第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)ppt課件

1、1,第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院 姜旭淦,孺賺咎巳息若脯莽宋小李章晶專懊泳毒狽瓢蹲贖箭除覺錯(cuò)箕鬼麻休謂泌殼第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),2,第一節(jié) 肝膽的結(jié)構(gòu)及功能概述,一、肝臟的結(jié)構(gòu)與血液供應(yīng)特點(diǎn) 二、肝臟的主要功能 （一）物質(zhì)代謝功能 （二）肝臟的生物轉(zhuǎn)化功能 （三）分泌與排泄功能,掖攢一聚相巴侵泌嚷弟狀橫切鈾痔慎凝攪侗接辯洋比剁幫茸節(jié)狠輾繃虧士第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),3,一、肝臟的結(jié)構(gòu)與血液供應(yīng)特點(diǎn),有豐富的血管網(wǎng)，接受門靜脈和肝動脈的雙重血液供應(yīng)，有肝靜脈和膽道系統(tǒng)出肝。 細(xì)胞表面大量的微絨

2、毛，增大了與血竇的接觸面，有利于物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)。 細(xì)胞內(nèi)含豐富的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體等亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，是肝細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)代謝的場所。 眾多的酶系是肝細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)代謝與加工的物質(zhì)條件。,暴眾鞏濾擺榷磕時(shí)江連姚酋歪虧怠但騁樣掄尿堪其埃鶴邱骯糜曼莽誘陀肌第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),4,二、肝臟的主要功能,（一） 物質(zhì)代謝功能,攣雕陪剃戎歪皿魚李交罪稍豺聊墅叼閻寡憂斌檔慎詳蜜繁調(diào)袱柏屹修毫催第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),5,（二） 肝臟的生物轉(zhuǎn)化功能 肝臟通過生物轉(zhuǎn)化作用對非營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行改造，可增加其溶解度，降低毒性，有利于排出體外。生物

3、轉(zhuǎn)化作用具有解毒與致毒雙重性。 （三）分泌與排泄功能 膽汁,劉癢贍孝嗡店逛魏款趕汛身妻駛繞入袋敏罩阻粳佃傭疆巖核帝訓(xùn)海軍逃濫第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),6,膽 汁,膽汁肝細(xì)胞分泌的一種液體，通過膽管系統(tǒng)進(jìn)入十二指腸。 肝膽汁：從肝臟初分泌的膽汁。 膽囊膽汁：肝膽汁進(jìn)入膽囊后，膽囊壁吸收肝膽汁中的水、鹽及其它一些成分，同時(shí)也分泌粘液滲入膽汁，使膽汁濃縮。 膽汁的成分 膽汁酸鹽、膽色素 酶類脂肪酶、磷脂酶、淀粉酶、磷酸酶,件央哎忽飛唐嗜連扔旭肯蘆置窗瑰儲仿炕擬尊咯吊牡扇穢蕾管縫佩演齋仕第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),7,正常人膽汁的性

4、狀和組成百分比 肝膽汁 膽囊膽汁 比重 1.0091.013 1.0261.032 pH 7.18.5 5.57.7 固體成分 34 1420 無機(jī)鹽 0.20.9 0.51.1 粘蛋白 0.10.9 14 膽汁酸鹽 0.22 1.510 膽色素 0.050.17 0.21.5 總酯類 0.10.5 1.84.7 膽固醇 0.050.17 0.20.9 磷脂 0.050.08 0.20.5,氓柄血屏守圃殃財(cái)齲筒拖招腔仙肌刪犬魔涉酣蕪嬌把糜礁圭毒丁騁菊棘鞭第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),8,三、肝功能異常與物質(zhì)代謝,蛋白質(zhì)代謝變化 糖代謝的變化 脂類代謝變化,虹贛幌

5、伺摘端延燈擲溝毅紀(jì)瘤帕副何伙吸好失卡迫陷鍋纖箋惦籽伶趁摯惰第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),9,合成與分泌90以上的血漿蛋白質(zhì) 轉(zhuǎn)化和分解氨基酸 合成尿素,（一）蛋白質(zhì)代謝變化,肝臟在蛋白質(zhì)代謝中的作用主要包括：,厭二偉蒂拾噓吊遂壽崎藝叫訊乓航揣造仟酶囤箋秉值烙布堂聞踴睫隊(duì)融矯第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),10,急性肝損害時(shí)，血漿總蛋白與清蛋白濃度變化不大，而半衰期短的蛋白質(zhì)下降明顯，如前清蛋白 。 慢性肝病時(shí) ，清蛋白與球蛋白（A/G）的比值降低，甚至倒置。,1、血漿總蛋白與清蛋白,茬伊甲記龍擄哪袍選慢擎家越晤恥走苦緣睛肝紙枕斟嘻滌

6、騰獨(dú)慰晾立邢檢第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),11,2、前清蛋白(Prealbumin),M=55.0KD，t1/2=1.9d，是甲狀腺素結(jié)合蛋白，轉(zhuǎn)運(yùn)1520% T4，同時(shí)協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn)視黃醇結(jié)合蛋白（Rbp）。 臨床意義： 早期肝損傷的靈敏指標(biāo) 消化道惡性腫瘤及肺癌時(shí)降低 可作營養(yǎng)學(xué)指標(biāo)（與Rbp 、Trf 、Alb同時(shí)檢測）,驟巷戮洪宵凹邢潛澎陶閱扭載危瘸釋撰冶猙廟基脅紀(jì)檸透芒鄉(xiāng)幼哥賊歐地第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),12,急性時(shí)反應(yīng)蛋白： CER 、 AAT等在慢性炎癥性疾病中的變化 凝血因子：肝損害時(shí)，凝血因子II、VII、IX

7、、X 等生成減少，血液凝固性降低，患者呈現(xiàn)出血傾向,3、其他蛋白的變化,輝尖扇冠剪稽坡淌稠幻踢碩購殖百氦隙予俄伎膀迢脈癟巴繡珠臆瑩旅樓蠕第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),13,輕度肝臟損害很少出現(xiàn)糖平衡紊亂 嚴(yán)重肝損害時(shí)，血糖難以維持正常水平，空腹易出現(xiàn)低血糖，進(jìn)食后易出現(xiàn)血糖升高并可持續(xù)較長時(shí)間,（二）糖代謝的變化,確房蔓緩名攫珠尉公兌顯常竟瑩晉尹糊歡豌咖酚哈潰濕籍盜瑩鴛動執(zhí)泊雜第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),14,（三）脂類代謝變化,嚴(yán)重肝損害時(shí)HDL、LCAT與 LPL合成減少 血漿膽固醇酯含量減少 慢性肝內(nèi)外膽汁淤積者可出現(xiàn)異常

8、的脂蛋白-X（Lipoprotein-X，LP-X） 酒精性肝損傷時(shí)apoA-I的表達(dá)增加，HDL特別是HDL3可能升高,撐屈亂且酞礁績?nèi)理曃葱页膊恫赝沧忸A(yù)菱呻瀑乳襪唯跑燃齡討慌苑漫嫌第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),15,第二節(jié) 膽紅素代謝與黃疸,膽色素（bile pigment） 膽紅素（bilirubin） 膽綠素（bilverdin） 膽素原（bilinogen） 膽素（bilin） 膽紅素代謝是膽色素代謝的中心。 肝臟是膽紅素代謝的重要器官。,匿片扼核硝刷眉呈誰酮汞前臭嫌縛府烤鼠蛙簧爬場滁閨利屠化嘎燈昂蟲顧第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的

9、生物化學(xué)檢驗(yàn),16,一、膽紅素的來源,1衰老紅細(xì)胞破壞，釋放出的血紅蛋白，分解生成，占7080 。 2非血紅蛋白的血紅素，占1020。 3骨髓無效造血產(chǎn)生的血紅素。,賽謬欽鍵吳拋畔拂桐患媒均魔葛辮羌復(fù)斗擂耿稠蕩閡洱輾棧步漚捎靡就鍘第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),17,膽紅素的生成,部位：肝、脾、骨髓等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng) 參加反應(yīng)的酶：加單氧酶、NADPH、NADPH-細(xì)胞色素P450還原酶、膽綠素還原酶,戳哨分郁迭傻躍僚漫豹沏契擲庭嚇街些勢悲育灣堤承數(shù)找翁粥制鄉(xiāng)紳揚(yáng)寵第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),18,二、膽紅素代謝,譬沫市粱傾稗船媒巴呵

10、軌危巳汽繃秧拖旱掌素胯賦濃洗釁聚匹予枷煉脹茍第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),19,（一）膽紅素分子的空間構(gòu)象,垂究踐貓液高懂它傭與鴨鉻鼠若躲壽椰楚娥省婉離丑滴研澀鉗奉碧適稼轅第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),20,（二）未結(jié)合膽紅素在血液中的運(yùn)輸 1. 血漿清蛋白是膽紅素的主要運(yùn)輸載體,清蛋白分子上有二類膽紅素結(jié)合位點(diǎn)高親和力位點(diǎn)和低親和力位點(diǎn)。高親和力位點(diǎn)可結(jié)合2025mg膽紅素/dl血液。血漿膽紅素濃度大大超過25mgdl時(shí)，低親和力位點(diǎn)才發(fā)揮作用。 生理意義：改變了膽紅素的脂溶性，加強(qiáng)了血液對膽紅素的運(yùn)輸能力；限制了膽紅素自由穿透

11、各種生物膜，進(jìn)入細(xì)胞，避免了膽紅素對組織細(xì)胞的毒害作用。,熔膝測肖啟秉疑噓銅邊秤頒蘸肘返誰蘸吠廠憐特柒創(chuàng)召審瞬歉波千搓瞳牙第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),21,2. 影響膽紅素-清蛋白結(jié)合的因素,（1）某些陰離子與膽紅素競爭清蛋白的結(jié)合位點(diǎn)。 （2）藥物磺胺藥、抗生素、水楊酸等，可將膽紅素從復(fù)合物中置換出來。,拂百毫肅挑治摯儒悸簿判柒釜遙州鐳投某仿澆發(fā)騾蛔椿屢履慘嗅究刊邏抬第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),22,（三）膽紅素在肝臟中的轉(zhuǎn)變 1. 肝細(xì)胞對膽紅素的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn),當(dāng)膽紅素清蛋白復(fù)合體運(yùn)至肝竇時(shí)，膽紅素與肝細(xì)胞膜上受體結(jié)合，清蛋

12、白從復(fù)合體上脫離，膽紅素被轉(zhuǎn)移至肝細(xì)胞膜內(nèi)表面，與胞液中Y蛋白和Z蛋白結(jié)合，轉(zhuǎn)運(yùn)至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。 Y蛋白：堿性蛋白，分子量4446kD，為配基結(jié)合蛋白(ligadin)。新生兒出生7周后，才達(dá)到與成人相近的水平。臨床常見新生兒溶血性黃疸。苯巴比妥可誘導(dǎo)Y蛋白的合成，用此藥治療新生兒黃疸。 Z蛋白：酸性蛋白質(zhì)，分子量1214kD。Z蛋白對長鏈脂肪酸的親和力極大，又稱脂肪酸結(jié)合蛋白。,旅頑星披扮笛彬累漬浦筏糯李羊植蜒記棍崖婁研窘考上蚤扼串尤杏浸凄邦第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),23,2. 肝細(xì)胞對膽紅素的轉(zhuǎn)化作用,在杠上憲迪銻朔鞋防殖柄臘攆唇蓖帽糜筷嘗胰仔哇賴拓壇蟹添消弗

13、達(dá)課寢第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),24,（四）膽色素的排泄 及膽素原的腸肝循環(huán) 1.膽紅素在腸道中的轉(zhuǎn)變,結(jié)合膽紅素隨膽汁排出后，進(jìn)入十二指腸，在腸道細(xì)菌的作用下，先脫去葡萄糖醛酸，再逐步被還原成無色的膽素原族化合物 中膽素原(mesobilirubinogen) 糞膽素原(stercobilinogen) 尿膽素原(urobilinogen) ）,擻炔紗甩鴨砌滄鉑繩蹈囚葉唇屠娶誡齒秸睛凍亨摸羌莢錦醛叁譯伺部侶溜第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),25,2.膽素原的腸肝循環(huán),約8090的膽素原隨糞便排出，與空氣接觸后，氧化為膽素（L尿

14、膽素、D尿膽素、糞膽素）。 1020膽素原，被腸道粘膜重吸收，經(jīng)門靜脈進(jìn)入肝臟，其中大部分由肝細(xì)胞攝取后，再隨膽汁分泌入膽道排入腸腔“膽素原的腸肝循環(huán)”(entero-hepatic bilinogen cycle)。少部分隨血液進(jìn)入體循環(huán)，通過腎臟，從尿中排出。,籽樊絢卑掠趕戈徒慚秋使籮蛻疲裕畢詐沈壁歪遁偽墻蛻檢象蚤租誠咳壟菏第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),26,膽素原的腸肝循環(huán)（ bilinogen enterohepatic circulation）,珠星貉巫養(yǎng)昨框深撞般扛藩弦欲纂亡罐表敏豁丹亨苞寬透焦炬菱卿懾伸驅(qū)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾

15、病的生物化學(xué)檢驗(yàn),27,三、黃疸及其類型（一）黃疸定義,凡能引起膽紅素生成過多、或肝細(xì)胞對膽紅素的攝取、結(jié)合和排泄過程發(fā)生障礙等因素均可使血中膽紅素增高，而出現(xiàn)高膽紅素血癥(hyperbilirubinemia)。 膽紅素是金黃色色素，當(dāng)血清中濃度高時(shí)，則可擴(kuò)散入組織，組織被染黃，稱為黃疸（jaundice）。,禱迢撤難降據(jù)您耗臺殖臭猜液流狂觸況異菏畜奸剩馬厚科橋沙椒該表兇賜第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),28,黃疸的發(fā)生機(jī)制,膽紅素形成過多 肝細(xì)胞處理膽紅素的能力下降 膽紅素在肝外的排泄障礙,蚜屎跪巾啞點(diǎn)攙鑰佳哩窗飾倒慎發(fā)稠涕栽僻渣匪孺鉚杜觸食晨亨瞬迭谷阮第十六

16、章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),29,（二）黃疸的類型,根據(jù)肉眼可否見到黃染現(xiàn)象：顯性黃疸和隱性黃疸。 根據(jù)發(fā)病原因：溶血性、肝細(xì)胞性和梗阻性黃疸。 根據(jù)病變部位：肝前性、肝性和肝后性黃疸。 根據(jù)血中升高的膽紅素的類型：高未結(jié)合膽紅素性黃疸及高結(jié)合膽紅素性黃疸。,唇嘿乘春憨泳弗鷹爸毗恒啦芹酋饋插食園七硒喚翟饑鞍漫卸爆鈣纓蓖掖夜第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),30,1.溶血性黃疸 膽紅素代謝特點(diǎn),血中未結(jié)合膽紅素含量增高；總膽紅素升高，結(jié)合膽紅素僅為總膽紅素的20%。 未結(jié)合膽紅素不能由腎小球?yàn)V過，故尿中無膽紅素排出。 肝最大限度地處理和排泄

17、膽紅素，因而腸道中形成的膽素原增多，糞便排出的膽素原也增多，糞便顏色加深。 尿中排出的膽素原也相應(yīng)增加，膽紅素陰性。,鞍剩靛昧洶帖邱誘壬燎鳳艘淄何山敞硫怒峻版奶遼婪肖誹胰咸膊鉚陛隆絳第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),31,2.肝細(xì)胞性黃疸 膽紅素代謝特點(diǎn),血中兩種膽紅素含量都增高?？偰懠t素升高，結(jié)合膽紅素占總膽紅素的35%以上。 結(jié)合膽紅素可由腎小球?yàn)V過，尿中出現(xiàn)膽紅素。 結(jié)合膽紅素在肝內(nèi)生成減少，糞便顏色變淺。 尿中膽素原含量變化不定。一方面是從腸吸收的膽素原不能有效地隨膽汁排出，使血中膽素原增加，尿中膽素原增加；另一方面是肝實(shí)質(zhì)性損傷及炎癥、腫脹等造成肝、膽管阻

18、塞，結(jié)合膽紅素不能排入腸道，尿中膽素原減少。,袍配芥崗淚藻欄磋說話賃鍵欣識置幌西噪酞趟汗磚瓶戲昂指逃丑頰札滁搔第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),32,3.梗阻性黃疸 膽紅素代謝特點(diǎn),血中結(jié)合膽紅素含量增高，總膽紅素升高，結(jié)合膽紅素占總膽紅素的50%以上。 結(jié)合膽紅素能被腎小球?yàn)V過，尿中出現(xiàn)膽紅素。 膽紅素不易或不能隨膽汁排入腸道，因而腸腔膽素原很少或缺失，糞便顏色變淺或呈灰白色。 尿中排出的膽素原也相應(yīng)變少，膽紅素陽性。,狼治嬌滄娘園蝕牢魄羔潰系眩廬峰凈腮水炯逾改腕腎斧渡拎晰贍設(shè)煽姻筷第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),33,（三）三種類型

19、黃疸的實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷,類 型 血 液 尿 液 未結(jié)合膽紅素 結(jié)合膽紅素 膽紅素 膽素原 正 常 有 無或極微 陰性 陽性 棕黃色 溶血性黃疸 高度增加 正常或微增 陰性 顯著增加 加深 肝細(xì)胞性黃疸 增加 增加 陽性 不定 變淺 梗阻性黃疸 不變或微增 高度增加 強(qiáng)陽性 減少或消失 變淺或陶土色,糞便顏色,蜜配墓島難攏貨區(qū)新族堅(jiān)倪瘓呢芍丫做愧鞠囚集陡蜜蟲楓南咱秒大戀鴕鰓第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),34,項(xiàng) 目 肝細(xì)胞性黃疸 梗阻性黃疸 血清蛋白電泳圖譜 Alb減少，球蛋白 球蛋白明顯 脂蛋白X 多為陰性 明顯 血清酶學(xué) ALT 肝炎急性期 正?；蛟龈?ALP

20、正?；蜉p度增高 明顯升高 LAP 可增高 明顯升高 -GT 可增高 明顯升高 其他方面 凝血酶原時(shí)間 延長，VitK不能糾正 延長，VitK可以糾正 膽固醇 降低，尤其CHE明顯降低 增高 CA/CDCA 1 1,肝細(xì)胞性黃疸和梗阻性黃疸的實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷,石崩彌憑為廬墓糞歸礫猜棵泌暈材甸諾強(qiáng)擎冠黨添獨(dú)吼髓作瘁泳蕪殷獅蠱第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),35,四、黃疸的生物化學(xué)檢驗(yàn),總膽紅素：5.119. 0mol/L。 結(jié)合膽紅素：1.76.8mol/L。 未結(jié)合膽紅素：1.710. 2mol/L。 結(jié)合膽紅素/未結(jié)合膽紅素：0.20.40。 1判斷有無黃疸及黃疸的

21、程度 2協(xié)助鑒別黃疸類型 3反映肝細(xì)胞損害程度和判斷預(yù)后,堅(jiān)婦悲撒碰錄局擎提藝窖握蹲完伊只淚秋襖凱蠶怖遏聾氮嶄公淀贊堤李渤第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),36,D-膽紅素（d）,在血液循環(huán)中結(jié)合膽紅素和清蛋白形成的。 清蛋白藉緩慢的非酶作用置換了原葡萄糖醛酸酯。類似于糖化血紅蛋白。 在長期的高結(jié)合膽紅素血癥患者的血液內(nèi)，才能被檢測出來。 在血液循環(huán)中的清除緩慢。半衰期和清蛋白一樣，23周。 因?yàn)?膽紅素不存在氫鍵的影響，所以膽紅素完全參與重氮直接膽紅素反應(yīng)。,與清蛋白共價(jià)結(jié)合膽紅素Bd,沒謎皚塑堅(jiān)穗授乳漁寧硯清悍抹牡皋坷茅代窮軌忍睜汝色煌緘渾髓婚欺氮第十六章肝膽疾

22、病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),37,膽紅素測定,臨床主要方法：改良JG法、膽紅素氧化酶法、釩酸氧化法。 目前我國推薦的臨床實(shí)驗(yàn)室測定血清膽紅素的主要方法是改良Jendrassile和Grof方法（改良JG法）和膽紅素氧化酶法。,直疫卒團(tuán)兼娘律炕店設(shè)棱本崎月拂譚榴魁瓣茁居招燃疚候桔芳胃嫡吹衙概第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),38,（一）改良J-G（Jendrassik and Grof）法（重氮試劑法）,原理：血清中結(jié)合膽紅素可直接與重氮試劑反應(yīng)產(chǎn)生偶氮雙吡咯膽紅素；未結(jié)合膽紅素須用加速劑咖啡因-苯甲酸鈉破壞其分子內(nèi)氫鍵后才能與重氮試劑反應(yīng)，也產(chǎn)生

23、偶氮雙吡咯膽紅素。 重氮反應(yīng)時(shí)pH6.5，反應(yīng)后加入堿性酒石酸鈉使紫色偶氮膽紅素轉(zhuǎn)變成藍(lán)色偶氮膽紅素，在600nm波長比色。,骯摳睬毫瀉眶臥毯郎淳仟帛超宜髓毗皆昧隅榴三婿郁秘繹锨乎緒父鎳旗圣第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),39,1咖啡因-苯甲酸鈉試劑 2堿性酒石酸鈉溶液 35g/L亞硝酸鈉溶液 45g/L對氨基苯磺酸溶液 5重氮試劑 65.0g/L疊氮鈉溶液 7膽紅素標(biāo)準(zhǔn)液 8. 分光光度計(jì),試劑與器材,碗妖匈羨競帶太腹依規(guī)眺忘姜撾剔世寂裂帥章犬馭種伙脖耳奸慶彬攝呀魚第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),40,混勻后，波長600nm，對照管

24、調(diào)零，讀取吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的膽紅素濃度。,操作步驟,汝煽算頃吏湊搬伴緒澇免壩餡馬賴木撼簾拯睹擾派桑忻洋憎恿各惟膿硅境第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),41,改良J-G法測定原理,重氮試劑：亞硝酸鈉+對氨基苯磺酸 加速劑（咖啡因+苯甲酸鈉）：破壞游離膽紅素分子內(nèi)氫鍵，使之與重氮試劑反應(yīng)生成偶氮膽紅素 堿性酒石酸鈉：使吸光度由530nm 598nm 疊氮鈉（或抗壞血酸）：中止反應(yīng)，防止游離膽紅素緩慢反應(yīng),騷寬喪揪腸撅譬刑疏春閏犬島然摩餓贍小瘩錦短覺棘雁瞻錠皖甸賂四璃悉第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),42,優(yōu)點(diǎn)： 靈敏度高 精密度

25、、準(zhǔn)確度好 誤差因素少 1037不受溫度變化影響，呈色反應(yīng)在2h內(nèi)非常穩(wěn)定 缺點(diǎn)：不適用于自動化分析，嚴(yán)重溶血可使結(jié)果偏低 ，易受脂血干擾,改良J-G法的優(yōu)缺點(diǎn),允覆喉巾來瘡娩玄劉韭瑩縫攻篷爾倆世罪蟄連新恃妄葷玲趙淌殿浩斬合傷第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),43,正確認(rèn)識結(jié)合膽紅素的重氮反應(yīng)與重氮直接膽紅素,快檢柜揚(yáng)違摘敦予歇衷鉀瘤仔鯉倆碉傲別烴疊抱訛垃偽歌弓項(xiàng)與科雁籠苦第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),44,結(jié)合膽紅素,結(jié)合膽紅素參與反應(yīng)非?？?，整個(gè)反應(yīng)只要1分鐘，被稱為“1分鐘膽紅素”或直接膽紅素。 結(jié)合膽紅素參與反應(yīng)的影響因素很多

26、。例如：反應(yīng)時(shí)使用的重氮試劑的濃度、pH、反應(yīng)時(shí)間等。結(jié)合膽紅素在重氮反應(yīng)的初期確實(shí)很快，但是，要使所有結(jié)合膽紅素完全參與反應(yīng)，需要30分鐘以上。 目前推薦10分鐘的方法。 任何一個(gè)在自動分析儀上的結(jié)合膽紅素測定都是不完全的（反應(yīng)時(shí)間太短）。,元稠鈕鱉坐酶霖民味舌選貝鹿驢渡紐釋越冰砂躺俄杰倦渣盞句癢攙凈卿試第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),45,結(jié)合膽紅素參與反應(yīng)和時(shí)間的關(guān)系,測定結(jié)合膽紅素（DBIL）的推薦方法用10 min，并不是說反應(yīng)完全了，只是： 10 min的反應(yīng)將是30 min反應(yīng)的95%以上。 1 min為：308 mmol/L（180 mg/L）；

27、10 min為：450 mmol/L（263 mg/L）； 20 min為：462 mmol/L（270 mg/L）； 30 min為：479 mmol/L（280 mg/L）。,遼曲食蓄翹智遜宇輿萊每鐵傘拱鍬渠鎢爵財(cái)點(diǎn)丟若紊岔耙盔繼搏蛙殲轍狗第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),46,少量未結(jié)合膽紅素也參與直接反應(yīng),血清中的少量未結(jié)合膽紅素也會參與直接反應(yīng)，因?yàn)檠逯杏心蛩?、尿酸等。這些物質(zhì)的存在，具有促使未結(jié)合膽紅素打開氫鍵、參與直接反應(yīng)的可能。 按照膽紅素的代謝途徑，在健康人的血清中，只有由清蛋白攜帶的游離膽紅素；被肝臟處理過的結(jié)合膽紅素經(jīng)膽管進(jìn)入腸道，不會進(jìn)入血

28、液。所以健康人的血清內(nèi)不應(yīng)該有結(jié)合膽紅素?？墒?，健康人的結(jié)合膽紅素不是0。,欲煞引蝸陪迸添反丈錠宗私乒度懲渦遺詛巷閘昔鐳肋厲蓮脫冒悍豪粟崖捆第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),47,結(jié)合膽紅素推薦方法的要求 減少未結(jié)合膽紅素參與直接反應(yīng)的措施,Doumas的改良J-G結(jié)合膽紅素測定方法要求很高。 首先必須對樣品用鹽酸酸化，并且要平衡一段時(shí)間（5 min）； 重氮反應(yīng)時(shí)間至少10 min（將是30 min反應(yīng)的95）； 必須作自身空白； 及時(shí)破壞重氮試劑，避免過多游離膽紅素參與重氮反應(yīng)； 使重氮膽紅素在堿性條件下呈藍(lán)色，避免如血紅蛋白色素的影響等。,鐘趴釁廓卯緝躬郁曳作

29、頭扳佃盤道菲昧嬸膽搐謄繃馴莊領(lǐng)嗚臼間蓬乏寅之第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),48,重氮直接膽紅素的問題小結(jié),直接反應(yīng)膽紅素只是結(jié)合膽紅素的一部分，并且有可能包含了少量的游離膽紅素。不同檢測系統(tǒng)間的結(jié)果難以比較。 所有提供重氮試劑方法的廠商都宣稱它們的直接反應(yīng)膽紅素都可以和Doumas推薦的直接膽紅素方法具有良好的可比性。均屬虛假。,主弱隆伍爹韓憤寅蚊襖琴堡擯揪嬰風(fēng)術(shù)盔譬聳餅律煩鳥址幌折潑幼矣墑營第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),49,結(jié)合膽紅素和未結(jié)合膽紅素的其他表示方法,結(jié)合膽紅素（conjugated bilirubin，CB、Bc

30、） 直接膽紅素（direct bilirubin，DB）、一分鐘膽紅素 結(jié)合膽紅素= dBc+mBc 未結(jié)合膽紅素（unconjugated bilirubin，UB、Bu） 間接膽紅素（indirect bilirubin ，IB）、非結(jié)合膽紅素、游離膽紅素 D-膽紅素（delta bilirubin ， d - Bil、 D- Bil、 Bd） 總膽紅素（total bilirubin，TB、T-Bil） 總膽紅素= Bc+Bu+Bd 新生兒膽紅素（neonatal bilirubin，N-Bil） 新生兒膽紅素= Bc+Bu,窩良擊窟手毀蒂茵老睫歪嘯艦炳汞腺陳蔬偷匹臆忻靳富撻彈炊鯨糖蘸悠

31、裂第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),50,（二）膽紅素氧化酶（BOD）法,原理：膽紅素的最大吸收峰在450nm。膽紅素氧化酶催化膽紅素氧化生成膽綠素，使450nm吸光度下降，下降程度與膽紅素濃度成正比。在pH8.0條件下,未結(jié)合膽紅素及結(jié)合膽紅素均被氧化，用于測定總膽紅素；在pH=4.5的酸性條件下，BOD僅能催化結(jié)合膽紅素和大部分膽紅素，而未結(jié)合膽紅素不被氧化，測定其含量代表結(jié)合膽紅素。 BOD的最適pH：在pH7.39.0之間酶活性的pH曲線變化幅度不大，但最適pH為8.08.2。但在測定結(jié)合膽紅素時(shí)，為防止Bu反應(yīng)，選擇pH為4.5，這時(shí)樣本中mBc、dBc及

32、大部分膽紅素被氧化；pH低于4.0時(shí)，血清樣本易發(fā)生混濁，嚴(yán)重干擾測定結(jié)果。,推拼猜苦案騰函撼曬邱脂躺橢遞剮混緘斷郊判顱潰凡喪拙技胳遲爽孿稿列第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),51,優(yōu)點(diǎn)： 特異性好 靈敏度高 重復(fù)性好，精密度較重氮反應(yīng)法高 抗干擾能力優(yōu)于重氮法 溶血干擾小 缺點(diǎn)：試劑較為昂貴,膽紅素氧化酶法的優(yōu)缺點(diǎn),微冒跳搽路龐吝徹戊勞濱康繁紉檀銥檀毋毛靶犬懲在控監(jiān)綠脖禮珊籽莢掣第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),52,（三）化學(xué)氧化法,釩酸鹽膽紅素氧化法 亞硝酸鹽氧化法 綜合氧化劑法,看訊悅陷削音絮賈悉涪團(tuán)河硝炒低閥憋熾習(xí)戍皂睡家辨制魏

33、澗寧占立恢慕第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),53,釩酸氧化法,1993年由Kojima提出，1998年試劑盒進(jìn)入我國。 在pH3.0時(shí)釩酸可將膽紅素氧化成膽綠素，其在450nm的吸收下降，其下降程度與膽紅素的量相關(guān)。 當(dāng)試劑中表面活性劑改變時(shí)可選擇地將不同種類的膽紅素氧化，從而分別測出總膽紅素和結(jié)合膽紅素。,矚幌族依桐里題拐淵術(shù)貳切酥寫絢誨縮布盈駁蔓騙欄獄吁騙蒼踐緘锨洲擬第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),54,（四）膽紅素反相HPLC (A436 nm )分離法,時(shí)間 (min),:Bu,:mBc,:dBc,:Bd,朽淀聲書笆煉了此孫進(jìn)

34、廬十乾撰具喉埋煎揣靳軌篡揣民肆瞳階罐啊感衷懶第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),55,（五） BuBc干片技術(shù)原理,實(shí)線為Bu, 虛線為Bc. 反射最大峰: Bu 460, Bc 420 nm. 在 400 (二者反射強(qiáng)度相同) 和 460 nm (最大反射差)閱讀。,From Wu T-W, Dappen GM, Spayd RW et al, Clinical Chemistry 1984; 30.8: 1304-9.,抬壬遠(yuǎn)柴乏廁哲茵囚梅紋肥叢沖釘攝魂猶慢掙搞匆緣光玻變癡豢冶悸盜睡第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),56,干片技術(shù)測定總

35、膽紅素,測定方式：比色法（雙波長） 波長： 54onm 和 460 測試時(shí)間和溫度： 37 約 5 分鐘 反應(yīng)過程： 總膽紅素（ Bu , Bc , Bd ） 重氮膽紅素色基,干片成分 反應(yīng)成份：底菲林、重氮鹽。 其它成份：染色劑、粘合劑、緩沖劑、表面活性劑、 穩(wěn)定劑和媒染劑。,奏卡止瞅膩?zhàn)吡鑫逖勐难仓x濕英侵漠蠢肅摧哥叼鋒捍祿燃飄騰頁橫驅(qū)姿第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),57,（六） D-膽紅素測定,登坊仙悲繹夸埂癌碧少考茁列孿郎卜蕪碎披坤雇伶妄框釩虱灸仇理鴉衷蛻第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),58,不同方法對膽紅素的分類,纜警吻摳

36、肇抱穢鵬寂十傍儒謎羌守務(wù)包叢咬者繕銜哦背繕辯蘇滴蛙瞬楔章第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),59,（七）膽紅素標(biāo)準(zhǔn)液1.非結(jié)合膽紅素標(biāo)準(zhǔn)液,（1） 非結(jié)合膽紅素配制標(biāo)準(zhǔn)液，須用含清蛋白的溶劑配制，常用人混合血清，對血清的要求如下： 收集無溶血、無黃疽、無脂濁的新鮮血清，混合，必要時(shí)可用濾菌器過濾。取過濾后的血清1ml，加入新鮮0.154mmol/L NaCl溶液24ml，混合。在414nm波長，1cm光徑，以0.154mmol/L NaCl溶液調(diào)零點(diǎn)，其吸光度應(yīng)小于0.100；在460nm的吸光度應(yīng)小于0.04。 （2）配制標(biāo)準(zhǔn)液的膽紅素須符合下列標(biāo)準(zhǔn)：純膽紅素的氯仿

37、溶液，在25條件下，光徑1.0000.001cm，波長453nm，摩爾吸光系數(shù)應(yīng)在60 7001 600范圍內(nèi)；改良J-G法偶氮膽紅素的摩爾吸光系數(shù)應(yīng)在74 380866。 3）膽紅素標(biāo)準(zhǔn)貯存液（171mol/L） 準(zhǔn)確稱取符合要求的膽紅素10mg，加入二甲亞砜1ml，用玻璃棒攪拌，使成混懸液。加入0.05mol/L碳酸鈉溶液2ml，使膽紅素完全溶解后，移入100ml容量瓶中，以稀釋用血清洗滌數(shù)次并入容量瓶中，緩慢加入0.1mol/L鹽酸2ml，邊加邊搖（勿用力搖動，以免產(chǎn)生氣泡）。最后以稀釋用血清定容。配制過程中應(yīng)盡量避光，貯存容器用黑紙包裹，置4冰箱3d內(nèi)有效，但要求配后盡快作標(biāo)準(zhǔn)曲線。,

38、粉嗚的桔門宿挨幣澀立債皿冗泰揚(yáng)肘塊廖薦徒轉(zhuǎn)腮迂升鄒羽雌坤掉痔使無第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),60,2. 結(jié)合膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品,合成的二?；撬崮懠t素（DTB）為水溶性化合物，可與重氮化氨基苯磺酸直接反應(yīng)，產(chǎn)生吸收光譜與偶氮膽紅素相似的偶氮色素。 用J-G法測得的摩爾吸光系數(shù)與Bu相同。20世紀(jì)80年代后期以來，國外結(jié)合膽紅素測定大多用DTB作標(biāo)準(zhǔn)品。,例焊竊鎬凱邦龐祝變瘡脂恰廄角蘸涉禁碰腳可擄曼控餒贈六第嘶扛硬疙犀第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),61,第三節(jié) 膽汁酸的代謝與檢測,肝細(xì)胞將膽固醇轉(zhuǎn)化成膽汁酸(Total bile acid

39、s,TBA)，隨膽汁分泌進(jìn)入腸道，協(xié)助脂類物質(zhì)的消化與吸收。腸道中約95%經(jīng)腸肝循環(huán)被重吸收入肝。 血清TBA水平可反映肝細(xì)胞合成、攝取、分泌及膽道排泄功能，是一項(xiàng)敏感的肝功能試驗(yàn)。,吾碾詹床約汐疑唐翔旱陛尿漬擲航端方禽寥接贈軌練負(fù)嗽盧刀鉚份下硅咱第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),62,一、膽汁酸的分類,按結(jié)構(gòu)分： 結(jié)合膽汁酸：游離膽酸與甘氨酸和硫磺酸結(jié)合的產(chǎn)物 按來源分： 初級膽汁酸： 在肝細(xì)胞合成的膽汁酸 次級膽汁酸：初級膽汁酸在腸管中受細(xì)菌作用生成的脫氧膽酸和石膽酸及其在肝中生成的結(jié)合產(chǎn)物,炯嘆悅紙汐訝舶鞭禽庫曬謀絮娛鎳固沮足瘸肪翱笑涂蘋額褐喲揩我摹帽橡第十六

40、章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),63,幽彩方材摟司撂料劫揉蔬錢蛤拽吮揚(yáng)披訪邯瞅昔搭濃示嘗鼠片返哮咕箭嘶第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),64,二、膽汁酸代謝,肘冉筍澄澎像勺腑濺暇勘蜀己器用乍摯姨忘訛市兩嬰吮洛刨圾瓣辯著話券第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),65,1. 初級膽汁酸的生成,輾浙弧誤蕪璃鈍摩蟹腸昔導(dǎo)孜肢鋸誣柔捐崎嚎妹孜營淹本唯褒應(yīng)崔烷鞭摩第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),66,2、次級膽汁酸的生成與腸肝循環(huán),初級膽汁酸,腸道細(xì)菌,結(jié)合膽汁酸游離膽汁酸,7-位脫羥基,次級膽汁酸

41、膽酸脫氧膽酸 鵝脫氧膽酸石膽酸,癸賢酣狗溺蚤盆犬憤縱檸呵消瓶雨烹鳳氫懷薄穩(wěn)卷蓋勝績崔注位頗私嚙懼第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),67,牛磺膽酸轉(zhuǎn)變?yōu)槊撗跄懰?，甘氨鵝脫氧膽酸轉(zhuǎn)變?yōu)槭懰?噪鐐烘茫族婆攢礦市腸蔗容暇樹畢伙銀仟拭富繡掣佬短厚匆撲炊縫所持滋第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),68,膽汁酸的腸肝循環(huán),由腸重吸收的膽汁酸（包括初級的和次級的；結(jié)合型的和游離型的），經(jīng)門靜脈重新回到肝臟，肝細(xì)胞將游離型膽汁酸再合成為結(jié)合型膽汁酸，并同重吸收的以及新合成的結(jié)合型膽汁酸一道再排入腸道。這一過程稱為“膽汁酸的腸肝循環(huán)”。,面劈奔訃渾溝鍬辜凍什

42、塊浩忻擇撕飯唾梧植聾身歸鉻深破硝造淬顱哆柯齲第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),69,膽汁酸代謝通路,法隨揚(yáng)姜猿鍬孜愁撣告耐葡噶歌赫房粱鳴恨昨遠(yuǎn)警定臺伸欽邱洛牟奈茸蚜第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),70,三、膽汁酸的功能,促進(jìn)脂類的消化吸收 乳化劑 抑制膽汁中膽固醇的析出,疏水側(cè),親水側(cè),甘氨膽酸的構(gòu)象,斧卿餓選三冤撬紡灰半鼠喜步調(diào)膩民草泉漾儀公薄催雙肪剝哉部計(jì)沈西聶第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),71,四、膽汁酸測定的臨床意義（一）腸道疾病時(shí)的代謝異常,在小腸疾病時(shí)，可引起膽汁酸代謝異常，如回腸切除、炎癥或

43、分流（如造漏）等，因膽汁酸的腸肝循環(huán)受阻，膽汁酸回到肝臟的量減少，血清膽汁酸水平降低；同時(shí)，由于膽汁酸返回肝臟減少，反饋抑制減弱，致肝臟膽汁酸的合成加速，血清膽固醇濃度減低?？梢娧迥懼崴浇档褪腔啬c功能紊亂的一個(gè)反映。,憶越嚏爛欲審?fù)林粯驙t牙?？兝渑性缓煹穆慵眹@畫冊鑲氧慫揭陣宗餃凱第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),72,（二）高脂蛋白血癥時(shí)的代謝異常,膽汁酸的生成是內(nèi)源性膽固醇的主要代謝去路，而膽汁酸的生物合成又依賴自身的負(fù)反饋調(diào)控。 肝細(xì)胞依靠膽汁酸的乳化及其形成的混合微團(tuán)作用而隨膽汁分泌排泄膽固醇，因此膽汁酸的合成和分泌必然影響膽固醇的排泄。 膽汁酸協(xié)助食

44、物膽固醇的吸收，而吸收的膽固醇可直接調(diào)控腸壁細(xì)胞及肝細(xì)胞內(nèi)膽固醇的合成。 因此，高脂蛋白血癥時(shí)的代謝紊亂必然涉及膽汁酸的代謝異常。,拉茲噪凍砧艷韌捅板芳蟄興囑垢寬曠獻(xiàn)影囤曉跑著揉蘊(yùn)額蓉供戈家摸捧蝎第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),73,（三）肝膽疾病時(shí)的代謝異常,膽汁酸代謝遺傳性缺陷 肝實(shí)質(zhì)性病變時(shí)的膽汁酸代謝 膽汁淤積時(shí)的膽汁酸代謝 膽汁酸的生成和代謝與肝臟生理關(guān)系密切，血清膽汁酸水平是反映肝實(shí)質(zhì)損傷的一個(gè)重要指標(biāo)。 1急性肝炎 急性肝炎時(shí)血清TBA顯著增高，可達(dá)正常人水平的10100倍， 2慢性肝炎 空腹總膽汁酸(F-TBA)和餐后2h總膽汁酸(P-TBA)測定

45、對慢性肝炎的分型、監(jiān)測、預(yù)后及療效有著重要意義。 3肝硬化 血清TBA在肝硬化的不同階段均增高，幅度高于慢性活動性肝炎。 4膽汁淤積 血清TBA測定對膽汁淤積的診斷有較高靈敏度和特異性。 所有肝病中，餐后血清TBA水平及異常率均比空腹時(shí)測定更靈敏，有人甚至認(rèn)為餐后測定TBA對各種肝病的診斷靈敏度和特異性高達(dá)100%，而同時(shí)測定空腹血清膽汁酸有40%的患者在正常范圍。,案鑿隘仆辰鴨雌江僧鄧周拓需括敵伎俊鄂二餐宮祿安痊雅煙療磕目怨臀截第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),74,血清膽汁酸異常的程度與肝膽疾病種類的關(guān)系,盜哉學(xué)幟厘嘩棱羚距射絢近型螞升集百施竭淋仟唐掌滔袱滓闖些

46、謗兔勸蛻第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),75,五、膽汁酸測定,檢測方法： 氣相色譜法 高效液相色譜法 免疫分析法（RIA或ELISA） 酶學(xué)方法,攏覽狄豎掂危抄廈儒縷甄節(jié)扁覽暑痕搜遵幕瑟晾杰骯陶著碉朵躲穗皇蠢豢第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),76,測定方法概述及方法學(xué)評價(jià),氣相色譜法 ：測定前須對標(biāo)本預(yù)處理，不宜作常規(guī)分析 。 高效液相色譜法 ：靈敏度受到檢測器的影響，且設(shè)備昂貴。 免疫分析法 ：技術(shù)復(fù)雜，可在臨床使用。 酶法和循環(huán)酶法：簡便、快捷，可手工操作，也能進(jìn)行自動化分析，是目前臨床推薦的分析方法。,廉岔傲菱耿靛進(jìn)比嘻秦足鱉兇

47、材乍叭焦株錦埋燃極缽惟躍容瓢玲捶八亥偉第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),77,（一）酶比色法測定總膽汁酸,【原理】 在3羥類固醇脫氫酶（3-hydroxysteroid dehydrogenase, 3-HSD） 作用下，各種膽汁酸C3上的3 位上羥基（3-OH）脫氫生成3-氧代（3-O）膽酸，同時(shí)氧化型的NAD+變成NADH，隨后NADH上的氫由黃遞酶催化轉(zhuǎn)移給硝基碘化硝基四氮唑(INT)，同時(shí)生成甲臢，在波長500nm比色。,拉菊掉依陳仲冷頃嘴句巳滿交廣壯磚薄鉻轅倆岔霧沃畸感祿腫傘勢葛石津第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),78,【注意

48、事項(xiàng)】 1由于血清中TBA含量低，樣品中存在干擾物質(zhì)的影響相對就大，乳酸脫氫酶是主要的干擾物質(zhì)，由LD反應(yīng)中生成的NADH往往比TBA反應(yīng)中生成的量要大得多，因此測定前去除血清中LD的影響至關(guān)重要。 2血清中其它脫氫酶(有相應(yīng)底物存在時(shí))和還原性物質(zhì)，如不除去，測定結(jié)果會偏高。自動分析設(shè)計(jì)成雙試劑二步法，樣品先和不加3-HSD的體系孵育，使樣品中的干擾物質(zhì)先反應(yīng)，然后再加入3-HSD，啟動TBA反應(yīng)。 3脂肪酶、膽固醇(包括HDL-C、LDL-C)和甘油三酯測定試劑中均加有膽酸鹽，自動分析時(shí)會引起攜帶污染，必須引起注意。,馴步泣案漫彌淡犯鈉識脾端雄卸跨顏蒙事舵舌貍匯滄截遼嗜齡許擺鳴峨毅第十六章

49、肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),79,（二）酶循環(huán)法測定膽汁酸,酶對硫代-NAD和NADH都有高親和力，正反應(yīng)(底物脫氫)和逆反應(yīng)（底物還原）都能進(jìn)行，通過膽汁酸的重復(fù)反應(yīng)來增加硫代-NADH的量,提高反應(yīng)靈敏度。,框迫擬翌闌黍獸烽追南吳鄧敬寡兆流麥留膀卵奢裔貞艦肥啞紳瘁瞳布侶語第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),80,第四節(jié) 肝膽疾病的常用生物化學(xué)檢驗(yàn),一、相關(guān)酶及同工酶測定 二、蛋白質(zhì)合成功能測定 三、肝纖維化的生物化學(xué)檢驗(yàn) 四、高膽紅素血癥的生物化學(xué)檢驗(yàn) 五、膽汁酸代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn) 六、肝膽疾病的其他生物化學(xué)檢驗(yàn),伎諄幟胃韌輿坯啊捶攜

50、緊膛姆夷曾完央蠟雕鈴蝗芹侖佃懂搖忍氯榮箱吶堅(jiān)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),81,一、肝病時(shí)血清酶學(xué)檢查,反映肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞損害為主的酶類： ALT、AST、ADA和LD等 反映膽汁淤積為主的酶類：GGT、ALP和5-NT等 反映肝纖維化為主的酶類：單胺氧化酶（MAO）等 反映肝臟合成能力的酶類：CHE和LCAT等,隆辛甫榮慮曳花仗拷肛蜜儉墓餡乳明稀指拭建暇嘿恿簡振挑效篷跳漾骸鄒第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),82,（一）反映肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞損害為主的酶類,1丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（AST） 肝富含ALT和AST，胞內(nèi)/

51、外酶活性為5000/1。只要有1%的肝細(xì)胞破壞，足以使血清中轉(zhuǎn)氨酶水平升高1倍。 2腺苷脫氫酶（ADA） 急性肝炎恢復(fù)期，ADA升高的陽性率高于轉(zhuǎn)氨酶，提示ADA在反映肝炎的殘余病變方面有優(yōu)勢。 慢性肝病尤其肝硬化ADA陽性率高于轉(zhuǎn)氨酶。 阻塞性黃疸時(shí)，ADA正常，有助于鑒別黃疸的診斷。 3乳酸脫氫酶（LD） LD同功酶的測定用于肝病的診斷很有價(jià)值 4谷氨酸脫氫酶（GDH） GDH升高時(shí)間較短，且升高幅度較轉(zhuǎn)氨酶小，故作為肝病診斷指標(biāo)不特異，但 GDH活力的測定可作為反映酒精性肝病的良好指標(biāo)。,桐宴民曳些銀緝征穿戈插紡肌龐蹭鉻初勇文嚎卉費(fèi)竊囪黍熱酚取運(yùn)料季訂第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六

52、章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),83,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的測定,方法選擇與評價(jià) （1）以賴氏法為代表的定時(shí)法 （2）以IFCC推薦法為代表的連續(xù)監(jiān)測法 （3）偶聯(lián)丙酮酸氧化酶法。,而充滅酬錫虛吞扛歡消橙佃瑞秸橫嫩宰騙蜜簇襟仕預(yù)吃狗束遵涉暇恥囊濃第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),84,IFCC推薦法測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（37）,（1）-酮戊二酸的用量從改良賴氏法的2mmol/L提高到15mmol/L，基本滿足了待測酶丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶最適條件對-酮戊二酸的用量的要求，擴(kuò)大了測定范圍，提高了測定準(zhǔn)確性。 （2）缺陷：存在內(nèi)源性丙酮酸和GLDH的干擾，采用雙試劑底物啟動模式可以消除

53、部分干擾，要求用高純度的試劑（不含雜酶）和無氨蒸餾水。 （3）輔基：預(yù)孵育使試劑中磷酸砒哆醛與部分脫輔基的酶先結(jié)合，使脫輔基的酶恢復(fù)酶活性。,魯旬愿瓦吹瘸梧邑侮艦必散豬獎磐愁階奏幅牲謾噓簧賺灤愉費(fèi)攙祁藩災(zāi)弟第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),85,門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及其同工酶的測定,惦巡水寬德牛勿脫汛撻鍬阮墨得臥讒也上請輛揣丘祝村尺衡耀標(biāo)盯手埃辟第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),86,乳酸脫氫酶及其同工酶的測定,正向反應(yīng)（LP）：以乳酸為底物，測定反應(yīng)中NAD的還原速率。 優(yōu)點(diǎn)：底物乳酸和NAD+比逆向反應(yīng)所用的丙酮酸和NADH穩(wěn)定；乳酸對

54、LDH的抑制作用小于丙酮酸；線性范圍較寬，重復(fù)性好于逆向反應(yīng)。 缺點(diǎn)：需要的底物濃度較高，反應(yīng)速度較慢。 逆向反應(yīng)（PL）：以丙酮酸為底物，測定反應(yīng)中NADH的氧化速率。 優(yōu)點(diǎn)：NADH用量少，試劑成本低；反應(yīng)速率快，靈敏度高。 缺點(diǎn)：丙酮酸和NADH的穩(wěn)定性差；過量丙酮酸對LD的抑制作用大。 連續(xù)監(jiān)測法以正向反應(yīng)（LP ）應(yīng)用較為廣泛，是IFCC和我國檢驗(yàn)學(xué)會的推薦方法。,毀敦阜榨掀砸詳嚴(yán)扒嘩宦茶凋賈凋緝包婆已釀偷賬感酌釩曝旺鑒牌晾悅增第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),87,（二）反映膽汁郁積為主的酶類,1谷氨?；D(zhuǎn)移酶（GGT） 血清GGT升高主要見于膽汁淤積和

55、肝內(nèi)占位性病變；與ALP相比，其優(yōu)點(diǎn)是骨病時(shí)不升高。但易受藥物誘導(dǎo)而增高，對肝病的特異性不如ALP。 2堿性磷酸酶（ALP） 血清ALP活性高于正常的2.5倍，轉(zhuǎn)氨酶不超過正常的8倍，90%為膽汁淤積；反之，90%為病毒性肝炎。膽汁淤積時(shí)血清ALP升高往往和膽紅素平行，肝內(nèi)占位性病變尤其是肝癌時(shí)，即使無黃疸，ALP也常升高。 35-核苷酸酶（5-NT）,欲亞缸舵洋納胚詳櫻掖措陶惑輛貞胞陋紹題緝舔墻輩賂獸嗆聾蜘夠悼叼膝第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),88,堿性磷酸酶及其同工酶的測定,具有代表性的方法有： （1）以布氏（Bodansky）法為代表：-甘油磷酸鈉做底物經(jīng)

56、ALP作用后產(chǎn)生磷酸根，通過定量磷來測定。 （2）以金-阿（King-Armstrong）法為代表：磷酸苯二鈉做底物經(jīng)ALP作用后產(chǎn)生酚，通過定量酚來測定。 （3）以皮-勞（Bessey-Lowery-Brock）法為代表：人工合成底物磷酸對硝基酚二鈉鹽（PNPP）做底物，經(jīng)ALP作用后產(chǎn)生對硝基酚，在堿性的測定條件下呈黃色而可以連續(xù)監(jiān)測。 其中以磷酸酰基的受體-2-甲基-2-氨基-1-丙醇（AMP）做緩沖液，是IFCC和我國檢驗(yàn)學(xué)會的推薦方法。,愁攆故上由晶鄰戚銀葵諱澗售姨膊彰虎灸妝剁濃司欠明鴦慢做讓檬蒂前楞第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),89,中華醫(yī)學(xué)會推薦法

57、測定堿性磷酸酶（37）,（1）PNPP的純度對測定結(jié)果影響很大。合格的PNPP所含雜質(zhì)應(yīng)盡量低，要求：游離4-NP小于0.03%，無機(jī)磷小于1%。 （2）各類分析儀的波長設(shè)置與4-NP的摩爾消光系數(shù)。 （3） 底物有一定自身水解作用，酶活性計(jì)算時(shí)應(yīng)扣除試劑空白變化速率。 （4）用于ALP測定的緩沖液分為三類： 惰性型：如碳酸鹽緩沖液和巴比妥緩沖液 抑制型：如甘氨酸緩沖液 活性型：如AMP、Tris和DEA緩沖液。,摸穩(wěn)翰舍誣賴埃氯帶群鐵苛魁誘艙賭漱匈簍蔬蛾嘎牌咎奏眠女籽壬昂嘩紗第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),90,-谷氨?；D(zhuǎn)移酶測定,（1）L-谷氨酰-（）-萘胺

58、做底物，催化生成的（）-萘胺與重氮試劑生成紅色化合物。該法簡便，試劑易得，采用定時(shí)法，適合一般分光光度計(jì)應(yīng)用。但反應(yīng)時(shí)間長，靈敏度低，底物溶解度差，在基層醫(yī)院還在使用。 （2）-L-谷氨酰對硝基苯胺（GNA）做底物，催化生成的對硝基苯胺在堿性環(huán)境下呈黃色，可以連續(xù)監(jiān)測。但底物溶解度差，達(dá)不到最適條件對底物濃度的要求，曾經(jīng)作為AACC和SSCC的推薦法。 （3）3-羧基-L-谷氨酰對硝基苯胺（GCNA）做底物，催化生成的對硝基苯胺在堿性環(huán)境下呈黃色，可以連續(xù)監(jiān)測。,氓疲蛤芝蝴帶停小繕搶澄蜒昂祝財(cái)鯨丁椅芽邯紊雷寶匈桑神募疊弗兵喻醉第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn)第十六章肝膽疾病的生物化學(xué)檢驗(yàn),91,IFCC推薦法測定-谷氨?；D(zhuǎn)移（37）,（1）反應(yīng)溫度37時(shí)的最適pH為7.70，以甘氨酰甘氨酸和氫氧化鈉做緩沖體系。 （2）5-氨基-2-硝基苯甲酸在410nm的摩爾消光系數(shù)為7.96 103（pH為7.70），受pH和溫度影響較大。 （3）GCNA的純度要求較高，對硝基苯胺應(yīng)小于0.5%，5-氨基-2-硝基苯甲酸應(yīng)小于0.1%，否則需先純化。 （5）底物有一定自身水解作用，酶活性計(jì)算時(shí)應(yīng)扣除試劑