藥物的雜質(zhì)檢查_(kāi)__藥物分析

1、第三章藥物的雜質(zhì)檢查,藥物分析教研室,Test for purity,Contents,第一節(jié) 概述,一、藥物純度的概念與要求,1. 純度（Purities）藥物的純凈程度,2. 雜質(zhì) (Impurities) 藥物中存在的無(wú)治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對(duì)人體健康有害的物質(zhì)。,需綜合考慮藥物的外觀性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定,綜合評(píng)定。,3. 藥物純度與試劑純度,第一節(jié) 概述,共同點(diǎn)均規(guī)定所含雜質(zhì)的種類(lèi)和限量.,不同點(diǎn),藥物純度從用藥安全、有效和對(duì)藥物穩(wěn)定性等方面考慮,只有合格品和不合格品. 試劑純度是從雜質(zhì)可能引起的化學(xué)變化對(duì)使用的影響以及試劑的使用范圍和使用目的加以規(guī)定,它

2、不考慮雜質(zhì)對(duì)生物體的生理作用及毒副作用.,化學(xué)試劑一般分為4個(gè)等級(jí)基準(zhǔn)試劑、優(yōu)級(jí)純或特種試劑(光譜純、色譜純、農(nóng)藥殘留檢測(cè)級(jí))、分析純和化學(xué)純,化學(xué)試劑不能代替藥品！,第一節(jié) 概述,二、雜質(zhì)的來(lái)源與種類(lèi),雜質(zhì)的來(lái)源,生產(chǎn) 過(guò)程,儲(chǔ)藏 過(guò)程,1.合成過(guò)程：原料不純或反應(yīng)不完全，中間體、副產(chǎn)物在精制中未除盡 2.制劑過(guò)程 3.生產(chǎn)過(guò)程：試劑、溶劑、還原劑殘留 4.異構(gòu)體、多晶體 5.使用的金屬器皿、裝置、工具引入的金屬雜質(zhì),在溫度、濕度、日光、空氣等外界條件影響下，或因微生物的作用，引起藥物發(fā)生水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等變化,第一節(jié) 概述,三、,四、雜質(zhì)的限量(Limi

3、t Test),藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。 通常用百分之幾或百萬(wàn)分之幾 (parts per million, ppm ),注意平行原則,第一節(jié) 概述,第一節(jié) 概述,注意單位統(tǒng)一！,第一節(jié) 概述,示例一 茶苯拉明中氯化物檢查,取本品0.30g 置200 ml量瓶中，加水50ml、氨試液3ml和10%硝酸銨溶液6ml，置水浴上加熱5min，加硝酸銀試液25ml，搖勻，再置水浴上加熱15min，并時(shí)時(shí)振搖，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15min，濾過(guò)，取續(xù)濾液25ml置納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀釋至50ml，搖勻，在暗處放置5min，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液(10g Cl-/ml)1.5

4、 ml制成的對(duì)照液比較，求氯化物的限量。,C=10 g/ml,V=1.5 ml,S=?,對(duì)照法,示例二 腎上腺素上酮體的檢查,第一節(jié) 概述,取本品0.2g,置100ml量瓶中，加鹽酸溶液(9-2000)溶解并稀釋至刻度，搖勻，在310nm處測(cè)定吸光度不得超過(guò)0.05，酮體的百分吸收系數(shù)為435，求酮體的限量,V=100 ml,C=A/E=0.05/435=1.1510-4 g/100ml,S=0.2 g,比較法,習(xí)題一 磷酸可待因中嗎啡的檢查,第一節(jié) 概述,取本品0.10 g，加鹽酸溶液(91000)使溶解成5ml，加亞硝酸鈉試液2ml，放置15min，加氨試液3ml，所顯顏色與嗎啡試液取無(wú)水

5、嗎啡2.0mg，加鹽酸溶液(91000)使溶解成100ml 5.0ml用同一方法制成的對(duì)照液比較，不得更深。問(wèn)限量是多少？,習(xí)題二 苯巴比妥鈉中重金屬的檢查,第一節(jié) 概述,取本品2.0g，加水32ml，溶解后緩緩加入1mol/L鹽酸溶液8ml，充分振搖，靜置數(shù)分鐘，濾過(guò)，取濾液20ml，加酚酞指示液1滴與氨試液恰顯粉紅色，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與水適量成25ml，依法檢查，含重金屬不得超過(guò)10ppm。試計(jì)算應(yīng)取得標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液(每1ml相當(dāng)于10g Pb)的體積。,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,一、氯化物檢查法,供試品,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml,標(biāo)準(zhǔn)溶液,稀HNO31

6、0ml,H2O,AgNO31ml,暗處放置5min (避免AgCl分解),氯化物檢查法,測(cè)定條件 C標(biāo)NaCl = 10g/ml，50ml溶液中含Cl-5080g為宜 HNO3避免碳酸銀、磷酸銀、氧化銀沉淀（10ml/50ml） 先使溶液體積為40ml，再加入硝酸銀 暗處放置 注意事項(xiàng) 供試液渾濁，含硝酸的水洗滌濾紙，再過(guò)濾 供試液若有顏色，可用內(nèi)消色或外消色法 碘的干擾 氨制硝酸銀或升華法 不溶于水的藥物，水溶解過(guò)濾 有機(jī)氯：轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)氯,二、硫酸鹽檢查法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,測(cè)定條件： C標(biāo)K2SO4 = 100g/ml，50ml含100500g SO42-為宜 HCl避免碳酸鋇或

7、磷酸鋇沉淀，2ml HCl/50ml 先使溶液40ml，再加氯化鋇 注意事項(xiàng) ： 供試液渾濁，含HCl的水洗凈濾紙，過(guò)濾 供試液有顏色，內(nèi)消色法,2ml稀HCl/50ml,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,三、鐵鹽檢查法,1. 硫氰酸鐵法 (Ch.P 和USP采用),紅色,4ml稀HCl/50ml，目的？,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,測(cè)定條件： C標(biāo)Fe = 10g/ml，用硫酸鐵銨配制時(shí)加入硫酸防止鐵鹽水解。1050g Fe/50ml 稀HCl：防止Fe3+水解。4ml/50ml 過(guò)硫酸銨：氧化Fe2+成Fe3+，防止硫氰酸鐵見(jiàn)光分解或還原 過(guò)量硫氰酸銨：增加配位離子穩(wěn)定性,注意事項(xiàng)： 稀硝酸：氧

8、化Fe2+成Fe3+，剩余加熱除去（亞硝酸能與硫氰酸根離子生成紅色亞硝酰硫氰化物） 色調(diào)不一致或顏色淺：正丁醇或異戊醇提取，醇層比色 環(huán)狀結(jié)構(gòu)：有機(jī)破壞,2. 巰基醋酸法 (BP采用),第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,紅色,注意： 由于反應(yīng)體系在氨堿性條件下進(jìn)行，為避免氫氧化鐵沉淀，應(yīng)先加入枸櫞酸與鐵離子形成配位離子,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,四、重金屬檢查法 (Pb),1. 第一法 硫代乙酰胺法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,條件： 介質(zhì)：醋酸鹽緩沖液 (pH 3.5) 2ml 試劑：硫代乙酰胺(CH3CSNH2) 2ml 雜質(zhì)對(duì)照液：Pb(NO3)2 (10g/ml) 靈敏度范圍： 1020

9、g / 27ml,黃色至棕黑色混懸液,注意： 供試品有色：加有色溶液或改用第二法 含微量高鐵鹽：加Vc 供試品為鐵鹽：除去 供試品能形成不溶性硫化物：加掩蔽劑,2. 第二法 熾灼后的硫代乙酰胺法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,3.第三法 硫化鈉法,4.第四法 微孔濾膜法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,五、砷鹽檢查法,(一)古蔡氏法 (Gutzeit),黃色,棕色,黑色,+ As2Hg3,2 As(HgBr)3 + AsH3 3AsH(HgBr)2,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,古蔡氏法檢砷器,8cm,有孔玻璃旋塞,導(dǎo)氣管,AsH3發(fā)生瓶,溴化汞試紙,醋酸鉛棉花 (60mg

10、),HCl Zn 粒 碘化鉀試液 酸性氯化亞錫試液,生成砷斑,吸收硫化氫氣體,注意事項(xiàng),砷斑不穩(wěn)定，應(yīng)干燥、避光、立即比較。 有機(jī)結(jié)合態(tài)的砷應(yīng)破壞后檢查（加酸或堿），但溫度應(yīng)低于600C。 供試品若為鐵鹽，能消耗碘化鉀和氯化亞錫，可加酸性氯化亞錫，使高 鐵離子還原后檢查。 供試品（硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽）若在酸性條件下生成硫化氫或二氧化硫，與溴化汞試紙作用生成黑色硫化汞和金屬汞，可先用硝酸處理，使其氧化為硫酸鹽。 銻鹽含量較多時(shí)，可改用白田道夫（Bettendorff）法檢查砷,(二)二乙基二硫代氨基甲酸銀法 Ag(DDC)法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,紅色膠態(tài)銀,目視比色法,510n

11、m 測(cè)定A值,線性范圍：110 g/40ml 含銻藥物不干擾測(cè)定 用于砷鹽的限量檢查和微量砷鹽的含量測(cè)定,(三)次磷酸法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,1) 用于硫化物、亞硫酸鹽以及含銻藥物的砷鹽檢查，不產(chǎn)生干擾。2）靈敏度較古蔡法低。,注意四種砷鹽檢查法生產(chǎn)的產(chǎn)物,古蔡法生成的是黃色至棕色的砷斑 Ag（DDC）法生成的是紅色膠態(tài)銀 白田道夫法生成的是棕褐色的膠態(tài)砷 次磷酸法生成的是棕色的游離砷,六、溶液顏色檢查法有色雜質(zhì) Ch.P采取三種檢查方法： 目視比色法：藥物溶液的顏色標(biāo)準(zhǔn)比色液的顏色 標(biāo)準(zhǔn)比色液：比色用重鉻酸鉀、硫酸銅、氯化鈷+水 分光光度法 某波長(zhǎng)處的吸收度 色差計(jì)法藥物溶液的三刺激

12、值（在給定的三色系統(tǒng)中與待測(cè)色達(dá)到色匹配所需要的三個(gè)原刺激量） 直接比較、與水之間的色差值,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,七、易炭化物檢查法 含義：藥物中易被硫酸（含硫酸94.5%-95.5%，g/g）炭化或氧化而呈色的有機(jī)雜質(zhì) 檢查方法：目視比較法 供試品炭化后，與對(duì)照液（視品種而定）目視比較 對(duì)照液： 溶液顏色檢查項(xiàng)下的不同色調(diào)的標(biāo)準(zhǔn)比色液 比色用氯化鈷、重鉻酸鉀、硫酸銅配成 高錳酸鉀液,八、溶液澄清度檢查法 含義：檢查藥品溶液的渾濁程度。 意義：反映藥物中微量不溶性雜質(zhì)的存在情況，反映藥 品的質(zhì)量和生產(chǎn)工藝水平。 方法：Ch.P 比濁法 藥典中澄清的定義為：供試

13、品溶液的澄清度相同于所用的溶劑，或不超過(guò)0.5號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液。 濁度標(biāo)準(zhǔn)液：烏洛托品在偏酸性條件下水解產(chǎn)生甲醛， 甲醛與肼縮合，生產(chǎn)不溶于水的甲醛腙白色渾 濁，以不同量的水稀釋可得不同濁度的標(biāo)準(zhǔn)液。 注意事項(xiàng)：光線及溫度、不同藥品溶劑會(huì)不同。,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,九、熾灼殘?jiān)鼨z查法 熾灼殘?jiān)╮esidue on ignition）：有機(jī)藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無(wú)機(jī)藥物加熱分解后，高溫?zé)胱?，所產(chǎn)生的非揮發(fā)性無(wú)機(jī)雜質(zhì)的硫酸鹽。 方法：1.02.0 g供試品 熾灼至恒重的坩鍋 精密稱(chēng)定 緩緩熾灼至完全炭化 防冷至室溫 加硫酸0.51ml 低溫除去硫酸 700800熾灼完全灰化 移置干燥器 放冷至室

14、溫后精密稱(chēng)定 700800熾灼至恒重 熾灼溫度：Ch.P 700800 USP 80025 BP 800 JP 450550,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,12 mg,0.1%0.2%,熾灼殘?jiān)鼨z查法注意點(diǎn) 1、操作及稱(chēng)重方法： 1）坩堝要事先恒重，精密稱(chēng)定，所得的殘?jiān)阒兀?2）坩堝應(yīng)斜置，防止暴沸和濺出； 3）有機(jī)藥物在坩堝中加熱開(kāi)始時(shí)應(yīng)緩緩加熱，加入硫酸后也應(yīng)緩緩加熱，防止藥物暴沸、濺出和硫酸腐蝕; 4）坩堝熾灼后要放于干燥器中冷卻后稱(chēng)重。 2、如供試品為重金屬，熾灼溫度應(yīng)為500-600C，防止重金屬逸失。 3、藥物的熾灼殘?jiān)蘖恳话銥?.1%-0.2%（1g供試品不超過(guò)1-2mg）。

15、含氟藥物用鉑坩堝,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,十、干燥失重測(cè)定法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,干燥失重：藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的量。 用于檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性物質(zhì)。 恒重：供試品連續(xù)兩次干燥或熾灼后稱(chēng)重的差異在0.3mg以下。 （干燥至恒重的第二次及以后每次稱(chēng)重都應(yīng)在規(guī)定的條件下繼續(xù)干燥1h后進(jìn)行）,（一）常壓恒溫干燥法 注意事項(xiàng) 樣品厚度 含較多結(jié)晶水：提高溫度 熔點(diǎn)低：逐漸升溫 易吸濕或受熱發(fā)生相變而達(dá)不到恒重：T、h一定減失的重量 供試品膏狀：事先放入粗沙?；虿０?（二）減壓干燥法與恒溫減壓干燥法 常用干燥劑的吸收能力：五氧化二磷 硅膠 無(wú)水氯化鈣硫酸 （三）干燥劑干

16、燥,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,(四)熱分析法（Thermal analysis） 測(cè)定物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)與溫度關(guān)系的儀器分析方法。,熱重分析法(Thermogravimetric Analysis,TGA),差熱分析法(Differential Thermal Analysis,DTA),差示掃描量熱法 (Differential Scanning Calorimetry,DSC),第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,1.熱重分析法 (TGA),應(yīng)用熱天平在程序控溫的條件下測(cè)量物質(zhì)的質(zhì)量隨溫度變化的熱分析技術(shù),可計(jì)算出樣品在相應(yīng)溫度范圍內(nèi)減失質(zhì)量的百分率.,特 點(diǎn),分析樣

17、品用量少, 適用于貴重藥材或在空氣中容易氧化藥物干燥失重測(cè)定. 靈敏度高,可達(dá)1 g以下 測(cè)定速度快 可用于判斷結(jié)晶水或吸附水,并推斷結(jié)晶水含量.,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,2. 差熱分析法 (DTA),在程序控制溫度下，測(cè)量供試品和惰性參比物(常用石英砂、煅制MgO)之間的溫度差與溫度(或時(shí)間) 關(guān)系的熱分析技術(shù),DTA用途(1) 熔點(diǎn)測(cè)定,(2) 定性和純度檢定根據(jù)峰的數(shù)目、形狀、位置對(duì)供試品進(jìn)行純度判別,草酸鈣(CaC2O4H2O)的熱重曲線,鹽酸多巴酚丁胺的DTA-TGA曲線,3.差示掃描量熱法 (DSC),第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,測(cè)量保持供試品和惰性參比物的溫度相同, 系統(tǒng)所需

18、輸給供試品或參比物的能量差隨溫度(或時(shí)間)變化的熱分析技術(shù).,用于待測(cè)物質(zhì)的鑒別、晶型鑒別、純度檢查以及熔點(diǎn)和水分等的測(cè)定，更適合于測(cè)量物質(zhì)在物理變化或化學(xué)變化中焓的變化。,不同純度苯甲酸的DSC曲線,低共熔雜質(zhì),應(yīng)用熱分析法檢查藥物純度的條件 樣品純度在98.0%以上 雜質(zhì)不與主成分反應(yīng) 雜質(zhì)不與主成分形成共晶或固熔體 雜質(zhì)與熔融試樣有化學(xué)相似性 藥物在熔融過(guò)程中化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定 藥物如存在多晶現(xiàn)象則必須全部轉(zhuǎn)變成某一晶型,甲磺酸二氫麥角毒堿的DSC-TGA曲線,失溶劑,失水,分解,十一、水分測(cè)定法（卡爾費(fèi)休法）,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,A供試品消耗的Fisher試液的體積 B空白消耗的Fi

19、sher試液的體積 F每1ml Fisher試劑相當(dāng)于水的重量(mg) W供試品的重量,指示終點(diǎn)方法： Fisher試液顏色 淡黃色紅棕色 永停法,十二、殘留溶劑測(cè)定法,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,殘留溶劑：在合成原料藥，輔料或制劑生產(chǎn)的過(guò)程中使用的，但在工藝中未能完全除去的有機(jī)溶劑。,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,色譜系統(tǒng)與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) (System Suitability Tests; SSTs) 用待測(cè)物的色譜峰計(jì)算的N應(yīng)大于1000（或5000）； 內(nèi)標(biāo)物與待測(cè)物的兩個(gè)色譜峰的R1.5； 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣5次，所得待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的RSD5%； 若以外標(biāo)法測(cè)定，所得待測(cè)物峰面

20、積的RSD10%,進(jìn)行有機(jī)溶劑限度測(cè)定時(shí)，根據(jù)殘留溶劑的限度規(guī)定來(lái)確定對(duì)照品溶液的濃度； 進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，應(yīng)根據(jù)供試品中實(shí)際殘留溶劑的實(shí)際殘留量確定對(duì)照品溶液的濃度。 對(duì)照品溶液的色譜峰面積與供試品溶液中對(duì)應(yīng)的殘留溶劑的色譜峰面積以不超過(guò)2倍為宜。,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法,一、色譜分析法 (一)TLC法,比移值,一般要求：顆粒直徑1040m 薄層涂布：無(wú)粘合劑 含粘合劑： 常加入1015% 煅石膏 (CaSO42H2O,180烘4h) 或0.50.7%羧甲基纖維素鈉水溶液,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法, 雜質(zhì)對(duì)照法 適用于已知雜質(zhì)并能夠得到雜質(zhì)對(duì)照品的情況 供試品

21、溶液自身稀釋法 適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不能確定或無(wú)雜質(zhì)對(duì)照品的情況(僅限于二者的顏色相近或相同的情況) 雜質(zhì)對(duì)照法與供試品溶液自身稀釋法對(duì)照使用 對(duì)照藥物法 無(wú)合適的雜質(zhì)對(duì)照品，或者是供試品顯示的雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色和主成分顏色有差異，難以判斷限量。,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法,(二)HPLC法,主要方法,內(nèi)標(biāo)法加校正因子法：用于有雜質(zhì)對(duì)照品時(shí)能夠測(cè)定雜質(zhì)的校正因子雜質(zhì)的含量測(cè)定。 外標(biāo)法：用于有雜質(zhì)對(duì)照品或雜質(zhì)對(duì)照品易制備的情況。 加校正因子的主成分自身對(duì)照法：用于有雜質(zhì)對(duì)照品時(shí)，雜質(zhì)的含量測(cè)定 不加校正因子的主成分自身對(duì)照法 ：用于沒(méi)有雜質(zhì)對(duì)照品的情況 峰面積歸一化法：粗略測(cè)量供試品中雜質(zhì)的含量,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法,220 260 300 nm,腎上腺酮及腎上腺素的紫外吸收曲線,max310nm,二、光譜分析法,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法,雜質(zhì)與一定試劑產(chǎn)生沉淀 雜質(zhì)與