玫瑰單胞菌研究現(xiàn)狀(圖文)

1、.玫瑰單胞菌研究現(xiàn)狀.玫瑰單胞菌是一種粉紅色的、革蘭氏陰性、需氧 的小球桿囷，是在1993年由Rihs等人利用生化實(shí)驗(yàn) 以及DNA雜交等手段，對(duì)42株革蘭氏陰性非Methy- lobactermm的粉紅色細(xì)菌進(jìn)行分類后而正式命名的, 在伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)第9版上還沒有收錄。該菌 多是從一些臨床病人標(biāo)本中分離獲得，如血、傷口、滲 出液、潰瘍、泌尿生殖道、腹膜透析液等, 80%的分 離病人多合并一些免疫低下疾病，如慢性白血病、 惡性腫瘤、腎衰、類風(fēng)濕等。因此許多學(xué)者普 遍認(rèn)為，該菌可能為條件致病菌，但臨床上確有因合 并該菌感染而致死的病例報(bào)道。我國目前還沒有關(guān)于這方面臨床病例的報(bào)道。近來，一些學(xué)者

2、又從飲 用水、淡水湖、土壤以及其他一些自然環(huán)境樣本中分離到了玫瑰單胞菌，而且多位學(xué)者對(duì)現(xiàn)有的分離株依據(jù)16S rRNA進(jìn)行了細(xì)致的分型,但是， 時(shí)至今日對(duì)于玫瑰單胞菌仍缺乏系統(tǒng)深入地研究。 該菌的病原學(xué)、檢測(cè)技術(shù)、致病機(jī)制以及諸多流行病學(xué)特征等到現(xiàn)在仍不清楚。目前，關(guān)于該菌的研究還主要停留在分類鑒定、生化特性及臨床病例報(bào)告等方 面，本文現(xiàn)對(duì)玫瑰單胞菌的國內(nèi)外研究現(xiàn)況作簡要介紹。1玫瑰單胞菌的分類1984年,Gilardi和Faur等發(fā)現(xiàn)了一些類似Methy- lobacterium（甲基桿菌）的粉紅色細(xì)菌，但是經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)與已有的菌種皆不相同，遂將這些粉紅色細(xì)菌定義 為一個(gè)未知的菌種20。199

3、3年,Rihs等人利用生化實(shí)驗(yàn)以及DNA雜交等手段，對(duì)42株粉紅色的革蘭氏陰性菌進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，正式命名了玫瑰單胞菌屬，并認(rèn)為該菌屬包括3個(gè)已命名的種(R.gilariii,Rcervicalii及R.yauriae)及3個(gè)未命名的基因種。近年來由于科技的進(jìn)步、生物化學(xué)的研究深入和遺傳學(xué)方面的研究進(jìn)展，基因雜交、基因測(cè)序技術(shù)的出現(xiàn)，使玫瑰單胞菌屬分類進(jìn)入一個(gè)嶄新的階段。隨著更多細(xì)菌的分離以及細(xì)菌分型技術(shù)的提高，目前認(rèn)為該類菌包括5個(gè)已命名的種R.gilardii（包括R.gilardii iubsp.gilardii 和R.gilardii subsp.rosea 兩個(gè)亞種) 、R.ce

4、rvi calis、R. fauriae、R. lacus 以及 R. mucosa。2玫瑰單胞菌的生物學(xué)特征玫瑰單胞菌對(duì)培養(yǎng)的要求不高，常用的細(xì)菌培養(yǎng) 基如肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培 養(yǎng)基等，玫瑰單胞菌均能生長,如在培養(yǎng)基中加入血 可以更加促進(jìn)其生長。大體上，玫瑰單胞菌在培 養(yǎng)2天后，可見如小米粒大小、圓形隆起、微凸出于培 養(yǎng)基，不向培養(yǎng)基內(nèi)生長，邊緣整齊，表面光滑濕潤呈 粉紅色、有光澤、黏液狀的菌落,34天菌落直徑達(dá)1 mm左右，散在分布。7天后直徑逐漸增大，菌落相互融合。該菌為革蘭氏染色陰性，球桿形，多數(shù)為成對(duì)和短鏈狀，在2537C生長，有些菌株在42C也 可以較好生長。

5、玫瑰單胞菌在透射電鏡下可見球桿形菌體，大小0.72m左右。Rihs、Han、Gal-ago 和 Jiang 等人分別對(duì)玫瑰單胞菌分離株理化特性進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)主要集中在研究玫瑰單胞菌產(chǎn)生各種酶的活性。綜合所有研究結(jié)果來看，目前該菌屬所有菌株都是氧化酶弱陽性（常在30 s后反應(yīng)） 或氧化酶陰性，觸酶和尿酶陽性。硝酸鹽還原、硫化氫產(chǎn)生、七葉靈水解、明膠液化、葡萄糖發(fā)酵、檸檬酸鹽利用、甘露醇發(fā)酵、不同鹽度(NaCl%)生長、最適宜 生長溫度等理化特性方面，各菌株略有不同。玫瑰單胞菌屬成員都能夠產(chǎn)生粉紅色色素，這一 點(diǎn)與甲基桿菌屬(Methylobacterium)相同，因此，在1993年Rihs等人

6、對(duì)玫瑰單胞菌屬正式分類命名之前，人們常把它們歸為甲基桿菌屬。但是兩菌屬在形 態(tài)上和生化特性上也是有差別的。玫瑰單胞菌無空泡、較豐滿、球形、多數(shù)為成對(duì)和短鏈狀。在改良的Thayer-Martin瓊脂和麥康凱瓊脂上37C生長，但在 沙氏瓊脂上生長最好。菌落呈黏液流動(dòng)狀。通過不氧化甲醇、不同化乙酰胺以及不吸收長波紫外光，可與甲基桿菌相鑒別。所有菌株都是氧化酶弱陽性（常 在30 s后反應(yīng)）或氧化酶陰性，觸酶和尿酶陽性。玫瑰單胞菌屬對(duì)氨基糖苷類、四環(huán)素和亞胺培南敏感。3玫瑰單胞菌的病原學(xué)情況關(guān)于玫瑰單胞菌的致病能力、致病機(jī)制等情況， 目前還不清楚。但是從能檢索到有分離來源的玫瑰單胞菌菌株來看，其中絕大多

7、數(shù)(78.5%)從臨床病人分離獲得，如血、傷口、滲出液、潰瘍、泌尿生殖道、連續(xù)移走性腹膜透析液和骨頭標(biāo)本等,其中來自血液樣本的占88%以上。更重要的是，80%的分離病人多合并一些免疫低下疾病，如慢性白血病、惡性腫瘤、腎衰、類風(fēng)濕。因此許多學(xué)者認(rèn)為，該菌能致使人體感染，可能為條件致病菌，而且臨床上確有因合并該菌感染而致死的病例報(bào)道。感染玫瑰單胞菌的病人主要臨床癥狀為發(fā)熱、白細(xì)胞增多，菌血癥等。病例報(bào)告者的年齡范圍從1月齡到91 歲不等，平均年齡為49.4歲，男女比例為3: 5較典型的臨床癥狀為敗血癥，占病人總數(shù)的34%。Struthers及 其同事在對(duì)分離到玫瑰單胞菌的35個(gè)患者的實(shí)驗(yàn)室、 臨床

8、和流行病資料的評(píng)價(jià)中，認(rèn)為玫瑰單胞菌對(duì)人可表現(xiàn)出低的致病潛力，但其中一些種，尤其是吉氏玫瑰單胞菌(R.gilardii),對(duì)于有潛在并發(fā)癥的患者來說是重要的病原菌。玫瑰單胞菌屬對(duì)氨基糖苷類、四 環(huán)素和亞胺培南敏感。然而,對(duì)于具有插管相關(guān)性感染的患者來說，除非移去感染的插管，否則難以消除細(xì)菌。邱爾臣等研究發(fā)現(xiàn)，該菌是一種潛在的病原體， 對(duì)小鼠具有致病能力，泌尿系統(tǒng)是實(shí)驗(yàn)菌株最早也是最主要攻擊的對(duì)象，實(shí)驗(yàn)小鼠的腎臟和膀胱的病變程度隨著時(shí)間的推移而逐漸加重。從腎臟及膀胱的病理改變情況看，類似于急性腎盂腎炎的表現(xiàn)。并且由于感染的持續(xù)存在，小鼠的膀胱粘膜萎縮變薄，移行上皮細(xì)胞層次減少，粘膜下間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量

9、增多，這些是間質(zhì)性膀胱炎的典型特征。間質(zhì)性病變也為癌 變提供了可能。致病性實(shí)驗(yàn)表明，分離株對(duì)BALB/c 小鼠具有致病能力，是一種新的病原體。其組織器官的病理改變由急性發(fā)展成為慢性，可能是病原體在機(jī) 體內(nèi)的長期存在所致。研究中發(fā)現(xiàn)小鼠病變與臨床病例報(bào)道較相同，提示其對(duì)人具有致病力，其致病機(jī)理有待進(jìn)一步研究。4玫瑰單胞菌的流行病學(xué)目前，盡管已經(jīng)從飲用水、淡水湖、土壤以及其他一些自然環(huán)境樣本中分離到了玫瑰單胞 菌，也有大量關(guān)于玫瑰單胞菌的臨床病例報(bào)道，但是 時(shí)至今日，該菌的自然宿主、媒介、傳播途徑等諸多流行病學(xué)特征仍不清楚。Shokar等在2002年報(bào)道了一病例，懷疑病人可能因蜘蛛叮咬而感染該菌，

10、但缺乏真實(shí)有力的證據(jù)。我們課題組在進(jìn)行自然性疾病現(xiàn)場調(diào)查時(shí),首次從蜱體內(nèi)分離到了玫瑰單胞菌，這提示蜱可能是該菌的自然媒介。我們不僅從一飽血的草原革蜱體內(nèi)分離獲得玫瑰單胞菌，將該蜱卵在實(shí)驗(yàn)室條件下孵化成幼蜱后,從幼蜱中又分離得到玫瑰單胞菌，經(jīng)16 S rDNA序列分析，兩者序列完全同源。 由于分離過程中，有效避免污染，因此，幼蜱體內(nèi)玫瑰單胞菌的分出，表明該菌可能經(jīng)蜱卵傳遞，進(jìn)一步提示蜱可能為該菌在自然環(huán)境中的傳播媒介。對(duì)此，有待于進(jìn)一步研究確認(rèn)。5玫瑰單胞菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)目前用于玫瑰單胞菌實(shí)驗(yàn)室診斷的方法主要有以下幾種。5.1病原學(xué)方法該方法對(duì)于感染性疾病的診斷最可靠、最直接，也是目前臨床上主要應(yīng)

11、用于感染玫瑰單胞菌的臨床患者的診斷方法。玫瑰單胞菌體外培養(yǎng)營養(yǎng)要求不高，但生長較緩慢，由于在培養(yǎng)基中加入血可以促進(jìn)玫瑰單胞菌的生長，所以如果臨床分離中選擇適合的培養(yǎng)基并加入5%的羊血，有利于該菌的分離。另外，由于感染玫瑰單胞菌的臨床病例十分少見，許多醫(yī)生對(duì)其缺乏認(rèn)識(shí)，尤其當(dāng)細(xì)菌為粉紅色, 形態(tài)為球桿形體時(shí),易與甲基桿菌相混淆。由于玫瑰單胞菌在伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)上還沒有收錄，目前細(xì)菌自動(dòng)鑒定分析儀器如API20NE等也沒有收錄該菌,鑒定也易與甲基桿菌相混淆。對(duì)此，要注意利用 玫瑰單胞菌的理化特性，如玫瑰單胞菌無空泡、較豐滿、球桿形、多數(shù)為成對(duì)和短鏈狀、菌落呈黏液流動(dòng) 狀。通過不氧化甲醇、不同化乙

12、酰胺以及不吸收長波紫外光等與甲基桿菌相鑒別。我們針對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，利用CHAB培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基，從發(fā)病動(dòng)物的血液、腎臟、膀胱及肝、脾等臟器中均可以分離出感染用的玫瑰單胞菌。5.2分子生物學(xué)方法與病原學(xué)方法相比，對(duì)于細(xì)菌的檢測(cè)，分子生物學(xué)方法具有敏感性高、快速等優(yōu)點(diǎn)， 但目前國內(nèi)外均沒有針對(duì)玫瑰單胞菌標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)試劑盒。對(duì)于可疑患者，臨床上主要從病人血、傷口 滲出液、潰瘍、泌尿生殖道、腹膜透析液、腦脊液等標(biāo)本中提取致病菌的核酸，選用細(xì)菌通用引物，經(jīng)PCR 擴(kuò)增其16 S rRNA基因，測(cè)序后通過采用BLAST SEARCH法進(jìn)行相似性檢索，與從GenBank和EMBL 等數(shù)據(jù)庫中搜集相關(guān)玫瑰單胞菌菌株所測(cè)定的16 S rDNA序列進(jìn)行比較，作出判斷。盡管診斷步驟較為繁瑣，但對(duì)于尚未分離到該病原