(最新整理)SDS-PAGE蛋白電泳分析

1、(完整)sds-page 蛋白電泳分析(完整)sds-page 蛋白電泳分析 編輯整理：尊敬的讀者朋友們：這里是精品文檔編輯中心，本文檔內(nèi)容是由我和我的同事精心編輯整理后發(fā)布的，發(fā)布之前我們對文中內(nèi)容進(jìn)行仔細(xì)校對，但是難免會有疏漏的地方，但是任然希望（(完整)sds-page 蛋白電泳分析）的內(nèi)容能夠給您的工作和學(xué)習(xí)帶來便利。同時也真誠的希望收到您的建議和反饋，這將是我們進(jìn)步的源泉，前進(jìn)的動力。本文可編輯可修改，如果覺得對您有幫助請收藏以便隨時查閱，最后祝您生活愉快 業(yè)績進(jìn)步，以下為(完整)sds-page 蛋白電泳分析的全部內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)二 sdspage 蛋白電泳分析一、 目的掌握 sds-p

2、age 電泳原理與方法二、 電泳原理 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺 （簡稱 acr） 和交聯(lián)劑 n，n亞甲基雙丙烯酰胺（簡稱 bis）在催化劑作用下，聚合交聯(lián)而成的具有網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)的凝膠,并以此為支持物進(jìn)行電泳。 聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據(jù)不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷的差異及分子大小的不同所產(chǎn)生的不同遷移率將蛋白質(zhì)分離成若干條帶，如果分離純化的樣品中只含有同一種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)樣品電泳后，就應(yīng)只分離出一條區(qū)帶。 sds 是一種陰離子表面活性劑能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此，各種蛋白質(zhì)

3、-sds 復(fù)合物在電泳時的遷移率,不再受原有電荷和分子形狀的影響，而只是棒長的函數(shù)。這種電泳方法稱為 sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳（簡稱 sds-page）.由于 sds-page 可設(shè)法將電泳時蛋白質(zhì)電荷差異這一因素除去或減小到可以略而不計(jì)的程度，因此常用來鑒定蛋白質(zhì)分離樣品的純化程度，如果被鑒定的蛋白質(zhì)樣品很純，只含有一種具三級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)或含有相同分子量亞基的具四級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì),那么 sds-page 后，就只出現(xiàn)一條蛋白質(zhì)區(qū)帶.三、 試劑配制1 30 丙烯酰胺：將 29g 丙烯酰胺和 1g n,n亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為 60ml 的水中.加熱至 37溶解之，補(bǔ)加水至終體積為 100m

4、l。用過濾器（0.45m 孔徑）過濾除菌,查證該溶液的 ph值應(yīng)不大于 7。0，置棕色瓶中保存于室溫 (丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應(yīng)戴手套和面具?？烧J(rèn)為聚丙烯酰胺無毒,但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作,因?yàn)樗€可能會含有少量未聚合材料)。2 1m triscl： 稱取 12.191g tris 堿溶于 80ml 蒸餾水中,用濃 hcl 調(diào)到所需 ph 值，定容至 100ml。1.5m：tris 堿 18。15g 去離子水 80ml 濃鹽酸調(diào) ph 值 8。8 加去離子水定容至 100ml3 1 m dtt：稱取 3.09 g dtt，加入到 50

5、 ml 塑料離心管內(nèi),加 20 ml 的 0.01 m naoac（ph5。2）,溶解后使用 0.22 mm 濾器過濾除菌適量分成小份后，-20保存.4 10 sds: 20g sds 溶于 200ml 純水中。5 10 過硫酸銨：1g 過硫酸銨溶于 10ml 純水中,現(xiàn)用現(xiàn)配。6 2sds 上樣緩沖液：1.0 mol/l triscl（ph6。8)10ml，10%sds 40ml，50甘油 40ml，0.2g 溴芬藍(lán)，定容至 100ml。7 10tris甘氨酸電泳緩沖液，3g tris 堿和 18.8g 甘氨酸，加入 10ml 10%sds，用去離子水補(bǔ)至100ml,配制成 10tris-甘

6、氨酸電泳緩沖液；取 50ml 10緩沖液，稀釋至 500ml，配制成工作濃度1tris-甘氨酸電泳緩沖液.8 考馬斯亮藍(lán) r250 染色液:1gr250 溶于 250ml 異丙醇、100ml 冰乙酸和 650ml 去離子水的混合液中,過濾去除顆粒狀物.9 脫色液:乙醇/水/冰乙酸分別為 50ml，850ml 和 100ml.四、 實(shí)驗(yàn)方法110分離膠的配制 7ml（小板為 5ml）:按附錄添加適量的試劑，立即倒膠，加水封膠待凝固。2吸干封液的水，倒?jié)饪s膠。3。 5濃縮膠的配制 3ml：按附錄添加適量的試劑，立即倒膠，插入梳子待凝固.3取下梳子，用蒸餾水沖洗梳孔，洗凈其中的殘余膠塊，用濾紙吸干。4將制成的膠放入電泳槽內(nèi),倒入 1甘氨酸電泳緩沖液，觀察不滲漏即可。5取 10l 樣品,加入等體積的 2sds 上樣緩沖液，樣品與蛋白質(zhì) maker 100保溫 5min。6 分別取 10l 上樣，110v 恒壓電泳 23 小時。7 將膠剝下至一平皿中，加入考馬斯亮藍(lán)