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文檔簡介
.,1,腦缺血模型的發(fā)展,1986年,Koizumi等首先采用血管內(nèi)栓塞堵塞腦中動脈開口建立大鼠局灶性腦缺血模型(MCAO)。1989年,Longa等采用血管內(nèi)栓線阻塞法制備該模型。之后發(fā)展起來的還有雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎法、開顱機械閉塞法、微栓子栓塞阻斷法、化學(xué)刺激誘導(dǎo)血栓性閉塞法、光化學(xué)誘導(dǎo)血栓形成法等。綜合考慮操作難易度以及缺血效果等方面因素,運用最為廣泛的是血管內(nèi)栓線法。,.,2,4VO全腦缺血法,麻醉動物,電凝燒灼雙側(cè)椎動脈;頸前分離雙側(cè)頸總動脈;分別結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈的遠近端,并從中間剪斷,以確保阻斷動脈血流。優(yōu)點:缺血模型狀態(tài)穩(wěn)定,成功率較高。缺點:對實驗溫度要求較高,如控制不當(dāng),大鼠易在實驗過程中死亡。,.,3,雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎法,麻醉動物,頸前分離雙側(cè)頸總動脈;分別結(jié)扎,結(jié)扎14min,以確保阻斷動脈血流后縫合。優(yōu)點:操作較簡單,對動物的創(chuàng)傷較小。缺點:對實驗技術(shù)要求較高,在分離迷走神經(jīng)時,若操作不當(dāng),大鼠易在實驗過程中死亡。,.,4,開顱法,麻醉動物,耳眼連線的中點垂直切開皮膚,通過鈍性分離顳肌,開顱后暴露MCA,用電凝器橫過嗅束旁的MCA使其凝閉,用10號手術(shù)絲線結(jié)扎MCA,造成MCA支配區(qū)局灶性腦缺血模型。優(yōu)點:實驗條件恒定,缺血效果可靠,全身影響小,局部條件可控制。缺點:需要開顱,創(chuàng)傷大,易感染。,.,5,光學(xué)法,將大鼠頭部固定于立體定位儀上,切開皮膚,暴露顱骨,靜脈注射光敏材料虎紅酸鈉,用特定冷光源(500-600nm)照射切口處顱骨,光線透過顱骨與血管內(nèi)的光敏物質(zhì)接觸,激發(fā)光化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生單線態(tài)氧,直接損傷血管內(nèi)皮細胞而誘導(dǎo)血栓形成。優(yōu)點:不開顱,手術(shù)創(chuàng)傷小,動物易長時間存活,血栓形成過程與人類近似,適用于抗血小板、抗血栓及內(nèi)皮細胞保護藥物的急慢性動物實驗研究。缺點:較早地導(dǎo)致終未動脈及微血管永久性閉塞,不利于擴血管及促進側(cè)支循環(huán)作用的研究。,.,6,栓塞法,麻醉動物,將無菌干燥研碎篩濾的血凝塊、碳素顆粒、塑料顆粒、花生四烯酸鹽等作為栓塞劑,由頸外動脈注入栓子后結(jié)扎,開放CCA,栓子由頸內(nèi)動脈(ICA)進入MCA,造成以MCA供血區(qū)腦組織損傷為主的缺血模型。優(yōu)點:不用開顱,操作較為簡單。缺點:無法預(yù)測栓塞部位與大小,腦組織缺血不一,不利于神經(jīng)癥狀和腦組織定量分析。,.,7,Longas線栓法,麻醉動物,頸部正中切口,暴露并結(jié)扎CCA和ECA,在CCA分叉處剪一小口,插入40手術(shù)絲線,進入ICA1720mm,阻斷MCA起始端及其所有側(cè)枝供應(yīng),在一定缺血時間后抽出絲線至CCA分叉處,進行再灌注。,.,8,檢測指標(biāo),參照ZeaLong評分標(biāo)準(zhǔn),分別于大鼠術(shù)后清醒時、再灌注開始前后評分:0分:無神經(jīng)損害癥狀;1分:不能完全伸展左側(cè)前爪;2分:向左側(cè)轉(zhuǎn)圈;3分:行走時向左側(cè)傾倒;4分:不能自發(fā)行走。,.,9,Longas法的優(yōu)缺點,優(yōu)點:無需開顱,對動物病理刺激小。模型重復(fù)穩(wěn)定性高,方法相對簡單。,缺點:對動物體重要求嚴(yán)格,一般在250-300g間,且絲線粗細要適中。,.,10,改良線栓法,方法步驟:僅分離并結(jié)扎頸總動脈,于頸內(nèi)外動脈分叉處插入線栓,而不分離頸外動脈和翼腭動脈。優(yōu)點,能精確控制缺血和再灌注時間,模型損傷評價高。缺點:模型成功率高,.,11,二法比較,Longas法改良法神經(jīng)功能評分2.20.842.60.55模型制作時間30.834.6220.174.88成功率83.33%83.33%死亡率16.67%0梗死率(23.037.94)%(18.652.61)%,.,12,梗死灶區(qū)域比較,Longas傳統(tǒng)線栓法,改良線栓法,.,13,參考文獻1孫宇,嚴(yán)國鋒.改良線栓法大鼠中腦動脈阻塞模型的建立J.中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2008,18(8):8-102吳巍,王彥云等.開心解郁湯對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎大鼠行為學(xué)及腦血流量的影響J.中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2010,,12(4):562-5643王軍,大鼠腦缺血模型研究進展J.中醫(yī)研究,2003,15(5):60-614WalsonBD,PraoloR,DietrichMD,eta1InductionofreproduciblebraininfarctionbyphotochemicallyinitiatedthrombosisJAnnNeurel,1985,17:4975張成英,陳前芬走置腦映血模型血管阻斷郝住的選擇四川解剖學(xué)雜志20008(3):146_1496吳遠華,朱廣旗,胡蓉.線栓法大鼠腦缺血
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