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文檔簡(jiǎn)介
1、專題1 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用本專題圍繞傳統(tǒng)發(fā)酵食品的制作展開,主要操作技術(shù)歸納如下。1. 果酒與果醋的制作技術(shù)。2. 腐乳的制作技術(shù)。3. 泡菜的腌制與亞硝酸鹽含量的測(cè)定。課題1 果酒和果醋的制作一、基礎(chǔ)知識(shí)(一)果酒制作的原理知識(shí)要點(diǎn):1. 酵母菌的兼性厭氧生活方式;2.發(fā)酵需要的適宜條件;3.傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)所使用的酵母菌的來源。(二)果醋制作的原理知識(shí)要點(diǎn):1.酒變醋的原理;2.控制發(fā)酵條件的作用;3.制醋所利用的醋酸菌的來源。二、課題成果評(píng)價(jià)(一)果酒的制作是否成功發(fā)酵后取樣,通過嗅味和品嘗進(jìn)行初步鑒定。此外,還可用顯微鏡觀察酵母菌,并用重鉻酸鉀檢驗(yàn)酒精的存在。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想,請(qǐng)學(xué)生分析
2、失敗原因,然后重新制作。(二)果醋的制作是否成功首先通過觀察菌膜的形成、嗅味和品嘗進(jìn)行初步鑒定,再通過檢測(cè)和比較醋酸發(fā)酵前后的pH作進(jìn)一步的鑒定。此外,還可以通過在顯微鏡下觀察發(fā)酵液中是否有醋酸菌,并統(tǒng)計(jì)其數(shù)量作進(jìn)一步鑒定。三、答案和提示(一)旁欄思考題1.你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗?為什么?答:應(yīng)該先沖洗,然后再除去枝梗,以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損,增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。2.你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染?提示:需要從發(fā)酵制作的過程進(jìn)行全面的考慮。例如,榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈;每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋、不要完全揭開瓶蓋等。3.制葡萄酒時(shí),為什么要將溫度控制在1825 ?制葡
3、萄醋時(shí),為什么要將溫度控制在3035 ?答:溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的重要條件。20 左右最適合酵母菌繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌,最適生長(zhǎng)溫度為3035 ,因此要將溫度控制在3035 。4.制葡萄醋時(shí),為什么要適時(shí)通過充氣口充氣?答:醋酸菌是好氧菌,在將酒精變?yōu)榇姿釙r(shí)需要氧的參與,因此要適時(shí)向發(fā)酵液中充氣。(二)資料發(fā)酵裝置的設(shè)計(jì)討論題請(qǐng)分析此裝置中的充氣口、排氣口和出料口分別有哪些作用。為什么排氣口要通過一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接?結(jié)合果酒、果醋的制作原理,你認(rèn)為應(yīng)該如何使用這個(gè)發(fā)酵裝置?答:充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的;排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用
4、來排出CO2的;出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接,其目的是防止空氣中微生物的污染,其作用類似巴斯德的鵝頸瓶。使用該裝置制酒時(shí),應(yīng)該關(guān)閉充氣口;制醋時(shí),應(yīng)將充氣口連接氣泵,輸入氧氣。(三)練習(xí)2.提示:大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)需要進(jìn)行更為全面周詳?shù)目紤],如原料的來源與選擇、菌種的培育與選擇、發(fā)酵的設(shè)備、發(fā)酵條件的自動(dòng)化控制,以及如何嚴(yán)格控制雜菌污染;等等。此外,無論是葡萄酒或葡萄醋,實(shí)驗(yàn)時(shí)所檢測(cè)的發(fā)酵液,并非商品意義上的產(chǎn)品。在實(shí)際生產(chǎn)中還需沉淀過濾、滅菌裝瓶等獲得成品酒或醋。葡萄酒還需在一定設(shè)施和條件下(如橡木桶和地窖)進(jìn)行后續(xù)發(fā)酵,以獲得特定的風(fēng)味和色澤。3.提示:需考慮廠房
5、、設(shè)備投資、原材料采購(gòu)、工人人數(shù)及工資、產(chǎn)品種類、生產(chǎn)周期、銷售渠道、利潤(rùn)等問題。課題2 腐乳的制作一、基礎(chǔ)知識(shí)知識(shí)要點(diǎn):相關(guān)的微生物,如毛霉等在腐乳制作中的作用。二、課題成果評(píng)價(jià)(一)是否完成腐乳的制作學(xué)生是否完成腐乳的制作依據(jù)是:能夠合理地選擇實(shí)驗(yàn)材料與用具;前期發(fā)酵后豆腐的表面長(zhǎng)有菌絲,后期發(fā)酵制作基本沒有雜菌的污染。(二)腐乳質(zhì)量的評(píng)價(jià)制作成功的腐乳應(yīng)該具有以下特點(diǎn):色澤基本一致、味道鮮美、咸淡適口、無異味、塊形整齊、厚薄均勻、質(zhì)地細(xì)膩、無雜質(zhì)。(三) 能否總結(jié)不同條件對(duì)腐乳風(fēng)味和質(zhì)量的影響。學(xué)生能從鹽、酒的用量、發(fā)酵的溫度、發(fā)酵時(shí)間的長(zhǎng)短,以及香辛料等因素中的某一因素來說明其對(duì)腐乳風(fēng)
6、味或質(zhì)量的影響。三、答案和提示(一)旁欄思考題1.你能利用所學(xué)的生物學(xué)知識(shí),解釋豆腐長(zhǎng)白毛是怎么一回事?答:豆腐上生長(zhǎng)的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴(yán)格地說是直立菌絲,在豆腐中還有匍匐菌絲。2.王致和為什么要撒許多鹽,將長(zhǎng)毛的豆腐腌起來?答:鹽能防止雜菌污染,避免豆腐腐敗。3.我們平常吃的豆腐,哪種適合用來做腐乳?答:含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量過高的豆腐制腐乳,不易成形。4.吃腐乳時(shí),你會(huì)發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢?它對(duì)人體有害嗎?它的作用是什么?答:“皮”是前期發(fā)酵時(shí)在豆腐表面上生長(zhǎng)的菌絲(匍匐菌絲),它能形成腐乳的“體”,使腐乳成形?!捌ぁ睂?duì)人體無
7、害。(二)練習(xí)1.答:越接近瓶口,雜菌污染的可能性越大,因此要隨著豆腐層的加高增加鹽的用量,在接近瓶口的表面,鹽要鋪厚一些,以有效防止雜菌污染。課題3 制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量一、基礎(chǔ)知識(shí) (一)乳酸菌發(fā)酵知識(shí)要點(diǎn):1. 乳酸菌在自然界的分布;2. 乳酸菌發(fā)酵的原理。(二)亞硝酸鹽知識(shí)要點(diǎn):1.亞硝酸鹽的有關(guān)知識(shí);2.我國(guó)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的亞硝酸鹽含量標(biāo)準(zhǔn);3.亞硝酸鹽的危害。三、課題成果評(píng)價(jià)(一)泡菜腌制的質(zhì)量如何可以根據(jù)泡菜的色澤和風(fēng)味進(jìn)行初步的評(píng)定,還可以在顯微鏡下觀察乳酸菌形態(tài),比較不同時(shí)期泡菜壇中乳酸菌的含量。(三)是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過程中,應(yīng)及時(shí)對(duì)泡菜中亞硝
8、酸鹽含量進(jìn)行鑒定,比較不同時(shí)期亞硝酸鹽含量的變化及其對(duì)泡菜質(zhì)量的影響。三、答案和提示(一)旁欄思考題1.為什么含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵成酸奶?答:酸奶的制作依靠的是乳酸菌的發(fā)酵作用??股啬軌驓⑺阑蛞种迫樗峋纳L(zhǎng),因此含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵成酸奶。2.為什么日常生活中要多吃新鮮蔬菜,不吃存放時(shí)間過長(zhǎng)、變質(zhì)的蔬菜?答:有些蔬菜,如小白菜和蘿卜等,含有豐富的硝酸鹽。當(dāng)這些蔬菜放置過久發(fā)生變質(zhì)(發(fā)黃、腐爛)或者煮熟后存放太久時(shí),蔬菜中的硝酸鹽會(huì)被微生物還原成亞硝酸鹽,危害人體健康。3.為什么泡菜壇內(nèi)有時(shí)會(huì)長(zhǎng)一層白膜?你認(rèn)為這層白膜是怎么形成的?答:形成白膜是由于產(chǎn)膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厭氧微
9、生物,泡菜發(fā)酵液營(yíng)養(yǎng)豐富,其表面氧氣含量也很豐富,適合酵母菌繁殖。(二)練習(xí)2.答:果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精發(fā)酵,果醋的制作利用的是醋酸菌將酒精轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿岬拇x,腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶類,泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸發(fā)酵。傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)都巧妙地利用了天然菌種,都為特定的菌種提供了良好的生存條件,最終的發(fā)酵產(chǎn)物不是單一的組分,而是成分復(fù)雜的混合物。專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用本專題圍繞微生物技術(shù)展開,主要技術(shù)歸納如下。1.培養(yǎng)基的制備。2.高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌。3.倒平板操作。4.平板劃線操作和稀釋涂布平板法。5.應(yīng)用選擇培養(yǎng)基分離某種特定的微生物(課題2和課題3)
10、。課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一.知識(shí)要點(diǎn):(一)培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基的用途和種類,指出培養(yǎng)基可分為液體和固體兩大類;2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方;3.盡管培養(yǎng)基的配方各不相同,但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。(二)無菌技術(shù)知識(shí)要點(diǎn):1.無菌技術(shù)的概念;2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別;3.常用的消毒與滅菌的方法,接種環(huán)灼燒滅菌的方法二.課題成果評(píng)價(jià)(一)培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長(zhǎng),說明培養(yǎng)基的制備是成功的,否則需要重新制備。(二)接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致,并符合大腸桿菌菌落的特
11、點(diǎn),則說明接種操作是符合要求的;如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落,則說明接種過程中,無菌操作還未達(dá)到要求,需要分析原因,再次練習(xí)。(三)是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同,及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn),并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。三、答案和提示(一)旁欄思考題1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外,還有什么目的?答:無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要,請(qǐng)選擇合適的方法。(1) 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿(2) 玻
12、棒、試管、燒瓶和吸管(3) 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答:(1)、(2)需要滅菌;(3)需要消毒。(二)倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50 左右時(shí),才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí),就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?答:通過灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后,為什么要將平板倒置?答:平板冷凝后,皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠,凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高,將平板倒置,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。4.在倒平板的過程中,如果
13、不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎?為什么?答:空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。(三)平板劃線操作的討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?答:操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時(shí),接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端,從而通過劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少,以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘
14、留的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線?答:以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí),為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線?答:劃線后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。(四)涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求,想一想,第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作?提示:應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如,酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒
15、精燈火焰周圍;等等。(五)練習(xí)1.提示:可以從微生物生長(zhǎng)需要哪些條件的角度來思考。例如,微生物的生長(zhǎng)需要水、空氣、適宜的溫度,食品保存可以通過保持干燥、真空的條件,以及冷藏等方法來阻止微生物的生長(zhǎng)。2.提示:可以從這三種培養(yǎng)技術(shù)的原理、操作步驟等方面分別進(jìn)行總結(jié)歸納。例如,這三種培養(yǎng)技術(shù)都需要為培養(yǎng)物提供充足的營(yíng)養(yǎng),但無土栽培技術(shù)的操作并不需要保證無菌的條件,而其他兩種技術(shù)都要求嚴(yán)格的無菌條件。課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離一.研究思路(一)篩選菌株微生物的選擇培養(yǎng),是指利用培養(yǎng)基的組成使適宜生長(zhǎng)的特定微生物得到較快繁殖的技術(shù),也稱為微生物的“選擇培養(yǎng)”。在本課題提供的選擇培養(yǎng)基的配方中,
16、尿素是培養(yǎng)基中的惟一氮源,因此,原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)。但實(shí)際上,微生物的培養(yǎng)是一個(gè)非常復(fù)雜的問題,有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)繁殖,因此能夠在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物不一定是所需要的微生物,還需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。(二)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。因此,恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,通常將幾個(gè)稀釋度下的菌液都涂布在平板上,培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(三)設(shè)置對(duì)照A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同,可能的解釋有兩種。一是由于土樣不同,二是
17、由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。究竟是哪個(gè)原因,可以通過實(shí)驗(yàn)來證明。實(shí)驗(yàn)方案有兩種。一種方案是可以由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn),如果結(jié)果與A同學(xué)一致,則證明A無誤;如果結(jié)果不同,則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。另一種方案是將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng),作為空白對(duì)照,以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個(gè)事例可以看出,實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力,對(duì)照的設(shè)置是必不可少的。二.課題成果評(píng)價(jià)(一)培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落對(duì)照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng),說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目,說明選擇培養(yǎng)基已篩選出
18、一些菌落。(二)樣品的稀釋操作是否成功如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30300的平板,則說明稀釋操作比較成功,并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。三.練習(xí)2.提示:反芻動(dòng)物的瘤胃中含有大量的微生物,其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌,接觸空氣后會(huì)死亡,因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基外,還應(yīng)參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì).課題3 分解纖維素的微生物的分離一.基礎(chǔ)知識(shí)(一) 纖維素與纖維素酶知識(shí)要點(diǎn): 1.纖維素在生物圈的分布;2.纖維素酶的作用。(二)纖維素分解菌的篩選知識(shí)要點(diǎn): 1.剛果紅染色法;2.剛果紅染色法的原理。二、課題成果評(píng)價(jià)(一)培養(yǎng)基的制作是否
19、合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落:對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落,則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。(二)分離的結(jié)果是否一致:由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量,因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同,學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。三、答案和提示(一)旁欄思考題1.本實(shí)驗(yàn)的流程與課題2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同?答:本實(shí)驗(yàn)流程與課題2的流程的區(qū)別如下。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上,直接分離得到菌落。本課題通過選擇培養(yǎng),使纖維素分解菌得到增殖后,再將菌液涂布在選擇
20、培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。2.為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌?答:由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系,在富含纖維素的環(huán)境中,纖維素分解菌的含量相對(duì)提高,因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。3.將濾紙埋在土壤中有什么作用?你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深?答:將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)聚集,實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10 cm左右腐殖土壤中。4.想一想,這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足?你打算選用哪一種方法??jī)煞N剛果紅染色法的比較方法一是傳統(tǒng)的方法,缺點(diǎn)是操作繁瑣,加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜;其優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上
21、是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便,不存在菌落混雜問題,缺點(diǎn)是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì),可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊,因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位,因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點(diǎn)是:有些微生物具有降解色素的能力,它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過程中會(huì)降解剛果紅形成明顯的透明圈,與纖維素分解菌不易區(qū)分。5.為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物?答:在選擇培養(yǎng)的條件下,可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖,而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“濃縮”的作用。(二
22、)練習(xí)2.答:流程圖表示如下。土壤取樣選擇培養(yǎng)(此步是否需要,應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定)梯度稀釋將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上挑選單菌落發(fā)酵培養(yǎng)專題3 植物的組織培養(yǎng)技術(shù)本專題圍繞植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)展開,主要技術(shù)歸納如下。1.培養(yǎng)基的制備2.外植體消毒3.接種4.培養(yǎng)5.移栽6.栽培課題1 菊花的組織培養(yǎng)一、基礎(chǔ)知識(shí)(一)植物組織培養(yǎng)的基本過程知識(shí)要點(diǎn):1.細(xì)胞分化的概念;2.離體植物細(xì)胞的脫分化和再分化。(二)影響植物組織培養(yǎng)的因素知識(shí)要點(diǎn):影響植物組織培養(yǎng)的因素有培養(yǎng)基配制、外植體的選取、消毒、接種、培養(yǎng)、移栽和栽培等。二、注意事項(xiàng)(一)無菌技術(shù)是植物組織培養(yǎng)能否獲
23、得成功的關(guān)鍵植物組織培養(yǎng)不同于扦插、分根、葉插等常規(guī)無性繁殖。由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,所以對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高,對(duì)無菌操作的要求非常嚴(yán)格。如果不小心引起污染,將可能造成培養(yǎng)工作的前功盡棄。無菌技術(shù)包括培養(yǎng)基消毒滅菌和植物材料(外植體)的消毒滅菌。對(duì)培養(yǎng)材料進(jìn)行表面滅菌時(shí),一方面要考慮藥劑的消毒效果;另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料,甚至不同器官要區(qū)別對(duì)待。(二)妥善處理被污染的培養(yǎng)物即使對(duì)于有經(jīng)驗(yàn)的操作人員,操作后出現(xiàn)培養(yǎng)物被污染的情況也常有。一般情況下,細(xì)菌污染可能是由接種人員造成的,如未戴口罩,接種時(shí)說話,或手及器械消毒不嚴(yán)等。真菌污染可能
24、是植物材料滅菌不當(dāng)。需要特別注意的是,一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)材料被污染,特別是真菌性污染,一定不要打開培養(yǎng)瓶。應(yīng)先將所有被污染的培養(yǎng)瓶統(tǒng)一放在高壓蒸汽鍋內(nèi)進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,然后再打開培養(yǎng)瓶,進(jìn)行清洗。(三)有毒藥品的用后處理外植體滅菌用過的有毒藥品要妥善處理(如氯化汞等),以免引起環(huán)境污染。一般應(yīng)收集后統(tǒng)一交給有關(guān)專業(yè)部門處理。三、課題成果評(píng)價(jià)(一)對(duì)接種操作中污染情況的分析接種34 d后,在接種操作中被雜菌污染的培養(yǎng)物會(huì)表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。請(qǐng)學(xué)生適時(shí)統(tǒng)計(jì)污染率,分析接種操作是否符合無菌要求。(二)是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果,看看是否培養(yǎng)出了愈傷組織,記錄多長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)出愈傷組織。統(tǒng)計(jì)
25、更換培養(yǎng)基后愈傷組織進(jìn)一步分化成根和芽的比例和時(shí)間。(三)是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄做好統(tǒng)計(jì)和對(duì)照,填好結(jié)果記錄表,培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度。從實(shí)驗(yàn)的第一步開始就要做好實(shí)驗(yàn)記錄,可以分組配制不同培養(yǎng)基,如誘導(dǎo)愈傷或直接分化叢芽的培養(yǎng)基,然后做不同配方的比較。(四)生根苗的移栽是否合格生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基,又不能傷及根系。一般使用無土栽培的辦法。培養(yǎng)基質(zhì)要提前消毒,可以向培養(yǎng)基質(zhì)噴灑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的高錳酸鉀,并用塑料薄膜覆蓋12 h。掀開塑料薄膜后24 h才能移栽。新移栽的組培苗要在溫室過渡幾天,等壯苗后再定植大田或進(jìn)行盆栽。統(tǒng)計(jì)自己移栽的成活率,看看移栽是否合格。四、答
26、案和提示(一)旁欄思考題1.你能說出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎?同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比,MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同?答:微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無機(jī)鹽;蔗糖提供碳源,同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓;甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同,MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營(yíng)養(yǎng),無機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元素和微量元素兩大類。2.你打算做幾組重復(fù)?你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎?答:可以生分組,做不同的材料或配方,最后分別匯報(bào)成果。但每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)
27、驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng),用以說明培養(yǎng)基制作合格,沒有被雜菌污染。(二)練習(xí)1.答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長(zhǎng),如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染,就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄,因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。2.答:外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理狀況好,容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。課題2 月季的花藥培養(yǎng)一、基礎(chǔ)知識(shí)(一)被子植物的花粉發(fā)育知識(shí)要點(diǎn):1.花粉是單倍體生殖細(xì)胞;2.花粉的發(fā)育要經(jīng)歷不同的時(shí)期。(二)產(chǎn)生花
28、粉植株的兩種途徑知識(shí)要點(diǎn):花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑。(三)影響花藥培養(yǎng)的因素知識(shí)要點(diǎn):選取適宜的材料和培養(yǎng)基組成是花粉植株誘導(dǎo)成功的關(guān)鍵。二、課題成果評(píng)價(jià)(一)選材是否恰當(dāng)選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。學(xué)生應(yīng)學(xué)會(huì)通過顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉。(二)無菌技術(shù)是否過關(guān)如果出現(xiàn)了污染現(xiàn)象,說明某些操作步驟,如培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等有問題。(三)接種是否成功如果接種的花藥長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體,花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時(shí)轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基,以便愈傷組織或胚狀體進(jìn)一步分化成再生植株。三、答案和提示(一)旁欄思考題為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來困難?答:花瓣松動(dòng)后,微生物就可能侵
29、入到花藥,給材料的消毒帶來困難。(二)練習(xí)1.答:F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu或AAsusu。如果運(yùn)用常規(guī)育種方法,將F2代中的紫色甜玉米與白色甜玉米(aasusu)進(jìn)行測(cè)交,可以選擇出基因型為AAsusu純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣,耗時(shí)也較長(zhǎng),需要至少三年的選種和育種時(shí)間。如果利用花藥培養(yǎng)的技術(shù),在F1代產(chǎn)生的花粉中就可能有Asu的組合,再將花粉植株進(jìn)行染色體加倍,就可以直接得到紫色甜玉米的純合體(AAsusu)。這種方法可以大大縮短育種周期。2.答:植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是:培養(yǎng)基配制方法、無菌技術(shù)及接種操作等基本相同。兩者的不同之處在于:花藥培
30、養(yǎng)的選材非常重要,需事先摸索時(shí)期適宜的花蕾;花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時(shí)更換培養(yǎng)基;花藥培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。專題5 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)課題1 DNA的粗撮與鑒定技術(shù)一、基礎(chǔ)知識(shí)知識(shí)要點(diǎn):1.DNA的物理化學(xué)性質(zhì),尤其是DNA的溶解性;2.二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。分析插圖5-1“DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線”,理解:在NaCl溶液濃度低于0.14 mol/L時(shí),DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而逐漸降低;在0.14 mol/L時(shí),DNA溶解度最?。划?dāng)NaCl溶液濃度繼續(xù)增加時(shí),DNA的溶解度又逐漸增大。利用上述原理,可
31、以將DNA溶于高濃度的NaCl溶液中,使其與其他物質(zhì)分開。2認(rèn)識(shí)DNA和蛋白質(zhì)對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性的不同。教材在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中關(guān)于去除濾液中雜質(zhì)的第二、第三個(gè)方案,正是利用了上述不同的特性,從而達(dá)到分離DNA和蛋白質(zhì)的目的。3用二苯胺法鑒定DNA的方法二、課題成果評(píng)價(jià)(一)是否提取出了DNA觀察你提取的DNA顏色,如果不是白色絲狀物,說明DNA中的雜質(zhì)較多;二苯胺鑒定出現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功,如果不呈現(xiàn)藍(lán)色,可能所提取的DNA含量低,或是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)錯(cuò)誤,需要重新制備。(二)分析DNA中的雜質(zhì)本實(shí)驗(yàn)提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。(三)不同實(shí)驗(yàn)方法的比較對(duì)于不同的實(shí)驗(yàn)方
32、法,本課題可以采用分組的方法進(jìn)行研究。首先選取不同的實(shí)驗(yàn)材料,其次同種材料還可以采用不同方法,從多方面比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果,如DNA的純度、DNA的顏色、二苯胺顯色的深淺等,看看哪種實(shí)驗(yàn)材料、哪種提取方法的效果更好。三、答案和提示(一)旁欄思考題1為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂?答:蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體,水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi),使血細(xì)胞脹裂,再加上攪拌的機(jī)械作用,就加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜和核膜的破裂),從而釋放出DNA。2加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么?答:洗滌劑是一些離子去污劑,能溶解細(xì)胞膜,有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。3如果研磨不充
33、分,會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響?答:研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全,提取的DNA量變少,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。4此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分?答:可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。5為什么反復(fù)地溶解與析出DNA,能夠去除雜質(zhì)?答:用高鹽濃度的溶液溶解DNA,能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出,能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此,通過反復(fù)溶解與析出DNA,就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。6方案二與方案三的原理有什么不同?答:方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白,從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開;方案三利用的是DNA和
34、蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同,從而使蛋白質(zhì)變性,與DNA分離。(二)練習(xí)1答:提取DNA的第一步是材料的選取,其目的是一定要選取DNA含量較高的生物材料,否則會(huì)由于實(shí)驗(yàn)過程中或多或少的損失而造成檢測(cè)的困難;第二步是DNA的釋放和溶解,這一步是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵,要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的DNA全部溶解;第三步是DNA的純化,即根據(jù)DNA的溶解特性、對(duì)酶及高溫的耐受性的不同等特性,最大限度地將DNA與雜質(zhì)分開;最后一步是對(duì)DNA進(jìn)行鑒定,這是對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的檢測(cè)。2答:提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大。這是因?yàn)椋cDNA相比,蛋白質(zhì)對(duì)溫度、鹽濃度、pH等條件要敏感得多,很容易失活;并且蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)多種多
35、樣,理化性質(zhì)各不相同,使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種統(tǒng)一的方法,只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件,設(shè)計(jì)特定的方法。專題6 植物有效萬分的提取本專題圍繞植物有效成分的提取展開,主要操作技術(shù)歸納如下。1.蒸餾法。2.壓榨法。3.萃取法。課題1 植物芳香油的提取一、基礎(chǔ)知識(shí)(一)植物芳香油的來源知識(shí)要點(diǎn):1.植物芳香油的來源和發(fā)展歷史;2.植物芳香油的主要化學(xué)成分。(二)植物芳香油的提取方法知識(shí)要點(diǎn):提取植物芳香油的三種基本方法:蒸餾、壓榨和萃取。二、課題成果評(píng)價(jià)(一)是否提取出了植物精油觀察提取出的玫瑰精油或橘皮精油,從顏色、氣味等方面來評(píng)價(jià)所提取的精油的純度和質(zhì)量。從玫瑰花提取的芳香油是淺黃色至黃色的液體,并帶有甜韻的玫瑰香;從橘皮提取的橘皮精油無色透明,具有誘人的橘香味。本課題只是對(duì)兩種精油進(jìn)行了初步的提取,其中仍然含有大量的雜質(zhì)。(二)出油率的計(jì)算根據(jù)教科書提供的公式計(jì)算出油率。如果出油率高,說明實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)合理;如果出油率低,教師可以幫助學(xué)生從實(shí)驗(yàn)方法的選擇、實(shí)驗(yàn)過程的操作等各方面分析原因,改進(jìn)后再作嘗試。三、答案和提示練習(xí)1.答:植物芳香油一般都是由23種芳香油混合調(diào)配而成的,其中的基底油常取自植物的種子或果實(shí),比如胡桃油、甜杏油。基底油與其他芳香油調(diào)配在一起,能夠加強(qiáng)功效。從玫瑰花中提
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