磷酸甘油氧化酶法測定血清甘油三酯ppt課件

1、實驗四 磷酸甘油氧化酶法測定血清甘油三酯 臨床生物化學(xué)實驗室,1,一、實驗?zāi)康?掌握：磷酸甘油氧化酶法測定血清甘油三酯的基本原理。 熟悉：磷酸甘油氧化酶法測定血清甘油三酯的基本操作。 了解：血清甘油三酯測定對于家族性脂類代謝紊亂等疾病診斷的臨床意義。,2,二、實驗原理,血清中甘油三酯(TG)經(jīng)脂蛋白酶(LPL)作用，可水解為甘油和游離脂肪酸，甘油在ATP和甘油激酶的作用下生成3-磷酸甘油，再經(jīng)磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羥丙酮和H2O2，H2O2與4-APP和 ESPAS 在過氧化物酶作用下，生成紅色醌類化合物，其顯色程度與TG的濃度成正比。,3,甘油三酯,過氧化物酶POD,ATP ADP,甘

2、油激酶GK,LPL,甘油+酯肪酸,3-磷酸甘油,磷酸甘油氧化酶GPO,磷酸二羥丙酮+H2O2,4-氨基安替比林（4-AAP）,對氯酚/ESPAS,醌亞胺染料,4,三、試劑,1. 酶試劑： GOODs緩沖液（pH7.2） 30mmol/L 甘油激酶 1KU/L 脂蛋白酯酶 3KU/L 甘油磷酸氧化酶 2KU/L 過氧化物酶 2KU/L ATP 0.5mmol/L 4-AAP 0.3mmol/L ESPAS 0.2mmol/L 穩(wěn)定劑 適量 2. 標(biāo)準液：甘油三酯 2.26 mmol/L,5,混勻， 37水浴5min后，在波長546nm處用B管調(diào)零，測定各管吸光度值。,四、實驗操作,6,五、結(jié)果計

3、算,TG(mmol/L)U/SCs（2.26 mmol/L） 參考范圍：血清TG:0.5651.695 mmol/L,7,六、注意事項,1. 本法使用的酶試劑在4避光保存，至少可穩(wěn)定3-7天，出現(xiàn)紅色時不可再用，試劑空白的吸光度應(yīng)0.05。 2. 血清要及時測定， 4存放不超過3天，避免TG水解釋放出甘油。 3. 本法線性上限為11.3mmol/L，若所測TG超過了11.0mmol/L, 則可用生理鹽水稀釋后再測。,8,七、方法學(xué)評價,1. 本法是一步終止法，簡便、快速、微量且試劑較穩(wěn)定等優(yōu)點，適用于手工和自動化測定。 2.不足：所測TG值包括了血清中游離的甘油。于4h內(nèi)立即檢測，若放置過久會

4、使結(jié)果偏高。,9,3.為了除去游離甘油的干擾，常用下面兩種方法： 1）外空白法:使用不含LPL的酶試劑測定FG作空白值，但此法需要雙份測定，成本加倍。 2）內(nèi)空白法：將酶試劑分成2部分：LPL和4-AAP組成試劑II，其余試劑為試劑I。血清先加試劑I，37溫育后，因無LPL存在，TG不被水解，F(xiàn)G在GK和GPO的作用下反應(yīng)生成H2O2，但因不含4-AAP，不能完成顯色反應(yīng)，故可除去FG的干擾；再加試劑II，即可測出TG水解生成的甘油。該法增加了操作步驟，但不增加成本。,10,八、臨床意義,TG 增高 常見于動脈粥樣硬化、原發(fā)性高脂血癥 ( 如家族性高膽固醇血癥、家族性 ApoB 缺陷癥、多源性高膽固醇血癥、混合性高脂蛋白血癥等 ) 、糖尿病、腎病綜合征、總膽管阻塞、甲狀腺功能減退、肥大性骨關(guān)節(jié)炎、老年性白內(nèi)障和牛皮癬。 TG 降低 常見于低脂蛋白血癥、貧血、