分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題(答案完善

1、答案完善版本，不要太愛我，我只是神一般的女子！第二章一、填空題1、由 DNA 和 組蛋白 組成的染色質(zhì)纖維細(xì)絲是許多核小體連成的念珠狀結(jié)構(gòu)。P302、 核小體的形成 是染色體中DNA壓縮的第一階段。P323、DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)分兩大類：一類是 右手螺旋，另一類是 左手螺旋。P374、如果DNA聚合酶把一個(gè)不正確的核苷酸加到3末端，一個(gè)含有3 5活性的獨(dú)立催化區(qū)會(huì)將這個(gè)錯(cuò)配堿基切去。這個(gè)催化區(qū)成為 校正核酸外切酶 。5、 原核生物中有三種起始因子分別是 IF-1 、 IF2 和 IF-3 。P1376、 由于新合成的DNA分子中，都保留了原DNA的一條鏈因此叫半保留復(fù)制 p437、 復(fù)制時(shí)，雙鏈D

2、NA要解開成兩股鏈分別進(jìn)行，所以，這個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)呈現(xiàn)叉子的形式，被稱為復(fù)制叉.p438、 為了解釋DNA的等速?gòu)?fù)制現(xiàn)象，日本學(xué)者岡崎（okazaki）等提出了DNA的半不連續(xù)復(fù)制.p469、 兩條鏈均按5到3方向合成,一條鏈3末端的方向朝著復(fù)制叉前進(jìn)的方向,可連續(xù)合成,稱前導(dǎo)鏈。P4610、 環(huán)狀DNA雙鏈的復(fù)制可分為型、滾環(huán)形 和 D型 幾種類型.p4711、 真核細(xì)胞的DNA聚合酶和細(xì)菌DNA聚合酶基本性質(zhì)相同，均以_dNTP_為底物，需要_Mg2+_激活，聚合時(shí)必須有 _模板鏈 和_3-OH末端_的引物鏈，鏈的延伸方向?yàn)?3. (55頁) 12、 DNA聚合酶的的功能主要是 引物合成,即

3、能起始前導(dǎo)鏈和后導(dǎo)鏈的合成.（P55）13、 DNA復(fù)制的調(diào)控主要發(fā)生在 起始階段_ ,一旦開始復(fù)制,如果沒有意外的阻力,就可以一直復(fù)制下去直到完成.(P56)14、 質(zhì)粒DNA編碼兩個(gè)負(fù)調(diào)控因子_Rop蛋白_和反義RNA(RNA1),它們控制了起始DNA復(fù)制所必須的_引物合成_。(P56)15、 染色體的復(fù)制與_細(xì)胞分裂_一般是同步的，但復(fù)制與_細(xì)胞分裂_不直接偶聯(lián)。(P56)16、 轉(zhuǎn)座子分為兩大類:插入序列和復(fù)合型轉(zhuǎn)座子。（書P62）17、 轉(zhuǎn)座子存在于原核細(xì)胞和真核細(xì)胞內(nèi)。（書P63）18、 玉米細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)座子歸納為兩大類：自主性轉(zhuǎn)座子和非自主性轉(zhuǎn)座子。（書P64）19、 轉(zhuǎn)座作用可被

4、分為復(fù)制型和非復(fù)制型兩大類。（書P65）20、 插入序列是最簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)座子，它不含有任何宿主基因。（書P62）21、 SOS反應(yīng)廣泛存在于原核和真核生物中，主要包括兩個(gè)方面：DNA的修復(fù)；產(chǎn)生變異。P622、 名詞解釋C值反?，F(xiàn)象：指C值往往與種系進(jìn)化的復(fù)雜程度不一致，某些低等生物卻有較大的C值p29端粒：是真核生物線性基因組DNA末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，它是一段DNA序列和蛋白質(zhì)形成的復(fù)合體.p33DNA變性與復(fù)性：當(dāng)DNA溶液溫度接近沸點(diǎn)或者pH較高時(shí)，互補(bǔ)的兩條鏈就可能分開，稱為DNA的變性：但DNA雙鏈的這種變性過程是可逆的，當(dāng)變性DNA的溶液緩慢降溫時(shí)，DNA的互補(bǔ)鏈又可重新聚合，重新形成

5、規(guī)則的雙螺旋。p40增色效應(yīng)：當(dāng)DNA溶液溫度升高到接近水的沸點(diǎn)時(shí)，260nm的吸光度明顯增加。p40復(fù)制子：一般把生物體內(nèi)能獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制的單位稱為復(fù)制子。p43復(fù)制起始點(diǎn)：復(fù)制子中控制復(fù)制起始的位點(diǎn)稱為復(fù)制起始點(diǎn)。p43染色體水平調(diào)控：決定不同染色體或同一染色體不同部位的復(fù)制子按一定順序在S期起始復(fù)制。P57DNA聚合酶:是一種天然產(chǎn)生的能催化DNA（包括RNA）的合成和修復(fù)的生物大分子。P53、P177AP位點(diǎn)：所有細(xì)胞中都帶有不同類型、能識(shí)別受損核酸位點(diǎn)的糖苷水解酶，它能特異性切除受損核苷酸上的N-糖苷鍵，在DNA鏈上形成去嘌呤或去嘧啶位點(diǎn)，統(tǒng)稱為AP位點(diǎn)。p59轉(zhuǎn)座子：存在于染色體DN

6、A上可自主復(fù)制和位移的基本單位（P62）復(fù)合型轉(zhuǎn)座子：是一類帶有某些抗藥性基因（或其他宿主基因）的轉(zhuǎn)座子，其兩翼往往是兩個(gè)相同或高度同源的IS，表明IS插入到某個(gè)功能基因兩端時(shí)就可能產(chǎn)生復(fù)合型轉(zhuǎn)座子。(P62)SNP：即單核苷酸多態(tài)性，指基因組DNA序列中由于單個(gè)核苷酸（A、T、C和G）的突變而引起的多態(tài)性。p66三、簡(jiǎn)答題1. 染色體具備哪些作為遺傳物質(zhì)的特征？答：分子結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定能夠自我復(fù)制，使親子代之間保持連續(xù)性能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成，從而控制整個(gè)生命過程能夠產(chǎn)生可遺傳的變異P252. 什么是核小體？簡(jiǎn)述其形成過程：P31-P32答：核小體是染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位，由200bpDNA和組蛋白八

7、聚體組成。形成過程：核小體是由H2A、H2B、H3、H4各兩個(gè)分子生成的八聚體和由大約200bp的DNA組成的。形成核小體時(shí)八聚體在中間，DNA分子盤繞在外組成真核細(xì)胞染色體的一種重復(fù)珠狀結(jié)構(gòu)。3. 簡(jiǎn)述組蛋白都有哪些類型的修飾，其功能分別是什么？答：類型：甲基化、乙?；⒘姿峄?、泛素化及ADP核糖基化。功能：1.甲基化：不同程度的甲基化極大地增加了組蛋白修飾和調(diào)節(jié)基因表達(dá)的復(fù)雜性，組蛋白的甲基化與基因激活和與基因沉默相關(guān)，與其他相比其修飾較為穩(wěn)定。2. 乙?；阂阴；揎椨绊懭旧|(zhì)結(jié)構(gòu)和基因活化，高乙?；綍?huì)使轉(zhuǎn)錄活化；低乙?；瘎t抑制轉(zhuǎn)錄，組蛋白的乙?；腿ヒ阴；揎椷€參與DNA修復(fù)、拼接

8、、復(fù)制，染色體的組裝，以及細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，與疾病的形成密切相關(guān)。P284. 簡(jiǎn)述DNA的一、二、三級(jí)結(jié)構(gòu)：答：1，DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)，就是指4種核苷酸的連接及排列順序，表示了該DNA分子的化學(xué)成分；2，DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)是指兩條多核苷酸鏈反向平行盤繞所形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)；3，DNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)是指DNA雙螺旋進(jìn)一步扭曲盤繞所形成的更復(fù)雜的特定空間結(jié)構(gòu)。p35-p415. DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型是有誰提出的？簡(jiǎn)述其發(fā)現(xiàn)的主要實(shí)驗(yàn)依據(jù)及其在分子生物學(xué)發(fā)展中的重要意義。P35P37答：由Waston和Crick提出。意義：為合理地解釋遺傳物質(zhì)的各種功能，解釋生物的遺傳和變異，解釋自然界千變?nèi)f化的生命現(xiàn)象奠定了

9、理論基礎(chǔ)。6. 解釋在DNA復(fù)制過程中，后隨鏈?zhǔn)窃鯓雍铣傻?。P46 答：后隨鏈在合成過程中，一段親本DNA單鏈?zhǔn)紫缺┞冻鰜?，然后以與復(fù)制叉移動(dòng)相反的方向按照53方向合成一系列的岡崎片段，然后再把它們連成完整的后隨鏈。7. 簡(jiǎn)述DNA復(fù)制的調(diào)控P56答：原核細(xì)胞DNA的復(fù)制調(diào)控：細(xì)胞復(fù)制叉的多少?zèng)Q定了復(fù)制起始頻率的高低，DNA復(fù)制的調(diào)控主要發(fā)生在起始階段，一旦開始復(fù)制，如沒有意外阻力就可以一直復(fù)制下去直到完成。真核細(xì)胞的DNA的復(fù)制調(diào)控：分為3個(gè)水平：1.細(xì)胞生活周期水平調(diào)控，即限制點(diǎn)調(diào)控，決定細(xì)胞停留在G1期還是進(jìn)入S期。2.染色體水平調(diào)控：決定不同染色體或同一染色體不同部位的復(fù)制子按一定順序

10、在S期起始復(fù)制。3.復(fù)制子水平調(diào)控：決定復(fù)制的起始與否。8. 真核生物DNA的特點(diǎn)P54答：1.基因組龐大；2.存在大量重復(fù)序列；3.大部分為非編碼序列；4.轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子；5.基因是斷裂基因，有內(nèi)含子結(jié)構(gòu)；6.存在大量的順式作用元件；7.存在大量的DNA多態(tài)性；8.具有端粒結(jié)構(gòu)。9.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？P50-p54答：1。結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)練：原核DNA分子的絕大部分是用來編碼蛋白質(zhì)，只有非常小的一部分不轉(zhuǎn)錄，這與真核DNA的冗余現(xiàn)象不同。2,存在轉(zhuǎn)錄單元：原核生物DNA序列中功能相關(guān)的RNA和蛋白質(zhì)基因，往往叢集在基因組的一個(gè)或幾個(gè)特定部位，形成功能單元或轉(zhuǎn)錄單元，

11、它們可被一起轉(zhuǎn)錄為含多個(gè)mRNA的分子，稱為多順反子mRNA。3,有重疊基因：重疊基因，即同一段DNA能攜帶兩種不同蛋白質(zhì)信息。主要有以下幾種情況一個(gè)基因完全在另一個(gè)基因里面；部分重疊；兩個(gè)基因只有一個(gè)堿基對(duì)是重疊的。10.大腸桿菌中的DNA修復(fù)系統(tǒng)及其功能？p57答：1.錯(cuò)配修復(fù)：恢復(fù)錯(cuò)配；2.切除修復(fù)：切除突變的堿基和核苷酸片段；3.重組修復(fù)：復(fù)制后的修復(fù)，重新啟動(dòng)停滯的復(fù)制叉；4.DNA直接修復(fù)：修復(fù)嘧啶二體或甲基化DNA；5.SOS系統(tǒng)：DNA的修復(fù)，導(dǎo)致變異。11.轉(zhuǎn)座子的類型：(P65)答：1）插入序列（IS）：最簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)座子，不含任何宿主基因。2） 復(fù)合型轉(zhuǎn)座子：是一類帶有某些抗

12、藥性基因（或其他宿主基因）的轉(zhuǎn)座子，其兩翼往往是兩個(gè)相同或高度同源的IS，表明IS插入到某個(gè)功能基因兩端時(shí)就可能產(chǎn)生復(fù)合型轉(zhuǎn)座子。12.轉(zhuǎn)座子的遺傳效應(yīng)：(P65)答：1）轉(zhuǎn)座引起插入突變，導(dǎo)致結(jié)構(gòu)基因失活。 2）出現(xiàn)新的基因 ；3）染色體畸變；4）引起生物進(jìn)化四、論述題1.談?wù)勗趶?fù)制型轉(zhuǎn)座過程中，轉(zhuǎn)座和切離的關(guān)系。P65答：在復(fù)制轉(zhuǎn)座過程中，轉(zhuǎn)座和切離是兩個(gè)獨(dú)立事件。先是由轉(zhuǎn)座酶分別切割轉(zhuǎn)座子的供體和受體DNA分子。轉(zhuǎn)座子的末端與受體DNA分子連接，并將轉(zhuǎn)座子復(fù)制一份拷貝，由此生成的中間體即共整合體（cointegrat，）有轉(zhuǎn)座子的兩份拷貝。然后在轉(zhuǎn)座子的兩份拷貝間發(fā)生類似同源重組的反應(yīng)，

13、在解離酶的作用下，供體分子同受體分子分開，并且各帶一份轉(zhuǎn)座子拷貝。同時(shí)受體分子的靶位點(diǎn)序列也重復(fù)了一份拷貝。2.為什么說DNA的復(fù)制是半保留半不連續(xù)復(fù)制？P46答：半不連續(xù)復(fù)制是由于DNA雙螺旋的兩股單鏈?zhǔn)欠聪蚱叫?，一條鏈的走向?yàn)?-3,另一條鏈為3-5,DNA的兩條鏈都能作為模板以邊解鏈邊復(fù)制方式，同時(shí)合成兩條新的互補(bǔ)鏈。但是，所有已知DNA聚合酶的合成方向都是5-3，所以在復(fù)制是，一條鏈的合成方向和復(fù)制叉前進(jìn)方向相同，可以連續(xù)復(fù)制，稱為前導(dǎo)鏈；另一條鏈的合成方向與復(fù)制叉前進(jìn)方向相反，按5-3方向生成一系列岡崎片段，然后它們連接完整的鏈，這條鏈稱隨后鏈。因此就把前導(dǎo)鏈連續(xù)復(fù)制，后隨鏈不連續(xù)復(fù)

14、制的復(fù)制方式稱為半不連續(xù)復(fù)制。3. 原核生物和真核生物DNA復(fù)制的異同點(diǎn)(50-51)答：同：均遵從互補(bǔ)配對(duì)原則。異：真核生物每條染色質(zhì)上可以有多處復(fù)制起點(diǎn)，而原核生物只有一個(gè)起始點(diǎn)；真核生物的染色體在全部完成復(fù)制之前，各個(gè)起始點(diǎn)上DNA的復(fù)制不能再開始，而在快速生長(zhǎng)的原核生物中，復(fù)制起始點(diǎn)上連續(xù)開始新的DNA復(fù)制，表現(xiàn)為雖只有一個(gè)復(fù)制單元，但可有多個(gè)復(fù)制叉。第三章一、填空題1、 轉(zhuǎn)錄的基本過程包括：模板的識(shí)別、轉(zhuǎn)錄起始、通過啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄的延伸和終止 p742、 大腸桿菌RNA聚合酶與啟動(dòng)子的相互作用主要包括啟動(dòng)子區(qū)的識(shí)別、酶與啟動(dòng)子的結(jié)合以及因子的結(jié)合與解離。P853、 核酶分可分為剪切型核

15、酶和剪接型核酶兩大類。P1124、 RNA編輯具有重要的生物學(xué)意義，其中包括校正作用、調(diào)控翻譯和擴(kuò)充遺傳信息。P1095、 基因轉(zhuǎn)錄實(shí)際上是RNA聚合酶、轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和 啟動(dòng)子區(qū) 各種調(diào)控元件相互作用的結(jié)果。6、.基因表達(dá)包括_ 轉(zhuǎn)錄_和_翻譯_兩個(gè)階段。P727、.大腸桿菌RNA聚合酶與啟動(dòng)子的相互作用主要包括_啟動(dòng)子區(qū)的識(shí)別_，_酶與啟動(dòng)子的結(jié)合_和_因子的結(jié)合與解離_p858、RNA剪接主要有_pre-mRNA剪接_,_類自剪接內(nèi)含子_和_類自剪接內(nèi)含子 p1009、tRNA的3個(gè)加工過程 內(nèi)含子的剪接，3端添加CCA 和 核苷酸的修飾 p10010、.RNA編輯的生物學(xué)意義 校正作用，

16、調(diào)控翻譯和擴(kuò)充遺傳信息 p10911、tRNA的種類有 起始tRNA、 延伸tRNA、 同工tRNA、 校正tRNA P12712、一般把生物體內(nèi)能獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制的單位稱為 復(fù)制子。P4313、核糖體 是指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的大分子機(jī)器。P12814、RNA既可作為 信息 分子又能作為 功能 分子發(fā)揮作用。P7415、PCR的基本反應(yīng)過程包括：變性、退火、鏈的延伸 三個(gè)階段。P17816. RNA含有核糖和嘧啶，通常是_單鏈線性_分子(P73)17.RNA既可作為信息分子又能作為 _功能_分子發(fā)揮作用。（P74)18.RNA轉(zhuǎn)錄的基本過程包括模板識(shí)別，轉(zhuǎn)錄起始、_通過啟動(dòng)子_和_轉(zhuǎn)錄的延伸和終止_（P

17、74-P78）19.啟動(dòng)子是基因轉(zhuǎn)錄起始所必需的一段DNA序列，是基因表達(dá)調(diào)控的 上游順式作用元件_之一(P74)20.大腸桿菌RNA聚合酶與啟動(dòng)子的相互作用主要包括啟動(dòng)子區(qū)的識(shí)別_酶與啟動(dòng)子的結(jié)合_和因子的結(jié)合與解離_p8521：RNA既可作為信息分子又能作為（功能分子）發(fā)揮作用。P7422：（RNA聚合酶）是轉(zhuǎn)錄過程中最關(guān)鍵的酶。P8123：RNA轉(zhuǎn)錄的抑制劑根據(jù)其作用性質(zhì)的主要可分為兩大類，（DNA模板功能抑制劑）和（RNA聚合酶的抑制物）。P9224：根據(jù)（中心法則），DNA、RNA和蛋白質(zhì)之間存在著直接的線性關(guān)系。P10825：生物體內(nèi)主要有3種RNA：（mRNA、tRNA、rRNA

18、）。P7426、真核細(xì)胞都有明顯的核結(jié)構(gòu)，除了（ 性細(xì)胞 ）以外，真核細(xì)胞的染色體都是二倍體，而性細(xì)胞即生殖細(xì)胞的染色體數(shù)目是體細(xì)胞的一半，故稱為（單倍體）27、啟動(dòng)子是基因轉(zhuǎn)錄起始所必需的一段（ DNA序列 ）p7428、細(xì)菌釋放因子有哪三種：（RF1、RF2、RF3）二、名詞解釋1、 核酶：是類具有催化功能RNA分子，通過催化靶位點(diǎn)RNA鏈中磷酸二酯鍵的斷裂，特異性地剪切底物RNA分子，從而阻斷基因的表達(dá)。P1102、 增強(qiáng)子：遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)（130Kb）、決定基因的時(shí)間、空間特異性表達(dá)、增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的DNA序列，其發(fā)揮作用的方式通常與方向、距離無關(guān)。增強(qiáng)子也是有若干功能組件增強(qiáng)體組

19、成，是特異轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合DNA的核心序列。P893、編碼鏈：指DNA雙鏈中與mRNA序列相同的那條DNA鏈。4、模板識(shí)別：指RNA聚合酶與啟動(dòng)子DNA雙鏈相互作用并與之結(jié)合的過程。P745、錯(cuò)意突變：由于結(jié)構(gòu)基因中某個(gè)核苷酸的變化使一種氨基酸的密碼變成另一種氨基酸的密碼。P1276、信號(hào)肽：在起始密碼子后，有一段編碼疏水性氨基酸序列的RNA區(qū)域，這個(gè)氨基酸序列就被稱為信號(hào)肽。 P1517. 轉(zhuǎn)錄延伸：當(dāng)RNA聚合酶催化新生的RNA鏈的長(zhǎng)度達(dá)到910個(gè)核苷酸時(shí)，因子從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的RNA聚合酶全酶上脫落下來，RNA聚合酶離開啟動(dòng)子，核心酶沿模板DNA鏈移動(dòng)并使新生RNA鏈不斷伸長(zhǎng)的過程。（P77）8

20、 轉(zhuǎn)錄終止：當(dāng)RNA鏈延伸到轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)時(shí)，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯鍵，RNA-DNA雜合物分離，轉(zhuǎn)錄泡瓦解，DNA恢復(fù)成雙鏈狀態(tài)，而RNA聚合酶和RNA鏈都被從模板上釋放出來。(p78)9：轉(zhuǎn)錄：拷貝出一條與DNA鏈序列完全相同的RNA單鏈的過程，是基因表達(dá)的核心步驟。P7210：翻譯：以新生的mRNA為模板，把核苷酸三聯(lián)遺傳密碼子翻譯成氨基酸序列、合成多肽鏈的過程。P7211、DNA聚合酶：是一種天然產(chǎn)生的能催化DNA（包括RNA）的合成和修復(fù)的生物大分子。p5312、錯(cuò)配修復(fù)：DNA在復(fù)制的過程中發(fā)生錯(cuò)配，能識(shí)別新合成鏈中錯(cuò)配并加以校正的系統(tǒng)。p58三、簡(jiǎn)答題1、 試比較原核和真

21、核細(xì)胞的mRNA的異同。P93（1）真核生物mRNA的5端存在帽子結(jié)構(gòu)，絕大多數(shù)真核細(xì)胞生物mRNA還具有多（A）尾巴，原核一般沒有；（2）原核的mRNA可以編碼幾個(gè)多肽，真核只能編碼一個(gè)；（3）原核生物以AUG作為起始密碼，有時(shí)以GUG、UUG作為起始密碼，真核幾乎永遠(yuǎn)以AUG作為起始密碼。（4）原核生物mRNA半衰期短，真核長(zhǎng)。（5）原核生物以多順反子的形式存在，真核以單順反子的形式存在。2、簡(jiǎn)述增強(qiáng)子的特點(diǎn)p89（1）遠(yuǎn)距離效應(yīng)，一般位于上游-200bp處，但可增強(qiáng)遠(yuǎn)處啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄，即使相距十多個(gè)千堿基對(duì)也能發(fā)揮作用。（2）無方向性，無論位于靶基因的上游、下游或內(nèi)部都可發(fā)揮增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄的作用

22、。（3）順式調(diào)節(jié)，只調(diào)節(jié)位于同一染色體上的靶基因，而對(duì)其他染色體上的基因沒有作用。（4）無物種和基因的特異性，可以連接到異源基因上發(fā)揮作用。（5）具有組織特異性，SV40的增強(qiáng)子在3T3細(xì)胞中比多瘤病毒的增強(qiáng)子要弱，但在HeLa細(xì)胞中SV40的增強(qiáng)子比多瘤病毒的要強(qiáng)5倍。增強(qiáng)子的效應(yīng)需特定的蛋白質(zhì)因子參與。（6）有相位性，其作用和DNA的構(gòu)象有關(guān)。（7）有點(diǎn)增強(qiáng)子可以對(duì)外部信號(hào)產(chǎn)生反應(yīng)，如熱休克基因在高溫下才表達(dá)，某些增強(qiáng)子可以被固醇類激素所激活。3、簡(jiǎn)述RNA的功能。如題64、簡(jiǎn)述原核生物和真核生物mRNA的區(qū)別。 答：書本P93如題15、真核生物基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)主要有哪些？P33（1）真核

23、基因組龐大，一般都遠(yuǎn)大于原核生物的基因組；（2）真核基因組存在大量的重復(fù)序列；（3）真核基因組的大部分為非編碼序列，占整個(gè)基因組序列的90%以上，該特點(diǎn)是真核生物與細(xì)菌和病毒之間最主要的區(qū)別；（4）真核基因組的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子；（5）真核基因是斷裂基因，有內(nèi)含子結(jié)構(gòu)；（6）真核基因組存在大量的順式作用元件，包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子等；（7）真核基因組中存在大量的DNA多態(tài)性；（8）真核基因組具有端粒結(jié)構(gòu)。6、RNA作為功能分子有哪些重要作用？ P74（1）作為細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成的主要參與者；（2）部分RNA可以作為核酶在細(xì)胞中催化一些重要的反應(yīng)，主要作用于初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的剪接加工；（3）參

24、與基因表達(dá)的調(diào)控，與生物的生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)；（4）在某些病毒中，RNA是遺傳物質(zhì)。7、.RNA的結(jié)構(gòu)有哪些特點(diǎn)。P73 1.RNA含有核糖和嘧啶，通常是單鏈線性分子； 2.RNA鏈自身折疊形成局部雙螺旋； 3.RNA可折疊形成復(fù)雜的三級(jí)結(jié)構(gòu)。8、.簡(jiǎn)述因子的作用。P82 答：因子的作用是負(fù)責(zé)模板鏈的選擇和轉(zhuǎn)錄的起始，它是酶的別構(gòu)效應(yīng)物，使酶專一性識(shí)別模板鏈上的啟動(dòng)子。因子極大地提高RNA聚合酶對(duì)啟動(dòng)子區(qū)DNA序列的親和力，還降低它對(duì)非專一位點(diǎn)的親和力。9：原核生物mRNA的特征。 p931，原核生物mRNA的半衰期短。2，許多原核生物的mRNA可能以多順反子的形式存在。3，原核生物mRNA的5

25、端無帽子結(jié)構(gòu)，3端沒有或只有較短的多(A)結(jié)構(gòu)。10：真核生物mRNA的特征。 p96 1,真核生物mRNA的5端存在帽子結(jié)構(gòu)。 2，絕大多數(shù)真核生物mRNA具有多(A)尾巴。11、 什么是編碼鏈？什么是模板鏈？ 答：與mRNA序列相同的那條DNA鏈稱為編碼鏈；另一條根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)元?jiǎng)t指導(dǎo)mRNA合成的DNA鏈稱為模板鏈。12、試述PCR擴(kuò)增的原理和步驟p177 答：原理：首先將雙鏈DNA分子在臨近沸點(diǎn)的溫度下加熱分離成兩條單鏈DNA為模板并利用反應(yīng)混合物中的四種脫氧核苷三磷酸合成新生的DNA互補(bǔ)鏈。 步驟：變性：雙鏈模板DNA分子在高溫下解開成長(zhǎng)單鏈；退火：引物與模板DNA相結(jié)合；鏈的延伸

26、：新生鏈從引物退火結(jié)合位點(diǎn)開始并朝相反方向延伸。四、論述題1、大腸桿菌的終止子有哪兩大類？請(qǐng)分別介紹一下它們的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。P78（1）不依賴因子的終止子：終止位點(diǎn)上游一般存在一個(gè)富含GC堿基的二重對(duì)稱區(qū)， 由其轉(zhuǎn)錄的RNA容易形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致RNA聚合酶的暫停，破壞DNA-RNA雜合 鏈的結(jié)構(gòu)。在終止位點(diǎn)前還有一段48個(gè)A組成的序列，對(duì)應(yīng)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的3端為寡聚U（poly U），該結(jié)構(gòu)特征導(dǎo)致了轉(zhuǎn)錄的終止。轉(zhuǎn)錄終止不依賴因子。 （2） 依賴因子的終止子：轉(zhuǎn)錄的RNA也有發(fā)卡結(jié)構(gòu)，但其后無poly（U）。形成 的發(fā)卡結(jié)構(gòu)較疏松，結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。轉(zhuǎn)錄終止需要因子的參與。與不依賴因 子的終止相同的是，終止

27、信號(hào)存在于新生RNA鏈，而非DNA鏈。2、大腸桿菌的終止子有哪兩類？請(qǐng)分別介紹它們的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)？ 答：書本P78-79 如題13、試論述原核生物與真核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的比較。P93答：（1）只有一種RNA聚合酶參與所有類型的原核生物基因轉(zhuǎn)錄，而真核生物有3種以上的RNA聚合酶來負(fù)責(zé)不同類型的基因轉(zhuǎn)錄，合成不同類型的、在細(xì)胞核內(nèi)有不同定位的RNA。（2）轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物有差別。原核生物的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物大多數(shù)是編碼序列，與蛋白質(zhì)的氨基酸序列呈線性關(guān)系；而真核生物的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物很大，含有內(nèi)含子序列，成熟的mRNA只占初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的一小部分。（3）原核生物的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物幾乎不需要剪接加工，就可直接作為成熟的mRNA進(jìn)

28、一步行使翻譯模板的功能；真核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需要經(jīng)過剪接、修飾等轉(zhuǎn)錄后加工成熟過程才能成為成熟的mRNA。（4）在原核生物細(xì)胞中，轉(zhuǎn)錄和翻譯不僅發(fā)生在同一個(gè)細(xì)胞空間里，而且這兩個(gè)過程幾乎是同步進(jìn)行的，蛋白質(zhì)合成往往在mRNA剛開始轉(zhuǎn)錄時(shí)就被引發(fā)了。真核生物mRNA的合成和蛋白質(zhì)的合成則發(fā)生在不同的空間和時(shí)間范疇內(nèi)。4、.真核與原核生物基因轉(zhuǎn)錄有哪些差異？（p93-p100） 答：如簡(jiǎn)答題9、10。5、RNA的種類和其生物學(xué)作用？p74 種類：mRNA、tRNA、rRNA 生物學(xué)作用作為信息分子：RNA擔(dān)負(fù)著貯藏及轉(zhuǎn)移遺傳信息的功能，起著遺傳信息由DNA到蛋白質(zhì)的中間傳遞體的核心作用。作為功能分子：

29、1、作為細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成的主要參與者2、部分RNA可以作為核酶在細(xì)胞中催化一些重要的反應(yīng)，主要作用于初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的剪接加工3、參與基因表達(dá)的調(diào)控，與生物的生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)4、在某些病毒中，RNA是遺傳物質(zhì)6、核酶具有哪些結(jié)構(gòu)特點(diǎn)？根據(jù)其催化功能不同可分為那兩大類？其生物學(xué)意義是什么？p110 答：結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：具有自我剪接能力的RNA大多數(shù)都能形成錘頭結(jié)構(gòu)，該二級(jí)結(jié)構(gòu)由3個(gè)莖構(gòu)成，莖區(qū)是由互補(bǔ)堿基構(gòu)成的局部雙鏈結(jié)構(gòu)，包圍著一個(gè)由1113個(gè)保守核苷酸構(gòu)成的催化中心。根據(jù)其催化功能不同可分為 剪切型核酶、剪接型核酶。生物學(xué)意義：核酶的發(fā)現(xiàn)是我們對(duì)RNA的重要功能又有了新的認(rèn)識(shí)，為基因治療提供了新的

30、策略，為生命起源的研究提供新的思路。 第四章一、填空題1.翻譯從（起始密碼AUG）開始，沿著mRNA(5-3)的方向連續(xù)閱讀密碼子，直至（終止密碼）為止。P1162.一個(gè)密碼子由（ 3 ）個(gè)核苷酸組成，（ 4 ）核苷酸可組成（ 64 ）個(gè)密碼子。P1203.終止密碼子為（UAA）、（UAG）、（UGA）。 P1204.作為基因產(chǎn)物的蛋白質(zhì)是受（ 基因 ）控制的。 P1165.mRNA中有（ 4 ）種核苷酸，而蛋白質(zhì)中有（ 20 ）種氨基酸。 P1176tRNA為相應(yīng)氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)到核糖體提供了 運(yùn)送載體 ，所以它又被稱為第二遺傳密碼。P1237tRNA的種類有起始tRNA， 延伸tRNA ，同工t

31、RNA和校正tRNA；P127 8核糖體小亞基負(fù)責(zé) 對(duì)模板mRNA進(jìn)行序列特異性識(shí)別 ，大亞基負(fù)責(zé) 攜帶氨基酸及tRNA的功能 P1349翻譯過程的肽鏈延長(zhǎng)，也稱為核糖體循環(huán)。每次核糖體循環(huán)又分為三個(gè)步驟：進(jìn)位、成肽 和 轉(zhuǎn)位 。（P139142）10、核糖體是由幾十種蛋白質(zhì)和幾種核糖體RNA組成的的 亞細(xì)胞顆粒P12811、蛋白質(zhì)的生物合成是以（ 氨基酸 ）作為原料，在（ 核糖體 ）中進(jìn)行的生物過程。 （P135 第一段 氨基酸的活化）12、蛋白質(zhì)的生物合成包括（ 氨基酸活化 ）、肽鏈的起始，伸長(zhǎng)，終止、以及（ 新合成多肽鏈的折疊與加工 ）。P134 第五段 蛋白質(zhì)合成的生物學(xué)機(jī)制13、（

32、tRNA ）與（ 相應(yīng)氨基酸 ）的結(jié)合是蛋白質(zhì)合成中的關(guān)鍵步驟。（P136 第一段）14、（ 抗生素 ）是蛋白質(zhì)生物合成的主要抑制劑。（P148 第三段 蛋白質(zhì)合成的抑制劑）15、肽鏈的終止密碼有（ UAA ）、（ UAG ）、（UGA ）（P143 第三段 肽鏈的終止）16若某個(gè)蛋白質(zhì)的合成和運(yùn)轉(zhuǎn)是同時(shí)發(fā)生的，則屬于翻譯運(yùn)轉(zhuǎn)同步機(jī)制。（P150 4.5）17若蛋白自從和糖體上釋放后才發(fā)生運(yùn)轉(zhuǎn)，則屬于翻譯后運(yùn)轉(zhuǎn)機(jī)制。（P150 4.5）18、?？康鞍准碊P是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的受體蛋白，它能夠與結(jié)合有信號(hào)序列的SRP牢牢地結(jié)合，使它在合成蛋白質(zhì)的核糖體?？康絻?nèi)質(zhì)網(wǎng)上來。（P153 4.5.1）19、

33、擁有前導(dǎo)肽的線粒體蛋白質(zhì)前體能夠跨膜運(yùn)轉(zhuǎn)進(jìn)入線粒體，在這一過程中前導(dǎo)肽被水解，前體轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓鞍?，失去繼續(xù)跨膜能力。（P155 4.5.2）20、葉綠體定位信號(hào)肽一般有兩個(gè)部分，第一部分決定該蛋白質(zhì)能否進(jìn)入葉綠體基質(zhì)，第二部分決定該蛋白能否進(jìn)入類囊體。（P155 4.5.2）21.泛素化修飾涉及（泛素激活酶E1）、（泛素結(jié)合酶E2）、（泛素連接酶E3）等3個(gè)酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。（P159 4.6.1）22.蛋白質(zhì)的（SUMO化修飾）能夠阻止泛素化引起的蛋白質(zhì)降解。（P161 4.6.2圖4-41解釋）23.NEDDylation可能參與（細(xì)胞增殖分化）、（細(xì)胞發(fā)育）、（細(xì)胞周期）、（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)）等重要

34、生命過程的調(diào)控。（P162 4.6.3）24.NEDD8參與NEDDylantion過程的關(guān)鍵位點(diǎn)是（賴氨酸殘基）。（P163 4.6.3）25.在真核生物中，蛋白質(zhì)的降解主要依賴與（泛素）。（P159 4.6.1）二、名詞解釋1、密碼子：mRNA上毎3個(gè)核苷酸翻譯成蛋白質(zhì)多肽鏈上的一個(gè)氨基酸，這3個(gè)核苷酸就稱為密碼，也叫三聯(lián)子密碼即密碼子。 P1162、簡(jiǎn)并：由一種以上密碼子編碼同一個(gè)氨基酸的現(xiàn)象稱為簡(jiǎn)并。P1213、同工tRNA：由于一種氨基酸可能有多個(gè)密碼子，因此有多個(gè)tRNA來識(shí)別這些密碼子，即多個(gè)tRNA代表一種氨基酸，我們將幾個(gè)代表相同氨基酸的tRNA稱為同工tRNA。P1274、

35、無義突變：在蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因中，一個(gè)核苷酸的改變可能使代表某個(gè)氨基酸的密碼子變成終止密碼子，使蛋白質(zhì)合成提前終止，合成無功能的或無意義的多肽，這種突變成為無義突變。P127 4.2.4.35、糖基化：是真核細(xì)胞蛋白質(zhì)的特征之一，大多數(shù)糖基化是由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的糖基化酶催化進(jìn)行的。所有的分泌蛋白和膜蛋白幾乎都是糖基化蛋白質(zhì)。 P145 第四段 糖基化6、熱休克蛋白：一類應(yīng)激反應(yīng)性蛋白，包括HSP70、HSP40、GrpE三個(gè)家族，廣泛存在于原核細(xì)胞以及真核細(xì)胞中。三者協(xié)同作用，促使某些能自發(fā)折疊的蛋白質(zhì)正確折疊形成天然空間構(gòu)象。 P147 最后一段 熱休克蛋白7信號(hào)肽：絕大多數(shù)越膜蛋白的N端都具有長(zhǎng)度

36、大約在13-36個(gè)殘基之間的以疏水氨基酸為主的N端信號(hào)序列稱為信號(hào)肽。（P151 4.5.1）8、信號(hào)識(shí)別顆粒（SRP）：是一種核糖核酸蛋白復(fù)合體，它的作用是識(shí)別信號(hào)序列，并將核糖體引導(dǎo)到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。（P153 4.5.1）9、泛素化：泛素分子在泛素激活酶、結(jié)合酶、連接酶等的作用下，對(duì)靶蛋白就進(jìn)行特異性修飾的過程。（P159 4.6.1）10、SUMO化修飾：把SUMO轉(zhuǎn)移到底物的賴氨酸殘基上，穩(wěn)定靶蛋白使其免受降解的過程。（P161 4.6.2）3、 簡(jiǎn)答題1、遺傳密碼具有哪些性質(zhì)？ P119-P123答：連續(xù)性、簡(jiǎn)并性、通用性、特殊性、密碼子與反密碼子相互作用。2、蛋白質(zhì)如何產(chǎn)生？P111

37、蛋白質(zhì)生物合成的主要過程？ P116答：1.蛋白質(zhì)由基因控制合成。 2.主要合成過程;翻譯起始：核糖體與mRNA結(jié)合并與氨基酰-tRNA生成起始復(fù)合物；肽鏈延伸：由于核糖體沿mRNA 5端向 3端移動(dòng)，開始了從N端向C端的多肽合成，這就是蛋白質(zhì)合成過程中速度最快的階段；肽鏈的終止及釋放：核糖體從mRNA上解離，準(zhǔn)備新一輪合成反應(yīng)。3、簡(jiǎn)述真核細(xì)胞中翻譯終止的過程。參考P143 肽鏈的終止答：由于氨酰 tRNA 上沒有反密碼子能夠與三個(gè)終止密碼子互補(bǔ)配對(duì)，因此翻譯終止。終止并需要tRNA 的協(xié)助，此時(shí)沒有氨基酸能夠連接到位于 P 位點(diǎn)的肽酰 tRNA 上。釋放因子（eRF）有助于終止的發(fā)生，可能

38、使 tRNA 上的氨基酸 C 端不需要轉(zhuǎn)肽基和脫?；l(fā)生轉(zhuǎn)位。新生肽直接從 P 位點(diǎn)離開核糖體并進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)（細(xì)胞質(zhì)核糖體）或進(jìn)入轉(zhuǎn)位酶通道（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體）。4、 區(qū)別 tRNA 和 mRNA 在翻譯中的作用。P116答：mRNA 是氨基酸裝配成多肽的模板。tRNA 一方面是識(shí)別特異氨基酸的接頭分子，另一方面又可以識(shí)別特異的 mRNA 密碼子。5、蛋白質(zhì)前體的加工主要內(nèi)容 P144 蛋白質(zhì)前體的加工N端fMet或Met的切除：N端的甲硫氨酸往往在多肽合成完畢之前被切除二硫鍵的形成：蛋白質(zhì)的二硫鍵是蛋白質(zhì)合成后，通過兩個(gè)半胱氨酸的氧化作用生成的，密碼子中沒有胱氨酸的密碼子。特定氨基酸的修飾：氨基

39、酸側(cè)鏈的修飾包括磷酸化、糖基化、甲基化、已基化、羥基化和羧基化等。切除新生肽鏈中的非功能片段：不少肽類激素和酶的前體都要經(jīng)過加工才能變成活性分子6、蛋白質(zhì)合成的過程P134-P135氨基酸的活化翻譯的起始肽鏈的延伸肽鏈的終止 肽鏈的折疊和加工7、信號(hào)肽的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是什么？（P151 4.5.1）1.一般帶有10-15個(gè)疏水氨基酸。2.常常在靠近該序列N-端疏水氨基酸區(qū)上游帶有1個(gè)或數(shù)個(gè)帶正電荷的氨基酸。3.在其C-末端靠近蛋白酶切割位點(diǎn)處常常帶有數(shù)個(gè)極性氨基酸，離切割位點(diǎn)最近的那個(gè)氨基酸往往帶有很短的側(cè)鏈(Ala或Gly)。8.前導(dǎo)肽一般具有什么特性？（P155 4.5.2）1.帶正電荷的堿性氨

40、基酸（特別是精氨酸）含量較為豐富，它們分散于不帶電荷的氨基酸序列之間；2.缺少帶負(fù)電荷的酸性氨基酸；3.羥基氨基酸（特別是絲氨酸）含量較高；4.有形成兩親（既有親水又有疏水部分）-螺旋結(jié)構(gòu)的能力。9、.泛素化修飾的作用？（P160 4.6.1）1.降解蛋白質(zhì)，2.參與多種生物功能的調(diào)控，在蛋白質(zhì)的定位、代謝、和降解中都起著重要作用，3.能參與細(xì)胞周期、增殖、凋亡、分化、轉(zhuǎn)移、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號(hào)傳遞、損傷修復(fù)、炎癥免疫等幾乎一切生命活動(dòng)調(diào)控。10、.SUMO化修飾的作用？P161-P162 4.6.2） 答：影響蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位，廣泛參與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用、DNA結(jié)合、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、

41、核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、轉(zhuǎn)錄因子激活等重要過程。四、論述題1、遺傳密碼有哪些特性？并回答各特點(diǎn)對(duì)生物具有哪些意義。 P119-P123答：連續(xù)性、簡(jiǎn)并性、通用性、特殊性、密碼子與反密碼子相互作用。意義：連續(xù)性：密碼子間無間斷也無重復(fù)，即起始密碼子決定了所有隨后密碼子的位置；簡(jiǎn)并性：減少變異對(duì)生物的影響；通用性：有助于我們研究生物的進(jìn)化；特殊性：表明物種之間的特異性；密碼子與反密碼子的相互作用：搖擺假說，解釋了反密碼子中某些稀有成分的配對(duì)以及許多氨基酸有2個(gè)以上密碼子的問題。2、真核與原核核糖體的主要區(qū)別是什么？參考P128-P134答：真核細(xì)胞的大小亞基（即 40S 和 60S）均比原核細(xì)胞的（原核細(xì)胞為

42、30S 和50S）大。在兩種細(xì)胞的核糖體中，原核生物核糖體約由2/3的RNA及1/3的蛋白質(zhì)組成，真核生物核糖體中RNA占3/5，蛋白質(zhì)占2/5，rRNA 占了絕大部分體積，原核細(xì)胞的 RNA 含量則比真核細(xì)胞高。原核細(xì)胞核糖體有 E 位點(diǎn)便于脫酰 tRNA 的離開。3、試述蛋白質(zhì)是如何合成、加工并運(yùn)輸?shù)侥康牡匦惺咕唧w功能的？P134-P164答：蛋白質(zhì)合成的過程：1.DNA轉(zhuǎn)錄形成信使RNA(mRNA),mRNA單鏈同時(shí)與多個(gè)核糖體結(jié)合，合成許多條肽鏈，肽鏈盤曲折疊形成復(fù)雜空間結(jié)構(gòu)，初步合成了蛋白質(zhì)。2. 接下來，進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔后，還要經(jīng)過一些加工，如折疊、組裝、加上一些糖基團(tuán)等，才能成為比較

43、成熟的蛋白質(zhì)，3. 然后，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔膨大、出芽形成具膜的小泡，包裹著蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到高爾基體，把蛋白質(zhì)輸送到高爾基體腔內(nèi)，做進(jìn)一步的加工。4. 接著，高爾基體邊緣突起形成小泡，把蛋白質(zhì)包裹在小泡里，運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞膜，小泡與細(xì)胞膜融合，把蛋白質(zhì)釋放到細(xì)胞外。4、線粒體蛋白質(zhì)的跨膜運(yùn)轉(zhuǎn)過程有什么特征？（P154 4.5.2）答：通過線粒體膜的蛋白質(zhì)是在合成以后再運(yùn)轉(zhuǎn)的。這個(gè)過程有如下特征：通過線粒體膜的蛋白質(zhì)在運(yùn)轉(zhuǎn)之前大多數(shù)以前體形式存在，它由成熟蛋白質(zhì)和N端延伸出的一段前導(dǎo)肽共同組成。蛋白質(zhì)通過線粒體內(nèi)膜的運(yùn)轉(zhuǎn)是一種需能過程；蛋白質(zhì)通過線粒體膜運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，首先由外膜上的Tom受體復(fù)合蛋白識(shí)別與Hsp70或M

44、SF等分子伴侶相結(jié)合的待運(yùn)轉(zhuǎn)多肽，通過Tom和Tim組成的膜通道進(jìn)入線粒體內(nèi)腔。5、 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的影響？（P163 4.6.4）答：成熟蛋白N端的第一個(gè)氨基酸在蛋白質(zhì)的降解中有著舉足輕重的作用。當(dāng)某個(gè)蛋白質(zhì)N端是甲硫氨酸、甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸和纈氨酸時(shí)，表現(xiàn)穩(wěn)定。N段是賴氨酸、精氨酸時(shí)，表現(xiàn)不穩(wěn)定，平均2-3min被降解。泛素調(diào)控的蛋白質(zhì)降解有重要的生理意義，不僅能夠清除錯(cuò)誤蛋白質(zhì)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期、DNA復(fù)制以及染色體結(jié)構(gòu)有重要調(diào)控作用。第五章一、填空題：1. 細(xì)菌轉(zhuǎn)化常用的方法有CaCl2法 和 電擊法 。P1752. 在一定的 電場(chǎng)強(qiáng)度 下，DNA分子的電泳的遷

45、移率取決于 核酸分子本身的大小 和 構(gòu)型 P1733. 電泳的速率與 電場(chǎng)強(qiáng)度 和 電泳分子本身所攜帶的凈電荷數(shù) 成正比。P1734. 凝膠濃度的高低影響凝膠介質(zhì)孔隙的大小，濃度 越高 ，孔隙 越小 ，其分辨能力就 越強(qiáng) 。P1735. CoLE1質(zhì)粒載體是松弛型復(fù)制控制的 多拷貝質(zhì)粒 。P1686. PCR反應(yīng)的原始材料是（模板DNA）出處：課本177頁7. DNA聚合酶是一種天然產(chǎn)生的能催化DNA的_合成_和_修復(fù)_的生物大分子。177頁8. 基因組中的某些區(qū)域中，CpG序列密度可達(dá)均值的5倍以上，成為鳥嘌呤和胞嘧啶的富集區(qū)，形成所謂的(CpG島）出處：課本181頁9. DNA甲基化的主要

46、形式有_5-甲基胞嘧啶_、_6-甲基腺嘌呤_和_7-甲基鳥嘌呤_181頁10. 由于PCR技術(shù)具有極高的敏感性，擴(kuò)增產(chǎn)物總量的變異系數(shù)常常達(dá)到（10%-30%）178頁11. 細(xì)胞中總RNA包括（mRNA）（rRNA）（tRNA）（sRNA）P18512. 基因文庫(kù)必須具有一定的（代表性）和（隨機(jī)性）P18313. 目前實(shí)驗(yàn)室常用的總RNA的抽屜方法是（異硫氰酸胍-苯酚抽提法）P18514. 構(gòu)建基因組文庫(kù)最常用的的方法是（噬菌體載體）和（限制性內(nèi)切核酸酶）部分消化法。P18415. RNA的濃度和純度可以通過測(cè)定其（OD260）和（OD280）來判斷。P18516. 基因文庫(kù)篩選的主要篩選方

47、法包括（核酸雜交法）、（PCR篩選法）和（免疫篩選法）。(p189)17. 可以用核酸雜交篩選法進(jìn)行（重組噬菌斑）的篩選。（P189）18. 基因文庫(kù)的篩選是指通過某種特殊方法從（基因文庫(kù)）中鑒定出含有所需重組DNA分子的特定克隆的過程。（P189）19. 含有cDNA插入片段的重組噬菌粒只有經(jīng)過體外蛋白外殼包裝反應(yīng)，才能成為有（侵染）和（復(fù)制）能力的成熟噬菌體。（P188）20. 在cDNA合成的過程中，應(yīng)選用活性較高的（反轉(zhuǎn)錄酶）及（甲基化dCTP），cDNA兩端應(yīng)加上不同內(nèi)切酶所識(shí)別的接頭序列，保證所獲得雙鏈cDNA的方向性。（P187）21. RACE是一項(xiàng)在 已知 cDNA序列 的基

48、礎(chǔ)上克隆 5 端或 3 端缺失序列的技術(shù)。P19122. cDNA序列可來自序列 表達(dá)標(biāo)簽 、 減法cDNA文庫(kù) 、差式顯示 和 基因文庫(kù)的篩選 。 P19123. Gateway 克隆技術(shù)主要包括 TOPO反應(yīng) 和 LR反應(yīng) 兩步。 P19324. 基因的圖位克隆法是分離 未知性狀目的基因 的一種好方法。 P19325. Gateway基因大規(guī)?？寺》ɡ?噬菌體 進(jìn)行位點(diǎn)特異性DNA片段重組。P19326. 蛋白質(zhì)組學(xué)是_蛋白質(zhì)_和_基因組_研究在形式和內(nèi)容兩方面的組合。 P19627. 分離大量混合蛋白質(zhì)組分的最有效方法是_雙向電泳技術(shù)_，該方法依賴于蛋白質(zhì)的兩個(gè)重要特性，即_等電點(diǎn)_和

49、_相對(duì)分子質(zhì)量_。P19728. 現(xiàn)行的質(zhì)譜儀可分為三個(gè)連續(xù)的組成部分，即是_離子源_、_離子分離區(qū)_和_檢測(cè)器。P19829. 在DIGE技術(shù)中，_內(nèi)標(biāo)_是所以實(shí)驗(yàn)樣本的混合物。P198 30. 雙向凝膠的最大分辨率已經(jīng)達(dá)到每塊膠_10000_個(gè)蛋白點(diǎn)。 P197名詞解釋：1. 細(xì)菌轉(zhuǎn)化：指一種細(xì)菌菌株由于捕獲了來自供體菌株的DNA而導(dǎo)致性狀特征發(fā)生遺傳改變的過程。P1752. 感受態(tài)細(xì)胞：指經(jīng)過適當(dāng)處理后容易接受外來DNA進(jìn)入的細(xì)胞。P1753. DNA甲基化：指生物體在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸為甲基供體將甲基轉(zhuǎn)移到特定的堿基上的過程。出自課本181頁4. 同源測(cè)序：指

50、實(shí)驗(yàn)中所挑取的克隆來源于同一個(gè)原始DNA模板分子，形成了完全相同的沒有代表性的甲基化模式。課本182頁5. 基因組文庫(kù)：基因組中所有DNA序列克隆的總匯被稱為基因組文庫(kù)。P1836. mRNA的純化：指將mRNA從總的RNA中分離，得到高純度的mRNA。P1867. 核酸雜交法：核酸雜交法以其廣泛的適用性和快速性成為基因文庫(kù)篩選中最常用的的方法之一，是用放射性標(biāo)記的特異DNA探針進(jìn)行高密度的菌落雜交篩選。（P189）8. 基因文庫(kù)：是指某一生物類型的全部基因的集合。P1899. 克?。涸诩?xì)胞水平上，克隆是指由同一個(gè)祖細(xì)胞分裂而來的一群帶有完全相同遺傳物質(zhì)的子細(xì)胞；在分子生物學(xué)上，人們把外源DN

51、A插入具有復(fù)制能力的載體DNA中，使之得以永久保存和復(fù)制的這種過稱為克隆。P19010. RACE技術(shù)：是一項(xiàng)在 已知 cDNA序列 的基礎(chǔ)上克隆 5端或 3端缺失序列的技術(shù)P19111. 內(nèi)標(biāo) ：在DIGE技術(shù)中所有實(shí)驗(yàn)樣本的混合物。P19812. 雙向電泳 ：是分離大量混合蛋白組分的最有效方法，該方法依賴于蛋白質(zhì)的兩個(gè)重要特性，等電點(diǎn)和相對(duì)分子質(zhì)量。P197簡(jiǎn)答題：1. pUC質(zhì)粒載體由哪幾部分組成？P168答：由四部分組成：來自pBR322質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)（ori）、氨芐青霉素抗性基因（ampr）、大腸桿菌-半乳糖酶基因（lacZ）啟動(dòng)子、編碼-肽的DNA序列（lacZ基因）。2. 在凝膠

52、電泳中使用溴化乙錠的原因。P174答：將DNA分子凝膠浸泡在含溴化乙錠的溶液中，此種燃料會(huì)在一切可能的部位與DNA分子結(jié)合，然而卻不能與瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠相結(jié)合，因此只有DNA分子能吸收溴化乙錠并發(fā)出熒光，可靈敏而快捷地檢測(cè)出凝膠介質(zhì)中DNA的譜帶部位。3. 簡(jiǎn)述重亞硫酸鹽測(cè)序的主要過程。（課本182頁）答：將待測(cè)DNA樣品用限制性內(nèi)切核酸酶處理，重亞硫酸鹽處理使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶發(fā)生脫氨基作用轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，而被甲基化的胞嘧啶由于甲基的保護(hù)而不受影響，PCR擴(kuò)增后該尿嘧啶被測(cè)序儀讀取為胸腺嘧啶。4. 在動(dòng)物細(xì)胞中，DNA的甲基化狀態(tài)有三種，分別是？（出自課本181頁）答：1.

53、持續(xù)低甲基化狀態(tài)；2.去甲基化狀態(tài)；3.高度甲基化狀。5. 簡(jiǎn)述在基因組文庫(kù)中通常提高文庫(kù)代表性的兩種策略。P183答：1.用機(jī)械切割法或限制性內(nèi)切核酸酶切割法隨機(jī)斷裂DNA，以保證克隆的隨機(jī)性；2.增加文庫(kù)重組克隆的數(shù)目，以提高覆蓋基因組的倍數(shù)。6. 簡(jiǎn)述RNA基本操作技術(shù)。P185答：1.總RNA的提取；2.mRNA的純化；3.cDNA的合成；4.cDNA文庫(kù)的構(gòu)建；5.基因文庫(kù)的篩選。7. 在cDNA合成過程中加入的甲基化dCTP的作用是什么？（P187）答：反應(yīng)體系中一般加入甲基化dCTP，保證新合成的cDNA鏈被甲基化修飾，以防止構(gòu)建克隆時(shí)被限制性內(nèi)切核酸酶切割。8.如何提高用雜交篩

54、選法進(jìn)行重組噬菌斑的篩選的結(jié)果的可靠性？（P189）答：將硝酸纖維素膜覆蓋在瓊脂平板表面，使之與噬菌斑直接接觸，噬菌斑中大量沒有被包裝的游離DNA及噬菌體顆粒便一起轉(zhuǎn)移到膜上?？蓮耐皇删咂桨迳线B續(xù)印幾張同樣的硝酸纖維素膜，進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，而且可以使用兩種或數(shù)種不同的探針篩選同一套重組子，提高結(jié)果的可靠性。9.說說cDNA差異分析法的原理？P192答：發(fā)揮了PCR以指數(shù)形式擴(kuò)增雙鏈DNA模板，而僅以線性形式擴(kuò)增單鏈模板的特性，通過降低cDNA群體負(fù)責(zé)性和更換cDNA兩端接頭等方式，特異性擴(kuò)增目的基因片段。10. cDNA末端快速擴(kuò)增法的主要操作步驟？P191答：1.獲得高質(zhì)量總RNA：含有大量

55、完整mRNA、tRNA、rRNA和部分不完整mRNA；2. 去磷酸化作用：帶帽子結(jié)構(gòu)的mRNA不受影響；3. 去掉mRNA的5帽子結(jié)構(gòu)，加特異性RNA寡聚接頭并用RNA連接酶連接；4. 以特異性寡dT為引物，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，反轉(zhuǎn)錄合成第一條cDNA鏈，包含了寡接頭的互補(bǔ)序列；5. 分別以第一鏈cDNA為模板進(jìn)行RACE反應(yīng)；6. 將純化的PCR產(chǎn)物克隆到載體DNA中，進(jìn)行序列分析。11.簡(jiǎn)述雙向電泳技術(shù)的原理。 P197答：該方法依賴于蛋白質(zhì)的兩個(gè)重要特性：等電點(diǎn)和相對(duì)分子質(zhì)量，蛋白質(zhì)在SDS凝膠電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)速率和距離完全取決于其相對(duì)分子質(zhì)量而不受其所帶電荷的影響，不同相對(duì)分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)

56、將位于凝膠的不同區(qū)段而得到分離。12.簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析技術(shù)的步驟和原理。 P198答：原理：是通過電離源將蛋白質(zhì)分子轉(zhuǎn)化為離子，然后利用質(zhì)譜分析儀的電場(chǎng)、磁場(chǎng)將具有特定質(zhì)量與電荷比值（M/Z）的蛋白質(zhì)離子分離開來，經(jīng)過離子檢測(cè)器收集分離的離子，確定離子的M/Z值，分析鑒定未知蛋白。通常結(jié)合相應(yīng)的處理及其他技術(shù)，能夠比較準(zhǔn)確、快速地鑒定蛋白質(zhì)。步驟：將感興趣的蛋白點(diǎn)回收后，進(jìn)行胰蛋白酶膠內(nèi)酶解，收集酶解肽段。一級(jí)質(zhì)譜將蛋白酶降解后的肽段按照質(zhì)荷比以及強(qiáng)度進(jìn)行分析，形成肽指紋圖譜（PMF）；二級(jí)質(zhì)譜是挑選一級(jí)質(zhì)譜中有代表性的母離子峰以誘導(dǎo)碰撞解離方式打碎，形成肽段碎片指紋圖譜（PFF）；然后一級(jí)PMF和二級(jí)PFF數(shù)據(jù)，進(jìn)行數(shù)