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文檔簡介

1、第2節(jié)微生物的純培養(yǎng),1.闡明接種方法。 2.進(jìn)行微生物的分離和培養(yǎng),一,二,一、純培養(yǎng) 人們要研究某種微生物的特性,就要從混雜的樣品中取得所需的純種,或者把受污染的菌種重新分離出來,使該微生物處于純培養(yǎng)狀態(tài)。也就是說,培養(yǎng)物中所有細(xì)胞只是微生物的某一個種或株,它們有著共同的來源,是同一細(xì)胞的后代,一,二,二、微生物的分離與純化 1.基本思路 一般根據(jù)微生物對營養(yǎng)物質(zhì)、pH、氧氣等條件的要求不同,供給它們適宜的生活條件,或加入某種抑制劑,造成只利于要分離的微生物生長、不利于其他微生物生長的環(huán)境,從而淘汰不需要的微生物,分離得到需要的微生物純種。 2.原理 將待檢測微生物樣品通過劃線或涂布接種在

2、固體培養(yǎng)基上,樣品中的每一個細(xì)胞或孢子都可以生長繁殖形成單個菌落。將單個菌落接種到斜面培養(yǎng)基上,經(jīng)培養(yǎng)后,即可得到一個微生物的純種。 3.分離步驟 微生物的分離包括樣品稀釋、劃線或涂布及培養(yǎng)三個步驟,一,二,4.接種方法 劃線或涂布過程包括平板劃線分離法和涂布分離法。常用的劃線方法有平行劃線和連續(xù)劃線兩種,1.平板劃線分離法的操作要點 (1)在操作第一步、每次劃線之前及劃線操作結(jié)束時都要灼燒接種環(huán)。操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時,接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端,從而通過劃

3、線次數(shù)的增加,使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少,以便得到單個菌落;劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境或感染操作者。 (2)在灼燒接種環(huán)之后,要等其冷卻后再進(jìn)行劃線,以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。 (3)在進(jìn)行第二次以及其后的劃線操作時,要從上一次劃線的末端開始劃線。劃線后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落,2.涂布分離法的操作要點 (1)稀釋操作時,注意每次都要使菌液與水充分混勻。操作時,試管口和移液管應(yīng)在距離火焰12 cm處。 (2)涂布平板時的所有操作

4、都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行,同時酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適,吸管頭不要接觸任何其他物體等。 (3)涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿,使涂布均勻。 (4)無菌玻璃涂棒末端浸在盛有體積分?jǐn)?shù)為70%酒精的燒杯中,取出時,要讓多余的酒精在燒杯中滴盡,然后將沾有少量酒精的玻璃涂棒在酒精燈火焰上引燃以滅菌,同時要注意防火。 平板劃線分離法與涂布分離法各有優(yōu)點,二者的目的都是分離得到單個菌落。平板劃線分離法方法簡單,涂布分離法單菌落更易分開,但操作復(fù)雜些,3.對分離純化效果的判斷方法 (1)培養(yǎng)時,要將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基一同培養(yǎng)。未接種的培養(yǎng)基的作用是對照,若其表面有菌落形成,說明培養(yǎng)基滅菌不徹底,需要重新進(jìn)行實

5、驗。 (2)如果對照培養(yǎng)基上無菌落形成,可觀察接種后的培養(yǎng)基。如果培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落呈白色,為圓形,光滑且有光澤,邊緣整齊,則說明接種成功;如果出現(xiàn)了其他顏色、形狀的菌落,說明有雜菌,需要重新進(jìn)行分離純化。 規(guī)律總結(jié)培養(yǎng)時間不同,菌落大小會不同,因為時間越長,菌落中細(xì)菌繁殖越多,菌落體積越大;培養(yǎng)時間越長,菌落數(shù)可能會增多,但已有的菌落分布位置應(yīng)相同,題型一,題型二,接種操作的注意事項 【例題1】 下列有關(guān)平板劃線操作的敘述,不正確的是 () A.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 B.每次劃線前,灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上的菌種 C.在第二區(qū)域內(nèi)劃

6、線時,接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液 D.劃線結(jié)束后,灼燒接種環(huán),能及時殺死接種環(huán)上的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境或感染操作者 解析:在第二區(qū)域內(nèi)劃線時,接種環(huán)上的菌種來源于第一次劃線的末端。 答案:C,題型一,題型二,對特定微生物的分離純化 【例題2】 有些細(xì)菌可分解原油,從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。請回答下列問題。 (1)在篩選過程中,應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上,從功能上講,該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。 (2)純化菌種時,為了得到單菌落,常采用的接種方法有兩種,即和。 (3)為了篩選出高效菌株,可比較單菌落周圍分解圈的大

7、小,分解圈大說明該菌株的降解能力,題型一,題型二,4)通常情況下,在微生物培養(yǎng)過程中,實驗室常用的滅菌方法有火焰滅菌、和。無菌技術(shù)要求實驗操作應(yīng)在酒精燈附近進(jìn)行,以避免周圍環(huán)境中微生物的污染,題型一,題型二,解析:(1)要獲得分解原油的細(xì)菌,應(yīng)選擇以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基,以保證這種細(xì)菌可以大量繁殖,而其他細(xì)菌不能生存。此種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)純化菌種常用平板劃線分離法和涂布分離法。(3)在以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基上,菌落周圍的原油被分解而形成分解圈,分解圈越大,說明該菌株降解能力越強(qiáng)。(4)實驗室滅菌的方法有火焰滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法,實驗操作要在酒精燈火焰附近的無菌區(qū)進(jìn)行。

8、 答案:(1)原油選擇(2)平板劃線分離法涂布分離法(3)強(qiáng)(4)干熱滅菌高壓蒸汽滅菌法火焰,1,2,3,1.涂布分離法是微生物培養(yǎng)中的一種常用的接種方法。下列相關(guān)敘述錯誤的是() A.操作中需要將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋 B.需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面 C.不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落 D.操作過程中,培養(yǎng)基和涂布器等均需進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理 答案:C 解析:涂布分離法是將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面,在適宜條件下培養(yǎng)。只有用稀釋度足夠高的菌液涂布,聚集在一起的微生物才能在固體培養(yǎng)基表面分散成單個細(xì)胞,從而能

9、在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落,1,2,3,2.為了獲得純度高的大腸桿菌,需要對大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)和分離。培養(yǎng)大腸桿菌一般用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。 (1)培養(yǎng)大腸桿菌時,配制固體培養(yǎng)基的基本流程是稱量_ 加塞和包扎擺斜面及倒平板。 (2)稱量時,由于牛肉膏比較黏稠,可以用玻璃棒挑取,放在稱量紙上稱量。由于牛肉膏和蛋白胨,稱量時動作要迅速,稱后要及時蓋上瓶蓋。 (3)在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上大腸桿菌能生長,說明培養(yǎng)基含有等大腸桿菌生長所需的營養(yǎng)要素。 (4)微生物純化培養(yǎng)可以通過多種接種方法,如和等,使大腸桿菌在固體培養(yǎng)基上形成單個,從而獲得純菌株,1,2,3,答案:(1)溶化調(diào)pH分裝滅菌 (2

10、)容易吸潮 (3)碳源、氮源、無機(jī)鹽、水 (4)平板劃線分離法涂布分離法菌落,1,2,3,3.分析下表所示培養(yǎng)基的配方,回答下面的問題,1,2,3,1)在該培養(yǎng)基的配方中,為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是和。 (2)按物理狀態(tài)劃分該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基,理由是培養(yǎng)基中含有。 (3)由于培養(yǎng)基中只有尿素一種源,所以該培養(yǎng)基只能用于能夠合成脲酶(可催化尿素分解)的微生物的培養(yǎng)。將土壤浸出液涂布在此培養(yǎng)基平板上能夠從土壤中篩選出的細(xì)菌。 (4)在微生物學(xué)中,將允許特定種類的微生物生長,并能抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基,稱作培養(yǎng)基,1,2,3,答案:(1)葡萄糖尿素 (2)固體瓊脂(凝固劑) (3)氮分解尿素 (4)選擇 解析:(1)碳源是為微生物的生長提供碳元素的物質(zhì),氮源是提供氮元素的物質(zhì),所以該培養(yǎng)基的碳源是葡萄糖,氮源是尿素

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