病毒感染的檢查方法與防治原則課件

1、目的與要求,了解病毒的診斷，抗病毒治療，病毒感染的預(yù)防,第一節(jié) 病毒感染的檢查方法,病毒感染的檢查,檢測(cè)內(nèi)容,查病毒,查特異性抗體,病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類(lèi)：如逆轉(zhuǎn)錄酶,電鏡直接觀察 光鏡檢查包涵體 分離培養(yǎng),一、標(biāo)本的采集與送檢,原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意： 1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理 2.低溫保存，盡快送檢 3.血清學(xué)診斷采雙份血清,二、病毒的分離與鑒定,一）病毒的分離培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture） 雞胚接種（egg inoculation） 動(dòng)物接種（animal inoculation,1.雞胚培養(yǎng) 采用孵化914天的雞胚 絨毛尿囊膜 痘苗病毒、人類(lèi)

2、皰疹病毒 尿囊腔 接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒的初次分離 卵黃囊 嗜神經(jīng)病毒,1、雞胚培養(yǎng),優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低 缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜,2.動(dòng)物接種 應(yīng)用：尚無(wú)敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng) 動(dòng)物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型 缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物 體內(nèi)常帶有潛伏病毒,病毒的分離培養(yǎng) 3.細(xì)胞培養(yǎng) 單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell culture） 分類(lèi) 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspended cell culture） 原代細(xì)胞（primary cell） 細(xì)胞種類(lèi) 二倍體細(xì)胞（diploid cell） 傳代細(xì)胞系（conti

3、nuous cell line,病毒的細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)瓶,單層細(xì)胞,1病毒增殖鑒定 (1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effect, CPE ） 細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）； 形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等,二）病毒的鑒定,細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落,麻疹病毒感染細(xì)胞,呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞,形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞,1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect, CPE,形成包涵體(inclusion body,1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effe

4、ct, CPE,腮腺炎病毒感染細(xì)胞,2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption,病毒囊膜表面血凝素(HA) 紅細(xì)胞表面HA受體,3)干擾現(xiàn)象（interference,風(fēng)疹病毒人胚腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE(,?？刹《救伺吣I細(xì)胞 病毒增殖，CPE(,人胚腎細(xì)胞,風(fēng)疹病毒？ ?？刹《?CPE(-)風(fēng)疹病毒(+) ?？刹《?-) CPE(+)風(fēng)疹病毒(-) ?？刹《?,2. 病毒數(shù)量與感染性測(cè)定,1.蝕斑形成試驗(yàn) （plaque formation test） 2.50組織細(xì)胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50,感染性病毒量,2.病毒形態(tài)學(xué)鑒

5、定,電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限 光學(xué)顯微鏡：可見(jiàn)大病毒（痘類(lèi)病毒）， 對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大,3.病毒血清學(xué)鑒定,用已知的抗體，鑒定病毒種、型、亞型 (1)血凝抑制試驗(yàn)-正粘病毒型與亞型鑒定 病毒雞紅細(xì)胞凝集（血凝試驗(yàn)） 病毒特異性抗體雞紅細(xì)胞不凝集 （血凝抑制試驗(yàn),2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA） 多種病毒鑒定,三、病毒分子生物學(xué)鑒定,抗原變異病毒基因的鑒定 核酸擴(kuò)增 核酸雜交 基因芯片 基因測(cè)序,四、病毒感染的血清學(xué)診斷,應(yīng)用： 采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚 目前尚無(wú)分離此病毒的方法或難以分離的病毒 為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義 進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等,1.中和試驗(yàn)（neutralizing test,病毒中和抗體 病毒失去感染性 特點(diǎn)：特異性高，抗體維持時(shí)間長(zhǎng) 應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查 臨床診斷少用,五、病毒感染的快速診斷,數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果 病毒顆粒 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗體檢測(cè)（IgM,病毒的快速診斷,光鏡-包涵體,電鏡,免疫熒光,ELISA,分子生物學(xué)技術(shù),雜交,Southern blot,PCR,Northern blot,第二節(jié) 病毒感染的防治原則,滅活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（living vaccine） 重組載體疫苗（recombinant carrier vaccine） 亞單位疫苗（s