第38講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用Word版含解析

1、第38講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1現(xiàn)有兩種固體培養(yǎng)基，已知其配制時所加的成分如下表：KHSO4MgSO4NaClCaSO4CaCO3葡萄糖淀粉甲培養(yǎng)基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培養(yǎng)基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%00用這兩種培養(yǎng)基分別分離土壤中的兩種微生物，你認為它們適于分離 ()A甲培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌；乙培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌B甲培養(yǎng)基適于分離酵母菌；乙培養(yǎng)基適于分離真菌C甲培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌；乙培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌D甲培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型共生細菌；乙培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型共生固氮菌22013屯溪月考下列

2、敘述錯誤的是()A培養(yǎng)乳酸菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素B培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至堿性C培養(yǎng)細菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或微堿性D培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無氧的條件3在做分離分解尿素的細菌實驗時，平板劃線操作中錯誤的是()A將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅B將燒紅的接種環(huán)在火焰旁邊冷卻C接種環(huán)在平板上劃線位置是隨機的D在挑取菌種和接種完畢后均要將試管口通過火焰4同學(xué)從對應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有()由于土樣不同由于培養(yǎng)基污染由于操作失誤沒有設(shè)置對照A B C D5利用剛果紅染色法進行分解纖維素的微生物的鑒定

3、時，加入剛果紅可在()制備培養(yǎng)基時梯度稀釋時倒平板時涂布時培養(yǎng)基上長出菌落時A B C D6用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活細菌的數(shù)目，其結(jié)果與實際值相比()A比實際值高B比實際值低C和實際值一致D比實際值可能高也可能低72012上海聯(lián)考 如下表所示為某微生物培養(yǎng)基的配方，請回答：成分NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4(CH2O)H2O青霉素含量3 g1 g0.5 g0.5 g0.01 g30 g1 000 mL0.1萬單位(1)依物理性質(zhì)，該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。(2)該培養(yǎng)基中的碳源是_。不論何種培養(yǎng)基，在各成分都溶化后分裝前，要進行的是調(diào)整pH和_，倒平板時，一般需冷卻

4、至_左右，在_附近操作。(3)若用該培養(yǎng)液培養(yǎng)纖維素分解菌，應(yīng)除去的物質(zhì)是_，應(yīng)加入的碳源是_，為檢測纖維素分解菌的存在與否還應(yīng)加入_染料，形成_色復(fù)合物，若產(chǎn)生_，則證明有纖維素分解菌存在。8發(fā)酵法生產(chǎn)酒精后的廢液(pH4.3)含有大量有機物，可用于培養(yǎng)、獲得白地霉菌體，生產(chǎn)高蛋白飼料。培養(yǎng)、制取白地霉菌體的實驗過程示意圖如圖K381所示：圖K381請據(jù)圖分析回答問題：(1)實驗過程中培養(yǎng)白地霉的培養(yǎng)基是_。培養(yǎng)基定量分裝前，先調(diào)節(jié)_，分裝后用棉塞封瓶口，最后_處理。(2)圖中過程稱為_，從甲到乙的培養(yǎng)過程是為了_。白地霉的代謝類型為_。(3)為確定菌體產(chǎn)量，圖中操作之前，應(yīng)先稱量_的質(zhì)量。

5、過濾后需反復(fù)烘干稱量，直至_。所獲菌體干重等于_。9現(xiàn)在大力提倡無紙化辦公，但是每年仍然不可避免地產(chǎn)生大量的廢紙，其主要成分是木質(zhì)纖維，人類正努力將其轉(zhuǎn)化為一種新的資源乙醇。如圖K382是工業(yè)上利用微生物由纖維素生產(chǎn)乙醇的基本工藝流程，請回答相關(guān)問題：圖K382(1)自然界中環(huán)節(jié)需要的微生物大多分布在_的環(huán)境中。將從土壤中獲得的微生物培養(yǎng)在以_為碳源、并加入_的培養(yǎng)基上，篩選周圍有_的菌落。(2)在如上所述的篩選過程中獲得了三個菌落，對它們分別培養(yǎng)，并完成環(huán)節(jié)，且三種等量酶液中酶的濃度相同，則你認為三種酶液的活性_(填“一定相同、不一定相同或一定不同”)，可以通過_進行定量測定。(3)根據(jù)測定

6、結(jié)果，環(huán)節(jié)常選擇木霉，則中獲得的酶是_酶。(4)生產(chǎn)中可以滿足環(huán)節(jié)的常見菌種是_，為了確保獲得產(chǎn)物乙醇，環(huán)節(jié)要注意_。(5)該技術(shù)雖然有廣闊的前景，但存在酶的成本高等問題，為了降低成本可利用_等技術(shù)使酶能夠重復(fù)利用。102012武漢聯(lián)考 飼養(yǎng)動物常用的植物飼料中含有難溶的植酸鈣等物質(zhì)，很難被動物吸收利用，還影響對其他營養(yǎng)物質(zhì)的利用。若在飼料中添加植酸酶，則能催化其水解成為可以吸收利用的磷酸鹽等。以下是科研人員從作物根部土壤中分離產(chǎn)植酸酶的菌株的過程示意圖。請分析作答。圖K383(1)培養(yǎng)基中除了添加植酸鈣以外，應(yīng)含有_、_、水、無機鹽等基本營養(yǎng)物質(zhì)。(2)為防止雜菌污染，要對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿等進

7、行_，而且須將接種后的培養(yǎng)皿呈_狀態(tài)放置。(3)接種以前進行的一系列操作，目的是在培養(yǎng)皿表面形成_。根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積，統(tǒng)計平板上的_就能大致推測出樣品中的活菌數(shù)。(4)由于植酸鈣的不溶解性，使培養(yǎng)基中形成白色渾濁。產(chǎn)植酸酶的菌株會水解植酸鈣，菌落的周圍將形成透明的區(qū)域，根據(jù)透明區(qū)域的有無，可初步判斷該菌是否產(chǎn)植酸酶。實驗結(jié)果顯示AE五種菌株中，_是產(chǎn)植酸酶的理想菌株。(5)獲得目的菌以后，若要用于植酸酶的生產(chǎn)，還需要進行_。11下面是探究如何從土壤中分離自生固氮菌與計數(shù)的實驗，完成下列問題：(1)實驗原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多。將用表層土制成的稀泥漿

8、，接種到無氮培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長繁殖。用這種方法，可以將自生固氮菌與其他細菌分離開來。(2)材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛有9 mL無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂布器、無菌培養(yǎng)皿、盛有90 mL無菌水的錐形瓶、恒溫箱。 (3)方法步驟：倒平板：分別將無菌培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，操作過程應(yīng)在火焰旁。制備土壤稀釋液：取土樣10 g加入盛有90 mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。用無菌吸管吸取上清液1 mL，轉(zhuǎn)至9 mL的無菌水的大試管中，依次稀釋到107稀釋度。涂布：按照由107103稀釋度的順序分別吸取0.1 mL進行平板涂

9、布，每個稀釋度下，無氮培養(yǎng)基一般應(yīng)至少涂布_個平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布1個平板。培養(yǎng)：放入恒溫箱內(nèi)，在2830 下培養(yǎng)34天。細菌的計數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)為_的平板進行計數(shù)。如果測試的平均值為50，則每克樣品中的菌落數(shù)是_(稀釋度是105)。 (4)預(yù)測結(jié)果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上的菌落數(shù)應(yīng)多于無氮培養(yǎng)基上的數(shù)目。請說明原因_。12某生物興趣小組進行研究性學(xué)習(xí)，探究“影響細菌生長繁殖的因素”。在培養(yǎng)細菌的過程中，發(fā)現(xiàn)某種細菌(記作R菌)周圍的其他細菌的生長繁殖受到抑制，他們把R菌接種到專門的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。一段時間后，他們除去R菌，用該培養(yǎng)基再培養(yǎng)其他細菌，結(jié)

10、果，其他細菌不能在這個培養(yǎng)基上生長繁殖。(1)從生態(tài)學(xué)的角度分析，R細菌與周圍細菌之間的關(guān)系是_。(2)某同學(xué)假設(shè)了造成R菌周圍的其他細菌不能生長繁殖的原因，你認為最可能的原因是_。AR菌占據(jù)了其他細菌的生存空間BR菌吞噬了其他細菌CR菌產(chǎn)生了不利于其他細菌生存的物質(zhì)DR菌更容易吸收培養(yǎng)基中的物質(zhì)(3)參照題中給出的有關(guān)材料，請設(shè)計一個實驗，對第(2)問所做的選擇進行驗證，簡述你的實驗步驟及結(jié)論。方法步驟：第一步：取兩個培養(yǎng)皿，按相同營養(yǎng)成分分別配制甲、乙兩個培養(yǎng)基。第二步：_。第三步：_。第四步：在相同條件下，讓甲、乙兩個培養(yǎng)基上的細菌生長繁殖。結(jié)果：_。結(jié)論：_。1C解析 根據(jù)所提供的甲、

11、乙兩種培養(yǎng)基的成分分析，兩者之間的主要差別是：甲培養(yǎng)基以葡萄糖和淀粉作為有機碳源和能源，也有少量的無機碳源(CaCO3)；乙培養(yǎng)基無有機碳源和能源。兩者之間的共同點是：都不含氮源。說明這兩種培養(yǎng)基只能培養(yǎng)具有固氮能力的微生物。2B解析 培養(yǎng)基不僅需要一定的營養(yǎng)構(gòu)成，還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求，培養(yǎng)乳酸菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無氧的條件。3C解析 平板劃線時的正確操作是左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。

12、注意不要劃破培養(yǎng)皿。然后灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。4A解析 該同學(xué)的實驗結(jié)果與其他同學(xué)明顯不同，其原因是多方面的，土樣不同、培養(yǎng)基污染、操作失誤等都可能引起產(chǎn)生上述結(jié)果，對照實驗的設(shè)置，不會影響實驗組的實驗結(jié)果。5C解析 一般用剛果紅染色法進行分解纖維素的微生物的鑒定，常用方法有兩種，這兩種方法分別在倒平板時和培養(yǎng)基上長出菌落時加入剛果紅。6B解析 因為當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，而樣品稀釋度無論多高都很難使其中的細菌都單個分布于培養(yǎng)基上。7(1)液體

13、(2)(CH2O)滅菌50 酒精燈火焰(3)(CH2O)纖維素粉剛果紅紅透明圈解析 培養(yǎng)基按物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基等，分析該培養(yǎng)基的成分，該培養(yǎng)基沒有添加瓊脂，應(yīng)為液體培養(yǎng)基，其碳源應(yīng)為(CH2O)。配制培養(yǎng)基時，各成分溶化后要調(diào)整pH和滅菌后再分裝，倒平板時，培養(yǎng)基應(yīng)冷卻到50 左右，并且在酒精燈火焰附近進行。由于纖維素分解菌能以纖維素為碳源，其他微生物不能，因此若用該培養(yǎng)液培養(yǎng)纖維素分解菌，應(yīng)除去(CH2O)添加纖維素粉，檢測纖維素分解菌常用的方法是剛果紅染色法。8(1)廢液上清液pH滅菌(2)接種擴大培養(yǎng)異養(yǎng)需氧型(3)濾紙恒重(質(zhì)量基本不變)恒重時質(zhì)量與濾紙質(zhì)量之差(答案

14、合理即可)解析 (1)培養(yǎng)基制備的流程是：確定營養(yǎng)成分調(diào)節(jié)pH滅菌處理，該實驗過程中，由圖示信息可知，白地霉的培養(yǎng)基來自廢液沉淀處理后所獲得的廢液上清液。(2)圖示是將白地霉菌種接種到培養(yǎng)基的過程。甲到乙的過程是菌種擴大培養(yǎng)。白地霉的培養(yǎng)基含有大量的有機物，推斷其同化作用為異養(yǎng)型。培養(yǎng)瓶開口，且培養(yǎng)過程不斷振蕩，則白地霉異化作用為需氧型。(3)由實驗過程示意圖可知，通過濾紙過濾，再烘干稱重來確定菌體產(chǎn)量，實驗結(jié)束后所稱重量不僅有菌體的，還有濾紙的，所以濾液過濾之前應(yīng)先稱量濾紙的質(zhì)量。菌體的產(chǎn)量是通過菌種干重體現(xiàn)的，所以過濾后需反復(fù)烘干，蒸發(fā)掉水分，直至質(zhì)量基本不變，才能確定為干重，最后求得菌體

15、干重恒重時的質(zhì)量濾紙質(zhì)量。9(1)富含纖維素(其他答案合理也可，如落葉較多等)纖維素剛果紅透明圈(2)不一定相同對纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖(3)纖維素(4)酵母菌發(fā)酵裝置的密閉性(或保證無氧條件等)(5)固定化酶解析 (1)富含纖維素的土壤中，含有大量以纖維素為碳源的纖維素分解菌。剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素分解后，復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，通過此方法來篩選纖維素分解菌。(2)酶液中蛋白質(zhì)的濃度相同，酶的活性不一定相同，可通過分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖量是否相等來鑒定其活性是否相同。(3)木霉能產(chǎn)生纖維素酶，可以將纖維素分解。(

16、4)在酒精發(fā)酵中常用的微生物是酵母菌，在接種過程中一定要避免雜菌污染。乙醇是酵母菌無氧發(fā)酵的產(chǎn)物，發(fā)酵過程中一定要保持無氧的環(huán)境。(5)可通過固定化酶技術(shù)使酶能夠反復(fù)利用來降低酶的成本。10(1)碳源氮源(2)滅菌倒置(3)單個菌落菌落數(shù)(4)E(5)擴大培養(yǎng)解析 (1)從土壤中分離培養(yǎng)植酸酶的菌株的過程中，培養(yǎng)基中加入植酸鈣，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長，此外還要充足的碳源和氮源等營養(yǎng)物質(zhì)。實驗的滅菌方法一般有：灼燒滅菌(接種環(huán)、接種針或其他金屬用具)、干熱滅菌(玻璃器皿和金屬用具等)、高壓蒸汽滅菌(培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿)。(2)將接種后的培養(yǎng)皿制平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水

17、珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的溫度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。(3)當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。(4)根據(jù)題干提供的信息，E菌落的周圍形成特別透明的區(qū)域，是產(chǎn)植酸酶的理想菌株。(5)獲得目的菌以后，若要用于植酸酶的生產(chǎn)，還需要進行擴大培養(yǎng)。11(3)3303005107(4)無氮培養(yǎng)基上能生存繁殖的僅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存解析 統(tǒng)計菌落數(shù)目的原則是：選出菌落數(shù)在30300的平板進行計數(shù)。根據(jù)計算方法“每克樣品中的菌落數(shù)(CV)M”，則(500.1)1055107。無氮培養(yǎng)基里沒有氮源，只允許固氮菌生存，屬于選擇培養(yǎng)基，可分離出土壤中的固氮菌。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基營養(yǎng)全面，幾乎允許土壤中所有菌類生存。 12(1)競爭(2)C(3)第二步：甲培養(yǎng)基上接種R菌，培養(yǎng)一段時間后除去R菌，乙培養(yǎng)基上不接種R菌，作為對照第三步：兩個培養(yǎng)基分別接種相同的其他細菌甲培養(yǎng)基上的細菌的生長