實(shí)驗三-不規(guī)則抗體ppt課件

1、實(shí)驗三 不規(guī)則抗體的篩選與鑒定,什么是不規(guī)則抗體,指血型以外的抗體，即抗和抗以外的抗體 . 也包括ABO亞型抗體，如抗A1、A2、A3等,不規(guī)則抗體有何臨床意義,引起各類免疫性輸血反應(yīng) 縮短輸入RBC的存活時間 新生兒溶血病,不規(guī)則抗體篩選方法有那些,鹽水介質(zhì)法 間接抗球蛋白試驗 低離子強(qiáng)度介質(zhì)聚凝胺法 酶技術(shù) 凝膠微柱法 再結(jié)吸收、放散等血清學(xué)手段，對抗 體的特異性作分析,一、不規(guī)則抗體篩選實(shí)驗 -鹽水法.凝聚胺法,實(shí)驗原理】 應(yīng)用特定的篩選細(xì)胞（1，2，3號），與被檢者血清在兩種介質(zhì)（鹽水，低離子介質(zhì)凝聚胺）中反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果判斷機(jī)體所產(chǎn)生的同種抗體類別,標(biāo)本、試劑與器材,1. 標(biāo)本 被

2、檢者不抗凝全血； 2. 試劑 符合國家標(biāo)準(zhǔn)的1、2、3號篩選譜細(xì)胞、0.9%氯化鈉、凝聚胺試劑盒 3. 器材 試管、滴管、記號 筆、離心機(jī)等,操作步驟,表 一 1 2 3 待撿血清 1滴 1滴 1滴 25% 1號篩選譜細(xì)胞 1滴 25% 2號篩選譜細(xì)胞 1滴 25% 3號篩選譜細(xì)胞 1滴 1. 鹽水法 按表一加樣后,1000g離心15s，輕輕搖動試管，肉眼觀察有無凝集結(jié)果，記錄結(jié)果. 2. 凝聚胺 按表一加樣后,依次加入低離子介質(zhì)溶液、凝聚胺溶液, 1000g離心15s，棄上清夜,搖動試管,看是否形成凝集(如沒有凝集形成需重做),加懸浮液,觀察凝集是否散開,記錄結(jié)果,結(jié)果判斷,1、2、3號篩選

3、譜細(xì)胞管出現(xiàn)4+凝集者為抗體篩選陽性結(jié)果,方法評價與注意事項,1. 被檢者自身血清加自身紅細(xì)胞管應(yīng)無凝集；若出現(xiàn)凝集則提示存在自身免疫性抗體； 2. 在鹽水、 低離子凝聚胺介質(zhì)中，1、2、3號篩選譜細(xì)胞只要有一個或一個以上管出現(xiàn)4+凝集，表示被檢者血清中存在不規(guī)則抗體，需進(jìn)一步鑒定抗體特異性； 3. 無凝集，表示被檢者血清中不存在不規(guī)則抗體。 4.低離子凝聚胺出現(xiàn)凝集，而鹽水介質(zhì)無凝集，則提示不規(guī)則抗體為IgG性質(zhì),二、不規(guī)則抗體鑒定試驗-凝膠微柱法,實(shí)驗原理】 對不規(guī)則同種抗體篩選試驗陽性的被檢者應(yīng)檢查其抗體特異性。根據(jù)譜細(xì)胞（1-10號共10個鑒定細(xì)胞）與被檢者血清在三種介質(zhì)（鹽水、酶、抗

4、人球蛋白）中反應(yīng)結(jié)果加以判定,標(biāo)本、試劑與器材,1. 標(biāo)本 被檢者不抗凝全血； 2. 試劑 符合國家標(biāo)準(zhǔn)的1-10號鑒定譜細(xì)胞、凝膠微柱卡； 3. 器材 臺式離心機(jī)、37水浴箱、血液細(xì)胞洗滌離心機(jī),譜細(xì)胞（Panel Cell,由812個人份的已知血型表現(xiàn)型的O型RBC配套組成 具有各種不同的抗原成分，分布各具特點(diǎn)，與抗體反應(yīng)出現(xiàn)不同的格局 能檢出常見抗體和稀有抗體 每種抗原在譜細(xì)胞上保持一定的陰陽比率 為了證實(shí)單價抗體，使用的 相應(yīng)抗原RBC應(yīng)為1 個以上,操作步驟,1.向凝膠卡內(nèi)依次加0.8-1% 110號鑒定譜細(xì)胞50ul, 2.每孔加被檢者血清25ul, 3.37溫15min, 4.專用離心機(jī)離心10min,觀察結(jié)果,結(jié)果判斷,方法評價與注意事項,1. 被檢者自身血清加自身紅細(xì)胞管應(yīng)無凝集；若出現(xiàn)凝集則提示存在自身免疫性抗體； 2. 4+凝集為陽性結(jié)果，表示待檢血清中有不規(guī)則抗體，結(jié)合譜紅細(xì)胞反應(yīng)格局，