青島農(nóng)業(yè)大學細胞工程教學計劃

1、.緒論細胞工程(cell engineering)是應用細胞生物學和分子生物學方法，借助工程學的實驗方法或技術，在細胞水平上研究改造生物遺傳特性和生物學特性，以獲得特定的細胞、細胞產(chǎn)品或新生物體的有關理論和技術方法的學科。又稱細胞技術，是生物技術的主要內(nèi)容之一。生物技術是以生命科學為基礎，利用生物體系和工程學原理生產(chǎn)生物制品和創(chuàng)造新物種的一門綜合技術。細胞工程的研究內(nèi)容：細胞工程基本技術；細胞、組織、器官培養(yǎng)；原生質體培養(yǎng)；細胞融合及培養(yǎng) 生物技術主要包括：細胞工程、基因工程、發(fā)酵工程、酶工程、蛋白質工程和生物化工程。細胞學說的提出：施旺，施萊登（1838年）1902年，H aberlandt

2、提出了細胞全能性學說細胞工程分類（填空）:植物細胞工程和動物細胞工程1.細胞工程的應用：（一）、脫毒和快速繁殖 許多植物，特別是無性繁殖植物，帶有病毒，并直接傳給子代，嚴重影響產(chǎn)量和質量。一般莖尖生長點不帶病毒。所以，利用莖尖培養(yǎng)再生的植株，可能不帶病毒，再進行大量繁殖生產(chǎn)脫毒苗。脫毒苗用于生產(chǎn)可明顯提高產(chǎn)量、質量和商品價值。甘薯、馬鈴薯、草莓、果樹、花卉等。（二）、細胞工程育種 1.利用培養(yǎng)變異，篩選優(yōu)良突變體 植物離體培養(yǎng)，能夠明顯提高突變率，并且會有各種各樣的生理和形態(tài)突變，如株高、花色、植株形態(tài)、生育期、耐性等等?？梢詮闹羞x擇優(yōu)良突變體，培育新品種。2、利用遠緣雜交幼胚培養(yǎng)，獲得雜種植

3、株，克服其雜交不親和性。有些植物遠緣雜交，能正常受精，但受精胚往往敗育。此種情況下，可以將幼胚在敗育前進行離體培養(yǎng)，以獲得緣遠雜種植株。3.利用細胞融合技術，克服遠緣雜交不親和性。野生種往往有許多優(yōu)良性狀，但大部分野生種與栽培種雜交不親和，嚴重影響了野生種優(yōu)良遺傳基因的應用。利用細胞融合，可以克服這種雜交不親和性，獲得體細胞雜種，使野生種的利用成為可能。（三）、離體種質保存隨著地球不斷開發(fā)、生態(tài)環(huán)境破壞，種質資源日趨枯竭，大量有用基因損失。利用組織培養(yǎng)法，超低溫保存（-196）或試管保存，為保存和搶救瀕臨滅絕的生物帶來希望。（四）、細胞培養(yǎng)生產(chǎn)有用物質利用細胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生物質，如藥物、色素、食

4、品添加劑、酶、農(nóng)藥等2. 細胞工程主要研究內(nèi)容（1）動植物細胞與組織培養(yǎng) 主要包括細胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)和器官培養(yǎng)。（2）細胞融合（3）染色體工程：按人們的需要來添加、削減或替換染色體的一種技術。主要用于新品種的培育。（4）胚胎工程：主要是對動物的胚胎進行某種人為的工程技術操作獲得人們所需要的成體動物，包括胚胎分割、胚胎融合、卵核稱植、體外受精、胚胎培養(yǎng)、胚胎移植、性別鑒定、胚胎冷凍技術等。（5）細胞遺傳工程：主要包括克隆和轉基因技術。第一章實驗室的設備及其基本操作技術第一節(jié) 實驗室的設備實驗室設計最基本應該有三室：準備室、無菌操作室和培養(yǎng)室第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制1. 培養(yǎng)基的成分及作用2，一般培

5、養(yǎng)基中的五類物質各有什么作用？1）無機營養(yǎng)成分，包括大量元素N，P，K，Ga，Mg，S和微量元素Fe, B, Mn, Cu, Co, Zn, Mo等; 2）有機營養(yǎng)成分，常用有機成分：糖類（蔗糖），維生素，肌醇，腺嘌呤，氨基酸。主要采用的是蔗糖，提供處于異養(yǎng)狀態(tài)的植物組織所需要的碳元素；3）維生素，主要使用的有B1, B6和B5,補充離體狀態(tài)下細胞內(nèi)生維生素的不足，提高細胞的活力；4）激素，包括生長素、分裂素、脫落酸、赤霉素和乙烯。激素：生長素（根），細胞分裂素（芽），赤霉素（細胞伸長）；5）其他添加物質，例如瓊脂作為培養(yǎng)基固化劑、山梨醇作為滲透壓調節(jié)劑、活性炭作為吸附劑等。4、蔗糖在培養(yǎng)基中

6、有何作用？作為碳源為植物提供能源，為有機化合物的合成提供碳架，細胞內(nèi)調節(jié)滲透壓，對形態(tài)的發(fā)生的特殊作用等。11、培養(yǎng)基內(nèi)加入活性炭的目的是什么？應注意什么問題？活性碳可以吸附非極性物質和色素等大分子物質，包括瓊脂中所含的雜質、培養(yǎng)物分泌的酚和醌類物質、蔗糖在高在壓消毒時產(chǎn)生的5-羥甲糖醛、激素等。2.植物激素5、生長素類物質大致可分為哪幾類，目前植物組織培養(yǎng)中主要使用了哪些生長素，生長素在離體培養(yǎng)中有何作用？1.吲哚類，2.奈酸類，3.苯氧羧酸類。植物組織培養(yǎng)中生長素一方面用于誘導愈傷組織的形成和生根，另一方面是與一定量的細胞分裂素配合共同誘導不定芽的分化、側芽的萌發(fā)與生長以及某些植物胚狀體的

7、誘導。6、在植物組織培養(yǎng)中，細胞分裂素有何作用？在植物組織培養(yǎng)中細胞分裂素的主要功能是促進細胞的分裂和分化，打破頂端優(yōu)勢，誘導芽分化與增殖，促進組織和器官的不定芽發(fā)育。3.幾種常用培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基種類：MS,B5,N6,White(P26)（1）高鹽平衡培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基、LS培養(yǎng)基、BL培養(yǎng)基、BM培養(yǎng)基和ER培養(yǎng)基。特點：無機鹽濃度較高，元素間的比例適當，離子平衡性好，具有較強的緩沖性；營養(yǎng)豐富；微量元素種類全，濃度高。（2）高硝態(tài)氮培養(yǎng)基：B5培養(yǎng)基，N6培養(yǎng)基及SH培養(yǎng)基等。特點：硝酸鉀的含量高，氨態(tài)氮的含量低，含有較高的鹽酸硫胺素。（3）中鹽培養(yǎng)基：H培養(yǎng)基、Nitsch培養(yǎng)基、Mi

8、ller培養(yǎng)基和Blaydes培養(yǎng)基。特點：大量元素無機鹽約為MS的一般，微量元素種類減少而含量增高，維生素種類比MS多。（4）低鹽培養(yǎng)基：White培養(yǎng)基、WS培養(yǎng)基、HE培養(yǎng)基、改良Nitsch培養(yǎng)基及HB培養(yǎng)基等。特點：無機鹽含量低，有機成分含量相對也很低。4. 培養(yǎng)基的配制1、 生長素和細胞分裂素母液如何制備？生長素類(NAA、IBA等)先用12毫升95%酒精將其溶解,然后緩緩加入蒸餾水定容。細胞分裂素類(6BA、KT等)先用少量(0.51當量濃度鹽酸),然后緩緩加入蒸餾水定容,倒入瓶內(nèi),存于冰箱。如發(fā)現(xiàn)貯存后又產(chǎn)生沉淀,可加溫使之溶解后再用。赤霉素需過濾滅菌。2、 簡述固體培養(yǎng)基的制

9、備過程。將燒杯放入適量的水（終體積的3/4左右），按大量元素、微量元素、鐵鹽及有機成分的順序，依次吸取各母液的需要量。2. 按所需濃度加激素，或其它成分，如AgNO3等。3.加蔗糖，一般30g/L。4.定容5、pH值測定（5.8） 。6.加瓊脂，一般6-8g/L，溶化 （電爐、微波爐等）。7. 分注、封口（鋁鉑紙、牛皮紙、塑料紙等）。8.滅菌 121，20分。第三節(jié) 無菌操作技術維持實驗室環(huán)境相對無菌應采取哪些措施？答：其滅菌方法是通過氣體熏蒸和紫外線照射或其他方法。氣體熏蒸：熏蒸劑常用甲醛加高錳酸鉀，可用每100ml甲醛加5g高錳酸鉀為一個使用單位，具體的做法是在每20m2的范圍內(nèi)放置1個單

10、位劑量。注意：為避免其氣體對人體的危害并達到較好的消毒效果，一般熏蒸期間應將實驗室封閉35d。以后在使用過程中，接種室還應定期熏蒸。紫外線照射：用紫外線燈照射0.5h，以保證接種室的無菌環(huán)境。其他：實驗室每次使用前還可噴灑75%的酒精、過氧乙酸或2%的新潔而滅溶液進行接種室消毒。其他操作室的環(huán)境控制可根據(jù)情況選用紫外燈定期照射或其他方法污染的起因包括四個方面，1）植物材料表面滅菌不徹底或存在有內(nèi)生菌；2）滅菌設備和無菌操作設備的異常；3）無菌操作技術不規(guī)范；4）培養(yǎng)條件不潔凈 第四節(jié) 外植體的選擇與處理外植體：從植物體上分離下來的用于離體培養(yǎng)的材料。三種來源：1.生長在自然環(huán)境下的植物 2.在

11、溫室控制環(huán)境條件下生長的植物 3.無菌環(huán)境下培養(yǎng)的植物（最優(yōu)）。1. 外植體的選擇1、選擇優(yōu)良的基因型 實驗首先應明確目的。例如，蔬菜、作物等的脫毒快繁，是為了脫去病毒，提高產(chǎn)量和質量，就應選擇當?shù)卦耘啻_認的高產(chǎn)優(yōu)質的品種作為脫毒材料，并且品種一定要可靠?；ɑ堋⒂^賞植物的快繁，也應選擇有價值的植物。2、取材從生長旺盛、健壯、無病蟲害的植株上取材。母株代謝旺盛期切取的外植體再生能力強，實驗容易成功。 3、外植體大小選擇 一般0.5-1cm為宜。因外植體不同而不同。如利用莖尖培養(yǎng)，脫毒快繁，外植體宜小，莖尖大小對脫毒效果非常明顯。再如幼胚培養(yǎng)，胚齡也非常重要。4、 選擇外植體的時期 外植體的生長動

12、態(tài)往往與該物種的生長節(jié)律（生物鐘）有關。因此，最好在植物生長的最適宜時期取材培養(yǎng)，會得到較好效果。（春天生長旺盛的植株，在春天培養(yǎng)會取得較好效果）二、外植體的處理1.取材母株的預處理 人工管理，促使母株生長旺盛、代謝活躍，從其上取材培養(yǎng)，容易成功。2.外植體休眠的處理 有些植物的種子、幼胚或芽，存在休眠。為了打破休眠，可利用低溫處理，或赤霉素等化學物質處理。因植物不同處理溫度和時間有所不同。3、 外植體的滅菌 大田或溫室植物材料，都帶有大量的細菌和真菌，這是組織培養(yǎng)的一大障礙，所以材料必須進行殺菌消毒（表面殺菌）。外植體消毒方法：取材后 將老的組織去掉 自來水沖洗 洗衣粉水洗（簡單殺菌） 自來

13、水沖洗 （超凈工作臺）70%酒精處理 消毒劑處理 滅菌蒸餾水沖洗3-5遍。消毒劑種類有很多，如次氯酸鈉（效果應該比較好，無毒、無污染，見光氧化，影響殺菌效果）、升汞（效果應該比較好）、漂白粉、高錳酸鉀、雙氧水、福爾馬林等。一般多用0.1%升汞。殺毒時間：一般酒精10秒，升汞5-12分鐘。升汞處理方法：升汞+NaS 絮狀沉淀（至絮狀沉淀不再產(chǎn)生為止） + FeSO4 (中和過多的NaS)。第五節(jié) 培養(yǎng)條件植物離體培養(yǎng)的環(huán)境條件及其對培養(yǎng)的影響：溫度大多數(shù)在20-30之間，通?？刂圃?52的恒溫條件下培養(yǎng)；一般光照12-16h,光強1000-5000lux。；因此需要通風。一般培養(yǎng)容器使用棉塞、鋁

14、箔、專用蓋等封口，容器內(nèi)外空氣是流通的。；濕度過高過低都不利于培養(yǎng)物生長。室內(nèi)相對濕度70-80。3、離體培養(yǎng)過程中人工光照的設置有何規(guī)律？在培養(yǎng)初期、對于大多數(shù)培養(yǎng)類型來講只需要散射光或弱光照或黑暗條件下。當外植體細胞啟動分裂后或進入分化培養(yǎng)階段，則需要根據(jù)植物類型增強光照第二章 細胞全能性第一節(jié) 培養(yǎng)細胞展現(xiàn)生命特征屬性1，植物細胞全能性的概念及其意義：植物細胞工程的基礎理論是植物細胞的全能性理論，即每每個植物的體細胞或性細胞都具有該植物的全套遺基因，并在條件合適的情況下能夠發(fā)揮該物種的各種功能和具有發(fā)育成為一個正常和完整的獨立個體的能力。根據(jù)這一理論，組織培養(yǎng)技術通過創(chuàng)造各種合適的培養(yǎng)條

15、件，促使細胞或組織發(fā)揮某一功能（例如合成藥物）或生長發(fā)育成完整的個體以達到特定的某種目的（例如快速繁殖植物種苗）。2.生命特征屬性：新陳代謝、應激性、自我復制細胞脫分化（cell dedifferentiation ）：（定義）培養(yǎng)條件下使一個已分化的細胞回復到原始無分化狀態(tài)或分生細胞狀態(tài)的過程就是細胞脫分化。靜止細胞啟動分裂是分化細胞成功脫分化的重要標志。蛋白體的出現(xiàn)和細胞質密度增加被認為是細胞開始脫分化的標志。細胞分化（Differentiation）：（定義）是指導致細胞形成不同結構，引起功能改變或潛在發(fā)育方式改變的過程。極性（polarity）：（定義）是指植物的器官、組織、甚至單個細

16、胞在不同的軸向上存在的某種形態(tài)結構以及生理生化上的梯度差異。玻璃化：植物組織培養(yǎng)中分化出半透明的畸形試管植株（玻璃化苗）的現(xiàn)象，稱為玻璃化現(xiàn)象。褐變：外植體在脫分化和再分化過程中，分泌褐色物質使培養(yǎng)基和外植體本身變褐的現(xiàn)象。分化細胞的脫分化需要兩個條件：創(chuàng)傷和外源激素。簡述植物細胞脫分化的過程啟動階段：蛋白體的出現(xiàn)和細胞質增生；演變階段：細胞核移向中央、質體轉化成原質體；脫分化終結期：回復到分生細胞狀態(tài)，細胞開始分裂影響植物細胞脫分化和再分化的因子：主要包括內(nèi)因和外因兩個方面。內(nèi)因主要指植物的遺傳特性和生理狀態(tài)。外因主要包括植物細胞營養(yǎng)條件（無機營養(yǎng)、有機營養(yǎng)、植物激素、天然提取物等）和環(huán)境條

17、件（滲透壓、酸堿度、溫度、濕度、光照等）8、愈傷組織: 在離體培養(yǎng)過程中形成的具有分生能力的一團不規(guī)則細胞，多在外植體切面上產(chǎn)生。實質上是一團無序生長的細胞，這些細胞大多處于隨機分裂的狀態(tài)。3. 細胞分化和組織分化4. 器官分化和植株形成器官發(fā)生方式：1）先芽后根：先分化芽，芽形成后，在芽的基部長出根進而形成完整植株。2）先根后芽：先分化根，再在根上產(chǎn)生不定芽進而形成完整植株。3）在愈傷組織的不同部位形成芽和根，再通過維管組織的聯(lián)系形成完整植株。36、培養(yǎng)條件下，植物細胞經(jīng)過再分化形成完整個體有哪兩種途徑？試比較這兩種途徑。器官發(fā)生途徑胚胎發(fā)生途徑實現(xiàn)方式愈傷組織誘導形態(tài)發(fā)生和胚狀體發(fā)育兩種途

18、徑體細胞胚發(fā)生途徑植株類型雙子葉植物，如茄科、菊科、十字花科及豆科的一部分種等多數(shù)集中于禾本科、傘形科、蕓香科、葫蘆科、豆科的一部分種尤其是豆科牧草和裸子植物中的松科注意事項愈傷組織誘導形態(tài)發(fā)生是與適量激素和合適培養(yǎng)基密切相關的培養(yǎng)過程中需通過超低溫保存技術保存胚性瘀傷組織或定期重新建立胚性懸浮培養(yǎng)細胞，且應盡可能縮短每個環(huán)節(jié)的所需時間，是保持分化的有效措施第三章 植物組織器官培養(yǎng)第一節(jié) 植物組織培養(yǎng)及器官形成1. 植物組織培養(yǎng)的意義植物組織培養(yǎng)：指在無菌條件下，將離體的植物器官（如根尖、莖尖、葉、花、未成熟的果實、種子等）、組織（如胚乳、皮層等）、細胞（體細胞、生殖細胞等）、胚胎（成熟和未成

19、熟的胚）、原生質體等培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適當?shù)呐囵B(yǎng)條件，誘導產(chǎn)生愈傷組織或完整植株的實驗技術。繼代培養(yǎng)：外植體在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，營養(yǎng)物質枯竭、水分散失，并且積累一些代謝產(chǎn)物，需將培養(yǎng)物轉到新的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，這種轉移稱為繼代培養(yǎng)或傳代培養(yǎng)。擬分生組織：是指培養(yǎng)物中出現(xiàn)的類似分生組織的細胞群，它是脫分化后的培養(yǎng)物發(fā)生一系列細胞分裂而產(chǎn)生的一團小型、薄壁、液泡小的細胞組織。也叫做生長中心或分生組織結節(jié)。植物組織培養(yǎng)的基本步驟：（1）培養(yǎng)材料的采集l（2）培養(yǎng)材料的消毒處理（3）制備外植體（4）接種和培養(yǎng)（5）生根培養(yǎng)l（6）煉苗和移栽l植物快速繁殖技術在園藝和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有廣泛

20、的用途，主要有以下幾個方面：（1）克服高度雜合物種因有性繁殖而引起的后代嚴重分離。（2）名優(yōu)植物或瀕危植物的快速繁殖。（3）無病毒苗木生產(chǎn)。（4）單獨繁殖雌株或雄株。（5）種質資源保存。適合進行組培快繁的植物有哪些？ 1）,通過脫毒后繁殖成為不帶病毒（virus free）的植株,由此而使生產(chǎn)力得到大幅度的提高,例如馬鈴薯,香蕉;2）,有性繁殖時變異幅度大的品系,可以從這些群體中選擇優(yōu)良的個體,進行無性繁殖,生產(chǎn)出整齊劃一的大量種苗;果樹,蘭花;3）,雌雄異株植物的繁殖,通過快速繁殖技術繁殖具有更高栽培價值的雌性植株或雄性植株,如蘆筍； 4）,需要用目的產(chǎn)品作為種苗材料進行種植的物種;如大蒜,

21、甘蔗等； 5）,稀有、瀕危植物種； 6）,自然繁殖率低的新品種，包括新引進的品種;離體培養(yǎng)條件下，莖、芽和根的再生方式大致有幾種?在組織培養(yǎng)中，通過莖芽和根而再生植株的方式大致有3種：1.先芽后根：多數(shù)植物；2.先根后芽：顛茄；3.在不同部位分別形成芽和根，最后通過微管組織聯(lián)系形成再生植株。簡述器官發(fā)生的過程1.愈傷組織誘導，2.“生長中心”形成，3. 器官原基和器官形成影響器官發(fā)生的因素有哪些？（1）外植體：母體植株的遺傳基礎與生理狀態(tài)，（2）激素(激素調控理論)，（3）培養(yǎng)基種類和培養(yǎng)方法（物理因素，化學因素），（4）環(huán)境條件（溫度，光照）第二節(jié) 體細胞胚胎發(fā)生1. 體細胞胚胎發(fā)生的途徑及

22、類型2. 體細胞胚胎發(fā)生的機制3. 影響體細胞胚胎發(fā)生的因素8、影響體細胞胚發(fā)生的因素有哪些？（1）、外源激素：生長素特別是2，4-D；（2）培養(yǎng)基：低無機鹽濃度和較高的硝態(tài)氮濃度；（3）基因型；（4）組織起源，距活體胚胎發(fā)育較近的組織和成熟及未成熟的胚胎在離體條件下更有利于細胞胚的誘導。體細胞胚或胚狀體（定義）：離體培養(yǎng)下沒有經(jīng)過受精過程，但經(jīng)過了胚胎發(fā)育過程所形成的胚的類似物（不管培養(yǎng)的細胞是體細胞還是生殖細胞），統(tǒng)稱為體細胞胚或胚狀體。體細胞胚胎發(fā)生: 指體細胞在未經(jīng)性細胞融合的情況下，模擬有性胚胎發(fā)生的各個階段而發(fā)育出新個體的形態(tài)發(fā)生過程。胚性發(fā)育：幼胚接種到培養(yǎng)基上以后，仍然按照在活

23、體內(nèi)的發(fā)育方式發(fā)育，最后形成成熟胚(有時甚至可能類似種子)，然后再按種子萌發(fā)途徑出苗形成完整植株離體胚培養(yǎng)：胚培養(yǎng)就是采用人工的方法將胚從種子中分離出來，在人工培養(yǎng)的條件下，使其他發(fā)育成正常植株。九體細胞胚的形成途徑：（簡答）1. 體細胞胚從外植體上直接發(fā)生：誘導階段;胚胎發(fā)育階段2. 間接發(fā)生：A.經(jīng)過愈傷組織的體細胞胚的形成：誘導愈傷組織的形成誘導愈傷組織胚性化體細胞胚的形成 B.經(jīng)過懸浮細胞的體細胞胚的形成：誘導愈傷組織的形成誘導愈傷組織胚性化懸浮培養(yǎng)的胚性細胞團體細胞胚的形成。l影響胚狀體發(fā)生和發(fā)育的因素l（1）供體植物的基因型（2）外植體的來源和培養(yǎng)物的生理狀況（3）與胚狀體發(fā)生相關

24、的基因表達（4）培養(yǎng)基中外源激素（5）培養(yǎng)基的氮源（6）天然提取物和活性碳對胚狀體形成的作用胚狀體的發(fā)育大約要經(jīng)過哪幾個時期?體細胞胚的大多首先起源于一個胚性細胞，胚性細胞經(jīng)過一次分裂形成二細胞原胚，最后經(jīng)過球性胚、魚雷形胚、心形胚和子葉形胚形成胚狀體。14、離體培養(yǎng)條件下，胚狀體產(chǎn)生有幾種方式?（1）直接途徑：即不經(jīng)過愈傷組織階段，從外植體直接產(chǎn)生體細胞胚； （2）間接方式：外植體首先誘導產(chǎn)生愈傷組織，再在愈傷組織上產(chǎn)生體細胞胚。第三節(jié) 幼胚培養(yǎng)1. 幼胚培養(yǎng)的意義離體胚胎培養(yǎng)可以克服種、屬間受精障礙，克服雜交后胚的衰亡，保證種內(nèi)或種間雜交的成功，或用于無性繁殖困難的植物的培養(yǎng)。胚培養(yǎng)還可以

25、打破種子休眠，縮短育種周期，克服種子生活力低下和自然不育等，對于植物界物種進化具有極其重要的意義。2. 幼胚培養(yǎng)時胚的發(fā)育方式有哪幾種？各有什么特點？答：幼胚培養(yǎng)常見的生長方式有3種：胚性發(fā)育 特點：形成成熟胚。一般一個幼胚將來就是一個植株。早熟萌發(fā) 特點：可出現(xiàn)叢生胚現(xiàn)象。愈傷組織 特點：大多為胚性愈傷組織，易分化成植株。胚性愈傷組織是很好的遺傳受體和分離原生質體的來源根據(jù)在培養(yǎng)中所取的外植體的部位不同，植物胚胎培養(yǎng)包括：胚培養(yǎng)，胚乳培養(yǎng)，胚珠培養(yǎng)，子房培養(yǎng)。3. 幼胚培養(yǎng)方法l關鍵技術是幼胚剝離：需借助解剖鏡，且注意保濕，和操作迅速。幼胚培養(yǎng)的關鍵技術：取材時期：多為球形胚至魚雷形胚階段。

26、體細胞胚與合子胚有何異同？界定：1）體細胞胚是離體培養(yǎng)的產(chǎn)物，只限于離體培養(yǎng)范圍使用，以區(qū)別于無融合生殖胚2）體細胞胚起源于非合子細胞，以區(qū)別于合子胚。3）體細胞經(jīng)過了胚胎發(fā)育過程，以區(qū)別于離體培養(yǎng)中器官發(fā)生形成個體的途徑。合子胚體細胞胚生殖類型有性無性細胞來源性細胞體細胞均經(jīng)過最初的胚性細胞不均等分裂以及以后的球形期、心形期、魚雷期等主要發(fā)育時期形態(tài)結構胚柄有、明顯無真正胚柄子葉規(guī)范不規(guī)范胚體積大小生理生化特征貯藏物高低含水量低高休眠有無第四節(jié) 花藥、花粉培養(yǎng)花藥培養(yǎng)（定義）：把發(fā)育到一定階段的花藥接種在人工培養(yǎng)基上，使其發(fā)育和分化成為植株的過程?；ǚ叟囵B(yǎng)（定義）：又叫小孢子培養(yǎng)，是從花藥中

27、分離除花粉粒，使之成為分散的或游離的狀態(tài)，通過培養(yǎng)使花粉粒脫分化，進而發(fā)育成完整植株的過程。花粉培養(yǎng)屬于細胞培養(yǎng)的范疇。花粉培養(yǎng)取材時期：四分體小孢子時期；花藥培養(yǎng)取材時期：單核晚期，雙核早期。六花藥培養(yǎng)的基本程序：外植體選擇外植體預處理外植體消毒剝?nèi)』ㄋ幗臃N誘導培養(yǎng)分化培養(yǎng)。1. 花藥、花粉培養(yǎng)的意義單倍體在植物遺傳育種中的應用（1）控制雜種分離，縮短育種周期2）提高常規(guī)育種的選擇效率（3）單倍體是誘變育種的良好材料2. 花藥、花粉培養(yǎng)再生途徑誘導單倍體的途徑（1）孤雌生殖（2）孤雄生殖（3）無融合生殖（4）體細胞減數(shù)分裂3. 影響花藥、花粉培養(yǎng)的因素4. 花藥培養(yǎng)方法花藥培養(yǎng)的程序大致如下

28、：（1） 從植株上取花粉單核期的花蕾或幼穗；l（2） 在保濕條件下低溫預處理；（3） 對花藥進行表面消毒；（4） 接種到培養(yǎng)基上，在適宜溫度下進行培養(yǎng)；（5） 將花粉胚或花粉愈傷組織轉入再生培養(yǎng)基中，進行植株再生培養(yǎng)；（6） 花粉植株的染色體加倍（在試管苗階段或移栽成活后）；（7） 花粉植株移栽。5. 游離花粉粒培養(yǎng)方法七花粉分離方法：1）機械分離法：將花藥置于盛有少量液體培養(yǎng)基或與培養(yǎng)基等滲的蔗糖溶液的培養(yǎng)皿中，用平頭的玻璃棒或注射器內(nèi)管輕輕擠壓花藥，使其散出花粉。（2）花藥漂浮培養(yǎng)自然釋放法：將經(jīng)過一定時間低溫處理的花藥，接種于液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)數(shù)天后，花藥開裂，釋放出花粉粒。（3）磁拌法

29、:將花藥接種于含有液體培養(yǎng)基的三角瓶中，然后放入一根磁棒，置于磁力攪拌器上，低速轉至花藥呈透明狀。通過離體培養(yǎng)獲得單倍體的途徑有哪些？助細胞或胚囊的無配子生殖產(chǎn)生單倍體；卵細胞、助細胞和反足細胞發(fā)育成單倍體；非正常發(fā)育的大孢子四分體產(chǎn)生單倍體；通過子房或花藥培養(yǎng)得到單倍體花藥培養(yǎng)中再生植株的形成途徑與再生植株倍性有何關系？答：花藥通過兩種途徑再生：一是由花藥誘導形成的胚狀體途徑；二是花藥愈傷組織途徑。通過胚狀體途徑產(chǎn)生的花粉植株幾乎全是單倍體，而經(jīng)愈傷組織產(chǎn)生的花粉植株中有不少是二倍體，并且愈傷組織繼代培養(yǎng)時間愈長，二倍體的比例愈高。第五節(jié) 人工種子1. 人工種子的定義2. 人工種子的優(yōu)越性與

30、局限性3. 人工種子的制作人工種子具備以下幾個特點：（1） 具有發(fā)育良好的體細胞胚，并能發(fā)育成正常的完整植株。（2） 具有人工胚乳可提供種胚發(fā)育的營養(yǎng)。（3）具有能起到保護作用的人工種皮。用于制備人工種子的繁殖體主要有哪些？答：主要有體細胞胚、微型營養(yǎng)變態(tài)器官和芽繁殖體一人工種子（artificial seeds）：將植物組織培養(yǎng)產(chǎn)生的胚狀體包裹上用有機化合物和營養(yǎng)物質制作的人工種皮，具有形成完整植株能力的繁殖體。根據(jù)包被的程度可將人工種子分為三大類：裸露的或休眠的繁殖體、人工種皮包被的繁殖體、水凝膠包埋再包被的繁殖體。二繁殖體的種類及其培養(yǎng)技術：體細胞胚、微型變態(tài)器官、微芽。三人工種子由以下

31、三部分組成：繁殖體，人工胚乳，人工種皮。四包埋介質的要求：1、要能對繁殖體起保護作用，要對繁殖體沒有毒害。2、要求具有一定的緩沖強度，以保證繁殖體在生產(chǎn)、運輸和種植操作中的安全。3、能夠提供類似于胚乳的營養(yǎng)物質以供繁殖體發(fā)芽的需要。4、應含有適當?shù)臍⒕鷦?。五理想的人工種皮：1具有一定的封閉性以保證人工胚乳的各種成分不易流失；2具有良好的透氣性，以保證繁殖體維持生理活性的需要；3有一定的堅硬度，以加強人工種子的耐儲運性和適于機械化操作；4無毒無害，能保證繁殖體順利穿透發(fā)芽。第四章 莖尖分生組織培養(yǎng)第一節(jié) 莖尖分生組織培養(yǎng)的目的和應用1. 形態(tài)建成研究2. 無病株的生產(chǎn)3. 營養(yǎng)繁殖4. 育種中的

32、應用第二節(jié) 脫毒苗的培育1. 病毒的危害及培育無毒苗的意義2. 病毒侵染的特點3. 熱處理脫毒4. 莖尖培養(yǎng)脫毒5. 熱處理結合莖尖培養(yǎng)脫毒6. 脫毒苗在生產(chǎn)中的應用7. 幾種主要植物的脫毒苗生產(chǎn)技術一植物脫毒：利用植物組織培養(yǎng)技術脫出植物細胞中侵染的病毒，生產(chǎn)健康的繁殖材料。二脫毒 基本原理：病毒在植物體內(nèi)的分布具有不均勻性。三脫毒苗制備流程：索取材料的病毒檢測 外植體的選擇及預處理莖尖分生組織培養(yǎng)再生植株 脫毒效果檢測 脫毒苗的保存與繁殖四（填空、簡答）培養(yǎng)物的增殖方式：1.腋芽增殖2. 不定芽增殖3. 體細胞胚增殖4. 愈傷組織增殖19.為什么莖尖分生組織培養(yǎng)能夠除去植物病毒？答：因為病

33、毒主要通過維管束和胞間連絲傳播，在植物莖尖分生組織無維管束，且胞間連絲不發(fā)達，病毒運轉速度慢；加之分生組織內(nèi)細胞分裂和生長速度快，病毒擴散的速度趕不上細胞分裂和生長速度，所以莖尖生長點病毒數(shù)量極少，幾乎檢測不出。12、為什么莖尖分生組織培養(yǎng)能夠能夠除去植物病毒？答：原因：病毒在植物體內(nèi)的分布不均勻性，在分生組織中不帶或很少帶有病毒。其中證明病毒的分布不均勻性的假說：能量競爭、轉導抑制、激素抑制、酶缺乏、抑制因子13、哪些因素影響莖尖培養(yǎng)的脫毒效果？答：影響因素：1.母體材料病毒侵染的程度：單一病毒感染的植株脫毒較容易。2.起始培養(yǎng)的莖尖大?。阂话悴粠~原基的生長點培養(yǎng)脫毒效果最好3.外植體的生

34、理狀態(tài)：頂芽的脫毒效果比側芽好，生長旺盛季節(jié)的芽為外植體脫毒比休眠體芽或快進入休眠的芽的脫毒效果好。32、如何檢測再生植株的脫毒效果？答：再生植株后，一般在18個月以內(nèi)進行病毒鑒定，因為病毒的潛伏期一般為612個月以上。通過指示植物鑒定和血清學鑒定及其他方法鑒定：1.指示植物鑒定法：常用指示植物有：千日紅、曼陀羅和心葉煙。將待測植物的汁液接種到指示植物上，如果被測植株帶毒，則指示植物會出現(xiàn)特定癥狀。2.血清法：可分為試管沉淀法（抗原-抗體沉淀反應）、免疫雙擴散（同左）、酶聯(lián)免疫吸附測驗（抗原-抗體反應及酶的催化反應結合）電鏡檢測技術：分汁液提取染色、免疫吸附電鏡、病毒粒子修飾等；3.核酸雜交

35、e）聚合酶鏈式反應3、指示植物：具有能夠辨別某種病毒?；誀畹募纳参锏谖逭?原生質體培養(yǎng)與細胞融合第一節(jié) 原生質體分離與培養(yǎng)1. 原生質體培養(yǎng)的意義2. 原生質體培養(yǎng)的發(fā)展歷史3. 原生質體的分離4. 原生質體培養(yǎng)原生質體（protoplast）是指除去細胞壁的裸細胞;是體細胞雜交育種的材料是轉基因的良好受體;是開展基礎理論研究的良好材料;是分離細胞器的良好材料2簡述酶法分離植物原生質體的基本原理。植物細胞壁由纖維素，半纖維素，果膠質等組成，通過用酶把原生質體外的細胞壁分解，便能得到完整的原生質體。原生質體純化有哪些方法？（填空、簡答）答：方法有：沉降法：在酶解處理中用相對分子質量較小的甘露

36、醇作為滲透壓調節(jié)劑時，將收集的濾液低速離心，使原生質體沉降于管底。漂浮法：在酶解處理中用相對分子質量較大的蔗糖作為滲透壓調節(jié)劑時，將收集的濾液于1000r/m的轉速下離心10min，原生質體將漂浮于溶液表面，細胞碎片等雜質將下沉到管底。界面法：利用比重不同的溶液，經(jīng)過離心后使完整無損的原生質體處在兩液相的界面之間，而細胞碎片等雜質則下沉到管底。原生質體的培養(yǎng)方法有哪些？各有何優(yōu)缺點？優(yōu)點缺點液體淺層培養(yǎng)法操作簡便，對原生質體的傷害較小，通氣性好，代謝物易擴散，易于補充新鮮培養(yǎng)基，形成細胞團或小愈傷組織后易于轉移。原生質體在培養(yǎng)基中分布不均勻，常常發(fā)生原生質體之間的黏連現(xiàn)象，或造成局部原生質體的

37、密度過高，從而影響了原生質體再生細胞的進一步生長發(fā)育，并且難以定點觀察和跟蹤單個原生質體的生長發(fā)育過程懸滴培養(yǎng)法所需材料少，生長快，容易添加新鮮培養(yǎng)基，不易污染，并且由于微滴的體積小，在一個培養(yǎng)基中可以做很多種培養(yǎng)基的對照實驗，有利于原生質體的低密度培養(yǎng)原生質體分布不均勻，容易集中在小微中央。另外由于微滴與空氣的接觸面積大，水分容易蒸發(fā)而造成培養(yǎng)基成分濃度變高。微滴培養(yǎng)法可用倒置顯微鏡觀察原生質體的發(fā)育過程，易于添加新鮮培養(yǎng)基，可用于較多組合的實驗或進行融合體及單個原生質體的培養(yǎng)與懸浮培養(yǎng)法相似，原生質體易于聚集在小滴的中央，微滴容易揮發(fā)。固體培養(yǎng)法原生質體被彼此分開并固定了位置，可以避免細胞

38、間有害代謝產(chǎn)物的影響，并便于定點觀察，有利于跟蹤觀察單個原生質體發(fā)育過程，易于統(tǒng)計原生質體的分裂頻率和植板率對操作要求較嚴格，在原生質體懸浮液與瓊脂或瓊脂糖培養(yǎng)基混合時溫度必須合適，太高會影響活力，太低培養(yǎng)基凝固太快使原生質體分布不均勻，并且原生質體的生長發(fā)育比液體淺層法要慢。液體淺層-固體平板雙層培養(yǎng)法優(yōu)點：固體培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分可以緩慢地釋放到液體培養(yǎng)基中，以補充培養(yǎng)物對營養(yǎng)的消耗，產(chǎn)生的一些有害物質可被固體培養(yǎng)基吸收，有利于培養(yǎng)物的生長。在下層固體培養(yǎng)基中如果添加一定量的活性碳，可有效地吸附培養(yǎng)物產(chǎn)生的有害物質，促進原生質體的分裂及細胞團的形成瓊脂糖珠培養(yǎng)法優(yōu)點：通氣性好飼養(yǎng)層培養(yǎng)法優(yōu)點：

39、可提高原生質體的植板率 第二節(jié) 細胞融合與培養(yǎng)1. 細胞融合的意義2. 細胞融合的方法3. 培養(yǎng)方法4. 雜種細胞的選擇5. 體細胞雜種鑒定四原生質體活力測定方法：（P114）1.形態(tài)識別法 2.熒光素雙醋酸酯（FDA）染色法：有活力的原生質體產(chǎn)生綠色熒光。3.酚藏花紅染色法：有活力的原生質體不能被染色。4、熒光增白劑染色法：有活力的原生質體隨著細胞壁的再生產(chǎn)生綠色熒光。5、伊凡藍染色法：有活力的原生質體不能被染色。五植物體細胞雜交：又稱為原生質體融合，是指將植物不同種、屬、甚至科間的原生質體通過人工方法誘導融合，然后進行離體培養(yǎng)，使其再生雜種植株的技術。植物細胞雜交的類型：1）體細胞雜交2）

40、體細胞-配子雜交3）配子間細胞雜交4）微細胞雜交原生質體融合的種類（完整程度）：1）對稱融合 2）非對稱融合六原生質體的融合方法之一: PEG誘導融合法1）特點：優(yōu)點是成本低；融合子產(chǎn)生的異核率高；不受物種限制。缺點是融合過程繁瑣，PEG對細胞有毒害。2）作用機理：PEG分子具有輕微的負極性，可與帶正極性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成H鍵，在原生質體之間形成分子橋，使原生質體發(fā)生粘連進而促使原生質體的融合；PEG還鞥增加類脂膜的流動性，使原生質體的核、細胞器發(fā)生融合成為可能。七原生質體的融合方法之二：電融合的基本過程細胞膜的接觸：原生質體在電場作用下極化而產(chǎn)生偶極子，使原生質體緊密接觸排列

41、成串。膜的擊穿：給予高頻直流脈沖就可以使原生質膜擊穿，從而導致兩個緊密接觸的細胞融合在一起。優(yōu)點：1）不存在對細胞的毒害問題2）融合效率高3）融合技術操作簡便八（填空）原生質體的融合產(chǎn)物：異核體（核未融合）、 同核體（同一親本融合 AA）、 未發(fā)生融合的雙親原生質體。30、體細胞雜交和原生質體融合有哪些類型？其產(chǎn)物和再生個體有何特點？答：細胞雜交類型有：體細胞-體細胞雜交、配子-體細胞雜交、配子間雜交、微細胞雜交原生質體融合有：對稱融合、非對稱融合（A細胞核+B細胞質、A完整細胞+B細胞質、A完整細胞+B細胞質和部分核物質）其產(chǎn)物和再生個體特點：對種質資源的開發(fā)和利用具有深遠的意義；克服了遠緣

42、雜交不親和；產(chǎn)生了新的核外遺傳系統(tǒng)33、使細胞核失活的途徑有哪些？答：使細胞核失活的方法有物理和化學方法：物理方法：常用射線處理，如X射線、射線等；化學方法：常用試劑有碘乙酰胺（IOA）、碘乙酸5、試述PEG融合法和電融合法的基本原理。答：PEG融合法的基本原理：原生質體融合首先必須使兩個原生質體緊密接觸，質膜之間的距離要小于10。由于PEG分子有帶負電荷的醚鍵，具有輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成氫鍵，在原生質體之間形成分子橋，其結果是使原生質體發(fā)生黏連。當用高Ca2+和高PH溶液清洗后，Ca2+和PEG被清洗掉，打破了電荷平衡，使原生質體某些正電荷與另一些

43、原生質體和負電荷連接起來，進而促使原生質體的融合。另外，PEG能增加類似脂膜的流動性，這也是原生質體的核和細胞器發(fā)生融合成為可能。電融合法的基本原理：根據(jù)原生質體的融合過程設計的，實質上它是借助于電場和電脈沖的作用來加速原生質體的融合過程，即給予了原生質體融合一個更有利的外部條件。融合程序包括細胞膜的接觸和膜的擊穿原生質體是去掉細胞壁的單細胞，它是在離體培養(yǎng)條件下能夠再生完整植株的最小單位。每個原生質體都含有該個體的全部遺傳信息，在適宜的培養(yǎng)條件下，具有再生成與其親本相似的個體的全能性。原生質培養(yǎng)（Protoplast culture）的主要目的是通過原生質體的融合，克服遠緣雜交障礙，實現(xiàn)體細

44、胞雜交（Somatic hybridization），從而產(chǎn)生雜交后代。原生質體的分離（1）機械分離方法（2）酶解分離法影響原生質體活力的因素滋養(yǎng)培養(yǎng)是利用能夠分泌生物活性物質的細胞或組織培養(yǎng)物作為滋養(yǎng)者，來促進原生質體的分裂和生長。影響原生質體培養(yǎng)的因素l（1）原生體的活力 （2）原生質體密度 （3）細胞壁再生速度 （4）培養(yǎng)條件 原生質體融合與體細胞雜交：兩種異源原生質體在誘導劑誘導下相互接觸，從而發(fā)生膜融合、胞質融合和核融合，并形成雜種細胞的過程稱為細胞融合，或細胞雜交。如果融合的細胞為體細胞則稱體細胞雜交。l細胞融合具有重要意義，它可克服種、屬以上植物有性雜交不親和性障礙，實現(xiàn)遠緣雜交

45、，為廣泛重組遺傳物質開辟新途徑。 l原生質體融合：（1）自發(fā)融合（2）誘發(fā)融合1）NaNO3誘導融合3）高pH高鈣離子誘導融合3)聚乙二醇（PEG）誘導融合4）PEG與高pH、高鈣離子相結合的融合法5）電擊融合體細胞雜交技術在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應用（1）體細胞雜交合成新物種（2）體細胞雜交可培育抗病新品種（3）胞質雜種在育種上的應用具有一個親本細胞核和兩個親本細胞質的體細胞雜種稱為胞質雜種。不對稱融合的供體受體系統(tǒng)，使得一個親本的原生質體的細胞核失活（細胞質供體），另一個親本的原生質體細胞質的線粒體失活（細胞質受體）。、哪些因素會影響原生質體培養(yǎng)？答：影響因素有：濃度：激素的濃度、無機鹽的濃度、有機

46、成分的濃度；滲透壓；營養(yǎng)成分完全性；培養(yǎng)基的條件： PH、激素等；培養(yǎng)條件：光照、溫度6、非對稱融合：利用物理或化學的方法使親本的核或細胞質失活后再進行融合第六章 體細胞無性系變異1. 培養(yǎng)細胞變異的類型2. 影響體細胞無性系變異的因素3. 植株再生的調控4. 優(yōu)良變異系的篩選方法5. 體細胞無性系變異的應用6、體細胞無性系變異：植物的組織、細胞、原生質體在離體培養(yǎng)的條件下所得的培養(yǎng)物及再生植株的變異叫體細胞8、離體培養(yǎng)物的遺傳與變異有何特點？答：特點：遺傳穩(wěn)定性：一般有較高的遺傳穩(wěn)定性；變異的普遍性：各種植物離體培養(yǎng)中變異普遍發(fā)生變異局限性變異的嵌合性：同一個有機體重同時存在有遺傳組成不同的

47、細胞。一體細胞無性系：由任何形式的細胞培養(yǎng)所產(chǎn)生的植株統(tǒng)稱為體細胞無性系。體細胞無性系變異：由體細胞無性系表現(xiàn)出來的變異。從對生物遺傳的影響而言，細胞工程技術本身即包含了雙重性：遺傳穩(wěn)定性和變異性。二離體培養(yǎng)中的遺傳與變異特點：遺傳穩(wěn)定性；變異的普遍性；變異的局限性；嵌合性8，細胞無性突變篩選育種有哪些優(yōu)缺點？優(yōu)點有：1）變異廣泛 各種性狀都可能發(fā)生變異，但變異并不完全隨機：有些性狀的變異頻率比較高，有些變異導致個體死亡而無法表達，多數(shù)變異（DNA分子的變異）并不表達或表達方式和水平難以察覺。2）后代穩(wěn)定快 多數(shù)變異是單基因變異：顯性變異可以直接選擇利用；隱性變異可以通過1次自交純合，得到表現(xiàn)

48、。3）可與輻射和其他化學誘變相結合 通過多種方法的結合可能顯著提高離體細胞的變異頻率。離體培養(yǎng)細胞的輻射誘變效果比個體水平的輻射的效果要好，其中最主要的是嵌合現(xiàn)象比較少，特別是通過胚胎再生途徑的情況更是如此。4）特別適合進行抗性突變體的篩選 可以通過在培養(yǎng)基中添加篩選劑而簡單地對上百萬個細胞進行有效的篩選。缺點有：1），自發(fā)突變和誘發(fā)突變的隨機性，即難以進行定向誘變；2），某些基因高度穩(wěn)定，即某些性狀不會發(fā)生突變；3），多數(shù)變異性狀難以在細胞水平進行選擇，例如株高，穗長，果皮顏色等等；4），細胞水平和個體水平表現(xiàn)的不一致性，細胞水平比較單純，而有相當多的功能需要多細胞或多種器官組織共同參與完成

49、。5），細胞的生理適應性和突變的混淆，這是造成選擇無效的原因。第八章 細胞培養(yǎng)及生產(chǎn)有用物質第一節(jié) 細胞培養(yǎng)方法1. 細胞的分離2. 單細胞培養(yǎng)3. 細胞懸浮培養(yǎng)1、薄層細胞培養(yǎng)：從外植體的表皮撕下數(shù)層細胞于合適的培養(yǎng)基上進行的離體培養(yǎng)；現(xiàn)也將外植體橫切成1mm厚的薄片2、單細胞培養(yǎng):指從植物器官，愈傷組織或細胞懸浮培養(yǎng)液中游離出單個細胞，于無菌條件下，進行體外培養(yǎng)，使其繁殖，生長，發(fā)育的一門技術。3、平板培養(yǎng)法 ：將懸浮培養(yǎng)的細胞接種到一薄層固體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的技術。 4、最低有效密度：在植物懸浮培養(yǎng)液中，使懸浮培養(yǎng)細胞能夠增殖的最少接種量。5、看護培養(yǎng)法：指用一塊愈傷組織或植物離體組織看

50、護單細胞使其生長并增殖的一種單細胞培養(yǎng)方法。 6、植板率：長出的細胞團的單細胞在接種細胞中所占的百分比數(shù)。17、用于建立懸浮細胞系的愈傷組織有何要求？ 答：必須有較好的松散性，使之在懸浮培養(yǎng)的起始階段細胞容易打散；具備較強的增殖和再生能力18、一個好的懸浮細胞系有哪些特征？答：其特征如下：懸浮培養(yǎng)物分散性良好，細胞團小，一般在3050個細胞以下。；均一性好，細胞形狀和細胞團大小大致相同，懸浮系外觀為大小均一的小顆粒，培養(yǎng)基清澈透亮，細胞色澤呈鮮艷的乳白或淡黃色。；細胞生長迅速，懸浮細胞的生長量一般23d甚至更短時間便可增加1倍。19、細胞懸浮系培養(yǎng)基群體生長有何規(guī)律？答：其規(guī)律是： 在一個周期

51、不添加培養(yǎng)基的懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)中，細胞數(shù)量開始隨著時間的變化，其擴增生長呈S形曲線。在細胞接種最初的時間內(nèi)細胞很少分裂，經(jīng)過一個延遲期，然后進入指數(shù)生長期和細胞迅速增值的直線生長期，接著是細胞增值減慢的減緩期和停止生長的靜止期。靜止期的細胞數(shù)量和質量均會下降，如果繼代不及時，長期處于停止期的細胞往往會出現(xiàn)死亡和下降，從而影響整個懸浮細胞系的狀態(tài)。通常狀態(tài)下，當細胞進入減緩期時就要及時繼代。26、建立懸浮細胞系的關鍵技術有哪些？答：關鍵技術有：愈傷組織的誘導、懸浮系的建立與繼代培養(yǎng)及細胞生長狀態(tài)調控第二節(jié) 培養(yǎng)物的次級代謝28、細胞大規(guī)模培養(yǎng)有哪些培養(yǎng)系統(tǒng)？答：主要包括：成批培養(yǎng)：指在一個培養(yǎng)體積中接種細胞和添加培養(yǎng)基后，中途不再添加培養(yǎng)基也不更換培養(yǎng)基的方法；連續(xù)培養(yǎng)：在培養(yǎng)過程中，不斷向反應器中以一定的流量添加新鮮培養(yǎng)基，同時以相同的流量從系統(tǒng)中取出培養(yǎng)基，從而維持培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)在細胞密度、產(chǎn)物濃度以及物理狀態(tài)上的相對平衡。；半連續(xù)培養(yǎng)：在完成上訴成批培養(yǎng)的一個周期后，只從反應器中取出大部分細胞懸液