細(xì)菌與病毒的病原學(xué)檢查法ppt課件

第7章細(xì)菌和病毒病原學(xué)檢查法、診斷方法：形態(tài)學(xué)檢查、分離培養(yǎng)和鑒定檢查、抗原檢查、基因序列檢查、抗體標(biāo)本的采集和運(yùn)輸：無菌操作部位時(shí)間用抗生素前的血清：急性期，提前檢查：冷藏運(yùn)輸、標(biāo)記，第1節(jié)細(xì)菌感染的微生物學(xué)檢查法之一， 細(xì)菌學(xué)診斷形態(tài)學(xué)檢查1 .普通光學(xué)顯微鏡檢查法：2.暗視場顯微鏡檢查法：活菌、線圈體及其動(dòng)力檢查3 .熒光顯微鏡檢查法：病原菌的分離培養(yǎng)生化學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)檢查：玻璃片凝集試驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：毒性、致病性毒性檢查： LD50、ID50、毒素藥物敏感性試驗(yàn)：紙片擴(kuò)散法二， 病原菌成分抗原檢測：凝集試驗(yàn)，對(duì)流免疫電泳，酶聯(lián)技術(shù)，免疫熒光技術(shù)核酸檢測：1.核酸雜交技術(shù)：Southern印跡雜交，Northern印跡雜交，原位雜交2.PCR技術(shù)3 .基因芯片4.16rRNA基因序列分析： rRNA 編碼可變區(qū)三、抗體檢測(血清學(xué)診斷)凝集試驗(yàn)：直接、間接、協(xié)同、凝集沉淀試驗(yàn)：環(huán)狀、棉狀、雙向、對(duì)流電泳補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA ) :采取兩部分血清，抗體有效價(jià)值比早期提高4倍以上。 第二節(jié)病毒感染的微生物學(xué)檢查法，一、形態(tài)學(xué)檢查1 .電鏡直接鏡檢查法： 107顆粒/ml，電鏡觀察病毒顆粒形態(tài)和結(jié)構(gòu)免疫電鏡法(IEM ) :標(biāo)本特異抗體病毒顆粒聚集電鏡觀察輪狀病毒糞便，HAV、HBV血清，皰疹病毒皰疹液，可早期診斷。 2 .用光學(xué)顯微鏡檢查痘病毒，觀察封入體，CPE，2 .病毒分離培養(yǎng)的方法1 .動(dòng)物接種常用動(dòng)物：小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、猴子等； 接種途徑：皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔、靜脈等接種； 觀察：動(dòng)物出現(xiàn)感染癥狀，取病變組織進(jìn)一步檢查，2、雞胚培養(yǎng)：孵化914天的雞胚接種途徑為絨毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊腔、卵黃囊。 鑒定：凝血和凝血抑制試驗(yàn)、尿囊腔接種、羊膜腔接種、蛋黃囊接種、絨毛尿囊膜接種、3、組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)：單層細(xì)胞培養(yǎng)、浮游細(xì)胞培養(yǎng)； 原代細(xì)胞培養(yǎng)：由新鮮組織制備的二倍體細(xì)胞：二倍體性質(zhì)，傳輸4050多歲，人胚肺成纖維細(xì)胞傳代細(xì)胞系：由突變的二倍體細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞制備的HeLa細(xì)胞、三、病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)細(xì)胞的變化： CPE紅細(xì)胞吸附(HAd ) :紅細(xì)胞凝集：病毒干擾作用：風(fēng)疹病毒、埃雷中和試驗(yàn)(NT ) :病毒在生物體內(nèi)或細(xì)胞培養(yǎng)中被特異抗體中和而失去感染性的試驗(yàn)空斑形成試驗(yàn)：食斑形成單位(PFU )，感染性病毒滴度以PFU/ml表示。 四、病毒成分病毒抗原檢測： HIV和HBV抗原病毒核酸檢測，ABCA :未感染成纖維細(xì)胞。 b :單純皰疹病毒感染后使細(xì)胞變圓。 c :呼吸道合胞病毒感染后出現(xiàn)細(xì)胞融合。五、病毒抗體檢測：中和試驗(yàn)：陽性：過去可能有隱性感染，可用于流行病學(xué)調(diào)查。 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：用已知病毒可溶性抗原檢測患者血清中有無相應(yīng)抗體，作為近期感染指標(biāo)。 血凝抑制試驗(yàn)病毒紅細(xì)胞凝固現(xiàn)象病毒抗體紅細(xì)胞凝固現(xiàn)象消失用于流感病毒、流感病毒的診斷、流行病學(xué)調(diào)查以及病毒類型和亞型的鑒定。 ELISA法： HSV、CMV、EB病毒等蛋白印跡技術(shù)：利用已知病毒蛋白檢測未知病毒，總結(jié)細(xì)菌感染