如何選擇HPLC溶劑-斯百全化學(xué)

1、如何選擇hplc溶劑, 800-720-5720620,高效液相色譜法（hplc）,20世紀60年代末70年代初發(fā)展起來的一種新型分離分析技術(shù) 目前已成為生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)研究、藥物臨床、化學(xué)化工、食品衛(wèi)生、環(huán)保檢測等領(lǐng)域最常用的化學(xué)分離分析手段 1、定性分析 2、定量分析（用于化合物含量及純度分析） 簡單來講，使用hplc分析的主要目的在于分離一個混合物中各個組分，并定量出各組分在混合物中所占的比重。 工作過程： 通過高壓泵， 連續(xù)的將流動相按照一定流速流過柱子；通過進樣器，注入樣品混合物。由于混合物中各組分性質(zhì)不同，因而它們在柱內(nèi)移動速度不同而逐漸分離。通過檢測器檢

2、測，得到組分的電信號并進行放大；記錄儀將放大的電信號以圖形形式記錄下來，由此得到液相色譜圖。,高效液相色譜法（hplc）,分離原理： 溶于流動相（mobile phase）中的各組分經(jīng)過固定相時，由于與固定相（stationary phase）發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出,在色譜分析中，如何選擇最佳的 色譜條件以實現(xiàn)最理想分離， 是色譜工作者的重要工作， 也是用計算機實現(xiàn)hplc 分析方法建立和優(yōu)化的任務(wù)之一,高效液相色譜法（hplc）,液相色譜系統(tǒng)的很多問題都能在譜圖上反映出來，其中一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得

3、到解決， 而其它的問題必須通過修改操作程序來解決。,對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵！,高效液相色譜法（hplc）,hplc分離指標 分離度：無論是定性鑒別還是定量分析，均要求待測峰與其它峰、內(nèi)標峰或特定的雜質(zhì)對照峰之間有較好的分離度。不一定是兩種待測物的分離度，而有可能是它們與其最接近的干擾物的分離度。應(yīng)當(dāng)盡量保證1.5，2.0比較理想，再大也可以，但沒太大意義。 峰型：窄而對稱的峰最為賞心悅目，這也是保證良好分離度的因素，同時有利于定量的準確和良好的重現(xiàn)。（拖尾引子：通過計算5%峰高處峰寬與峰頂點至前沿的距離比來評價峰形的參數(shù)。） 塔板數(shù)：和半峰寬相關(guān)。半峰寬越小，塔板數(shù)

4、越大，峰就越窄，分離越好。究竟要多大，應(yīng)以良好的分離為準。 保留時間：要求的是重現(xiàn)性，是色譜定性的依據(jù)，同時也決定了分析時間 rsd(標準偏差）2 正確選擇流動相直接影響檢測結(jié)果和儀器的損耗！,hplc溶劑的要求,（1）高純度，溶劑與固定相不互溶，并能保持色譜柱的穩(wěn)定性 由于高效液相靈敏度高，對流動相溶劑的純度要求也高。不純的溶劑會引起基線不穩(wěn)，或產(chǎn)生“偽峰”）。 （2）溶劑對于待測樣品，必須具有合適的極性和良好的選擇性，即足夠的溶解能力 溶劑的極性要與待測樣品相匹配，如果溶解度欠佳，樣品會在柱頭沉淀，不但影響純化分離，且會使柱子惡化。,(3）溶劑要與檢測器匹配 對于uv-vis，所用流動相在

5、檢測波長下應(yīng)沒有吸收或吸收很小 （4）化學(xué)穩(wěn)定性好 不能選與樣品發(fā)生反應(yīng)或聚合的溶劑 (5）低粘度，沸點適中 減小溶質(zhì)的傳質(zhì)阻力，降低柱壓，利于提高柱效。 常用的低粘度溶劑有丙酮、乙醇、乙腈等；粘度過低的溶劑也不宜采用，如戊烷、乙醚等，易在色譜柱或檢測器內(nèi)形成氣泡，影響分離,hplc溶劑的要求,hplc溶劑關(guān)鍵性能,uv吸收性 hplc級試劑是用特殊方法生產(chǎn)的含有最少的顆粒和最低的紫外吸收物質(zhì)，除去具有吸收uv的雜質(zhì)，在規(guī)定的波長上吸光度限制在規(guī)定值以內(nèi)。 梯度洗脫性能 在一個分析周期內(nèi)程序控制流動相的組成，如溶劑的極性、離子強度和ph值等，用于分析組分數(shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品。 采用梯

6、度洗脫可以縮短分析時間，提高分離度，改善峰形，提高檢測靈敏度 溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能作為梯度洗脫的流動相。 當(dāng)有機溶劑和緩沖液混合時，可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心 純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時產(chǎn)生氣泡。 防止壓力過大?；旌先軇┑恼扯瘸ｋS組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當(dāng)二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。,spectrumhplc溶劑特點

7、,超越acs標準 低紫外吸收背景 低水分，低蒸發(fā)殘渣 提供良好的梯度性能 保證不同批次產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定 隨貨附全套檢測報告,hplc溶劑的選擇,反相液相色譜 （柱效高、分離能力強、保留機理清楚，是液相色譜分離模式中使用最為廣泛的一種。適用于非極性-中等極性組分） 固定相：極性小的烷基鍵合相 c8柱，c18柱 流動相：流動相極性 固定相極性 極性大的甲醇-水或乙腈-水,hplc溶劑的選擇,反相液相的流動相一般用水或緩沖液，常加入有機改善劑，如：甲醇、乙醇、四氫呋喃、二氧六環(huán)、異丙醇等與水互溶的有機溶劑以調(diào)整保留時間，也常加入離子對試劑使被測組分與反離子形成中性離子對以改善分離。 分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/l磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱堿樣品時，通常加入少量弱堿，常用50mmol/l磷酸鹽緩沖液和30mmol/l三乙胺溶液。 能夠作為液相色譜流動相使用的溶劑有100多種，但實用的溶劑只有少數(shù)幾種。 一般情況下，甲醇-水系統(tǒng)可以滿足多數(shù)樣品的分離要求，且流動相粘度小，價格低，是反相色譜最常用的流動相。乙腈性能優(yōu)于甲醇。 在實驗室中有了甲醇、乙腈、水、四氫呋喃、正己烷、異丙醇、二氯甲烷，就能夠解決9o以上的色譜分離問題。,spectrumhplc溶劑,hplc產(chǎn)品,離子對試劑： 被測組分與反離子