菌種擴大和培養(yǎng).ppt

1、2. 生物工業(yè)菌種與種子擴大培養(yǎng),2.1 工業(yè)生產常用的微生物及要求 2.2 工業(yè)微生物菌種的衰退、復壯與保藏 2.3 工業(yè)微生物菌種的選育 2.4 生產菌種的改良 2.5 種子擴大培養(yǎng),本節(jié)思考題,1、什么是自然選育？自然選育（自然分離）的一般程序是什么,2. 3工業(yè)微生物菌種的選育,一、微生物菌種的自然選育 在生產過程中，不經過人工處理，利用菌種的自然突變而進行菌種篩選的過程叫做自然選育,自然選育是一種簡單易行的選育方法，它可以達到純化菌種，防止菌種衰退、穩(wěn)定生產、提高產量的目的。但是自然選育的最大缺點是效率低、進展慢。因此，經常把自然選育和誘變育種交替使用，這樣可以收到良好的效果。 自然

2、選育（自然分離）的一般程序，是把菌種制備成單孢子懸浮液，經過適當的稀釋以后，在固體平板上進行分離，挑取部分單菌落進行生產能力的測定，經反復篩選，以確定生產能力更高的菌株代替原來的菌株,在過去40年間曾篩選出許多產生新的有用的次級代謝物的菌種。這些菌種多半是以經驗式的篩選方法獲得的。大多數的抗生素均由放線菌綱產生,前述介紹放線菌綱為主的分離方法原理和發(fā)展,選擇性分離方法大致可分為五個步驟： 含微生物材料的選擇；材料的預處理；所需菌種的分離；培養(yǎng)；菌落的選擇和純化,小結：菌種的分離簡介,一、菌種的來源 根據資料直接向有科研單位、高等院校、工廠或菌種保藏部門索取或購買； 從大自然中分離篩選新的微生物

3、菌種,二、分離思路,新菌種的分離是要從混雜的各類微生物中依照生產的要求、菌種的特性，采用各種篩選方法，快速、準確地把所需要的菌種挑選出來。 實驗室或生產用菌種若不慎污染了雜菌，也必須重新進行分離純化。 有了優(yōu)良的菌種，還要有合適的工藝條件和合理先進的設備與之配合,定方案：首先要查閱資料，了解所需菌種的生長培養(yǎng)特性。 采樣：有針對性地采集樣品。 增殖：人為地通過控制養(yǎng)分或培養(yǎng)條件，使所需菌種增殖培養(yǎng)后，在數量上占優(yōu)勢。 分離：利用分離技術得到純種。 發(fā)酵性能測定：進行生產性能測定。這些特性包括形態(tài)、培養(yǎng)特征、營養(yǎng)要求、生理生化特性、發(fā)酵周期、產品品種和產量、耐受最高溫度、生長和發(fā)酵最適溫度、最適

4、pH值、提取工藝等,三、新種分離與篩選的步驟,菌種篩選主要步驟,調查研究及查閱充分的資料 設計實驗方案 確定采集樣品的生態(tài)環(huán)境 采樣 確定特定的增殖條件 增殖培養(yǎng) 確定特殊的選擇培養(yǎng)基及可能的 定性或半定量快速檢出法 平板分離,原種斜面 確定發(fā)酵培養(yǎng)基礎條件 篩選 初篩（1株1瓶） 復篩（1株35瓶） 結合初步工藝條件摸索 再復篩（1株35瓶） 35株 單株純種分離 生產性能試驗 毒性試驗菌種鑒定,一）采樣,1、采樣對象 以采集土壤為主。 一般園田土和耕作過的沼澤土中，以細菌和放線菌為主；富含碳水化合物的土壤和沼澤地中，酵母和霉菌較多，如一些野果生長區(qū)和果園內。 采樣的對象也可以是植物，腐敗物

5、品，某些水域等,從自然界篩選,2、采樣季節(jié)：以溫度適中，雨量不多的秋初為好。 3、采土方式：在選好適當地點后，用小鏟子除去表土，取離地面5-15cm處的土約10g，盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中，扎好，標記，記錄采樣時間、地點、環(huán)境條件等，以備查考。為了使土樣中微生物的數量和類型盡少變化，宜將樣品逐步分批寄回，以便及時分離,二）增殖培養(yǎng),為了容易分離到所需的菌種，讓無關的微生物至少是在數量上不要增加，可以通過配制選擇性培養(yǎng)基，選擇一定的培養(yǎng)條件來控制。 例如碳源利用的控制，可選定糖，淀粉、纖維素，或者石油等，以其中的一種為唯一碳源，那么只有利用這一碳源的微生物才能大量正常生長，而其它微生物就可能死亡或淘汰。這樣對下階段的純種分離就會順利得多,三）培養(yǎng)分離,盡管通過增殖培養(yǎng)效果顯著，但還是處于微生物的混雜生長狀態(tài)。因此還必須分離，純化。在這步，增殖培養(yǎng)的選擇性控制條件還應進一步應用，而且控制得細一點，好一點。純種分離的方法有劃線分離法、稀釋分離法,平皿劃線分離法 a. 連續(xù)劃線分離法 b. 分區(qū)劃線分離法,四）篩 選,這一步是采用與生產相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，通過三角瓶的容量進行小型發(fā)酵試驗，以求得適合于工業(yè)生產用菌種,五）毒性試驗,自然界的一些微生物是在一定條件下產毒的，將其作為生產菌種應當十分當心，尤其與食品工業(yè)有關的菌種，更應慎重。據有的國家規(guī)定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、