植物油中磷脂含量的測定

1、項目五植物油中磷脂含量的測定,食品分院劉深勇,主要內(nèi)容,實驗?zāi)康?掌握用油脂中磷脂測定的原理和方法。 學(xué)習(xí)吸收曲線的制作和結(jié)果計算。 進(jìn)一步熟練掌握分光光度計的使用方法。,磷脂的定義,實驗原理,植物油脂中的磷脂經(jīng)灼燒成五氧化二磷，被熱鹽酸變成磷酸，遇鉬酸鈉生成磷鉬酸鈉，用硫酸聯(lián)氨還原形成鉬藍(lán)，在680nm，用分光光度法測定其含量。,磷脂測定儀器和器具,鉬藍(lán)比色法 1.瓷坩堝或石英坩堝； 2.分光光度計或帶塞的50 ml比色管； 3.移液管：5、10 ml； 4.電爐、高溫爐； 5.容量瓶：100、500、1000 ml； 6.表面皿、燒杯、量筒； 7.恒溫水浴鍋； 8.漏斗、坩堝鉗、試劑瓶等,

2、磷脂測定的試劑,1.50氫氧化鉀溶液； 2.鹽酸、硫酸、氧化鋅、濾紙； 3.0.015硫酸聯(lián)氨溶液； 4.2.5鉬酸鈉稀硫酸溶液：量取140 ml硫酸注入300 ml水中，搖勻，冷卻至室溫，加入 12.5 g鉬酸鈉，溶解后加水至500 ml，搖勻，靜置24 h備用。 5.磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取無水的磷酸二氫鉀0.4391 g溶于1000 ml水中，作為1號液，含磷0.1 mg/ml，吸取1號液10 ml，加水稀釋至100 ml，含磷0.01 mg/ml，作為2號液，比色用。,操作步驟,1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：取4只50 ml比色管，編成1，2，4，8五個號碼，按號碼順序分別注入磷標(biāo)準(zhǔn)2號液1，2，4，8

3、ml，再按順序分別加水9，8，6，2 ml。接著向4只管內(nèi)各加0.015硫酸聯(lián)氨溶液8.0ml；各加鉬酸鈉稀硫酸溶液2.0 ml，加塞、搖勻。去塞，將4只管置于正在沸騰的水浴中加熱10 min，取出冷卻至室溫，用水稀釋至50 ml，充分搖勻，靜置10 min后，用分光光度計在波長650 nm 下，用1cm液槽，用水調(diào)整零點(diǎn)，分別測定吸光度值。以吸光度為縱坐標(biāo)，以磷量（0.01、0.02、0.04、 0.08 mg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。,操作步驟,2.制備被測液：用坩堝稱取試樣約10 g（準(zhǔn)確至0.001 g），加氧化鋅0.5 g（氧化鋅在灰化中能和磷形成磷酸鋅防止磷以氧化物的形式揮發(fā)造成損失

4、），先在電爐上加熱炭化，然后送入550600的高溫爐中灼燒至灰化（白色），灼燒時間約1 h，取出坩堝冷卻至室溫，用熱鹽酸（11）10 ml溶解灰分，并加熱微沸5 min，將溶解液過濾注入100 ml容量瓶中，用熱水沖洗坩堝和濾紙，待濾液冷卻至室溫后，用50氫氧化鉀溶液中和至出現(xiàn)混濁，緩慢滴加鹽酸使氧化鋅沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀釋至刻度，搖勻。,操作步驟,3.比色：用移液管吸取被測液10 ml注入50 ml比色管中，加入0.015硫酸聯(lián)氨8.0 ml，加2.0 ml鉬酸鈉稀硫酸溶液，加塞，搖勻。去塞，將比色管置于正在沸騰的水浴中加熱10 min，取出冷卻至室溫，用水稀釋至50 ml，充分搖勻，靜置10 min后，用分光光度計在波長650 nm下，用1cm液槽，用水調(diào)整零點(diǎn)，測定吸光度值。,結(jié)果計算,根據(jù)被測液的吸光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得磷量（P），按公式（1）計算磷脂含量：,雙試驗結(jié)果允許差不超過0