藥物的安全性評價試驗方法

1、全身用藥的毒理研究,第一節(jié) 新藥急性毒性試驗,急性毒性：24h內(nèi)單次或多次大劑量給予某種藥物所出現(xiàn)的有害作用,急性毒性試驗 毒性反應(yīng)類型 定性 出現(xiàn)和消失時間 可能的靶器官和死亡原因 致死量 定量 最大給藥量 半數(shù)致死量,急性毒性試驗的目的和意義： 1、測定藥物的半數(shù)致死量及相關(guān)參數(shù) 2、通過觀察藥物急性中毒癥狀，推測藥物的毒性靶器官 3、為長期毒性試驗和特殊毒性試驗提供劑量設(shè)計參考,二、試驗內(nèi)容,一）半數(shù)致死量（LD50） 試驗?zāi)康模河^察一次給予受試藥物后動物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況，計算LD50,試驗方法： 1、動物：小鼠或大鼠 2、動物分組：隨機原則 3、劑量設(shè)計：56個劑量組（LD0L

2、D100） 4、給藥途徑：兩種 5、觀察時間：14天左右,6、觀察指標：中毒癥狀、LD50 中毒癥狀：被毛，行為學(xué)變化，情緒，神經(jīng)癥狀（震顫、痙攣、抽搐、步態(tài)不穩(wěn)等），呼吸頻率，肛門周圍有無污染，眼、鼻、口有無分泌物，體溫，體重變化等 剖檢檢查：各臟器的變化等。 組織切片,急毒試驗常見觀察指針及可能涉及的組織、器官、系統(tǒng),LD50測定的缺陷： 1、動物消耗量大，獲得的信息有限 2、影響因素較多，數(shù)據(jù)重復(fù)性較差 3、從安全性評價角度來看，需要的不是精確的LD50值，而是更多的毒性信息,二）最大給藥量試驗,在受試藥物合理的最大容積和最高濃度條件下，單次或24h內(nèi)多次給予試驗動物不產(chǎn)生死亡的最大給藥

3、量試驗,常用于某些低毒的藥物急性毒性試驗,三）最大耐受量試驗,單次給藥引起動物出現(xiàn)明顯的中毒反應(yīng)而未發(fā)生死亡的劑量。 多用于毒性較小的藥物研究,試驗方法： 1、動物：小鼠、大鼠、犬等 2、動物數(shù)：小動物1020只；大動物46只（雌雄各半） 3、給藥途徑：臨床給藥途徑 4、試驗對照： 5、觀察時間：714天大體解剖 如有改變組織切片 6、結(jié)果與評價：描述動物單次大劑量給藥或在24h內(nèi)接受多次大劑量給藥后，在短期內(nèi)出現(xiàn)的與藥物相關(guān)的毒性反應(yīng)，發(fā)生、發(fā)展過程提供不引起動物死亡的最大劑量,四）固定劑量試驗,不以死亡作為觀察終點，而是以明顯的毒性體征作為重點進行藥物的急性毒性評價,試驗方法：選5、50、

4、500、2000mg/kg四個固定劑量進行試驗 動物：大鼠 預(yù)試：500mg/kg 正式試驗：根據(jù)預(yù)試結(jié)果，從四個固定劑量中選擇一個可能產(chǎn)生明顯毒性，但不引起死亡的劑量進行試驗。 觀察指標：同半數(shù)致死量試驗,固定劑量法試驗結(jié)果的評價,五）近似致死劑量試驗,1、估計可能的毒性范圍 2、按50%遞增法，設(shè)計出含1020個劑量組 3、測出最低致死劑量和最高非致死劑量后，用二者之間的劑量（即近似致死劑量）給一只動物,三、LD50計算方法,Bliss法 加權(quán)概率單位法 寇氏法 改良寇氏法,LD50= -1Xm i (P 0.5,Xm：最大劑量的對數(shù)值 i ：相鄰兩組劑量對數(shù)值之差 P：各組動物死亡率，用

5、小數(shù)表示（如死亡率為80應(yīng)寫成0.80） P：各組動物死亡率之總和,第二節(jié) 新藥長期毒性試驗,長期毒性：試驗動物連續(xù)多次接觸較大劑量的藥物所引起的中毒效應(yīng)。 長期毒性試驗：為觀察藥物的長期毒性而設(shè)計的毒理學(xué)試驗。又被稱為重復(fù)給藥毒性試驗,長期毒性試驗的目的,1、反復(fù)多次給藥的情況下，實驗動物出現(xiàn)的毒性反應(yīng)、量效關(guān)系、主要的靶器官、損害程度及其可逆性。 2、獲得反復(fù)給藥情況下，實驗動物能 耐收的劑量范圍及完全無毒性反應(yīng)的安全范圍,一、一般原則,1、試驗動物：二種（嚙齒類和非嚙齒類） 動物數(shù)量、性別、年齡、敏感性 2、給藥期限：一般為臨床療程的34倍時間 創(chuàng)新藥品試驗周期不少于90天 3、劑量選擇

6、：高中低三個組 高劑量組：能充分反映藥物的毒性，但不能造成太多動物死亡。 低劑量組：無毒,4、給藥方法：最好與臨床給藥途徑一致 5、觀察途徑： 日常觀察（生長率、食耗、一般觀察等） 測定指標：器官重量、血液學(xué)變化、血液生化學(xué)指標,二、檢測項目,1、日常觀察： 一般指標：被毛、皮膚、眼睛、呼吸、行為活動、病理檢查等。 生長率 食耗 2、測定指標 血液學(xué)指標（紅細胞、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、白細胞總數(shù)級分類、血小板等） 血液生化指標（天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶、 丙氨酸氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶、堿性磷酸酶、尿酸氮 、總蛋白、白蛋白、血糖、 總膽紅素、肌酐、 總膽固醇） 器官重量,三、檢測指標的時間,一）檢查間隔

7、 一般癥狀：每天觀察記錄 測定指標：定期檢查 （二）恢復(fù)期觀察 最后一次給受試藥物后，部分動物進行活殺檢測各項指標，留下約1/31/4動物進行恢復(fù)期觀察。 恢復(fù)期觀察目的：了解毒性反應(yīng)的可逆性和可能出現(xiàn)的延遲性毒性,四、結(jié)果評價,1、試驗結(jié)果數(shù)據(jù)應(yīng)進行統(tǒng)計學(xué)處理 2、根據(jù)實驗?zāi)康模Y(jié)合觀察到的毒性表現(xiàn)作出恰當(dāng)?shù)脑u價 3、通過實驗結(jié)果確定毒性靶器官和毒性表現(xiàn) 4、可結(jié)合其他試驗同時觀察,第三節(jié) 制劑的全身毒性試驗,一、靜脈注射制劑的全身毒性試驗 1、血管刺激性試驗 目的：觀察受試靜脈注射制劑經(jīng)多次給藥后對血管刺激反應(yīng)情況。 試驗方法： 動物：家兔 分組：試驗組、空白對照組 給藥方法：多次靜脈注射

8、 觀察指標：肉眼觀察 病理切片,2、體外溶血試驗,目的：觀察靜脈注射劑是否能引起溶血現(xiàn)象。 試驗方法： （1）制備2%紅細胞懸液 （2）加樣 （3）保溫 （4）結(jié)果觀察 全溶血：溶液澄明，紅色，管底無紅細胞殘留 部分溶血：溶液澄明，紅色或棕色，管底有少量紅細胞殘留 不溶血：紅細胞全部下沉，上層液體無色透明。鏡檢紅細胞不凝集,3、過敏性試驗（致敏試驗,目的：觀察受試藥物經(jīng)注射給藥后有無過敏反應(yīng),試驗方法： 動物：豚鼠 分組：3組（給藥組、空白對照組、陽性致敏組） 給藥方法：腹腔注射 結(jié)果觀察：過敏性反應(yīng)（痙攣、呼吸困難、 皮疹等,熱源：微生物產(chǎn)生的能引起人及恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)，主要是革蘭

9、氏陰性菌細胞壁分離出來的內(nèi)毒素,4、熱原試驗,目的：將受試藥靜脈注射給予家兔，觀察家兔體溫升高情況，以判定藥物是否具有致熱作用。 試驗方法： 動物：家兔 給藥方法：耳緣靜脈注射 觀察指標：體溫,一般藥理學(xué)評價,評價新藥在擬推薦臨床使用劑量下對重要的生命活動（如心血管系統(tǒng)功能、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、呼吸系統(tǒng)功能、胃腸道功能、內(nèi)分泌功能、外周神經(jīng)功能、尤其是體液傳遞機制及其神經(jīng)沖動和骨骼肌功能等）的影響的研究，以預(yù)期用于臨床防治疾病主要目的以外的其它廣泛的藥理作用，從而達到基本認識全身用藥對機體主要器官系統(tǒng)影響的目的,一般藥理學(xué)評價的基本要求,1、精神神經(jīng)系統(tǒng) 常用動物：小鼠 觀察指標：行為學(xué)變化、對

10、神經(jīng)系統(tǒng)的興奮或抑制作用,2、心血管系統(tǒng) 常用動物：大鼠、犬、貓等 觀察指標：血壓、心率、心電、血流動力學(xué)變化等,3、呼吸系統(tǒng) 常用動物：犬、貓等大動物 觀察指標：呼吸頻率、呼吸深度、呼吸類型等,局部用藥的毒性試驗是根據(jù)局部用藥部 位的解剖和生理特點設(shè)計的。 涂劑、擦劑 皮膚用藥 膏劑、凝膠劑 其他透皮吸收制劑 常用局部用藥制劑 滴眼劑、滴鼻劑 噴霧劑、肌內(nèi)注射 直腸和陰道制劑,第十九章 局部用藥的毒性研究,第一節(jié) 皮膚用藥的毒性試驗 一、皮膚的組織結(jié)構(gòu) 皮膚由表皮、真皮及皮下組織等構(gòu)成,皮膚覆蓋全身。 表皮較薄，厚為0.1-0.2mm。 角質(zhì)層 表皮 顆粒層 生發(fā)層 真皮依附于皮下組織，厚約

11、2mm。 膠原 真皮 彈性硬蛋白 纖維母細胞,二、化學(xué)物質(zhì)對皮膚毒性作用的類型 （一）皮膚原發(fā)性刺激 指藥物直接作用于皮膚引起的病理學(xué)反應(yīng)。原發(fā)性刺激的表現(xiàn)：紅斑、水腫、水皰疹、潰瘍、蕁麻疹等 作用機理：1、直接刺激作用 2、使皮膚表面蛋白質(zhì)變性,藥物：強酸、強堿、強氧化劑、重金屬等,二）皮膚致敏 作用機理：變態(tài)反應(yīng) 藥物：抗生素、非甾體類抗炎藥、局麻藥、消毒藥等,三）皮膚致癌,三、皮膚用藥毒性試驗,一）急性毒性試驗 1、試驗?zāi)康模河^察動物完整皮膚及破損皮膚短期內(nèi)接觸受試藥物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。 2、試驗材料 （1）動物：成年健康家兔、豚鼠、大鼠 （2）藥物制劑：膏劑、液體制劑、粉末 3、試驗方

12、法 （1）劑量：3個劑量組 （2）給藥途徑：將藥物均勻涂布于動物背部皮膚（經(jīng)脫毛處理） （3）觀察指標：全身反應(yīng)、死亡情況、各系統(tǒng)變化、剖檢變化,二）皮膚用藥長期毒性試驗 1、試驗?zāi)康模河^察動物皮膚長期接觸受試藥物，經(jīng)皮膚滲透或吸收后對機體產(chǎn)生的異常反應(yīng)及其可逆程度。 2、試驗材料 （1）動物：成年健康家兔、豚鼠、小鼠 （2）受試藥物：膏劑、液體制劑、粉末 3、試驗方法 （1）劑量：3個劑量組 （2）給藥途徑：將藥物均勻涂布于動物背部脫毛區(qū)，每日一次，每次至少接觸6小時 （3）觀察指標：全身反應(yīng),第二節(jié) 眼睛用藥刺激性試驗,1、試驗?zāi)康模河^察動物眼睛接觸受試藥物產(chǎn)生的刺激 反應(yīng)情況。 2、試驗

13、材料 （1）動物：成年健康家兔 （2）受試藥物：原液或原 3、試驗方法 （1）試驗分組：1個劑量組，1個對照組 （2）給藥方案：將藥物滴入或涂敷于動物一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)作為對照。 （3）觀察指標：6、24、48、72h、7d觀察眼部反應(yīng)情況（具體觀察評分方式見書177頁,第三節(jié) 肌肉注射用藥局部刺激性試驗,試驗?zāi)康模河^察藥物肌內(nèi)注射后是否具有局部刺激作用 試驗方法（略,第四節(jié) 滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗,1、試驗?zāi)康模河^察受試藥物一次滴入或吸入后對動物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)或死亡情況。 2、試驗材料： （1）動物：大鼠、豚鼠或家兔 （2）藥物：液體或粉末制劑 3、試驗方法： （1）試驗分組：3個劑量組 （2）給藥途徑：滴入或吸入 （3）觀察指標：全身狀況、體重、呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等變化,滴鼻劑和吸入劑刺激試驗,1、試驗?zāi)康模河^察藥物一次或多次滴入或吸入后動物產(chǎn)生的刺激反應(yīng)。 2、試驗材料 （1）動物：大鼠、豚鼠或家兔 （2）藥物：液體或粉末制劑 3、試驗方法 （1）試驗分組：3個劑