孔彬-群體藥代動(dòng)力學(xué)綜述--交

1、臨床藥物治療與患者的生理、病理等多種因素相關(guān)，治療方案常因?yàn)闆](méi)有考慮這些因素而存在諸多問(wèn)題，使得藥物治療無(wú)法達(dá)到最佳效果。盡管我們每年都能獲得大量各種藥物相關(guān)的臨床數(shù)據(jù)，但卻未能充分利用這些數(shù)據(jù)以發(fā)現(xiàn)其中的科學(xué)規(guī)律。因此用新的方法來(lái)深入發(fā)掘藥物臨床數(shù)據(jù)背后的客觀規(guī)律，形成知識(shí)體系，以提高對(duì)藥物總體特征的認(rèn)識(shí)并優(yōu)化臨床藥物治療方案格外重要。群體藥代動(dòng)力學(xué)( population pharmacokinetics，PPK) 應(yīng)運(yùn)而生，它是藥學(xué)與數(shù)學(xué)學(xué)科之間的邊緣科學(xué)，近年來(lái)獲得迅速發(fā)展1目前，群體藥代動(dòng)力學(xué)已經(jīng)形成獨(dú)立的學(xué)科領(lǐng)域和完善的知識(shí)體系，在新藥研發(fā)和優(yōu)化臨床藥物治療方案兩方面都起著不可或缺

2、的重要作用2。一、群體藥代動(dòng)力學(xué)的概念和發(fā)展歷史（一）群體藥代動(dòng)力學(xué)的產(chǎn)生群體藥代動(dòng)力學(xué)是在藥物代謝動(dòng)力學(xué)( pharmacokinetics) 的基礎(chǔ)上提出的3。藥代動(dòng)力學(xué)是描述藥物通過(guò)各種途徑進(jìn)入體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄過(guò)程的量時(shí)變化或血藥濃度經(jīng)時(shí)變化規(guī)律的一門(mén)科學(xué)。為了解藥物的體內(nèi)性質(zhì)，制定給藥方案，明確藥物的安全性和有效性就必須進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)的研究。它的基本方法已經(jīng)滲入到生物藥劑學(xué)、分析化學(xué)、臨床藥理學(xué)、藥物治療學(xué)等諸多學(xué)科領(lǐng)域中，推動(dòng)著各個(gè)學(xué)科的發(fā)展5。但在不同患者群體中，藥物在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化會(huì)產(chǎn)生很大差異。1、經(jīng)典藥代動(dòng)力學(xué)研究用個(gè)體全息法，著眼于個(gè)體對(duì)象，試驗(yàn)設(shè)計(jì)是為了得到藥

3、物在個(gè)體中動(dòng)態(tài)變化的詳細(xì)數(shù)據(jù)6，用全程采血，即血樣數(shù)據(jù)涵蓋吸收、分布、代謝和排泄的全過(guò)程，通常 11 14 個(gè)血樣點(diǎn)。但從臨床治療實(shí)際和醫(yī)學(xué)倫理學(xué)考慮，密集采血相對(duì)困難，尤其是在重病患者、兒童及老年人群中，傳統(tǒng)頻繁取血、嚴(yán)格取樣時(shí)間的藥代動(dòng)力學(xué)研究非常困難。另一方面，經(jīng)典藥代動(dòng)力學(xué)研究以個(gè)體為單位，求每一個(gè)體的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差，若個(gè)體差異較大的情況下，個(gè)體的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)對(duì)整體結(jié)果影響較大，使最終結(jié)果產(chǎn)生很大偏倚7。研究樣本量較小，單個(gè)樣本在總體樣本中所占的權(quán)重較大，個(gè)體的偏差對(duì)結(jié)果造成的影響不能輕易消除。因此，為了描述各個(gè)受試者參數(shù)的離散程度與分布情況，確定能夠代表特定群體的

4、藥代動(dòng)力學(xué)特征，以及研究相關(guān)因素對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)的影響，就必須提出新的方法來(lái)進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究8。2、 群體藥代動(dòng)力學(xué)的定義群體藥代動(dòng)力學(xué)廣義通常指定量藥理學(xué)( phar-macometrics，PM) ，是用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法探討、描述和預(yù)測(cè)藥物在特定群體的藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)以及生物標(biāo)識(shí)物 效應(yīng)關(guān)系的行為特征的一門(mén)科學(xué)9。群體藥代動(dòng)力學(xué)是基于模型( modeling) 和仿真( simula-tion) 研究藥物與機(jī)體作用的全新方法，將藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)模型與統(tǒng)計(jì)學(xué)模型相結(jié)合，研究確定劑量方案下藥物在特定群體中的藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)的特征以及變異性的大小，定量的研究特定群體中藥物濃度/效應(yīng)的影響因素

5、10。這里的“群體”的概念是指根據(jù)研究目的所確定的研究對(duì)象總體。針對(duì)某一特定群體來(lái)探討和預(yù)測(cè)藥物在該群體中的體內(nèi)處置特征。影響藥物體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)的因素，例如年齡、體重、基因型、性別、疾病狀態(tài)、藥物-藥物相互作用等，由于研究對(duì)象的健康狀況、生理特征、營(yíng)養(yǎng)狀況、遺傳等方面都存在差異，不同研究對(duì)象對(duì)于同一藥物的體內(nèi)處置過(guò)程可能存在較大的差異11。因此在群體藥代動(dòng)力學(xué)研究中引入了 “協(xié)變量( covariate) ”，協(xié)變量的集合可以看作是不同的“亞群體”，例如性別對(duì)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)行為產(chǎn)生影響，則男性和女性就分別作為該群體中的亞群體。多個(gè)協(xié)變量疊加的“亞群體”，實(shí)際上就接近個(gè)體，即個(gè)體是多個(gè)

6、特定協(xié)變量疊加的“亞群 體”。例 如 一 個(gè) 體 重 60 kg，年 齡 40 歲 的CYP2C19 慢代謝的男性個(gè)體就是體重、年齡、基因型和性別 4 個(gè)協(xié)變量疊加的“亞群體”。協(xié)變量越多、越具體，就越接近真實(shí)的個(gè)體，因此，群體藥代動(dòng)力學(xué)可以用于優(yōu)化個(gè)體化給藥方案12。個(gè)體化給藥方案是充分了解個(gè)體的這些協(xié)變量對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)的影響，根據(jù)群體藥代動(dòng)力學(xué)特征以?xún)?yōu)化藥物治療方案，達(dá)到最佳藥效和減少不良反應(yīng)的目的13。（3） 群體藥代動(dòng)力學(xué)的發(fā)展歷史 1977 年美國(guó) Sheiner 教授首次提出用群體模型估算臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)中的群體參數(shù)。隨著群體藥代動(dòng)力學(xué)的發(fā)展，相繼提出稀疏數(shù)據(jù)模型和估算藥代動(dòng)力學(xué)

7、參數(shù)的變異。最初的群體藥代動(dòng)力學(xué)模型首先大量用于治療藥物監(jiān)測(cè)( TDM) 的臨床數(shù)據(jù)，用稀疏數(shù)據(jù)得到藥代動(dòng)力學(xué)的典型參數(shù)和變異值。上個(gè)世紀(jì) 80 90 年代，該方法逐步將 TDM 數(shù)據(jù)模型與 Bayesian 回歸方法結(jié)合，估算個(gè)體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)以及優(yōu)化個(gè)體給藥方案。 1982 年在 Journal of Pharmacokinetics and Biop-harmaceutics 雜志，首次提出群體藥代動(dòng)力學(xué)( 定量藥理學(xué)) 定義，即“應(yīng)用模型進(jìn)行分析復(fù)雜藥代動(dòng)力學(xué)和生物藥劑學(xué)特征的科學(xué)。此后，群體藥代動(dòng)力學(xué)在藥物研發(fā)和藥物治療中的作用逐漸被認(rèn)識(shí)，越來(lái)越廣泛的得到認(rèn)可和接受。模型仿真的應(yīng)用是

8、另一個(gè)促進(jìn)群體藥代動(dòng)力學(xué)發(fā)展的因素。模型仿真早在 1971 年 Maxwell 等提出，但直到1998 年 Hale 等才真正將模型仿真技術(shù)用于臨床試驗(yàn)?zāi)Ｐ蛿?shù)據(jù)的檢驗(yàn)。這一應(yīng)用極大地推動(dòng)了群體藥代動(dòng)力學(xué)的發(fā)展。同年，美國(guó)食品和藥品監(jiān)督管理局( FDA) 表現(xiàn)出對(duì)此技術(shù)的極大興趣，認(rèn)為模型仿真是進(jìn)行臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)的非常有用的工具，并將其用于評(píng)價(jià)不同試驗(yàn)設(shè)計(jì)的優(yōu)劣。自此模型仿真被廣泛用于各期臨床試驗(yàn)，進(jìn)一步促進(jìn)群體藥代動(dòng)力學(xué)的發(fā)展。群體藥代動(dòng)力學(xué)的快速發(fā)展使 FDA 和歐洲藥品監(jiān)督管理局( EMEA) 相繼出臺(tái)指南將該方法用于藥物研發(fā)。1998 年 FDA 藥品評(píng)價(jià)中心的兒童藥代動(dòng)力學(xué)研究指南中提出

9、除了進(jìn)行傳統(tǒng)的藥代動(dòng)力學(xué)研究外，還應(yīng)進(jìn)行群體藥代動(dòng)力學(xué)研究。1999 年，該機(jī)構(gòu)提出的肝功能不全患者藥代動(dòng)力學(xué)研究指南中也提到相關(guān)問(wèn)題。同年，F(xiàn)DA 頒布了藥物研發(fā)中群體藥代動(dòng)力學(xué)研究指南，明確提出新藥研發(fā)中如何進(jìn)行群體藥代動(dòng)力學(xué)研究以及報(bào)告的具體內(nèi)容。2000 年，人用藥品注冊(cè)技術(shù)規(guī)定國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議( ICH) 推薦在兒童患者藥物臨床研究中應(yīng)進(jìn)行群體藥代動(dòng)力學(xué)研究14。目前在美國(guó)和歐洲，群體藥代動(dòng)力學(xué)研究已經(jīng)成為藥物研發(fā)必不可少的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。同時(shí)該方法也廣泛應(yīng)用于臨床藥物治療的各個(gè)方面，發(fā)揮著非常重要的作用。Sheiner等將經(jīng)典的藥代動(dòng)力學(xué)模型與群體統(tǒng)計(jì)學(xué)模型結(jié)合起來(lái)提供了群體統(tǒng)計(jì)學(xué)模型（Po

10、pulation Statistical Model）結(jié)合起來(lái)，提供群體藥代動(dòng)力學(xué)理論，主要研究人體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的群體值，再結(jié)合病人的個(gè)體信息反饋，得到病人個(gè)體化藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，以?xún)?yōu)化給藥方案，指導(dǎo)臨床個(gè)體化用藥，(二)群體藥代動(dòng)力學(xué)的研究?jī)?nèi)容1群體參數(shù)：明確和預(yù)測(cè)藥物在特定群體的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)行為典型特征研究目標(biāo)群體中藥物的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)的總體特征，通常用典型患者來(lái)表示，稱(chēng)為群體參數(shù)( popu-lation parameter) 或者群體典型值 ( population typical value)，群體典型值表征目標(biāo)群體的整體特征，用于表述整個(gè)群體的平均狀態(tài)或者群體典型患者的特

11、征15。2.定量相關(guān)因素( 協(xié)變量)：協(xié)變量是指對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)產(chǎn)生影響的因素，包括生理因素( 例如年齡、性別、種族、基因型、體重、體表面積、胖瘦等) ，病理因素( 例如疾病狀態(tài)、并發(fā)癥、肝腎功能狀況等) ，藥物 藥物相互作用和藥物 食物相互作用，以及其他因素( 晝夜節(jié)律等) 。協(xié)變量可以指證個(gè)體與群體的差別，個(gè)體是多個(gè)“亞群體”疊加的結(jié)果，而不同“亞群體”是不同協(xié)變量的集合。因此，定量研究協(xié)變量以將研究從群體水平深入到個(gè)體水平，預(yù)測(cè)個(gè)體的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)行為特征。3估算藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)參數(shù)的隨機(jī)變異群體藥代動(dòng)力學(xué)中的隨機(jī)變異包括個(gè)體間變異(inter-individual varia

12、bility，IIV或者between-subject variability，BSV) 、周期間變異( inter-occasion variability，IOV 或者 between-occasion variability，BOV) 和個(gè)體內(nèi)變異(intra-individual variability) 或稱(chēng)殘差變異( residual variability) ，與隨機(jī)因素相關(guān)。這類(lèi)因素確定存在，但卻未知和無(wú)法測(cè)量16。個(gè)體間變異是指不同個(gè)體間的差異，協(xié)變量是導(dǎo)致個(gè)體間變異的主要來(lái)源。周期間變異是指同一個(gè)體在不同試驗(yàn)周期中的差異，與試驗(yàn)設(shè)計(jì)相關(guān)。個(gè)體內(nèi)變異或者殘差變異是指同一個(gè)體在

13、不同時(shí)間或者重復(fù)試驗(yàn)時(shí)依然存在的差異，與測(cè)定誤差、模型偏倚或者劑量誤差等相關(guān)。在群體藥代動(dòng)力學(xué)中，所有變異都用百分?jǐn)?shù)( %) 表示。4 發(fā)掘隱藏在臨床數(shù)據(jù)中的科學(xué)規(guī)律藥物研發(fā)和臨床應(yīng)用過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的數(shù)據(jù)，傳統(tǒng)藥代動(dòng)力學(xué)方法從中獲得的知識(shí)有限。基于大量臨床數(shù)據(jù)的群體藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)模型，統(tǒng)計(jì)學(xué)模型，圖形等方法的應(yīng)用，可以充分發(fā)掘隱藏在臨床數(shù)據(jù)中的科學(xué)規(guī)律，為藥物研發(fā)和藥物治療的決策提供理論依據(jù)。（三）群體藥代動(dòng)力學(xué)的優(yōu)勢(shì)1.與傳統(tǒng)藥代動(dòng)力學(xué)相比，群體藥代動(dòng)力學(xué)的應(yīng)用更加廣泛，其數(shù)據(jù)類(lèi)型可以是富集數(shù)據(jù)，也可以是稀疏數(shù)據(jù)，適用于治療藥物監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，以及臨床難以采樣的特殊患者，包括兒童、孕婦、腫瘤

14、患者等。稀疏數(shù)據(jù)同樣可以作為有效信息納入到藥物研究中，提供藥物的相關(guān)信息。另一方面，群體藥代動(dòng)力學(xué)可以進(jìn)行多個(gè)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的集合研究，將樣本量有限的多個(gè)不同試驗(yàn)設(shè)計(jì)的臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行集合分析，獲得更為豐富的信息與知識(shí)。此外，群體藥代動(dòng)力學(xué)可以對(duì)不同試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)進(jìn)行模型仿真，模擬臨床試驗(yàn); 可以明確藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)變異性，優(yōu)化給藥方案; 通過(guò)群體模型進(jìn)行試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)和劑量選擇; 研究藥物-藥物/食物相互作用，分析藥物相互作用的機(jī)理; 可以進(jìn)行種屬間外推; 可以明確不同種屬間的差異大小; 充分發(fā)掘藥物研發(fā)中各期臨床試驗(yàn)的藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)科學(xué)規(guī)律12。2.清除率概念在藥代動(dòng)力學(xué)中的應(yīng)用 藥物從人體

15、內(nèi)清除是多途徑的。通常是以腎清除和肝清除為主。當(dāng)一個(gè)藥物經(jīng)主要的代謝途徑消除時(shí)，病人間消除的個(gè)體差異是普遍存在的。藥物主要以腎排泄消除時(shí)，則肌醉清除率以及血清肌醉濃度可用于評(píng)價(jià)病人的腎功能，并可以用來(lái)估算藥物的清除率(C1)和半衰其( t1/2 )，因?yàn)槟I清除直接與肌醉清除率(Clcr)成正比: K=aClcr+knr (1) 用K對(duì)Clcr作圖可以得到一條直線。 血清肌醉濃度Cc與肌醉清除率又有以下關(guān)系:Cc=PR/Clcr (2)根據(jù)（1）（2）式可獲得K=aPR / Cc +knr (3)由于K=0.693/t1/2,可以獲得t1/2與肌酐濃度的雙倒數(shù)關(guān)系式【】，K=aPR /0.693

16、Cc +knr/0.693 (4)式中PR為內(nèi)源性肌酐生成速度，knr為腎消除速率常數(shù)，a為系數(shù)。 病人的血清肌酐濃度與年齡，性別，體重等個(gè)體信息有關(guān)系，Jone，和Perrier導(dǎo)出它們間的關(guān)系式Clcr=bw (144一Y)/ 71G (5) 式中bw為體重(kg). y為年齡(歲)，對(duì)于女性則上式右邊乘以0.85為其肌醉清除率Clcr。 因此一旦直接測(cè)出血清肌醉濃度，估算出肌醉清除率。就可以得到藥物的消除速率常數(shù)(K)或C1。確定K和Cl參數(shù)后，就可以計(jì)算維持劑量和負(fù)荷劑量，為實(shí)現(xiàn)給藥方案?jìng)€(gè)體化提供依據(jù)。3主要的估算群體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方法3.1 NPD法(單純聚集法)一組受試者服用某藥

17、后，分別在相同時(shí)間點(diǎn)采血樣，測(cè)定血藥濃度，取其平均值，然后再用藥代模型進(jìn)行c-t曲線擬合，求算出各項(xiàng)藥代動(dòng)力參數(shù)。本法不足之處:(1)不能反映個(gè)體間變異 (2)參數(shù)估算值比較粗略。3.2 TS法(二步法)對(duì)一組受試者的各個(gè)c-t數(shù)據(jù)進(jìn)行。c-t曲線擬合，求算出各項(xiàng)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，再求算其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。本法優(yōu)于NPD法:(1)參數(shù)反映出個(gè)體間變異;(2)個(gè)體間變異不僅來(lái)源于生物學(xué)，也來(lái)原于方法學(xué)的誤差;(3)由于前二個(gè)原因，其個(gè)體間變異往注比NONMEM法高。3.3 NONMEM法(一步法) 為采用線性混合效應(yīng)模型(nonlinear mixed effect model)的一步法.本法既優(yōu)于

18、NPD法又優(yōu)于TS法，(1)病例數(shù)多，代表性強(qiáng)，采血點(diǎn)少(2-3點(diǎn))，臨床易于接受，(3)不同年齡，病理分組區(qū)別，所得參數(shù)更能反映生理病理因素的影響，對(duì)臨床給藥方案?jìng)€(gè)體化有幫助。該方法主要包括以下幾個(gè)步驟：確定藥代動(dòng)力學(xué)模型根據(jù)某藥已知的確定統(tǒng)計(jì)模型預(yù)測(cè)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)用兩點(diǎn)實(shí)測(cè)血藥濃度計(jì)算實(shí)際藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。4群體藥代動(dòng)力學(xué)的應(yīng)用 曾衍霖曾在國(guó)臨床藥理雜志上介紹了群體藥代動(dòng)力學(xué)及其參數(shù)三種估算方法。以后陳剛，夏東亞和李珍等發(fā)表了一些研究結(jié)果，與傳統(tǒng)方法比較，有更好的參數(shù)估算能力，而且能處理臨床藥物監(jiān)測(cè)中收集的非均勻的零散血藥濃度數(shù)據(jù)，便于開(kāi)展臨床藥學(xué)研究，其研究可歸納以下方面:(1)群體藥代動(dòng)

19、力學(xué)參數(shù)結(jié)合個(gè)體血藥濃度的反饋,得到病入個(gè)體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，以?xún)?yōu)化給藥方案，指導(dǎo)個(gè)體化用藥.如應(yīng)用C1,Vd,K等參數(shù)，估算維持劑量(Do)和負(fù)荷量(Do),在連續(xù)給藥方案中利用C1, Vd, K等參數(shù)，確定或預(yù)測(cè)隱態(tài)濃度，確定給藥時(shí)間間隔。(3)國(guó)外已有商品軟件如NONMEM程序可應(yīng)用，如無(wú)軟件，自行計(jì)算也很簡(jiǎn)便 (4)從文獻(xiàn)來(lái)看國(guó)外在群體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)估算方面有一定的成功經(jīng)驗(yàn)，如地高辛，慶大霉素，卡那霉素和5一Fu等。國(guó)內(nèi)也有成功的經(jīng)驗(yàn)，如茶堿，丁胺卡那霉素及其他氨基糖類(lèi)抗生素5、群體藥代動(dòng)力學(xué)研究主要對(duì)象遺傳因素對(duì)藥物代謝動(dòng)力學(xué)影響的研究是以闡明藥物代謝的個(gè)體差異及種族差異的規(guī)律為目的的

20、，以利臨床實(shí)施個(gè)體化藥物抬療及不同種族患者臨床用藥方案的調(diào)整。藥代動(dòng)力學(xué)與藥效動(dòng)力學(xué)的相關(guān)性研究該項(xiàng)研究除探索相關(guān)性的規(guī)律、治療血藥濃度范圍、中毒濃度外，還應(yīng)確定是否納入臨床治療藥物監(jiān)測(cè)的范疇，從而進(jìn)一步提供安全、有效用藥依據(jù)。6、群體藥代動(dòng)力學(xué)研究對(duì)象以及分析方法的建立和驗(yàn)證臨床藥物動(dòng)力學(xué)研究的生物樣品一般為全血、血清、血漿或尿液，具有取樣量少、藥物濃度低、內(nèi)源性物質(zhì)干擾大(如激素、維生素、膽汁以及可能同服的其他藥物)、個(gè)體的差異大等原因，因此必須根據(jù)待測(cè)物的結(jié)構(gòu)、生物樣品來(lái)源和預(yù)期的濃度范圍，建立靈敏、專(zhuān)一、精確的生物分析方法，并經(jīng)驗(yàn)證后才能用于臨床試驗(yàn)群體模型。6.1生物樣品分析方法目前

21、常用的幾種分析方法有:(1)色譜法:氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法(LC一MS、LC一MS一MS，Gc一Ms，Gc一Ms一MS)等，可用于大多數(shù)藥物的檢測(cè);(2)免疫學(xué)方法:放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法等，多用于蛋白質(zhì)多肽類(lèi)物質(zhì)檢測(cè);(3)生物側(cè)定和微生物學(xué)方法。分析一般首選色譜法，如HpLC、Gc法或Lc一MS、Gc一Ms法，這類(lèi)方法靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性一般都能適應(yīng)臨床藥代研究的需要，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室也具備條件，因此應(yīng)用最廣。6.2方法學(xué)驗(yàn)證為了保證分析方法可靠，一般應(yīng)進(jìn)行以下兒方面的考察:(l)特異性;特異性是指在樣品中存在干擾成分的情況下，分

22、析方法能夠準(zhǔn)確、專(zhuān)一地測(cè)定分析物的能力。必須證明所測(cè)定物質(zhì)是受試藥品的原形藥物或特定活性代謝物、內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)代謝物、降解產(chǎn)物無(wú)千擾。如生物樣本分析法為色譜法，應(yīng)至少提供空白生物樣品、空白生物樣品加入標(biāo)準(zhǔn)品及服藥后生物樣品的色譜圖，以反映分析方法的特異性。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍:標(biāo)準(zhǔn)曲線反映了所測(cè)定物質(zhì)濃度與儀器響應(yīng)值之間的關(guān)系，一般用回歸分析方法(如用加權(quán)最小二乘法)所得的回歸方程來(lái)評(píng)價(jià)。應(yīng)提供標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程和相關(guān)系數(shù)，說(shuō)明其線性相關(guān)程度。標(biāo)準(zhǔn)曲線高低濃度范圍為線性范圍，在線性范圍內(nèi)濃度測(cè)定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗(yàn)要求的精密度和準(zhǔn)確度。(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品:在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用

23、于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。不同生物樣品應(yīng)配制標(biāo)準(zhǔn)樣品制備各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度個(gè)數(shù)取決于分析物可能的濃度范圍和分析物/響應(yīng)值關(guān)系的性質(zhì)。應(yīng)使用與待測(cè)樣品相同生物介質(zhì)，一般用6一8個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)于非線性相關(guān)可能需要更多濃度點(diǎn)。線性范圍要能覆蓋全部待側(cè)的生物樣品濃度范圍，不得用線性范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)隨行空白生物樣品，但計(jì)算時(shí)不包括該點(diǎn)，僅用于評(píng)價(jià)干擾。(4)精密度與準(zhǔn)確度:精密度是指在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測(cè)量值的分散程度。通常用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)來(lái)考察方法的精確度

24、。一般RSD應(yīng)小于巧%，在定量下限(LowerLi而t可quantitation，LLOQ)附近RSD應(yīng)小于20%。準(zhǔn)確度是指在確定的分析條件下，測(cè)得的生物樣品濃度與真實(shí)濃度的接近程度(即質(zhì)控樣品的實(shí)測(cè)濃度與真實(shí)濃度的偏差)，重復(fù)測(cè)定己知濃度分析物樣品可獲得準(zhǔn)確度。一般應(yīng)在85%-110%范圍內(nèi)(一般偏差應(yīng)少于10%)，在LLOQ附近應(yīng)在80%120%范圍內(nèi)。一般要求選擇3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇在定量下限(LLoQ)附近，其濃度在LoQ的3倍以?xún)?nèi);高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限。每一濃度至少測(cè)定5個(gè)樣品。(4)定量下限(LowerLtofquantitatio

25、n，LLoQ):定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，表示淵定樣品中符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低藥物濃度。LLOQ應(yīng)能滿足側(cè)定35個(gè)消除半衰期時(shí)樣品中的藥物濃度或能檢測(cè)出Cmax的1/101/120時(shí)的藥物濃度。其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實(shí)濃度的80%-120%范圍內(nèi)，RSD應(yīng)小于20%。(5)樣品穩(wěn)定性:含藥生物樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時(shí)間進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時(shí)間。以及考察儲(chǔ)備液的穩(wěn)定性和樣品處理后的穩(wěn)定性。(6)提取回收率:從生物樣本樣品中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值除以純標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為分析物的提取回收率。也可以說(shuō)是將供試生物樣品中分析物提取出來(lái)供分析的比例。實(shí)驗(yàn)

26、應(yīng)該考察高、中、低3個(gè)濃度的提取回收率，應(yīng)當(dāng)獲得一致、精密和可重現(xiàn)的回收率。(7)方法學(xué)質(zhì)控:在測(cè)定生物樣品中的藥物濃度時(shí)應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制。一般做法是在每批樣品測(cè)定時(shí)應(yīng)同時(shí)制備空白、低、中、高4份質(zhì)控(標(biāo)準(zhǔn)濃度)樣品或隨行制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法進(jìn)行方法學(xué)質(zhì)控研究。質(zhì)控樣品系將已知量的待測(cè)藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于監(jiān)測(cè)生物分析方法的效能和評(píng)價(jià)每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。應(yīng)在生物樣品分析方法確證完成之后開(kāi)始測(cè)試未知樣品。推薦由獨(dú)立的人員配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)分析方法進(jìn)行考核。每個(gè)分析批生物樣品測(cè)定時(shí)應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于20%。每個(gè)濃度至少雙樣本。質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于20%，低濃度點(diǎn)偏差一般應(yīng)小于20%，最多允許不在同一濃度的質(zhì)控樣品結(jié)果超限。(8)徽生物學(xué)和免疫學(xué)分析:上述原則基本適用于生物學(xué)和微生物學(xué)或免疫學(xué)分析，但在方法確證中應(yīng)考慮到其特殊性。微生物學(xué)或免疫學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線本質(zhì)上是非線性的。結(jié)果的準(zhǔn)確度是關(guān)鍵的因素。分析數(shù)據(jù)的報(bào)告臨床報(bào)告中至少應(yīng)當(dāng)包括:(l)方法建立數(shù)