高效液相色譜檢查十一酸睪酮其他甾體課件

1、高效液相色譜檢查十一酸睪酮其他甾體,過程,查資料（藥典，文獻(xiàn)，藥物分析及儀器分析課本等,進(jìn)行討論，確定方法，制定儀器清單,實(shí)驗(yàn),成果,實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)一步修改,查資料,藥典 藥物的理化性質(zhì)，檢查方法及具體操作 網(wǎng)絡(luò) 結(jié)構(gòu)式，功效及一些產(chǎn)品名 文獻(xiàn) 同類藥物高效液相色譜法的使用情況 分析化學(xué)和藥物分析教材 高效液相色譜法,實(shí)驗(yàn)方案,主成分自身對照法（無雜質(zhì)對照品） 將供試品稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)臐舛?，作為對照溶液。分別取供品試溶液和對照溶液進(jìn)樣，計(jì)算供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)峰面積總和，與對照溶液主成分峰面積比較，確定雜質(zhì)是否超過限量。 供試品溶液配制 取本品約0.1g，精密稱定，加入流動相約20ml，

2、溶解，定容至50ml容量瓶（制成每1ml中含2mg的供試品溶液）。 自身對照品溶液配制 精密量取供試品溶液1ml至50ml容量瓶，定容（每1ml中含0.04mg,實(shí)驗(yàn)清單,儀器： 高效液相色譜儀，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，（柱長？） 乙腈異丙醇水（40:40:20）為流動相；檢測溫度室溫，檢測波長為240nm。（靈敏度？流速？） 50ml容量瓶2 1ml移液管 電子天平 小漏斗 250ml 燒杯 50ml量筒 濾紙 洗耳球,方案修改,供試品溶液 2mg 1ml 0.5mg1ml 自身對照溶液 0.04 mg 1ml 0.01mg1ml 色譜條件的確定 ： 色譜柱：Agilent C185

3、um（1504.6mm） 流動相的確定：？ 流速：1.0mlmin 靈敏度：0.01檔,溶液配置及儀器操作,供試品溶液配置：0.5mg/1ml 精密稱定50.0mg 乙腈定容至10ml 移液管移取1.0ml 流動相定容至10ml（乙腈-水=75：25） 自身對照品溶液配制：0.01mg/ml 移液管移取供試品1.0ml 乙腈溶液定容至50.0ml（乙腈溶液：10ml乙腈用75%乙腈定容至100ml,液相色譜儀器操作,開始：裝柱 檢漏 甲醇沖洗0.5h 流動相沖洗0.5h 設(shè)定參數(shù) 待基線穩(wěn)定后進(jìn)樣 結(jié)束：用沖柱水沖洗1h 純甲醇沖洗1h 收好柱子,藥典方法,流動相 乙腈-異丙醇-水40：40：

4、20下色譜圖 主峰 R:1.960 T: 1.258 n:9443,思考,1.主成分峰與雜質(zhì)的分離度不夠（1.960） 2.主成分出峰時間太長（21.538min,如何改變條件呢,流動相配比,乙腈-異丙醇-水（90：5：5,R: 1.182 T: 1.329 n: 10321,乙腈：異丙醇：水（85：10：5,R:3.709 T: 1.834 n: 9309,乙腈：異丙醇：水（80：15：5,R: 1.591 T: 1.732 n:10495,第二次思考： 乙腈價格昂貴，毒性大。 而甲醇粘度小，柱壓低，價格便宜，適用范圍廣，常用于色譜分析的流動相，激素類藥物中較常用。 藥典為什么不用甲醇代替乙

5、腈呢,甲醇-異丙醇-水=90：5：5,R: 1.225 T: 1.338 n: 8099,甲醇-異丙醇-水=80：15：5,R：1.208 T : 1.334 n:8564,結(jié)論,甲醇替代乙腈后分離度較低，柱效有所下降，所以在實(shí)驗(yàn)中使用乙腈較為合適,選取流動相，進(jìn)行雜質(zhì)限量檢查。 乙腈-異丙醇-水=80：15：5 1.進(jìn)溶劑 2.進(jìn)低濃度對照溶液 3.進(jìn)高濃度供試品溶液,溶劑峰,高濃度（0.5mgml,低濃度0.01mgml,計(jì)算及結(jié)論,自身對照溶液主峰峰面積：1691935 樣品溶液雜質(zhì)峰總峰面積：666831 樣品溶液雜質(zhì)峰總峰面積自身對照溶液主峰 峰面積 即雜質(zhì)含量2.0，符合規(guī)定,心得,藥