醫(yī)學(xué)微生物學(xué)：18病毒感染的檢查方法與防治原則

1、病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷與防治原則,第18章,教學(xué)大綱,熟悉病毒的診斷，抗病毒治療，病毒感染的預(yù)防。,第一節(jié) 病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷,病毒感染的檢查,檢測(cè)內(nèi)容,查病毒,查特異性抗體,病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類(lèi)：如逆轉(zhuǎn)錄酶,電鏡直接觀(guān)察 光鏡檢查包涵體 分離培養(yǎng),一、標(biāo)本的采集與送檢,原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意： 1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理 2.低溫保存，盡快送檢 3.血清學(xué)診斷采雙份血清,二、病毒形態(tài)學(xué)鑒定,電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限 光學(xué)顯微鏡：可見(jiàn)大病毒（痘類(lèi)病毒）， 包涵體（如內(nèi)基小體） 對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大,三、病毒的分離與鑒定,（一）病毒的分離培養(yǎng) 細(xì)胞培

2、養(yǎng)（cell culture） 雞胚接種（egg inoculation） 動(dòng)物接種（animal inoculation）,1.雞胚培養(yǎng) 采用孵化914天的雞胚 絨毛尿囊膜 痘苗病毒、人類(lèi)皰疹病毒 尿囊腔 接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒的初次分離 卵黃囊 嗜神經(jīng)病毒,1、雞胚培養(yǎng),優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低 缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜,2.動(dòng)物接種 應(yīng)用：尚無(wú)敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng) 動(dòng)物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀(guān)察，可建立動(dòng)物模型 缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物 體內(nèi)常帶有潛伏病毒,病毒的分離培養(yǎng) 3.細(xì)胞培養(yǎng) 單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell cul

3、ture） 分類(lèi) 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspended cell culture） 原代細(xì)胞（primary cell） 細(xì)胞種類(lèi) 二倍體細(xì)胞（diploid cell） 傳代細(xì)胞系（continuous cell line）,病毒的細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)瓶,單層細(xì)胞,1病毒增殖鑒定 (1)細(xì)胞的變化 細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）； 形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。,（二）病毒的鑒定,細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落,麻疹病毒感染細(xì)胞,呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞,形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞,(1)細(xì)

4、胞病變 (cytopathy),形成包涵體(inclusion body),(1)細(xì)胞病變(cytopathy ),腮腺炎病毒感染細(xì)胞,(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）,病毒包膜表面血凝素(HA) 紅細(xì)胞表面HA受體,(3)干擾現(xiàn)象（interference）,風(fēng)疹病毒 細(xì)胞 病毒增殖，CPE(),?？刹《?細(xì)胞 病毒增殖，CPE(), 細(xì)胞,風(fēng)疹病毒？ ?？刹《?CPE(-)風(fēng)疹病毒(+) 埃可病毒(-) CPE(+)風(fēng)疹病毒(-) 埃可病毒(+),(4)細(xì)胞代謝改變 細(xì)胞代謝變慢 pH變化減慢,2.病毒數(shù)量與感染性測(cè)定,(1).空斑形成試驗(yàn) （plaque formation

5、 test） (2).50組織細(xì)胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50） (3). 感染復(fù)數(shù)測(cè)定（MOI）,感染性病毒量,四.病毒抗原的測(cè)定,用已知的抗體，檢測(cè)病毒的抗原 免疫熒光法 放射免疫測(cè)定法 ELISA,五.病毒核酸檢測(cè),抗原變異病毒基因的鑒定 核酸擴(kuò)增 核酸雜交 基因芯片 基因測(cè)序,六、血清學(xué)診斷,用已知抗原檢測(cè)患者血清中抗體水平及動(dòng)態(tài)變化。 應(yīng)用： 采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚 目前尚無(wú)分離此病毒的方法或難以分離的病毒 為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義 進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等,補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) （complement fixation t

6、est）,用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測(cè)病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體 特點(diǎn)：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快 應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。,病毒的快速診斷,光鏡-包涵體,電鏡,免疫熒光,ELISA,分子生物學(xué)技術(shù),雜交,Southern blot,PCR,Northern blot,病毒的血清學(xué)診斷,中和試驗(yàn),補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn),血凝抑制試驗(yàn),免疫擴(kuò)散等,病毒感染的檢查,檢測(cè)內(nèi)容,查病毒,查特異性抗體,病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類(lèi)：如逆轉(zhuǎn)錄酶,電鏡直接觀(guān)察 光鏡檢查包涵體 分離培養(yǎng),第二節(jié) 病毒感染的防治原則,微生物及其代謝產(chǎn)物 生物制品 動(dòng)物免疫血清 （biological products） 免疫細(xì)胞

7、細(xì)胞因子 防治和診斷感染性疾病,滅活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（living vaccine） 重組載體疫苗（recombinant carrier vaccine） 亞單位疫苗（subunit vaccine） 化學(xué)提取或人工合成疫苗 重組疫苗（recombinant vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,一、人工主動(dòng)免疫常用生物制品,二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品,免疫球蛋白 血清丙種球蛋白 細(xì)胞免疫制劑 IFN-、 細(xì)胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞 LAK細(xì)胞,三、病毒感染的藥物治療,核苷類(lèi)藥物 非核苷類(lèi)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 蛋白酶抑制劑 2.干擾素和干擾素誘生劑 3.中草藥 4.基因治療劑,1.抗病毒化學(xué)