有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案講解

1、*制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 1 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 8 *原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 20*年*月 *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 2 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 驗(yàn)證方案的起草與審批驗(yàn)證方案的起草與審批 驗(yàn)證小組成員驗(yàn)證小組成員 部門(mén)人員職責(zé) 驗(yàn)證小組組長(zhǎng)驗(yàn)證小組組長(zhǎng) 部門(mén)人員職責(zé) 負(fù)責(zé)組織起草驗(yàn)證方案并按批準(zhǔn)方案組織實(shí)施； 督促驗(yàn)證人員做好記錄；負(fù)責(zé)各階段驗(yàn)證結(jié)果 匯總及評(píng)價(jià)、組織起草驗(yàn)證報(bào)

2、告；組織相關(guān)培 訓(xùn) 方案審核方案審核 審核簽名及日期 驗(yàn)證委員會(huì) 方案批準(zhǔn)方案批準(zhǔn) 批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期 方案實(shí)施日期：方案實(shí)施日期： *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 3 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 目目 錄錄 1.驗(yàn)證目的驗(yàn)證目的.4 2.方法簡(jiǎn)介與確認(rèn)范圍方法簡(jiǎn)介與確認(rèn)范圍.4 3.標(biāo)準(zhǔn)品、供試品標(biāo)準(zhǔn)品、供試品.4 4.風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估.4 5.驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn).4 6.驗(yàn)證步驟驗(yàn)證步驟.4 6.1 系統(tǒng)適應(yīng)性系統(tǒng)適應(yīng)性.4 6.2 專(zhuān)屬性專(zhuān)屬性.6 6.3 檢測(cè)限與定量限檢測(cè)限與定量限.8 6.4

3、線(xiàn)性線(xiàn)性.9 6.5 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度.9 6.6 精密度精密度.10 6.6 范圍范圍.10 6.7 耐用性耐用性.10 6.8 樣品測(cè)定樣品測(cè)定.11 7.偏差偏差.11 8.風(fēng)險(xiǎn)的接收與評(píng)審風(fēng)險(xiǎn)的接收與評(píng)審.11 9.再驗(yàn)證再驗(yàn)證.11 10.確認(rèn)結(jié)果評(píng)審和結(jié)論確認(rèn)結(jié)果評(píng)審和結(jié)論.11 11.更改歷史更改歷史.12 12. 附錄附錄.12 *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 4 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 1. 驗(yàn)證目的驗(yàn)證目的 根據(jù)法規(guī)的要求，采用非藥典或其它法規(guī)未收載的分析方法應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，證明采用 的方法適合于相

4、應(yīng)的檢測(cè)要求。 這個(gè)驗(yàn)證方案的目的是為驗(yàn)證提供具體方法參數(shù)、可接受標(biāo)準(zhǔn)和研究步驟。 2. 方法簡(jiǎn)介與確認(rèn)范圍方法簡(jiǎn)介與確認(rèn)范圍 *原料有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法為自行開(kāi)發(fā)的液相室色譜方法。為確保方法的準(zhǔn)確性和可 行性，為日常檢測(cè)方法提供依據(jù)，現(xiàn)對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證必須按照驗(yàn)證方案進(jìn) 行，此次驗(yàn)證方案提供*原料含量分析方法驗(yàn)證驗(yàn)證，包括：專(zhuān)屬性、精密度、線(xiàn)性、 范圍、準(zhǔn)確度、檢測(cè)限&定量限、耐用性。 3. 標(biāo)準(zhǔn)品、供試品標(biāo)準(zhǔn)品、供試品 3.1 標(biāo)準(zhǔn)品 名稱(chēng)批號(hào)來(lái)源 3.2 供試品 名稱(chēng)批號(hào)來(lái)源 4. 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 按照質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理規(guī)程 ，質(zhì)量控制部和質(zhì)量管理部共同對(duì)分析方法進(jìn)行了風(fēng)險(xiǎn)評(píng) 估，確定

5、了需進(jìn)行方法確認(rèn)的項(xiàng)目。具體見(jiàn)下表： 風(fēng)險(xiǎn) 因素 風(fēng)險(xiǎn)可能影響效應(yīng) 現(xiàn)有控制措 施 SPDRPN 風(fēng)險(xiǎn) 級(jí)別 建議采取措施 專(zhuān)屬性 不具有 專(zhuān)屬性 分離度不好， 影響雜質(zhì)定量 每次試驗(yàn)測(cè)試 分離度 33327 中 首次使用前， 對(duì)專(zhuān)屬性進(jìn)行 驗(yàn)證 定量限 定量限 小的雜質(zhì)不能無(wú) 33327 中對(duì)該方法的定 *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 5 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 與檢測(cè) 限 高被檢出量限進(jìn)行驗(yàn)證。 精密度 精密度 差 不同時(shí)間或人 員測(cè)定的結(jié)果 不一致 每次測(cè)試前進(jìn) 行系統(tǒng)適用性 測(cè)試 33327 中 首次使

6、用前， 對(duì)精密度進(jìn)行 驗(yàn)證 準(zhǔn)確度 回收率 低 雜質(zhì)結(jié)果不準(zhǔn) 確 無(wú) 33327 中 首次使用前， 對(duì)準(zhǔn)確度進(jìn)行 驗(yàn)證 線(xiàn)性 線(xiàn)性不 好 雜質(zhì)結(jié)果不準(zhǔn) 確 無(wú) 33327 中 首次使用前， 對(duì)線(xiàn)性進(jìn)行驗(yàn) 證 范圍范圍窄 濃度超過(guò)范圍 后結(jié)果不準(zhǔn)確 無(wú) 33327 中 首次使用前， 對(duì)范圍進(jìn)行驗(yàn) 證 耐用性 耐用性 差 參數(shù)微小變化 對(duì)結(jié)果影響很 大 無(wú) 33327 中 首次使用前， 對(duì)耐用性進(jìn)行 驗(yàn)證 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估人： 評(píng)估日期： 5. 驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn) 項(xiàng)目可接受標(biāo)準(zhǔn) 專(zhuān)屬性空白無(wú)干擾，主峰與相鄰峰之間的分離度不小于 1.5，峰純度應(yīng)不小于 0.990. 檢測(cè)限與定量限0.05%

7、 線(xiàn)性R0.999 準(zhǔn)確度回收率在 0.05%質(zhì)量指標(biāo)的 140%范圍內(nèi) 精密度重復(fù)性 RSD%10.0% 中間精密度 RSD%10.0% 精密度：兩組數(shù)據(jù)平均檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)偏差 20.0% *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 6 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 范圍應(yīng)至少為指標(biāo)的 80%120% 耐用性評(píng)估柱溫、流速、色譜柱、緩沖鹽 pH、有機(jī)相比 例、流動(dòng)相比例、溶液放置時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響 6. 驗(yàn)證步驟驗(yàn)證步驟 6.1 系統(tǒng)適應(yīng)性系統(tǒng)適應(yīng)性 分離度測(cè)試液：取*產(chǎn)品分離度標(biāo)準(zhǔn)品 5mg，置于一比色管中，加稀釋液 10

8、ml 溶解， 在 95下水浴加熱 30 分鐘，放冷。 標(biāo)準(zhǔn)液：取*產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)品25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；精密移取1ml，置于一100ml量瓶中，用稀釋液稀釋至 刻度。 取分離度測(cè)試液進(jìn)樣，記錄色譜圖，*產(chǎn)品與*-3異構(gòu)體之間的分離度應(yīng)不小 于2.0。 取標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)樣，記錄色譜圖，*產(chǎn)品主峰拖尾因子應(yīng)不大于 2.0，理論塔板數(shù)應(yīng)不 低于 3000；標(biāo)準(zhǔn)液連續(xù)進(jìn)樣 6 次，主峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 5.0%，保留時(shí)間的 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 1.0%。 6.2 專(zhuān)屬性專(zhuān)屬性 a) 溶劑空白：取空白進(jìn)樣，記錄色譜圖，溶劑對(duì)測(cè)定應(yīng)無(wú)干

9、擾。 b) 樣品液：取本品25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀 釋液溶解并稀釋至刻度。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于1.5，主峰峰 純度應(yīng)不小于0.990。 c)雜質(zhì)1定位溶液：取雜質(zhì)1約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 d)雜質(zhì)2定位溶液：取雜質(zhì)2約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻

10、度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 e)雜質(zhì)3定位溶液：取雜質(zhì)3約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 7 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) f)雜質(zhì)4定位溶液：取雜質(zhì)4約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0

11、.990。 i)雜質(zhì)5定位溶液：取雜質(zhì)5約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 j)雜質(zhì)6定位溶液：取雜質(zhì)6約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 k)雜質(zhì)7定位溶液：取雜質(zhì)7約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，

12、用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 l)雜質(zhì)8定位溶液：取雜質(zhì)8約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 m)雜質(zhì)9定位溶液：取雜質(zhì)9約25mg，精密稱(chēng)定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 n)雜質(zhì) 10 定位溶液：取雜質(zhì) 10 約 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶

13、解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用稀釋液溶 解并稀釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990。 o) 高溫破壞試驗(yàn)：取在 60加熱 10 天的樣品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶 中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得高溫破壞樣品溶液。進(jìn)樣 分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜 質(zhì)的變化。 p) 高濕破壞實(shí)驗(yàn)：取在相對(duì)濕度為 90%5%的條件下放置 10 天的樣品 25mg，精密 稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即

14、得高 濕破壞樣品溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng) 不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。 q) 強(qiáng)光破壞試驗(yàn)：取經(jīng)取經(jīng)總照度不低于1.2106Lux.hr 強(qiáng)白光,近紫外能量不低于 200w.hr/m2破壞的的樣品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后 *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 8 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得強(qiáng)光破壞樣品溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間 的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0

15、.990,記錄各雜質(zhì)的變化。 r) 酸破壞試驗(yàn)：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 鹽酸溶液 1.00ml，25下放置 24 小時(shí)，然后用 0.1mol/L 氫氧化鈉溶液 1.00ml 中和，用乙腈 5ml 溶 解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得酸破壞樣品溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜 質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。 s) 堿破壞試驗(yàn)：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 氫氧化鈉溶液 1.00ml，25下放置 24 小時(shí)，然后用 0.1mol/L 鹽酸溶液 1.00ml 中和，用乙

16、腈 5ml 溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得堿破壞樣品溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之 間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。 t) 氧化破壞試驗(yàn)：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 10%過(guò)氧化氫溶液 1ml，25 下放置 24 小時(shí)，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得氧化破壞樣品 溶液。進(jìn)樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。 i)根據(jù)雜質(zhì) 110 的定位溶液和*標(biāo)準(zhǔn)品溶液的主峰峰面積，計(jì)算響應(yīng)因子，以* 標(biāo)準(zhǔn)品為 1.0 計(jì)，計(jì)算各雜質(zhì)的相對(duì)

17、響應(yīng)因子。 6.3 檢測(cè)限與定量限檢測(cè)限與定量限 a) 定量限：取*產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶 解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；用稀釋液分步稀釋成一定濃度的溶液，進(jìn)樣，獲 得的色譜圖中，信噪比(S/N)為(1020):1 時(shí)，相應(yīng)的濃度即為定量限濃度。 定量限精密度：配制 6 個(gè)相同濃度的定量限溶液進(jìn)樣，主峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏 差應(yīng)不大于 2.0%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 5.0%。定量限應(yīng)不大于 0.05%。 定量限準(zhǔn)確度： LOQ 儲(chǔ)備溶液：根據(jù) LOQ 測(cè)試結(jié)果配制 LOQ 儲(chǔ)備溶液，濃度為 LOQ 濃度的 5 倍。 LOQ 濃

18、度雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相 稀釋至刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。同法配制 3 個(gè)。 供試液：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后 用稀釋液溶解并稀釋至刻度。同法配制 3 個(gè)。 LOQ 回收率測(cè)試液：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ 儲(chǔ)備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當(dāng)于雜質(zhì)的 LOQ 濃度)。同法配制 3 個(gè)。 分別取 LOQ 濃度雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試液進(jìn)樣，計(jì)算雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的單位濃度峰面積和供 *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原

19、料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 9 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 試液中所含雜質(zhì)的單位濃度峰面積。LOQ 回收率測(cè)試液各進(jìn)樣 3 針，計(jì)算回收率，每個(gè)回 收率及平均回收率應(yīng)為 80120%，各回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 15%。 回收率(%)=計(jì)算濃度100%/實(shí)際濃度。 b) 檢測(cè)限：取*產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶 解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；用稀釋液分步稀釋成一定濃度的溶液，進(jìn)樣，獲 得的色譜圖中，信噪比(S/N)為(35):1 時(shí)，相應(yīng)的濃度即為檢測(cè)限濃度。 6.4 線(xiàn)性線(xiàn)性 a)雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：取雜質(zhì)

20、1 約 10mg，雜質(zhì) 2 約 50mg,雜質(zhì) 3 約 15mg, 雜質(zhì) 4 約 75mg，雜質(zhì) 5 約 10mg,雜質(zhì) 6 約 50mg, 雜質(zhì) 7 約 15mg，雜質(zhì) 8 約 10mg,雜質(zhì) 9 約 50mg, 雜質(zhì) 10 約 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密稱(chēng)定，加乙腈 5ml 溶解后用流動(dòng)相稀釋至刻度， 再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度。 b)線(xiàn)性 L1 溶液：取檢測(cè)限與定量限項(xiàng)下的 LOQ 濃度雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。 c)線(xiàn)性 L2 溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 3.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至 刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當(dāng)于

21、60%雜質(zhì)限度，也可以不做，但至少保證有 5 個(gè)點(diǎn)） d)線(xiàn)性 L3 溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 4.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至 刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當(dāng)于 80%雜質(zhì)限度） e)線(xiàn)性 L4 溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至 刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當(dāng)于 100%雜質(zhì)限度） f)線(xiàn)性 L5 溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 6.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至 刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當(dāng)于 120%雜質(zhì)限度） g)線(xiàn)性 L6 溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 7.0ml 至 25ml

22、 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至 刻度。計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當(dāng)于 140%雜質(zhì)限度） 進(jìn)樣，記錄色譜圖，以樣品濃度(g/ml)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸計(jì)算， 得出線(xiàn)性回歸方程及相關(guān)系數(shù)。線(xiàn)性范圍為雜質(zhì)的定量限濃度至約 1.4 倍最大允許雜質(zhì)限 度濃度，相關(guān)系數(shù) R 應(yīng)不小于 0.990，Y 軸截距應(yīng)在 100%響應(yīng)值的 25%以?xún)?nèi)，響應(yīng)因子 的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 10%。 6.5 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 a)雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：取雜質(zhì) 1 約 10mg，雜質(zhì) 2 約 50mg,雜質(zhì) 3 約 15mg, 雜質(zhì) 4 約 75mg，雜質(zhì) 5 約 10mg,雜質(zhì) 6 約 50mg, 雜質(zhì) 7

23、 約 15mg，雜質(zhì) 8 約 10mg,雜質(zhì) 9 約 50mg, *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 10 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 雜質(zhì) 10 約 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密稱(chēng)定，加乙腈 5ml 溶解后用流動(dòng)相稀釋至刻度， 再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度。 b)LOQ 儲(chǔ)備溶液：根據(jù) LOQ 測(cè)試結(jié)果配制 LOQ 儲(chǔ)備溶液，濃度為 LOQ 濃度的 5 倍。 c)雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液：移取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至 刻度。同法配制 3 個(gè)。

24、計(jì)算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當(dāng)于雜質(zhì)限度溶液） d)供試液：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然 后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。同法配制 3 個(gè)。計(jì)算樣品中各雜質(zhì)的單位濃度峰面積， 用于扣除回收率測(cè)試中扣除空白的依據(jù)。 e)回收率測(cè)試液 1：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上 述雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液儲(chǔ)備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當(dāng)于雜質(zhì)的限度)。 f)回收率測(cè)試液 2：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上 述雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液儲(chǔ)備液 7.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當(dāng)于雜質(zhì)的限度的 1.4

25、倍)。 i)回收率測(cè)試液 3：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱(chēng)定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ 儲(chǔ)備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當(dāng)于雜質(zhì)的 LOQ 濃度)。(也可以配制相當(dāng)于雜質(zhì) 限度的 0.8 倍的溶液，但是為了減少工作量，還是最好做 LOQ 點(diǎn)的回收率)。 分別取雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試液、回收率測(cè)試液 1、回收率測(cè)試液 2、回收率測(cè)試液 3 各連續(xù)進(jìn)樣 3 次，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算*產(chǎn)品的量，并計(jì)算回收率，每個(gè)回收率及平 均回收率應(yīng)為 80120%，各回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 15%。 回收率(%)=計(jì)算濃度100%/實(shí)際濃度。 6.6 精密度精密度 a)重復(fù)性：稱(chēng)取*產(chǎn)

26、品樣品適量，照有關(guān)物質(zhì)檢查方法配制樣品溶液，同法配制 6 份樣品溶液，進(jìn)樣測(cè)試，各雜質(zhì)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均應(yīng)不大于 10%。 b) 中間精密度：不同儀器(Agilent 1200)、不同檢驗(yàn)人員(另一位化驗(yàn)員)、新配制的流 動(dòng)相、新配制的樣品液及標(biāo)準(zhǔn)液，與重復(fù)性測(cè)試測(cè)同一批樣品，各雜質(zhì)測(cè)定結(jié)果的相對(duì) 標(biāo)準(zhǔn)偏差均應(yīng)不大于 10%。 c) 精密度測(cè)試結(jié)果：重復(fù)性測(cè)定結(jié)果的平均值與中間精密度測(cè)定結(jié)果的平均值之間 的相對(duì)偏差不大于 20%。 6.6 范圍范圍 根據(jù)線(xiàn)性、精密度和準(zhǔn)確度確定方法的范圍，在該濃度范圍內(nèi)，方法具有良好的精 *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分

27、析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案 第第 11 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 密度、線(xiàn)性和準(zhǔn)確度。范圍至少在 0.05%質(zhì)量指標(biāo)的 140%范圍內(nèi)。 6.7 耐用性耐用性 a) 色譜條件的影響：在其他條件不變情況下，單獨(dú)改變柱溫、流速、色譜柱、緩沖 液 pH 值、有機(jī)相比例、流動(dòng)相比例等其中一個(gè)色譜條件，取分離度測(cè)試液分別進(jìn)樣， *產(chǎn)品與*雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 2.0。 改變項(xiàng)目柱溫流速(ml/ 分鐘) 色譜 柱 緩沖液 pH 值 甲醇、乙腈 比例 A、B 相初始 比例 設(shè)定值20 30 0.851.05另一 支 2.8 0 3.2 0 55:4 5 45:5 5 80:2070:30

28、b) 溶液穩(wěn)定性：按本方法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試品溶液和分離度溶液，供試品溶液分 別放置 0h，4h，8h，24h，48h，36h 后進(jìn)樣測(cè)定，考察溶液的穩(wěn)定性。要求標(biāo)準(zhǔn)品溶液 的峰面積相對(duì) 0h 的增長(zhǎng)率在5%范圍內(nèi)，供試品中各雜質(zhì)的增長(zhǎng)相對(duì) 0h 不超過(guò) 20%，且無(wú)新的雜質(zhì)產(chǎn)生，分離度溶液分離度不小于 2.0。則表明溶液在這段時(shí)間內(nèi)穩(wěn) 定，否則說(shuō)明溶液不穩(wěn)定，需根據(jù)溶液穩(wěn)定性結(jié)果考慮配制和進(jìn)樣時(shí)間。 6.8 樣品測(cè)定樣品測(cè)定 應(yīng)用本方法，對(duì) 3 批樣品進(jìn)行測(cè)定，樣品各雜質(zhì)均應(yīng)能夠符合限度要求。 7.偏差偏差 驗(yàn)證過(guò)程中如果出現(xiàn)偏差應(yīng)及時(shí)進(jìn)行調(diào)查和上報(bào)，并且采取適當(dāng)?shù)拇胧┻M(jìn)行處理， 并及時(shí)記錄

29、。如經(jīng)調(diào)查確定偏差的性質(zhì)會(huì)對(duì)驗(yàn)證結(jié)果產(chǎn)生實(shí)質(zhì)影響，應(yīng)確定原因并采取 必要措施后重新進(jìn)行驗(yàn)證。 8.風(fēng)險(xiǎn)的接收與評(píng)審風(fēng)險(xiǎn)的接收與評(píng)審 經(jīng)分析，對(duì)上一步判斷的風(fēng)險(xiǎn)采取的控制措施，若經(jīng)檢查確認(rèn)符合要求，則其相應(yīng) 的風(fēng)險(xiǎn)可降至為可接受風(fēng)險(xiǎn)。否則，需采取進(jìn)一步的措施降低風(fēng)險(xiǎn)。 9.再驗(yàn)證再驗(yàn)證 發(fā)生下列情形之一時(shí)，需進(jìn)行再驗(yàn)證。 （1）生產(chǎn)工藝發(fā)生改變。 （2）檢驗(yàn)方法發(fā)生改變。 10.確認(rèn)結(jié)果評(píng)審和結(jié)論確認(rèn)結(jié)果評(píng)審和結(jié)論 驗(yàn)證小組負(fù)責(zé)收集各項(xiàng)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果記錄，根據(jù)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果起草驗(yàn)證報(bào)告， *制藥股份有限公司 文件編號(hào)：文件編號(hào)： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證方案

30、 第第 12 頁(yè)頁(yè) 共共 12 頁(yè)頁(yè) 報(bào)驗(yàn)證委員會(huì)。 驗(yàn)證委員會(huì)負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)審，做出驗(yàn)證結(jié)論，確認(rèn)再驗(yàn)證周期。對(duì)驗(yàn) 證結(jié)果的評(píng)審應(yīng)包括： 確認(rèn)試驗(yàn)是否有遺漏？ 確認(rèn)試驗(yàn)過(guò)程中對(duì)驗(yàn)證方案有無(wú)修改，修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)？ 確認(rèn)記錄是否完整？ 確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求？偏差及對(duì)偏差說(shuō)明是否合理？是否需要進(jìn)一步補(bǔ) 充試驗(yàn)？ 11.更改歷史更改歷史 12. 附錄附錄 附錄 1 *原料有關(guān)物質(zhì)分析方法 guideline on the limits of genotoxic impurities 版本號(hào)生效日期主要變更描述 第 1 版本文檔為新訂 *制藥股份有限公司 附錄附錄 1 *原料有關(guān)物質(zhì)分析方法原料有關(guān)物質(zhì)分析方法 1 儀器：LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司） ，紫外檢測(cè)器。 2 標(biāo)準(zhǔn)品及試劑 *標(biāo)準(zhǔn)品 來(lái)源:USP 或公司自制 *分離度標(biāo)準(zhǔn)品 來(lái)源：U