醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)：第二章 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量及其對動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的影響 (3)

1、第二章實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量及其對動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的影響,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué) 分類及其特性,第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)質(zhì)量控制,緒論回顧1：實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物的分類,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 經(jīng)濟(jì)動(dòng)物 野生動(dòng)物 觀賞動(dòng)物,V,實(shí) 驗(yàn) 動(dòng) 物,通過人工培育和人工改造,來源清楚，遺傳背景明確；,提供適用于科學(xué)研究,教學(xué),生產(chǎn),檢定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物。,對動(dòng)物攜帶的微生物,及其遺傳質(zhì)量和營養(yǎng)狀況，飼育環(huán)境等實(shí)行控制，,緒論回顧2：,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)化,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性狀表現(xiàn)主要是由遺傳因素和環(huán)境因素決定。,緒論回顧3：,遺傳型 表現(xiàn)型 演出型 實(shí)驗(yàn)結(jié)果,種 品種 品系,胚胎期 哺乳期環(huán)境,飼養(yǎng) 生活 環(huán)境,實(shí)驗(yàn) 處理,發(fā)育環(huán)境：包括母

2、體內(nèi)的環(huán)境和哺乳期環(huán)境,周圍環(huán)境： 包括氣候，物理，化學(xué)，居住和微生物等因素。,實(shí)驗(yàn)技術(shù)：包括保定,麻醉,采血,給藥,手術(shù)和采集標(biāo)本等,遺傳控制：包括純化，改良，復(fù)合和轉(zhuǎn)基因等,緒論回顧4：,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)需要其結(jié)果具有良好的重復(fù)性，就必須要求實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有穩(wěn)定的演出型。,緒論回顧5：,遺傳型的控制,包括：相應(yīng)的嚴(yán)格的繁殖制度和遺傳質(zhì)量檢測。,緒論回顧6：,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)是普通遺傳學(xué)的基本規(guī)律在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)中的運(yùn)用和發(fā)展。 近交系的培育 遺傳質(zhì)量檢測 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)化 特殊基因的保持 遺傳工程小鼠研制、保種 都是建立在遺傳學(xué)基礎(chǔ)上的。,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳 學(xué)分類及其特性,標(biāo)準(zhǔn)的國際通用命名規(guī)則: 一

3、個(gè)品系只能有一個(gè)名字，不同的人在不同的時(shí)間、地點(diǎn)做實(shí)驗(yàn)，他們只要根據(jù)名字，就能使用相同的品系，他們的結(jié)果就具有可重復(fù)性或可比性。 國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)協(xié)會(huì)（ICLAS） 小鼠遺傳標(biāo)準(zhǔn)化命名委員會(huì),二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種、品種和品系,種：在生物分類學(xué)上，“種”是動(dòng)物分類的基本單位，由自然選擇形成；一般情況下，同種動(dòng)物交配能順利繁殖后代，而異種動(dòng)物存在生殖隔離。各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)過人類的長期馴化、培育和選擇，已與其祖先有著極顯著的差異。,界門綱目科屬種,品種：品種是種以下的非自然的單位，是人為選擇的產(chǎn)物。根據(jù)不同需要把動(dòng)物的外形和生物學(xué)特性進(jìn)行改良，選擇和定向培育，使之具備某些生物學(xué)特性，這些特性能穩(wěn)定遺傳，同

4、種動(dòng)物中具有不同遺傳特性的動(dòng)物稱為不同的品種。,英國短毛種豚鼠,近交系,2 13 RAP,封閉群,DH Dunkin Hartley DHP Dunkin Hartley pirbright DHPK,比如：,KM小鼠是封閉群小鼠中的一個(gè)品 種，屬我國常用的實(shí)驗(yàn)小鼠，1994年 列入國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物理事會(huì)出版的實(shí)驗(yàn) 小鼠目錄。,又比如：,品系：品系是根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，采用近親交配 方式繁殖，且遺傳背景明確的動(dòng)物。具有:,獨(dú)特的生物學(xué)特性,相似的外貌,穩(wěn)定的遺傳特性,如C57BL/6小鼠是近交系小鼠中的一個(gè)品系，屬低癌，高補(bǔ)體活性的小鼠；全身黑色被毛；其生物學(xué)特性穩(wěn)定地代代相傳。,因此，品系和品種

5、是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分類的基本單位。,KM小鼠,小 鼠,中國倉鼠,新西蘭兔,豚 鼠,金黃倉鼠,比格犬,一. 近交系,Inbred strain,1.近交系動(dòng)物的概念,經(jīng)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系內(nèi)所有個(gè)體都可追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對共同祖先，近交系數(shù)達(dá)到98.6%以上,該品系稱為近交系。,經(jīng)連續(xù)20代以上親代與子代的交配，與全同胞兄妹的交配具有同等效果。,2.近交系數(shù) F,動(dòng)物個(gè)體的基因組成中純合子占所有基因型的比率。,近交系數(shù)F：,它反映了動(dòng)物在不同代次的純化程度。 Fn = 1 （1 F）n F ： 每一代近交系數(shù)的上升率 連續(xù)全同胞的兄妹交配，每一代 近交率平均上升1

6、9% 近交系 F20 = 0.986,體型較大動(dòng)物的近交系培育很難獲得成功；因?yàn)槌晒β实?，往往成為?jīng)濟(jì)上的沉重負(fù)擔(dān)。,如犬和貓連續(xù)全同胞兄妹交配20代需要20年左右的時(shí)間；雞和兔也要花費(fèi)較長時(shí)間。目前根據(jù)研究的特別需要，已培育出兔、犬、貓、雞、羊、豬等的若干近交品系。,通常禽類和兔類等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的近交系數(shù)達(dá)到80以上時(shí)(相當(dāng)于親兄妹交配4代)，即可稱為近交系。,3.近交系動(dòng)物的命名,以大寫英文字母或阿拉伯?dāng)?shù)字命名，亦可以用大寫英文字母加阿拉伯?dāng)?shù)字命名，符號應(yīng)盡量簡短。如A系，TA1系等。,C3h C3H C3H,Balb/c, 129, A, C57BL/6,Begg,albino,BALB/c

7、,C57BL/6,4.國內(nèi)外常用近交系,1）國內(nèi)培育的近交系小鼠,615小鼠：用KM小鼠與前蘇聯(lián)引進(jìn)的C57BL雄鼠雜交后培育的近交系。常發(fā)乳腺癌， 常發(fā)肺癌。可用于白血病研究和抗癌藥物篩選。,2）國外引進(jìn)的近交系小鼠,BALB/c小鼠：低乳腺癌，但對致癌因子敏感，血壓偏高，有心臟損害和動(dòng)脈硬化，容易飼養(yǎng)，常用于單克隆抗體和免疫學(xué)研究。,C3H小鼠：野生色，為國際上使用最廣品系之一。高自發(fā)乳腺癌和肝癌，用于免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生理學(xué)和核醫(yī)學(xué)研究。,C57BL/6小鼠：繼人類之后第二個(gè)完成基因測序工程的哺乳動(dòng)物。低乳腺腫瘤，對白血病因子和麻疹病毒敏感，有老年腎硬化癥。,5.近交系動(dòng)物的遺傳學(xué)特性及應(yīng)

8、用,1）基因純合性,經(jīng)過連續(xù)20代以上的近親繁殖,近交品系個(gè)體基因已有98.6%以上純合；,這樣的個(gè)體與品系內(nèi)任何一個(gè)動(dòng)物交配所產(chǎn)生的后代，也應(yīng)是純合子。,因此，同一近交系動(dòng)物的基因是一致的，沒有暗藏的隱性基因。,2）同基因性,同一個(gè)近交品系中所有個(gè)體在遺傳上是同源的，個(gè)體間極為相似，,具有基本相同的遺傳組成和遺傳 特點(diǎn)，也就是基因型相同。,因此，同品系個(gè)體間可進(jìn)行組織或腫瘤移植，也可用一只動(dòng)物檢測該品系的基因型。,3）表現(xiàn)型的均一性,同一近交系動(dòng)物，在相同環(huán)境因素的作用下，由于同基因性，其表現(xiàn)型是均一的，,如血型、組織型、體重、毛色、可遺傳疾病的發(fā)病率、對藥物的反應(yīng)、甚至行為的類型等。,因此

9、, 使用較少量的近交系動(dòng)物可達(dá)到生物統(tǒng)計(jì)需要的精密度。,4）遺傳穩(wěn)定性,近交系動(dòng)物的基因高度純合，堅(jiān)持近親交配則增加其在特定部位純合子，減少了遺傳變異，,使動(dòng)物的基因型可長期處于穩(wěn)定狀態(tài)，導(dǎo)致近交系動(dòng)物長期遺傳穩(wěn)定性。,近交系動(dòng)物的遺傳變異僅發(fā)生在少量殘留雜合基因，或基因的突變，而這種幾率非常低。,5）個(gè)體性,每個(gè)品系在遺傳上都是獨(dú)特的，有些品系可能發(fā)生一些疾病，成為研究人類疾病理想的模型。,可在眾多的近交系中，篩選出對某些因子敏感或不敏感的品系，以達(dá)到不同的研究目的。,6）分布廣泛性,近交系動(dòng)物個(gè)體具備品系的全能性，任何個(gè)體均可攜帶該品系全部基因庫，,引種僅需1-2對動(dòng)物。不少近交系動(dòng)物已分

10、布在世界各地，,意味著：不同地區(qū)，不同國家的科學(xué)家有可能重復(fù)或驗(yàn)證已取得的理論和數(shù)據(jù)。,7）背景資料和數(shù)據(jù)較完整,近交系動(dòng)物在培育和保種過程中都有詳細(xì)記錄，,一些常用品系具有相當(dāng)數(shù)量的背景資料；有大量文獻(xiàn)記載了各種品系的生物學(xué)特性。,這些有關(guān)品系的特征、壽命和自發(fā)性疾病等資料，對今后的研究工作的設(shè)計(jì)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋提供便利條件。,8）可分辨性,每個(gè)近交系都有自己獨(dú)特的生化標(biāo)志基因。,研究者在掌握了遺傳質(zhì)量監(jiān)測方法后，通過建立品系的遺傳概貌，和定期的遺傳檢測，可以分辨混雜在一起的兩個(gè)，或兩個(gè)以上外貌近似的品系動(dòng)物。,6.近親交配的優(yōu)點(diǎn)和弊端,近親交配的優(yōu)點(diǎn),近親交配是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物獲得遺傳均一性的

11、典型方法。,使用較少的近交系動(dòng)物，即可達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)要求的精密度。,同一近交系的全部動(dòng)物，在遺傳上相同，減少了表現(xiàn)型的變異。,在個(gè)體之間能互相接受皮膚和腫瘤移植。,近親交配的弊端,固定基因時(shí)，有害的隱性基因也會(huì)純合，出現(xiàn)不利的性狀而造成育種失敗；,近交還可能導(dǎo)致多基因之間喪失平衡，從而使高度純化的動(dòng)物對不良環(huán)境的調(diào)節(jié)適應(yīng)能力降低；,近交使動(dòng)物失去為保持足夠生物適合度所必需的最低水平的基因雜合性，從而影響動(dòng)物生長率，壽命，對疾病的感受性，生活力，體力及繁殖能力。,隨著生物醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的發(fā)展，已培育成功各種人類疾病的動(dòng)物模型，如：高血壓大鼠、癲癇大鼠、糖尿病小鼠、白血病小鼠，白內(nèi)障小鼠、先天性肌萎縮小

12、鼠、免疫缺陷型小鼠等等。這些近交系動(dòng)物家系清楚，取材方便，是比較理想的實(shí)驗(yàn)材料。,7*近交系動(dòng)物的保持,目前最廣泛采用的是建立全同胞親兄妹交配核心群 保持過程中的技術(shù)問題 選擇與淘汰,少量生產(chǎn) 核心群內(nèi)得到 大量生產(chǎn)“紅綠燈制”,8*近交系動(dòng)物的生產(chǎn),“紅綠燈制”,核心群（BS) 擴(kuò)大繁殖群（BS) 生產(chǎn)群（隨機(jī)交配） 第一代綠牌 第二代黃牌 第三代紅牌,二、封閉群(遠(yuǎn)交群),Closed colony or Outbred stock,1.封閉群動(dòng)物的概念,以非近交交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群，在不從其外部引入新個(gè)體的條件下，至少連續(xù)繁殖4代以上，稱為一個(gè)封閉群，或叫遠(yuǎn)交群。,封閉

13、群可分為起源于近交系,但并不進(jìn)行全同胞交配的維持群;,和起源于非近交系,亦不進(jìn)行全同胞交配的維持群兩類。,封閉群群體世代間近交系數(shù)上升率必須低于1%。,這類動(dòng)物和近交系不同，在相同品種不同動(dòng)物群體內(nèi)和同一群體不同動(dòng)物個(gè)體間，具有某種程度的遺傳學(xué)差異。,2.封閉群近交系數(shù)上升率,F= 1/N + 1/N 當(dāng)N = N= n 時(shí)(n為對數(shù)） F= 2/n,例如ddN小鼠，Wistar大鼠、我國各研究單位長期自行繁殖的KM小鼠、青紫蘭兔、新西蘭白兔、大耳白兔等均屬此類。,3.封閉群動(dòng)物的命名,封閉群一般由2-4個(gè)大寫英文字母命名。,種群名稱前標(biāo)明保持者的英文縮寫名稱，第一個(gè)字母須大寫，后面的字母小寫

14、。,保持者與種群名稱之間用冒號分開。,如：N：NIH表示美國國立衛(wèi)生研究院（N）保持的NIH封閉群小鼠。,Ssmu:KM表示上海第二醫(yī)科大學(xué)（Ssmu）保持的KM封閉群小鼠 。,4.封閉群動(dòng)物的遺傳學(xué)特性及應(yīng)用,對于封閉群的研究，無論在理論上還是實(shí)踐上，無論在國內(nèi)還是國外，都落后于近交系。,其原因在于封閉群是屬于群體遺傳理論范疇，不僅群體遺傳學(xué)本身產(chǎn)生較晚，而且該理論又不能機(jī)械地套用于封閉群。至今，對封閉群動(dòng)物的研究工作幾乎都局限于實(shí)驗(yàn)小鼠和大鼠，且資料也甚少。,1）基因庫大，雜合率高,封閉群是一種長期與外界隔離，雌雄個(gè)體間能夠隨機(jī)交配的動(dòng)物群，,其遺傳組成比較接近自然狀態(tài)下的動(dòng)物群體結(jié)構(gòu)，具

15、有類似于人類群體遺傳異質(zhì)性的遺傳組成。,其基因的雜合率較高，個(gè)體間的基因型不一致，因此，群體基因庫較近交系大。,2）群體基因頻率基本保持穩(wěn)定,封閉群動(dòng)物不從其外部引入新基因，又堅(jiān)持隨機(jī)交配，,群體基因頻率可達(dá)到哈臺(tái)溫伯格平衡。,從而使群體在一定范圍內(nèi)保持相對穩(wěn)定的遺傳特征。,3） 封閉群內(nèi)個(gè)體間差異程度主要取決于其祖代起源,起源于近交系的封閉群遺傳差異較小。 如 NIH： Car-2（3）， b Es-3（11）， c Es-10（14），a,起源于非近交系的封閉群內(nèi)個(gè)體間差異較大。 如KM： Car-2，a，b ； Es-3，a，b，c Es-10，a，b，c 且可攜帶隱性的有害基因，或致死

16、基因，易于誘發(fā)突變。,封閉群動(dòng)物的遺傳組成具有很高的雜合性,其繁殖力和生活力較強(qiáng),表現(xiàn)為平均胎產(chǎn)仔數(shù)多，胎間隔短，仔鼠離乳率高，生長快，成熟早，抗病力強(qiáng)，壽命長；,生產(chǎn)成本低，可大量供應(yīng),廣泛用于各種預(yù)試驗(yàn)、學(xué)生教學(xué)和常規(guī)的藥物篩選和毒性試驗(yàn)中。,5.封閉群動(dòng)物的保持和生產(chǎn),隨機(jī)繁殖法 分組循環(huán)法 最大限度避免近交法,分組循環(huán)法,組別： A B C D N代 ： N+1代 ,最大限度避免近交法,在分組循環(huán)法的基礎(chǔ)上采取“留雄不留雌”、“留雌不留雄”的原則。,三、雜交 F1,就是將2個(gè)不同近交系動(dòng)物進(jìn)行交配。 假設(shè)近交系A(chǔ)的基因型為A1/A1，B1/B1，C1/C1；近交系B的基因型為A2/A2

17、，B2/B2，C2/C2 。兩種品系內(nèi)的血緣系數(shù)R=1；而兩種品系間無共同的祖先R=0。,把這兩種品系進(jìn)行雜交，產(chǎn)生F1的基因型是均一的A1/A2，B1/B2，C1/C2；個(gè)體各基因位點(diǎn)均是雜合型，又保持了個(gè)體遺傳均一性，即F1的各個(gè)體間血緣系數(shù)R=1；還可能出現(xiàn)新的遺傳特性。,如近交系NZB和NZW的F1中發(fā)現(xiàn)了自身免疫性疾病鼠。,四、重組近交系,重組近交系 由兩個(gè)近交系雜交后，經(jīng)連續(xù)20代以上兄妹交配育成的近交系。,第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)質(zhì)量控制,隨著生物醫(yī)學(xué)科研的發(fā)展及其需要，目前世界上已培育成功數(shù)百種近交品系和封閉群動(dòng)物，加上不同的亞系和新建的突變?nèi)海淇倲?shù)（品系）達(dá)2500 之多。,

18、在各科研或教學(xué)單位的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼育繁殖部門，一般都保持幾個(gè)或幾十近交系。而在多個(gè)品系動(dòng)物生產(chǎn)繁殖過程中，無法確保絕對不發(fā)生計(jì)劃外雜交。,有必要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量控制,科研人員都希望證明各自所得到的品系動(dòng)物的遺傳背景是符合標(biāo)準(zhǔn)的；,生產(chǎn)繁殖部門希望確證：所提供的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物符合遺傳控制的質(zhì)量。,隨著各種新技術(shù)，新檢測方法的建立，可用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量檢測的新技術(shù)也越來越多。,國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物理事會(huì)提出了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測必須符合“4E原則”。,準(zhǔn)確 Exact,簡便 Easy,有效 Efficient,經(jīng)濟(jì) Economic,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量控制的意義,每個(gè)品系（或種群）的遺傳概貌；,定期進(jìn)行常規(guī)質(zhì)量

19、檢測，證明被檢動(dòng)物質(zhì)量是否符合遺傳概貌；,簽發(fā)品系（種群）的合格證書。,一.遺傳概貌的確定,近交系遺傳概貌是指一套生化標(biāo)志基因位點(diǎn),根據(jù)這些位點(diǎn)可確切無誤地判定品系,并將其同其它近交品系,甚至可能只有1-2個(gè)位點(diǎn)不同的亞系區(qū)分開來。,從理論上講，遺傳概貌應(yīng)至少由每條染色體的3個(gè)位點(diǎn)組成：每條染色體著絲點(diǎn)相應(yīng)的近端和遠(yuǎn)端各1個(gè)位點(diǎn)和中部1個(gè)位點(diǎn)。,一旦確定了遺傳概貌后，檢測特定的染色體就能夠完成近交系遺傳質(zhì)量的判定。,國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物理事會(huì)對封閉群實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳概貌應(yīng)包括的內(nèi)容作出要求。,二.封閉群動(dòng)物遺傳概貌內(nèi)容,繁殖數(shù)據(jù) 整體分析胎間隔 整體脂肪含量 成活新生數(shù) 整體干物質(zhì)含量離乳仔數(shù) 血液學(xué)數(shù)據(jù)

20、幼仔體重（2周齡） 血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血白細(xì)胞計(jì)數(shù) 形態(tài)測定數(shù)據(jù) 血紅蛋白含量體長 血細(xì)胞比容體重 平均細(xì)胞容積11個(gè)下頜骨測量數(shù)據(jù) 尺骨長,三、近交系動(dòng)物遺傳質(zhì)量檢測,目前常用的檢測方法,生化 標(biāo)志基因位點(diǎn)檢測,皮 膚 移 植,下頜 骨形 態(tài)學(xué) 分析,毛色 基 因 交配 測試,遺傳質(zhì)量檢測方案的設(shè)計(jì),在確定了近交系動(dòng)物的遺傳概貌后，為了保證遺傳質(zhì)量檢測的可靠和完善，又實(shí)現(xiàn)“4E原則”，沒有必要（也不可能）不停息的對遺傳概貌中的所有位點(diǎn)進(jìn)行檢測。,在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國家標(biāo)準(zhǔn)哺乳類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量控制（GB14923-2001）中規(guī)定：,對基礎(chǔ)群，凡在子代留有種鼠的親本動(dòng)物都應(yīng)進(jìn)行檢測；對生產(chǎn)群動(dòng)物每年至少

21、進(jìn)行一次遺傳質(zhì)量檢測，每次應(yīng)采樣6只。,方法一.生化標(biāo)志基因位點(diǎn)測試,當(dāng)前生物化學(xué)進(jìn)展，已能靈敏地測定蛋白質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)的微小差異，這些差異由遺傳基因決定，是個(gè)體及品系固有的特性，可用作鑒定品系和個(gè)體的判定。,使用電泳技術(shù)顯示蛋白質(zhì)不同性狀，便能建立每一近交系獨(dú)特的基因概貌。,經(jīng)研究，目前實(shí)驗(yàn)小鼠至少有64種生化標(biāo)記（同功酶或蛋白質(zhì)）位點(diǎn)；在大鼠近交系中，生化標(biāo)記位點(diǎn)僅有少量的報(bào)道。,在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國家標(biāo)準(zhǔn)哺乳類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量控制（GB14923-2001）,對近交系小鼠選擇位于10條染色體上的13個(gè)生化位點(diǎn),對近交系大鼠選擇9個(gè)生化位點(diǎn)，作為生化標(biāo)記檢測。,生化標(biāo)志基因位點(diǎn)測試法是一種得到廣泛應(yīng)

22、用的靈敏的遺傳質(zhì)量檢測方法，它能證實(shí)近交系和確定亞系間的遺傳關(guān)系，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。,該方法必須嚴(yán)格選擇每一種顯示同功酶的緩沖液，電泳的溫度、時(shí)間、電壓和電流的最佳值。使用這種方法需要一定的技術(shù)和設(shè)備。,方法二.皮膚移植,實(shí)驗(yàn)證明動(dòng)物具有接受或排斥所植皮膚的能力。每個(gè)近交系的全部個(gè)體在遺傳上高度純合，所以，同品系的個(gè)體間能互相接受皮膚移植；而不同品系的個(gè)體間植皮就會(huì)互相排斥。,皮膚移植也是的常用的遺傳質(zhì)量檢測方法，在國家推薦標(biāo)準(zhǔn)（GB/T14927.2-2001）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物近交系小鼠大鼠皮膚移植法中，對該方法的基本操作步驟有詳細(xì)的介紹和規(guī)定。,皮膚移植示意圖,小鼠和大鼠的檢測中普遍采用的是快速

23、、有效的尾部皮膚移植法。,植皮后至少觀察100天，只有在100天以上植皮雙方均不發(fā)生排斥，才能證實(shí)待測小鼠或大鼠的遺傳純合性。,在對已知品系檢測時(shí)，若急性排斥占手術(shù)例數(shù)30%，須重新考慮采樣，以確認(rèn)是技術(shù)性還是其他原因造成的結(jié)果。,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚移植規(guī)律,皮膚移植法優(yōu)點(diǎn)： 易掌握、高度靈敏、經(jīng)濟(jì)、不需昂貴設(shè)備、對植皮接果的排斥或接受容易判斷。,皮膚移植法不足：該方法費(fèi)時(shí)：需觀察100天后才能作出判斷；,飼養(yǎng)植皮動(dòng)物需一定飼養(yǎng)空間；,會(huì)出現(xiàn)一些系技術(shù)或其他非免疫因素植皮實(shí)驗(yàn)失敗。,該方法不是鑒別新品系的理想方法。,方法三.下頜骨形態(tài)學(xué)分析,下頜骨形態(tài)是高度遺傳的性狀，由多態(tài)性位點(diǎn)確定。下頜骨的形態(tài)

24、和大小在小鼠的近交系間存在明顯差異，所以，下頜骨分析是一種合理的方法。,該方法是一種靈敏和有效的鑒別和檢測亞系變異（源于遺傳混雜和突變）的技術(shù)。,正常環(huán)境因素及飼養(yǎng)管理對下頜骨形態(tài)幾乎沒有什么影響，,50日齡后下頜骨基本上不再生長，其形態(tài)也不再發(fā)生變化。,檢測前，制作測量用的標(biāo)準(zhǔn)直角坐標(biāo)底板，,在近交系核心群中隨機(jī)取60日齡以上的成年雄鼠，,每次取樣10只為1組，制備下頜骨標(biāo)本后，,在顯微鏡下，放大10倍測量在直角坐標(biāo)底板上下頜骨11個(gè)形態(tài)特征參考點(diǎn)的距離。,3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0,0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5,下頜骨測

25、試示意圖,將所測量值的平均數(shù)作統(tǒng)計(jì)分析，利用判別函數(shù)確定下頜骨形態(tài)。如果測量值集中，則表明在被測小鼠間無顯著的遺傳差異。,下頜骨形態(tài)分析是一種靈敏、經(jīng)濟(jì)、簡便、可同時(shí)檢驗(yàn)大量的遺傳位點(diǎn)的遺傳監(jiān)測方法。,若配以掃描機(jī)將下頜骨形態(tài)掃入電腦，經(jīng)電腦測量其形態(tài)特征參考點(diǎn)的距離，并由電腦完成統(tǒng)計(jì)分析，既可減少人為誤差，還可加快統(tǒng)計(jì)分析的速度。,方法四.毛色基交配測試,小鼠毛色主要受A、B、C、D四個(gè)等位基因控制，它們分別在2、4、7、9號染色體上。,cc基因是其他毛色基因的上位基因。白化小鼠cc等位基因是已知的，A，B是待測基因。毛色基因交配測試可把隱性的毛色基因顯示出來。,A-B-C-為野生色,A-bbC-為桂皮色,aaB-C-為黑色,aabbC-為棕色,基因型與毛色,小白鼠?,-cc！,根據(jù)遺傳學(xué)原理，被測個(gè)體與已知復(fù)隱性基因個(gè)體交配，可以從F1的毛色判斷待測小鼠基因型；,如待測小鼠A、B位點(diǎn)是純合的，則雜交F1的毛色只出現(xiàn)一種顏色。,將60-70日齡待測白化小鼠（雌性）與已知毛色基因結(jié)構(gòu)的復(fù)隱性有色鼠（基因型為aabbCC，如DBA/2 ，俗稱“標(biāo)準(zhǔn)鼠”）雄鼠交配，根據(jù)雜交F1的毛色確定待測小鼠主要毛色基因型，鑒定是否純合。,舉例1: 近交系BALB/c小鼠毛色基因測定 “標(biāo)準(zhǔn)鼠”：DBA/2, 基因型:a