細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)介

1、,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)介,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室組成 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備配置 常用器皿、器械 實(shí)驗(yàn)室操作注意事項(xiàng),大綱,細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)是由工作的目的和規(guī)模決定的， 其基本要求是：便于隔離、便于操作、便于滅菌、便于觀察。 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置必須滿足三個(gè)基本的需要，即：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備（培養(yǎng)基配制，洗滌與滅菌等）、無(wú)菌操作、控制培養(yǎng)。,一.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室組成,基本組成：,基本實(shí)驗(yàn)室 消毒準(zhǔn)備室 制備室 無(wú)菌操作室 輔助實(shí)驗(yàn)室 細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室 生化分析室 攝影室及暗室,消毒準(zhǔn)備室 制備室 無(wú)菌操作室,1.基本實(shí)驗(yàn)室：,消毒準(zhǔn)備室 功能 一切與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的準(zhǔn)備工作 要求 設(shè)備的安裝和排列要合理 房間要寬敞明亮

2、，通風(fēng)條件好 地面要便于清潔、防滑 配備 實(shí)驗(yàn)臺(tái)，高壓滅菌鍋、排風(fēng)滅火設(shè)備、 超聲波清洗器、洗瓶機(jī)等。,制備室 功能 進(jìn)行培養(yǎng)液及相關(guān)試劑的配制 要求 在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)過(guò)濾、除菌。 配備 冰箱、天平、真空泵、PH計(jì)等。,無(wú)菌操作室 地面、天花板及四壁盡可能光潔，無(wú)死角，易于清潔。 大小適度，層高不高于2.5米。 干爽、安靜、清潔、明亮。 紫外燈12盞，保持室內(nèi)無(wú)菌狀態(tài)。,無(wú)菌操作室 設(shè)置空氣過(guò)濾和恒溫恒濕裝置，恒溫溫度26度左右。相對(duì)濕度控制在30-65%。 保持正壓，盡量減少與外界的空氣對(duì)流，減少塵埃與微生物侵入。 通常由內(nèi)外間組成，外間為緩沖間，用于準(zhǔn)備工作。 研究人員進(jìn)入操作間前要穿上消過(guò)

3、毒的工作服和拖鞋。,無(wú)菌操作,（1）無(wú)菌操作室：無(wú)菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無(wú)菌操作的區(qū)域，最好能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。 理想的無(wú)菌操作室應(yīng)劃為三部分： a) 更衣室供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。 b) 緩沖間位于更衣間與操作間之間，目的是為了保證操作間的無(wú)菌環(huán)境。 c) 無(wú)菌操作間專用于無(wú)菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。其大小要適當(dāng)，且其頂部不宜過(guò)高（不超過(guò)2.5m）以保證紫外線的有效滅菌效果；墻壁光滑無(wú)死角以便清潔和消毒。工作臺(tái)安置不應(yīng)靠墻壁，臺(tái)面要光滑壓塑作表面，漆成白色或灰色以利于酚紅,顯示pH的觀察。 無(wú)菌操作間的空氣消毒： 紫外線燈產(chǎn)生臭氧，并且室內(nèi)溫度及濕度均較高，不利于工作

4、人員健康。 空氣過(guò)濾的恒溫恒濕裝置最好 無(wú)臭氧紫外線消毒器 電子消毒滅菌器在高壓電場(chǎng)作用下，電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強(qiáng)氧化劑，能同細(xì)菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進(jìn)行氧化分解反應(yīng)，從而靠臭氧氣體彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌之目的，消毒時(shí)沒有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需3040min即能自行還原成氧氣，空氣不留異味，消毒物體表面不留殘毒。,細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能進(jìn)行五方面的工作： 無(wú)菌操作 制備 清洗 消毒滅菌處理 儲(chǔ)藏,二.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置,三.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備配置,基本設(shè)備 滅菌設(shè)備 無(wú)菌操作設(shè)備 細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備 細(xì)胞學(xué)鑒定設(shè)備,冰箱 天平 酸度計(jì) 恒溫

5、水浴鍋 磁力攪拌器 液氮罐 純水設(shè)備,1.基本設(shè)備,PH 7.07.4去離子水無(wú)菌,高溫電子滅菌爐 蒸汽式壓力滅菌鍋 過(guò)濾滅菌裝置 噴霧消毒器 紫外燈,2.滅菌設(shè)備,0.45 m0.22 m,生物安全柜,3.無(wú)菌操作設(shè)備,生物安全柜 根據(jù)主要幾項(xiàng)生物安全柜國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，安全柜可分為一級(jí)、二級(jí)和三級(jí)三大類以滿足不同生物研究和防疫的要求。安全柜的分類級(jí)別與生物安全登記無(wú)關(guān)。,一級(jí)生物安全柜 保護(hù)工作人員和環(huán)境，而不保護(hù)樣品。 排氣口安裝有HEPA過(guò)濾器。 無(wú)自帶風(fēng)機(jī)，依賴外接通風(fēng)管中的風(fēng)機(jī)帶 動(dòng)氣流。,二級(jí)生物安全柜 可提供對(duì)樣品，環(huán)境，工作人員的保護(hù)。 排氣口安裝有HEPA過(guò)濾器，獨(dú)有特征是具

6、有垂直層狀薄片（無(wú)定向的）HEPA過(guò)濾器。 內(nèi)置風(fēng)機(jī)，形成下沉氣流 無(wú)自帶風(fēng)機(jī)，依賴外接通風(fēng)管中的風(fēng)機(jī)帶 動(dòng)氣流。,三級(jí)生物安全柜 為34級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全等級(jí)而設(shè)計(jì)，柜體完全氣閉。 通過(guò)手套進(jìn)行操作，俗稱“手套箱”。 實(shí)驗(yàn)品通過(guò)雙門的傳遞箱進(jìn)出。 適用于高風(fēng)險(xiǎn)的生物實(shí)驗(yàn)。,CO2培養(yǎng)箱 離心機(jī),4.細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備,溫度：370.5CO2濃度：5%相對(duì)濕度：100%定期清洗、消毒,罐內(nèi)壓力指示,接培養(yǎng)箱的管子,輸出壓力指示,壓力調(diào)節(jié)旋鈕,流量控制閥門,5.細(xì)胞學(xué)鑒定設(shè)備,倒置顯微鏡 熒光顯微鏡 酶標(biāo)檢測(cè)儀 流式細(xì)胞儀,四.常用器皿、器械,培養(yǎng)器皿 移液器 特殊用具,移液器 電動(dòng)移液器 微量移液器 多通道微量移液器,特殊用具 細(xì)胞篩網(wǎng)、細(xì)胞刮刀、細(xì)胞計(jì)數(shù)板,五.實(shí)驗(yàn)室操作注意事項(xiàng),做好實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備，避免反復(fù)進(jìn)出而增加污染機(jī)會(huì) 進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室前需更換工作服,換鞋并洗凈、消毒雙手。 注意無(wú)菌室內(nèi)的紫外燈 室內(nèi)常規(guī)用品不準(zhǔn)隨意拿出室外，所有物品不得挪作它用,冰