傳染病實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室診斷[行業(yè)材料]

1、傳染病實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)材料：病鴨、鑷子、剪刀、托盤、普通平板、麥康凱平板、血平皿、接種環(huán)、酒精燈、藥敏紙片、生化管、注射器、小白鼠二、實(shí)驗(yàn)方法：病理解剖觀察、病料接種培養(yǎng)、特殊平板培養(yǎng)、生化實(shí)驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、玻板凝集實(shí)驗(yàn)（演示）三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟:(1) 病理解剖觀察：1、 觀察鴨子的天然孔道，是否有異常黏液分泌2、打開病鴨腹腔，采用“三刀法”打開腹腔（兩只鴨腿與腹部交接的地方各剪一刀，腹部中間再剪一刀）。同時(shí)注意觀察皮下及胸、腿部肌肉有無異常（如出血、皮下水腫等）。3、檢查皮下及肌肉：觀察皮下與肌肉是否有出血壞死，皮下是否有滲出物等。4、檢查體腔與內(nèi)臟：注意體腔內(nèi)、氣囊是否有異物，是

2、否增厚、有綠斑、出血等現(xiàn)象，內(nèi)臟器官的體積、顏色、性質(zhì)是否異常。（1）呼吸系統(tǒng)：主要檢查鼻腔內(nèi)是否有異常分泌物；氣管是否有出血環(huán)，有異常黏液分泌；肺臟顏色形狀是否正常，是否有出血壞死腫大等現(xiàn)象。（2）消化系統(tǒng)：口腔是否有黏液；食道是否有出血，壞死灶潰瘍；肌胃腺胃是否出血有壞死灶，乳頭是否腫脹；腸道是否有充血出血壞死灶；肝臟是否發(fā)壞生變性，腫大，有無出血點(diǎn)，出血斑，壞死等異常；胰臟是否有出血，壞死。 （3）泌尿系統(tǒng)：主要檢查腎臟，是否腫大，有出血壞死尿酸鹽沉積。 （4）心血管系統(tǒng)：心臟的顏色，是否有心包積液；各處血管是否有充血現(xiàn)象。 （5）淋巴系統(tǒng)：檢查胸腺、法氏囊是否腫大出血；腸道淋巴結(jié)及盲腸

3、扁桃體是否異常。 （6）神經(jīng)系統(tǒng)：檢查顱腔腦是否腫大，積液，腦膜有無異常；神經(jīng)粗細(xì)顏色。（2） 病料接種培養(yǎng) 1、選取病變明顯典型的部位接種，大鴨子選取腦、肝、脾、肺接種，小鴨子選取接種，并將血平皿劃分成相應(yīng)的幾部分做好標(biāo)記。 2、將接種環(huán)酒精燈滅菌，蘸取相應(yīng)部位，使用“Z”形劃線接種法劃線接種。每蘸取一個(gè)部位后都要進(jìn)行酒精燈燃燒滅菌，接種時(shí)應(yīng)在酒精燈周圍進(jìn)行。 3、將接種好的血平皿放置在37恒溫下培養(yǎng)24小時(shí)后取出觀察菌落生長(zhǎng)情況。 （三）特殊平板培養(yǎng) 1、選取病變明顯典型的部位接種，大鴨子選取腦、肝、脾、肺接種，小鴨子選取接種，并將麥康凱平板劃分成相應(yīng)的幾部分做好標(biāo)記。 2、將接種環(huán)酒精燈

4、滅菌，蘸取相應(yīng)部位，使用“Z”形劃線接種法劃線接種。 3、將接種好的麥康凱平板放置在37恒溫下培養(yǎng)24小時(shí)后取出觀察其生長(zhǎng)情況。 （四）生化實(shí)驗(yàn) 1、選?。ǘ?3中培養(yǎng)好的細(xì)菌，大鴨子選取 接種的細(xì)菌，小鴨子選取兩種不同菌落形態(tài)的細(xì)菌。 2、將接種環(huán)滅菌蘸取相應(yīng)細(xì)菌至生化管，37恒溫，24小時(shí)后拿出觀察。 （五）藥敏試驗(yàn)1取適量培養(yǎng)的細(xì)菌與一定生理鹽水混合均勻，用棉簽蘸取后涂布于普通平板上；2待平板上的菌液晾干后，將帶有卡那霉素、氨芐西林、氟苯尼考、頭孢曲松、多西霉素、恩諾沙星、磺胺甲基異惡唑的藥敏紙片貼于平板上；3將貼好藥敏紙片的平板放于37恒溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果。 （六）動(dòng)物試驗(yàn)

5、 1、在EP管中加入適量的生理鹽水，選取（二）.3中培養(yǎng)好的細(xì)菌，大鴨子選取 接種的細(xì)菌，小鴨子選取兩種不同菌落形態(tài)的細(xì)菌，用滅菌后的接種環(huán)分別蘸取至EP管中，混勻制成菌液。 2、分別用一次性注射器將三種菌液分別注入三只小鼠體內(nèi)（皮下注射，注射時(shí)要緩慢推進(jìn)以防局部積液），并將小鼠做好標(biāo)記。24小時(shí)后觀察小鼠病理特征。 （七）玻板凝集實(shí)驗(yàn)（演示實(shí)驗(yàn)） 1、分別編號(hào)1號(hào)，2號(hào)，3號(hào)。再分別往1號(hào)，2號(hào)，3號(hào)玻片中加入40ul抗原,40ul抗原,40ul生理鹽水。其中3號(hào)作為對(duì)照。 2、分別往1號(hào)，2號(hào)加入10ul血清,5ul血清,3號(hào)不加血清。一段時(shí)間后觀察現(xiàn)象。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果（1） 病理解剖觀察1

6、、大鴨子：呼吸系統(tǒng)：氣管出血；肺臟有出血點(diǎn)。消化系統(tǒng): 食道充血；胃漿膜面出血；，腸道表面充血出血，腸系膜出血；肝臟腫脹，質(zhì)脆易碎，表面斑駁有針尖大小的壞死灶；胰臟有透明樣壞死灶；氣囊廣泛出血。泌尿系統(tǒng): 腎臟質(zhì)脆易碎，花斑腎。心血管系統(tǒng)：心包黃色積液，有出血點(diǎn)，心冠脂肪出血。淋巴系統(tǒng)：胸腺腫大；法氏囊有出血斑；脾臟腫大，呈大理石樣變。神經(jīng)系統(tǒng)：腦充血，神經(jīng)無明顯癥狀。2、小鴨子：呼吸系統(tǒng)：氣管出血；肺臟出血；氣囊均有出血斑。消化系統(tǒng): 食道充血；腺胃肌胃出血；肝臟腫大，有針尖大小壞死灶，顏色布局不均勻，質(zhì)脆；腸道黏膜充血出血，腸系膜出血；泄殖腔出血，胰腺有針尖大小壞死灶，透明樣壞死。泌尿系統(tǒng)

7、: 腎臟質(zhì)脆，花斑腎。心血管系統(tǒng)：心臟心包積液，心冠脂肪出血，心臟有出血點(diǎn)，充血嚴(yán)重。淋巴系統(tǒng)：胸腺腫大；脾臟腫大有壞死灶，成大理石樣；法氏囊有出血點(diǎn)。神經(jīng)系統(tǒng)：神經(jīng)無明顯癥狀。（2） 病料接種培養(yǎng)（血平皿培養(yǎng)）1、大鴨子平板：菌落均呈乳白色，光滑，圓形菌落，無溶血現(xiàn)象。2、小鴨子平板；有兩種形態(tài)菌落，一種呈光滑透明圓形菌落，一種呈光滑灰白菌落有溶血現(xiàn)象。（三）特殊平板培養(yǎng)麥康凱培養(yǎng)基培養(yǎng)：大鴨子接種菌生長(zhǎng)較好，呈紅色；小鴨子接種菌白色菌呈灰白色生長(zhǎng)。（四）生化實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)中接種的三套可疑菌落生化管為如下結(jié)果：試劑/菌種甘露醇鼠李糖蔗糖半乳糖果糖葡萄糖大鴨，+，+，+，+，+-小鴨（白色菌落），+

8、，+，+，+，+-小鴨（透明菌落），+，+，+，+，+-注：+ 陽性或產(chǎn)酸；+ 產(chǎn)酸又產(chǎn)氣；- 陰性或不發(fā)酵。大腸桿菌：能發(fā)酵多種碳水化合物產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)菌種可迅速發(fā)酵乳糖和山梨醇，僅極少數(shù)遲發(fā)酵或不發(fā)酵；約半數(shù)菌株不分解蔗糖。沙門氏菌：發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖，甘露醇和山梨醇產(chǎn)氣；不發(fā)酵乳糖、蔗糖鏈球菌：能發(fā)酵簡(jiǎn)單的糖類，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。巴氏桿菌：可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；一般發(fā)酵乳糖、鼠李糖、水楊苷、肌醇、菊糖。（五）藥敏試驗(yàn)2、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（1）大鴨抑菌圈直徑（mm）判定標(biāo)準(zhǔn)耐藥 中介 敏感卡那霉素2413 1417 18氨芐西林15 13 1416 17氟苯尼考24

9、12 1317 18頭孢曲松27 19 2022 23多西環(huán)素21 12 1315 16恩諾沙星3515 1620 21磺胺甲基異惡唑2812 1316 17（2） 小鴨（白色菌落）抑菌圈直徑（mm）判定標(biāo)準(zhǔn)耐藥 中介 敏感卡那霉素1313 1417 18氨芐西林713 1416 17氟苯尼考1312 1317 18頭孢曲松1519 2022 23多西環(huán)素1112 1315 16恩諾沙星1015 1620 21磺胺甲基異惡唑3012 1316 17（3） 小鴨（透明菌落）抑菌圈直徑（mm）判定標(biāo)準(zhǔn)耐藥 中介 敏感卡那霉素713 1417 18氨芐西林713 1416 17氟苯尼考712 131

10、7 18頭孢曲松719 2022 23多西環(huán)素712 1315 16恩諾沙星715 1620 21磺胺甲基異惡唑712 1316 17（六）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)解剖后病理特征：1、小鼠1號(hào)（接種大鴨子菌）：皮下出血，有膠凍樣物質(zhì)；心臟出血嚴(yán)重；肝臟出血腫大；腸粘膜出血；腎臟出血；肺臟出血；胃出血；脾臟腫大。2、小鼠2號(hào)（接種小鴨子無色菌）：打開腹腔有惡臭味；皮下有膠凍樣物質(zhì)；心臟有出血充血；肝臟表面斑駁，有壞死灶；胃充血；腸道充血；肺臟充血出血；腎臟腫大。3、小鼠3號(hào)（接種小鴨子白色菌）：心臟出血；肺臟出血；肝臟腫大出血；胃出血；脾臟腫大；腸系膜出血；胰腺出血質(zhì)脆易碎；腎臟腫大出血。 （七）玻板凝集實(shí)驗(yàn)（演示實(shí)驗(yàn)）1號(hào)凝集現(xiàn)象最明顯，2號(hào)凝集現(xiàn)象不明顯，3號(hào)無凝集現(xiàn)象。5、 結(jié)果與分析1、 大鴨子的分析：特征病理病變?yōu)楦闻K腫脹，質(zhì)脆易碎，表面斑駁有針尖大小的壞死灶；胰臟有透明樣壞死灶。心臟心包積液；肺臟出血；氣囊出血。其菌落在麥康凱上生長(zhǎng)為紅色生長(zhǎng)良好。其動(dòng)物實(shí)驗(yàn)病理癥狀呈全身性敗血變化和皮下膠凍樣滲出。綜合生化與藥敏，初步懷疑為沙門氏菌與大腸桿菌的混合感染。沙門氏菌造成全身性敗血變化，大腸桿菌可能造成皮下腹腔膠凍樣滲出。2、小鴨子分離出兩種菌落。白色菌落在血平皿上有溶血現(xiàn)象，鏡檢形態(tài)為球狀，呈鏈狀排列。接種動(dòng)物病變呈全身性敗血，初步懷疑為鏈球菌。小鴨病理病變主