PCR儀操作規(guī)程

1、 一、目 的：建立PCR儀操作規(guī)程，規(guī)范其操作。 二、范 圍：PCR儀。 三、責(zé) 任 人：質(zhì)檢部負(fù)責(zé)人、檢驗員、設(shè)備負(fù)責(zé)人。 四、內(nèi) 容： 1.開機，打開機器后部的主開關(guān)。 2.將樣品放入樣品槽后，將熱蓋上的旋鈕按順時針方向旋至對應(yīng)的管型處使其緊閉。 3.設(shè)計程序 3.1常規(guī)PCR反應(yīng)：出現(xiàn)主菜單后，按standard或new方式編制要運行的PCR程序，在輸入預(yù)變性的溫度及時間、變性的溫度及時間、退火的溫度及時間、延伸的溫度及時間、Sock的溫度后，按start/stop鍵開始啟動運行當(dāng)前程序。 如果設(shè)計程序時選擇了CNTRL/TUBE命令，則程序啟動后需要輸入反應(yīng)管的相應(yīng)型號和樣品體積。用S

2、EL鍵選擇反應(yīng)管的型號，用ENTER鍵確認(rèn)。輸入溶液體積，用Enter鍵確認(rèn)。當(dāng)程序運行時，按Opt鍵可以顯示大概的運行時間和預(yù)期結(jié)束的時間。 3.2梯度PCR反應(yīng)： 開機后按照常規(guī)PCR反應(yīng)設(shè)置程序，按控制面板上的四個方向選擇鍵將閃爍的光標(biāo)移至程序退火這一步的數(shù)字序號處（一般為3），按住控制面板上的OPTIONS鍵，則進入溫度梯度程序設(shè)計。 按方向選擇鍵將光標(biāo)移至G=0.0（輸入數(shù)值范圍0-12），一旦輸入這個數(shù)值，即對樣品槽的每一列設(shè)定了不同的溫度，預(yù)設(shè)的溫度在樣品槽的中間，沿著樣品槽從做至右溫度依次升高。用0.2ml的管可設(shè)置12個不同的溫度，用0.5ml的管則可設(shè)置11個不同的溫度。在

3、Option/Gradient中查看溫度分布。反應(yīng)槽最高溫度不能超過99。 4.其它參數(shù)設(shè)置及說明：T輸入溫度、循環(huán)次數(shù)、以及相關(guān)選項。0.0溫度變異量（0.0）：每一個循環(huán)溫度增加或減少的量。必須注意溫度不能超過99。例如，變異量是+0.1，25個循環(huán)，則起始溫度不能超過96.5。先輸入數(shù)值，然后輸入加減號。+：溫度上升；-：溫度下降。0.00時間變異量（S）：輸入每個循環(huán)時間的增加或減少（最大為1分鐘）R=3.0/SRamp(K/S)代表了一個循環(huán)曲線的升降溫速率。這個值越高，則加熱或降溫就越快。允許值范圍：0.3-3.0K/S。0.0/SRampincrement(S):輸入升降溫速率的

4、變異量。該速率不能超過3K/S，因此，如果起始速率為0.3，變異量為0.1，則最大循環(huán)次數(shù)為27個。 5.程序運行 程序設(shè)計好后可直接按控制面板上的start鍵運行，如果設(shè)計程序時選擇了CNTRL/TUBE命令，則程序啟動后需要輸入反應(yīng)管的相應(yīng)型號和樣品體積。用SEL鍵選擇反應(yīng)管的型號，用ENTER鍵確認(rèn)。輸入溶液體積，用Enter鍵確認(rèn)。當(dāng)程序運行時，按Opt鍵可以顯示大概的運行時間和預(yù)期結(jié)束的時間。Lid用來確定熱蓋的溫度。允許值為0-110。啟動時，NOWAIT無需熱蓋溫度，程序直接啟動。WAIT程序直到熱蓋達到預(yù)設(shè)的溫度才啟動。 6.關(guān)機,程序運行結(jié)束后，按Exit退出原程序。關(guān)閉機器

5、后部的開關(guān)。7.注意：7.1Sock時，溫度應(yīng)設(shè)為10，時間不要超過30分鐘。溫度過高，時間過長，易導(dǎo)致儀器的損壞。 7.2操作時，要嚴(yán)格遵守以上原則，及時記錄儀器運行的情況。 8.保養(yǎng)： 8.1樣品池的清洗,先打開蓋子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min，然后清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開PCR儀，設(shè)定保持溫度為50的PCR程序并使之運行，讓殘余液體揮發(fā)去除。一般510min即可。 8.2熱蓋的清洗,對于熒光定量PCR儀，當(dāng)有熒光污染出現(xiàn)，而且這一污染并非來自樣品池時；或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的