微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)10 放線菌酵母菌和霉菌的形態(tài)觀察

1、南京大學(xué)生物技術(shù)系實(shí)驗(yàn)報(bào)告 放線菌、酵母菌和霉菌的形態(tài)觀察 題目 日姓 名 月 年 【一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?1、通過(guò)菌落及細(xì)胞形態(tài)的觀察和比較，掌握區(qū)分細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌的要點(diǎn)。 2、掌握觀察放線菌孢子的方法。 3、掌握觀察霉菌孢子及根霉假根的方法。 4、了解酵母菌子囊孢子形成的方法。 【二、實(shí)驗(yàn)原理】 1、三類微生物菌落形態(tài)特征： 霉菌形態(tài)比細(xì)菌、酵母菌復(fù)雜，個(gè)體比較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。霉菌營(yíng)養(yǎng)體的基本形態(tài)單位是菌絲，包括有隔菌絲和無(wú)隔菌絲。營(yíng)養(yǎng)菌絲分布在營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)的內(nèi)部，氣生菌絲伸展到空氣中。營(yíng)養(yǎng)菌絲體除基本結(jié)構(gòu)以外，有的霉菌還有一些特化形態(tài)，例如假根、匍匐菌絲、吸器等。

2、霉菌的繁殖體不僅包括無(wú)性繁殖體，例如分生孢子，孢子囊等，包裹其內(nèi)或附著其上的有各類無(wú)性孢子；還包括有性繁殖結(jié)構(gòu)，例如子囊果，其內(nèi)形成有性孢子。在觀察時(shí)要注意細(xì)胞的大小，菌絲構(gòu)造和繁殖方式。 放線菌一般由分枝狀菌絲組成，它的菌絲可分為基內(nèi)菌絲(營(yíng)養(yǎng)菌絲)、氣生菌絲或有孢子絲三種。放線菌生長(zhǎng)到一定階段，大部分氣生菌絲分化成孢子絲，通過(guò)橫割分列的方式產(chǎn)生成串的分生孢子。孢子絲形態(tài)多樣，有直、波曲、鉤狀、螺旋狀、輪生等多種形態(tài)。孢子也有球形、橢圓形、桿狀和瓜子狀等等。它們的形態(tài)構(gòu)造都是放線菌分類鑒定的重要依據(jù)。 酵母菌是單細(xì)胞的真核微生物，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)有明且分化，個(gè)體比細(xì)菌大得多。酵母菌的形態(tài)通常有

3、球狀、卵園狀、橢圓狀、柱狀或香腸狀等多種。酵母菌的無(wú)性繁殖有芽殖、裂殖和產(chǎn)生擲孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母細(xì)胞在一系列的芽殖后，如果長(zhǎng)大的子細(xì)胞與母細(xì)胞并不分離，就會(huì)形成藕節(jié)狀的假菌絲。 2、三點(diǎn)接種法與霉菌菌落形態(tài)的觀察 霉菌的菌落形態(tài)是分類鑒定的重要依據(jù)。為便于觀察，通常用接種針挑 頁(yè)9 共 頁(yè)1 第取極少量霉菌孢子點(diǎn)接于平板中央，使其形成單個(gè)菌落；或在平板上接三點(diǎn)，即在等邊三角形的三個(gè)頂點(diǎn)上接種，經(jīng)培養(yǎng)后同一菌種可形成三個(gè)重復(fù)的單菌落。后一方法稱為三點(diǎn)接種法。其優(yōu)點(diǎn)不僅可同時(shí)獲得三個(gè)重復(fù)菌落，還由于在三個(gè)彼此相鄰的菌落間會(huì)形成一個(gè)菌絲生長(zhǎng)較稀疏且較透明的狹窄區(qū)域，在

4、該區(qū)域內(nèi)的氣生菌絲僅分化出數(shù)子實(shí)器官，因此直接將培炎皿放低倍鏡下就可觀察到子實(shí)體的形態(tài)特征，從而省略了制片的麻煩，并避免了由于制片而破壞子實(shí)體自然著生狀態(tài)的弊端。 3、微培養(yǎng) 微培養(yǎng)是研究絲狀真菌、放線菌等微生物生長(zhǎng)繁殖全過(guò)程的有效方法。其基本原理是將絲狀菌的孢子（或菌體）接種在載玻片的小塊薄層培養(yǎng)基上，并蓋上蓋玻片，且輕壓上，使接種后的瓊脂塊成薄圓片狀，造成一個(gè)讓微生物僅能在載玻片和蓋玻片的狹窄空間內(nèi)橫向伸展的生鏡，因而在培養(yǎng)過(guò)程中，可隨時(shí)用顯微鏡觀察孢子的萌發(fā)，菌絲的生長(zhǎng)及孢子的形成等各階段，亦不會(huì)因觀察而造成培養(yǎng)標(biāo)本片的污染。用此法制備的鏡檢標(biāo)本其視野清晰，形態(tài)逼真，是顯微鏡攝影之好材料

5、。 4、插片法培養(yǎng)放線菌 放線菌是抗生素的最重要產(chǎn)生菌，其形態(tài)特征是軍中選育和分類的重要依據(jù)。插片法原理是：在接種過(guò)放線菌的瓊脂平板上，由于插上蓋玻片或在平板上開(kāi)槽后再搭上蓋玻片，使放線菌的菌絲體沿著培養(yǎng)給予蓋玻片的交界線上生長(zhǎng)，蔓延，從而附著在蓋玻片上。待培養(yǎng)物成熟輕輕取出蓋玻片，就能獲得放線菌在自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的標(biāo)本。若將其置于載玻片上即可鏡檢觀察到放下面的個(gè)體形態(tài)特征。 5、蓋片法培養(yǎng)熱假絲酵母 假絲酵母是以菌體細(xì)胞接種，因菌體細(xì)胞較濕粘而不易分散，應(yīng)先加培養(yǎng)基，使凝固后再將菌體接種到表面，然后蓋上蓋玻片。 【三、實(shí)驗(yàn)材料、主要儀器和試劑】 1、材料(菌種)：黑根霉、產(chǎn)黃青霉、曲霉、放線菌

6、(鏈霉菌)、熱帶假絲酵母菌各培養(yǎng)物，PDA培養(yǎng)基，高氏一號(hào)培養(yǎng)基 2、試劑：乳酚油溶液、美藍(lán)染液 3、儀器：接種環(huán)(1)、酒精燈(1)、載玻片(5)、光學(xué)顯微鏡(1) 頁(yè)9 共 頁(yè)2 第 【四、操作步驟】 1、放線菌的形態(tài)觀察 （1）肉眼觀察 取放線菌的平皿培養(yǎng)物，仔細(xì)觀察菌落(即孢子堆)的顏色，基內(nèi)菌絲(即菌落反面)的顏色，可溶性色素(即滲入培養(yǎng)基內(nèi)的)的顏色，菌落表面的形狀(崎嶇、褶皺或平滑，有無(wú)同心環(huán))菌落的大小，最后用接種耳去觸試菌落的硬度。 把你觀察的結(jié)果記錄下來(lái)。 （2）顯微鏡觀察 觀察孢子絲(插片法)。 將放線菌接種到含葡萄糖天門(mén)冬素培養(yǎng)基的平皿中，用刮刀均勻。用插片法把無(wú)菌蓋玻

7、片斜插在瓊脂內(nèi)。置于28溫度箱內(nèi)培養(yǎng)710天。取出插片法的載玻片，在高倍鏡下觀察，注意孢子絲的形狀(直形、波曲形或螺旋形)、是否輪生。 觀察孢子(印片法) 用一片蓋玻片在鏈霉菌菌落表面輕輕按一下，即成印片。在載玻片上放一滴美藍(lán)染液。將印孢子的蓋玻片直接放在美藍(lán)液上，使孢子著色，用吸水紙吸取多余的染液。用油境觀察孢子的形狀。 記錄觀察到的孢子絲及孢子的各種性狀。 2、酵母菌的形態(tài)觀察 （1）肉眼觀察 取酵母的平皿培養(yǎng)物及斜面培養(yǎng)物，仔細(xì)觀察菌落的顏色、透明度、隆起情況、大小。 記錄你所觀察到的結(jié)果，與細(xì)菌菌落加以比較。 （2）顯微鏡觀察 取清潔載玻片一塊，滴上一滴生理鹽水。用接種耳取酵母斜面培養(yǎng)

8、物少許，放在水中輕輕和勻。蓋上清潔蓋玻片一塊，注意不要產(chǎn)生氣泡。置于低倍鏡、高倍鏡下觀察，注意細(xì)胞的形態(tài)、大小、有無(wú)芽體。繪細(xì)胞圖。 有些酵母菌能形成假菌絲，取下上述蓋玻片，在清潔的載玻片上滴一滴生理鹽水，蓋上上述蓋玻片，把帶菌的一面貼在載玻片上，高倍鏡下觀察是 頁(yè)9 共 頁(yè)3 第否形成假菌絲。 3、霉菌的形態(tài)觀察 （1）肉眼觀察 取根霉、產(chǎn)黃青霉、曲霉的培養(yǎng)物各一皿，仔細(xì)觀察菌落的顏色、質(zhì)地，用接種耳觸其堅(jiān)度，與放線菌菌落加以比較。記錄觀察結(jié)果。 （2）顯微鏡觀察 在載玻片中央滴一滴乳酸油。用尖頭鑷子從根霉菌菌落邊緣取出一小塊很薄的帶菌絲的培養(yǎng)基，放在載玻片上的乳酚油中。加蓋玻片用低倍鏡、高

9、倍鏡觀察。用同樣方法觀察產(chǎn)黃青霉、曲霉。分別繪出三種霉菌的結(jié)構(gòu)圖。 根霉假根的觀察：菌絲經(jīng)培養(yǎng)已倒掛成須狀， 不少菌絲已接觸到載玻片，并分化出假根。取出載玻片，在菌絲上滴一滴乳酚油，蓋上蓋玻片后，在顯微鏡下能觀察到清晰的假根與葡萄菌絲。 4、清理器皿、實(shí)驗(yàn)桌面。 【五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果】 1、三類菌的基本菌落形態(tài)觀察 辨別要點(diǎn) 菌落描述 顏色干 菌 濕 透 菌名隆起邊 類明 表面反厚大松大 形狀緣 正面度 面密薄 小 小 略熱假酵乳乳白低凸整透光滑、濕潤(rùn)、粘稠 厚母絲酵 大 白 色起齊 菌 明母 色 粉末狀或顆粒狀,同放不白凹鏈霉致心圓放射狀,交錯(cuò)纏 扁平白色 透小 線 陷菌 色低產(chǎn)淺圓青綠黑細(xì)顆粒黑

10、細(xì)顆粒、絮根黑、三類菌的基本細(xì)胞形態(tài)觀 菌菌形狀 菌絲 隔假根 匍孢子器 孢子 頁(yè)9 共 頁(yè)4 第 匐膜 名 類菌 絲 熱卵圓、假酵子圓形, 絲 母 代相連酵菌 成鏈狀 母呈圓形、橢圓伸入培有, 圓柱鏈形、桿狀、)孢子絲放桿形、養(yǎng)基(淺、亮分支狀梭線或向上生長(zhǎng)狀、瓜子狀、波浪形、螺旋 霉 菌絲狀和半月?tīng)畹?，?形等伸向空中(較 菌 形態(tài)各異顏色、深、粗) 頂端孢子梗無(wú)頂,產(chǎn)不膨大從菌絲體,囊黃 有 有 ,直立上產(chǎn)生,青梗的先端分枝 霉 呈掃帚狀數(shù)次,頂端孢子梗呈綠、,黑球形,膨大成為頂囊霉黃、橙、褐、 曲 有有 一般呈不分枝 菌,黑等色 霉 球形弧菌絲伸,入培養(yǎng)形褐色孢子囊水基內(nèi)呈根 長(zhǎng)管狀

11、白色黑色無(wú) 或黑色, 表面光平 霉分枝狀 滑生生長(zhǎng),顏 色略深 長(zhǎng)) P30數(shù)碼相機(jī)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中拍攝、圖片3(除示意圖外，插圖均為用三星 頁(yè)9 共 頁(yè)5 第 酵母菌細(xì)胞 酵母菌菌落 放線菌菌落 酵母菌示意圖 放線菌示意圖 放線菌細(xì)胞 產(chǎn)黃青霉菌落 產(chǎn)黃青霉細(xì)胞 頁(yè)9 共 頁(yè)6 第 黑曲霉培養(yǎng)皿 產(chǎn)黃青霉示意圖 黑曲霉細(xì)胞 黑曲霉示意圖 根霉培養(yǎng)皿 根霉細(xì)胞 根霉示意圖 頁(yè)9 共 頁(yè)7 第4、鏡檢 （1）蓋片法培養(yǎng)酵母菌 在10倍鏡下觀察時(shí)，視野中的酵母如同長(zhǎng)葉子的枝條狀。后用40倍鏡觀察。 可以清晰地看到酵母菌的枝條實(shí)際上是一個(gè)個(gè)分省的出芽細(xì)胞，像菌絲但實(shí)際不是菌絲，故得名假菌絲。從菌落中挑取

12、一點(diǎn)于一滴蒸餾水中，繼續(xù)觀察，可以看到正在出芽生殖的酵母菌。其中有的正在分裂，有的已經(jīng)分裂。 （2）插片法培養(yǎng)放線菌 放線菌呈細(xì)長(zhǎng)線狀，分布很密，交錯(cuò)縱橫。中間的腔呈透明。40倍鏡下觀察結(jié)構(gòu)，由于使用美藍(lán)，所以視野中呈藍(lán)色。仔細(xì)觀察可以發(fā)現(xiàn)：放線菌長(zhǎng)有基內(nèi)根，在培養(yǎng)基中；培養(yǎng)基上不是氣生根，從氣生根又分出許多孢子絲，呈節(jié)狀，一節(jié)為一個(gè)孢子；孢子絲頂端一般會(huì)盤(pán)旋呈螺旋狀；同時(shí)還有些散落的孢子。故孢子絲并不牢固，其中的孢子很容易就掉下來(lái)。 （3）三點(diǎn)接種 產(chǎn)黃青霉： 顯微鏡產(chǎn)黃青霉為草綠色，40倍鏡下形狀類似掃帚，分生孢子像糖葫蘆長(zhǎng)在頂端易脫落，故視野中有大量散落的孢子。 黑曲霉： 在顯微鏡下觀察

13、到黑色的菌絲。若制片是挑得太少，則會(huì)破壞其結(jié)構(gòu)只觀察到孢子鏈，因此挑取一塊，其有厚度，可放在10倍鏡下觀察，逐漸改變焦距可分別清晰地觀察到各層次的結(jié)構(gòu)。有的具有初生小柄，有的不具有。 黑霉菌： 在顯微鏡下可以觀察到棕色的根霉菌絲，其中的孢子束柄為中空的，由匍匐霉菌絲，并觀察到假根。有的孢子囊已被其中凝固的孢子散落在周圍。 （4）微培養(yǎng) 我們組微培養(yǎng)用的材料是曲霉，由于培養(yǎng)基加的較少，水也較少，所以沒(méi)有觀察到生長(zhǎng)。用其它組培養(yǎng)的根霉載片觀察形態(tài)同上面的根霉。 【六、實(shí)驗(yàn)討論】 1、該實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)有以下一些： （1）三點(diǎn)接種對(duì)有幾點(diǎn)要注意：接種時(shí)應(yīng)使平板盡量垂直于桌面，以防接種 頁(yè)9 共 頁(yè)8 第針上的孢子散落到平板的其它區(qū)域或空氣中的微生物落到培養(yǎng)基上引起污染；接種時(shí)針要垂直于平板，輕點(diǎn)一下即可，切勿刺破培養(yǎng)基；產(chǎn)黃青霉和曲霉要注意其分生孢子穗結(jié)構(gòu)、黑根霉注意孢囊和孢子以及假根和匍匐菌絲結(jié)構(gòu)。 （2）在微培養(yǎng)時(shí)，由于我們組的培養(yǎng)基加的較少，且水也較少，所以沒(méi)有看到曲霉的生長(zhǎng)。故在微培養(yǎng)時(shí)，要加入適量培養(yǎng)基和水，接種菌量宜少，同時(shí)，蓋片和載片間的空間宜窄，但不可無(wú)縫隙，盡量使微生物能在狹窄空間里水平生長(zhǎng)，利于觀察。 （3）放線菌的生長(zhǎng)速度較慢，培養(yǎng)其較長(zhǎng)，在操作中應(yīng)特別注意無(wú)菌操作，嚴(yán)防雜菌污染。 （4）若酵母生長(zhǎng)旺盛，形成密集的一片難以觀察，應(yīng)