急性皮膚刺激試驗(yàn)

1、.急性皮膚刺激試驗(yàn)1 目的 確定化學(xué)品對哺乳動物皮膚局部是否有刺激作用及程度，為制定化學(xué)品對皮膚的保護(hù)措施提供依據(jù)。2 制定依據(jù) 化妝品衛(wèi)生規(guī)范（2007版）。3試驗(yàn)方法3.1受試樣品處理液體受試物一般不需稀釋，可直接使用原液。若受試物為固體，應(yīng)將其研磨成細(xì)粉狀，并用水或其它無刺激性溶劑充分濕潤，以保證受試物與皮膚有良好的接觸。使用其它溶劑，應(yīng)考慮到該溶劑對受試物皮膚刺激性的影響。需稀釋后使用的產(chǎn)品，先進(jìn)行產(chǎn)品原型的皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)，如果試驗(yàn)結(jié)果顯示中度以上刺激性，可按使用濃度為受試物再進(jìn)行皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)。受試物為強(qiáng)酸或強(qiáng)堿（ph 值2 或11.5），可以不再進(jìn)行皮膚刺激試驗(yàn)。此

2、外，若已知受試物有很強(qiáng)的經(jīng)皮吸收毒性，經(jīng)皮ld50 小于200 mg/kg 體重或在急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)中受試物劑量為2000 mg/kg 體重仍未出現(xiàn)皮膚刺激性作用，也無需進(jìn)行急性皮膚刺激性試驗(yàn)。3.2實(shí)驗(yàn)動物和飼養(yǎng)環(huán)境 多種哺乳動物均可被選為實(shí)驗(yàn)動物，首選白色家兔。應(yīng)使用成年、健康、皮膚無損傷的動物，雌性和雄性均可，但雌性動物應(yīng)是未孕和未曾產(chǎn)仔的。實(shí)驗(yàn)動物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反應(yīng)則需增加實(shí)驗(yàn)動物數(shù)。實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)單籠飼養(yǎng)，試驗(yàn)前動物要在實(shí)驗(yàn)動物房環(huán)境中至少適應(yīng)3d 時間。實(shí)驗(yàn)動物及實(shí)驗(yàn)動物房應(yīng)符合國家相應(yīng)規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制。3.3 急性皮膚刺激性試驗(yàn)步驟3.3.1 試驗(yàn)前約

3、24h，將實(shí)驗(yàn)動物背部脊柱兩側(cè)毛剪掉，不可損傷表皮，去毛范圍左、右各約3cm3cm。3.3.2 取受試物約0.5ml（g）直接涂在皮膚上，然后用二層紗布（2.5cm2.5cm）和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定。另一側(cè)皮膚作為對照。采用封閉試驗(yàn)，敷用時間為4h。對化妝品產(chǎn)品而言，可根據(jù)人的實(shí)際使用和產(chǎn)品類型，延長或縮短敷用時間。對用后沖洗的化妝品產(chǎn)品，僅采用2h 敷用試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)束后用溫水或無刺激性溶劑清除殘留受試物。精品.如懷疑受試物可能引起嚴(yán)重刺激或腐蝕作用，可采取分段試驗(yàn)，將三個涂布受試物的紗布塊同時或先后敷貼在一只家兔背部脫毛區(qū)皮膚上，分別于涂敷后3min、60m

4、in 和4h 取下一塊紗布，皮膚涂敷部位在任一時間點(diǎn)出現(xiàn)腐蝕作用，即可停止試驗(yàn)。3.3.3 于清除受試物后的1、24、48 和72h 觀察涂抹部位皮膚反應(yīng)，按表1 進(jìn)行皮膚反應(yīng)評分，以受試動物積分的平均值進(jìn)行綜合評價(jià)，根據(jù)24、48 和72 h 各觀察時點(diǎn)最高積分均值，按表2 判定皮膚刺激強(qiáng)度。3.3.4 觀察時間的確定應(yīng)足以觀察到可逆或不可逆刺激作用的全過程，一般不超過14d。3.4 多次皮膚刺激性試驗(yàn)步驟3.4.1 試驗(yàn)前將實(shí)驗(yàn)動物背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉，去毛范圍各為3cm3cm，涂抹面積2.5cm2.5cm。3.4.2 取受試物約0.5ml（g）涂抹在一側(cè)皮膚上，當(dāng)受試物使用無刺激性溶劑配

5、制時，另一側(cè)涂溶劑作為對照，每天涂抹1 次，連續(xù)涂抹14d。從第二天開始，每次涂抹前應(yīng)剪毛，用水或無刺激性溶劑清除殘留受試物。一小時后觀察結(jié)果，按表1 評分，對照區(qū)和試驗(yàn)區(qū)同樣處理。3.4.3 結(jié)果評價(jià)：按下列公式計(jì)算每天每只動物平均積分，以表2 判定皮膚刺激強(qiáng)度。表1 皮膚刺激反應(yīng)評分皮膚反應(yīng)評分紅斑和焦痂形成無紅斑0輕微紅斑1明顯紅斑2中等程度到重度程度紅斑3嚴(yán)重紅斑（紫紅色）至輕微焦痂形成4水腫形成無水腫0微水腫（勉強(qiáng)可見）1輕度水腫（皮膚隆起輪廓清晰）2中度水腫（皮膚隆起約1mm）3精品.重度水腫（皮膚隆超過1mm，范圍擴(kuò)大）4 最高積分8分 84 試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)以表格形式總結(jié)，包

6、括如下內(nèi)容：（1）受試物名稱、理化性狀、配制方法和用量。必要時說明受試物的ph 值；（2）實(shí)驗(yàn)動物的種屬、品系、性別、體重和來源（注明合格證號和動物級別）；（3）實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)環(huán)境，包括飼料來源、室溫、相對濕度、實(shí)驗(yàn)動物房合格證號；（4）每個動物在每一觀察時點(diǎn)的皮膚刺激反應(yīng)積分；（5）具體描述除刺激性以外的其它毒性作用；（6）結(jié)論。5 試驗(yàn)結(jié)果的解釋急性皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果從動物外推到人的可靠性很有限。白色家兔在大多數(shù)情況下對有刺激性或腐蝕性的物質(zhì)較人類敏感。若用其它品系動物進(jìn)行試驗(yàn)時也得到類似結(jié)果，則會增加從動物外推到人的可靠性。試驗(yàn)中使用封閉式接觸是一種超常的實(shí)驗(yàn)室條件下的試驗(yàn)，在人類實(shí)際使用化妝品過程中很少存在這種接觸方式。表2 皮膚刺激強(qiáng)度分級積分均值強(qiáng)度分級00.5無刺激性0.52.0輕度刺激性2.06.0中等刺激性6.08.0強(qiáng)刺激性表3_ 對家兔急性皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果動物編號性別體重kg1h 24h 48h 72h樣品對照樣品對照樣品對照樣品對照紅斑水腫總分紅斑水腫總分紅斑水腫總分紅斑水腫總分紅斑水腫總分紅斑水腫總分紅斑水腫總分紅斑水腫總分1精品.234總積分均值刺激強(qiáng)度分級表4_對家兔多次皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果涂抹天數(shù)動物數(shù)