2020_2021學(xué)年新教材高中生物第3章基因工程2基因工程的基本操作程序?qū)W案新人教版選擇性必修3

1、第2節(jié)基因工程的基本操作程序 必備知識素養(yǎng)奠基一、目的基因的篩選與獲取(第一步)1.目的基因:在基因工程的設(shè)計和操作中,用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物的基因。2.篩選合適目的基因的方法:從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中進(jìn)行篩選。3.利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因(1)原理:DNA半保留復(fù)制。(2)DNA復(fù)制所需的基本條件:參與的組分DNA復(fù)制的作用解旋酶(體外用高溫)打開DNA雙鏈DNA母鏈提供DNA復(fù)制模板4種脫氧核苷酸合成DNA子鏈的原料DNA聚合酶催化合成DNA子鏈引物使DNA聚合酶能夠從引物的3端開始連接脫氧核苷酸(3)過程:填一填:基于PCR的過程,完成下列問題: 過程為變性

2、,該階段的溫度為90_以上,目的是使雙鏈DNA解聚為單鏈。過程為復(fù)性,該階段的溫度為50_左右,兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合。過程為延伸,該階段的溫度為72_左右,該過程需要在D耐高溫的DNA聚合酶的催化下,利用4種脫氧核苷酸為原料,根據(jù)堿基互補配對原則從子鏈的3 端延伸合成新的子鏈DNA。(4)儀器:PCR擴(kuò)增儀。(5)鑒定方法:瓊脂糖凝膠電泳。 PCR過程中兩種引物的堿基序列能否互補?說明理由。提示:不能。因為兩種引物分別與兩個DNA單鏈的3端互補結(jié)合,而DNA的兩條單鏈的3端堿基序列往往不同,如果2種引物的堿基序列互補那么會影響引物與DNA單鏈的結(jié)合。 二、基因表達(dá)載體的

3、構(gòu)建(第二步)1.基因表達(dá)載體作用:(1)使基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且遺傳給下一代。(2)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2.基因表達(dá)載體組成:填一填:基于基因表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)模式圖,完成下列問題: (1)A啟動子,RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,可以驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA,B目的基因。(2)C終止子,轉(zhuǎn)錄停止的部位。(3)D復(fù)制原點,E標(biāo)記基因。3.構(gòu)建過程:(1)用適宜的限制酶切割載體。(2)用同種限制酶或能產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶切割目的基因。(3)用DNA連接酶將目的基因片段拼接到載體上。 構(gòu)建基因表達(dá)載體時目的基因插入的位置應(yīng)該在哪里?為什么?提示:啟動子下游和終止子上游。因為只有插入

4、在啟動子和終止子之間,目的基因才可以正常表達(dá)。 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(第三步)1.植物細(xì)胞:(1)花粉管通道法我國獨創(chuàng)的方法(2)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法常用的方法轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。2.動物細(xì)胞:利用顯微注射直接將目的基因?qū)胧芫阎小?.原核生物:用Ca2+處理,使細(xì)胞處于能夠吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。四、目的基因的檢測與鑒定(第四步)1.分子水平的檢測:連一連:將檢測目的和方法連線 2.個體生物學(xué)水平的檢測:如飼喂法等。 關(guān)鍵能力素養(yǎng)形成知識點一PCR技術(shù)1.PCR過程:過程說明圖解變性當(dāng)溫度上升到90 以

5、上時,雙鏈DNA解旋為單鏈 復(fù)性溫度下降到50 左右,兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合 延伸72 左右時,耐高溫的 DNA聚合酶有最大活性,可使DNA新鏈由5端向3端延伸 2.PCR擴(kuò)增的計算:理論上DNA數(shù)目呈指數(shù)擴(kuò)增。(1)若開始只有一個DNA 提供模板,則循環(huán)n 次后獲得的子代DNA數(shù)目為2n個。(2)若開始有N0個DNA 提供模板,則循環(huán)n 次后獲得的子代DNA數(shù)目為N02n個。3.比較PCR擴(kuò)增和體內(nèi)DNA復(fù)制的異同:項目DNA復(fù)制PCR技術(shù)解旋方式解旋酶催化DNA在高溫作用下變性解旋場所細(xì)胞內(nèi)(主要在細(xì)胞核內(nèi))細(xì)胞外(主要在PCR擴(kuò)增儀內(nèi))酶解旋酶、普通的DNA聚合酶等

6、耐高溫的DNA聚合酶溫度條件細(xì)胞內(nèi)溫和條件需控制溫度,在較高溫度下進(jìn)行合成的對象DNA分子DNA片段或目的基因相同點(1)模板:均需要DNA的兩條單鏈作為模板(2)原料:均為4種脫氧核苷酸(3)酶:均需DNA聚合酶【特別提醒】PCR過程的兩點提醒(1)復(fù)性不一定均為引物與DNA模板結(jié)合。復(fù)性時,引物與DNA模板的結(jié)合是隨機的,也存在DNA解開的兩條鏈的結(jié)合。(2)PCR反應(yīng)的結(jié)果不都是所需的DNA片段。因為第一次循環(huán)得到的DNA片段只有一種引物,比所需的DNA片段要長,從第二次循環(huán)才出現(xiàn)所需的DNA片段,這樣的片段存在兩種引物。 如圖a、b、c均為PCR擴(kuò)增的DNA片段,下列有關(guān)說法正確的是(

7、) A.片段a、b、c的長度均相同B.片段a、b只是第一次循環(huán)的產(chǎn)物C.片段c最早出現(xiàn)在第二次循環(huán)的產(chǎn)物中D.經(jīng)過30次循環(huán)后,片段c的數(shù)量為230【解題導(dǎo)引】解答本題思維流程如下:【解析】選C。圖中片段a、b只有一種引物,是由原始DNA鏈為模板復(fù)制而來,其長度比片段c長,A項不正確。由于原始模板在每次循環(huán)中均可作為模板,則每次循環(huán)都能產(chǎn)生圖中片段a、b,B項不正確。由于第一次循環(huán)的產(chǎn)物只有一種引物,而圖中片段c有兩種引物,則c最早出現(xiàn)在第二次循環(huán),C項正確。經(jīng)過30次循環(huán)后,得到的DNA片段總數(shù)為230,這包括圖中的片段a、b,故D項不正確。 【素養(yǎng)探究母題追問】(1)科學(xué)思維演繹與推理若該

8、過程加入模板DNA片段a個,經(jīng)過n次復(fù)制后,產(chǎn)生的DNA片段中含有模板DNA片段a的DNA個數(shù)為多少?試分析原因。提示:2a個。因為DNA是半保留復(fù)制,一開始的模板鏈最終分布在子代DNA分子中。(2)科學(xué)思維批判性思維某同學(xué)認(rèn)為PCR過程不同的DNA片段變性時溫度是不同的,你認(rèn)為他的說法正確嗎?說明你的理由。提示:正確。變性目的是通過升高溫度破壞氫鍵,將DNA分子雙鏈變成單鏈,不同片段的DNA分子中氫鍵的數(shù)量不同導(dǎo)致穩(wěn)定性不同,因此所需的溫度不同。 【素養(yǎng)遷移】2020年新型冠狀病毒引發(fā)的疫情在世界范圍內(nèi)迅速傳播。各研發(fā)機構(gòu)迅速進(jìn)行了針對新型冠狀病毒檢測和治療的研發(fā)?；卮鹣铝袉栴}。(1)科研機

9、構(gòu)在拿到新型冠狀病毒序列后,第一時間就進(jìn)行了新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒(雙重?zé)晒釶CR法)的開發(fā)。這里涉及的PCR是利用_的原理,將目的基因加以復(fù)制。PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有_,以便根據(jù)它合成_。PCR擴(kuò)增的過程:目的基因DNA_后解鏈為單鏈,_與單鏈相應(yīng)互補序列結(jié)合,然后在_作用下進(jìn)行延伸,如此重復(fù)循環(huán)。(2)接種疫苗是人類對付傳染病的有力武器。疫苗作為_可激發(fā)人體產(chǎn)生相應(yīng)的_,當(dāng)與疫苗同源的病毒侵入人體后,可引發(fā)二次免疫反應(yīng)?！窘馕觥?1)PCR的原理是DNA雙鏈復(fù)制。PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需要有一段已知目的基因的核苷酸序列,利用該序列合成引物。PCR擴(kuò)增的過程:目的基因DNA受

10、熱變性形成單鏈,引物與單鏈相應(yīng)序列結(jié)合,在耐高溫的DNA聚合酶的催化作用下進(jìn)行延伸,如此重復(fù)循環(huán)。(2)疫苗作為抗原,激發(fā)人體產(chǎn)生記憶細(xì)胞和抗體,當(dāng)與疫苗同源的病毒侵入人體后,可引發(fā)二次免疫反應(yīng)。答案:(1)DNA雙鏈復(fù)制一段已知目的基因的核苷酸序列引物受熱變性引物耐高溫的DNA聚合酶(2)抗原記憶細(xì)胞和抗體 【補償訓(xùn)練】PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫,現(xiàn)在已成為分子生物學(xué)實驗中的一種常規(guī)手段,它可以在體外很短的時間內(nèi)將DNA大量擴(kuò)增。你認(rèn)為下列符合在體外進(jìn)行PCR反應(yīng)條件的一組是()穩(wěn)定的緩沖液環(huán)境DNA模板合成引物四種脫氧核苷酸DNA聚合酶DNA解旋酶限制性內(nèi)切核酸酶溫控設(shè)備A.B.C.D.

11、【解析】選D。PCR反應(yīng)的實質(zhì)是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制,因此需要穩(wěn)定的緩沖液環(huán)境,正確;PCR反應(yīng)需要DNA模板,正確;PCR反應(yīng)需要一對引物,正確;PCR反應(yīng)需要以四種脫氧核苷酸為原料,正確;PCR反應(yīng)需要DNA聚合酶催化延伸過程,正確;PCR反應(yīng)過程中通過高溫使DNA變性解鏈,不需要DNA解旋酶,錯誤;PCR反應(yīng)不需要限制性內(nèi)切核酸酶,錯誤;PCR反應(yīng)過程中需要控制的關(guān)鍵因素是溫度,因此需要溫控設(shè)備,正確。知識點二目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞及目的基因的檢測與鑒定1.目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法:生物類型方法受體細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程特點植物農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法體細(xì)胞或受精卵目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌導(dǎo)

12、入植物細(xì)胞插入植物細(xì)胞中的染色體DNA上目的基因表達(dá)適用于雙子葉植物和裸子植物花粉管通道法在植物受粉后的一定時間內(nèi),剪去柱頭,將DNA溶液滴加在花柱切面上,使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊適用于任何開花植物動物顯微注射法受精卵目的基因表達(dá)載體提純?nèi)÷?受精卵)顯微注射受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的轉(zhuǎn)基因動物是采用最多、最有效的方法微生物Ca2+處理法原核細(xì)胞Ca2+處理微生物細(xì)胞使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)將基因表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合在緩沖液中一定溫度下促使該細(xì)胞吸收DNA分子原核生物繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少,從而成為最常用的受體細(xì)胞2.目的基因的檢測與鑒定:

13、3.常見轉(zhuǎn)基因生物在個體水平上鑒定、檢測的方法:轉(zhuǎn)基因生物檢測方法觀察目標(biāo)抗蟲植物飼喂害蟲害蟲死亡抗病毒(菌)植物病毒(菌)感染未侵染上病斑抗鹽植物鹽水澆灌正常生長抗除草劑植物噴灑除草劑正常生長【特別提醒】不同分子水平的兩個檢測原理(1)轉(zhuǎn)錄水平的檢測原理與復(fù)制水平的檢測原理是相似的,只是被檢測的物質(zhì)不再是轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA,而是mRNA。(2)翻譯水平的檢測則是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理。 在基因工程中,受體細(xì)胞的不同,導(dǎo)入目的基因的方法也不同。請回答下列問題:(1)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法常用來將外源基因轉(zhuǎn)入_細(xì)胞,具體操作時,先要將目的基因插入農(nóng)桿菌_質(zhì)粒的T-DNA中,然后用該農(nóng)桿菌感染

14、植物細(xì)胞。(2)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入動物細(xì)胞,常采用_的方法。若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌,一般情況下,不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,原因是未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱。所以,用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時,常先用_處理大腸桿菌,以利于表達(dá)載體的進(jìn)入。(3)目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞引起生物性狀的改變,屬于可遺傳變異中的_(變異類型)?！窘忸}導(dǎo)引】解答本題思維流程如下:【解析】(1)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法常用來將外源基因轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞,具體操作時,先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中,然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞。 (2)將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最常用的方法是顯微注射法。若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸

15、桿菌,一般情況下,不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,原因是未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱。所以,用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時,常先用Ca2+處理大腸桿菌,以利于表達(dá)載體的進(jìn)入。(3)基因工程的原理為基因重組。答案:(1)植物Ti(2)顯微注射Ca2+(3)基因重組 【素養(yǎng)探究母題追問】 (1)生命觀念結(jié)構(gòu)與功能觀農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法為什么要將目的基因插入農(nóng)桿菌質(zhì)粒的T-DNA片段?提示:Ti質(zhì)粒的T-DNA片段可以整合到受體細(xì)胞的染色體上。(2)科學(xué)思維演繹與推理如果改用花粉管通道法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,與農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法相比有什么優(yōu)點?提示:操作簡便;直接將目的基因?qū)胧芫?無須

16、組織培養(yǎng)即可獲得植株。(答出一個即可,其他答案合理也可) 【素養(yǎng)遷移】新型冠狀病毒導(dǎo)致全球疫情,造成很多人死亡?？茖W(xué)工作者經(jīng)研究,發(fā)現(xiàn)了數(shù)種快速檢驗新型冠狀病毒的方法,下列與新型冠狀病毒研究、診斷有關(guān)的說法中錯誤的是()A.鏡檢法:在光學(xué)顯微鏡下直接觀察病人的痰液或血液,以發(fā)現(xiàn)病原體B.PCR:體外基因復(fù)制技術(shù),可在幾十分鐘內(nèi)把病原體的基因擴(kuò)展到數(shù)百萬倍C.抗原抗體法:用特殊制備的病原體蛋白質(zhì)與病人血清中的相關(guān)抗體特異性結(jié)合,發(fā)現(xiàn)病原體D.DNA探針技術(shù):用放射性同位素、熒光因子等標(biāo)記的DNA分子作為探針,利用DNA分子雜交原理來檢測病原體【解析】選A。病毒在光學(xué)顯微鏡下無法看到,只有在電子顯

17、微鏡下才能觀察到,A錯誤;PCR用于體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列,B正確;病原體進(jìn)入人體后會刺激機體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng),產(chǎn)生相應(yīng)抗體,由于抗體與抗原結(jié)合具有特異性,因此用特殊制備的病原體蛋白質(zhì)與病人血清中的相關(guān)抗體特異性結(jié)合,可發(fā)現(xiàn)病原體,C正確;可以利用DNA分子作為探針,通過DNA分子雜交技術(shù)檢測病原體,D正確。【補償訓(xùn)練】受體細(xì)胞不同,將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法也不相同,下列受體細(xì)胞與導(dǎo)入方法匹配錯誤的一項是()A.棉花細(xì)胞花粉管通道法B.大腸桿菌用Ca2+處理法C.羊受精卵農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法D.大豆細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法【解析】選C?；ǚ酃芡ǖ婪ㄊ俏覈茖W(xué)家獨創(chuàng)的一種方法,是一種十分簡便經(jīng)濟(jì)

18、的方法,我國的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉就是用此種方法獲得的,A正確;Ca2+處理法能使大腸桿菌細(xì)胞的生理狀態(tài)發(fā)生改變,使之處于易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),所以將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞,常采用Ca2+處理法,B正確;農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的受體細(xì)胞一般是雙子葉植物和裸子植物,羊受精卵導(dǎo)入目的基因的方法是顯微注射法,C錯誤;將目的基因?qū)氪蠖?雙子葉)細(xì)胞可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,D正確。 課堂檢測素養(yǎng)達(dá)標(biāo) 【概念診斷】1.基因工程的操作過程涉及許多的技術(shù)和方法,下列有關(guān)基因工程中的操作步驟和技術(shù)的描述正確的是_。PCR過程使用的是耐高溫的DNA聚合酶?；虮磉_(dá)載體中含有起始密碼子和終止密碼子。農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的

19、T-DNA可轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞內(nèi),并且與其染色體DNA整合在一起。只要檢測出受體細(xì)胞中含有目的基因,目的基因就一定能成功表達(dá)?；蚬こ讨袑⒛康幕?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、花粉管通道法等?！窘馕觥窟x。PCR儀在DNA分子擴(kuò)增過程使用的是耐高溫的DNA聚合酶,正確;基因表達(dá)載體中含有啟動子和終止子,起始密碼子和終止密碼子在mRNA上,錯誤;農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞內(nèi),并且能整合到受體細(xì)胞的染色體上,正確;目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后,除檢測是否含有目的基因外,還需要檢測目的基因是否表達(dá),錯誤;基因工程中將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、花粉管通道法等,正確。2.從自

20、然界中的生物體內(nèi)分離得到的天然酶,在工業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中催化效率往往較低?？蒲腥藛T通過如圖所示的流程改造天然酶,以改進(jìn)酶的功能。對這一改造過程的分析,不合理的是() A.過程產(chǎn)生的基因突變是隨機的B.過程中受體菌應(yīng)處理為一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)C.過程篩選突變酶依賴于抗生素D.多次重復(fù)循環(huán)導(dǎo)致酶的定向進(jìn)化【解析】選C。過程產(chǎn)生的基因突變是隨機的,A正確;過程中導(dǎo)入受體菌時,應(yīng)用鈣離子處理為一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),B正確;過程篩選突變酶依賴于抗原-抗體雜交,C錯誤;多次重復(fù)循環(huán)導(dǎo)致酶的定向進(jìn)化,使酶的活性越來越高,D正確。3.缺乏維生素A就容易導(dǎo)致出現(xiàn)夜盲癥,營養(yǎng)不良

21、,甚至有一些能夠威脅到生命。而-胡蘿卜素可以在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化成維生素A。科學(xué)家嘗試通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)富含胡蘿卜素的大米。八氫番茄紅素合酶(其基因用psy表示)和胡蘿卜素脫飽和酶(其基因用crtl表示)參與-胡蘿卜素的合成。根據(jù)以上信息分析正確的是()A.重組質(zhì)粒中的目的基因含有psy基因和crtl基因B.構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶、DNA連接酶和核酸酶C.可通過顯微注射法將目的基因?qū)胨臼荏w細(xì)胞D.PCR既可擴(kuò)增特定基因也可檢測目的基因表達(dá)【解析】選A。根據(jù)“八氫番茄紅素合酶和胡蘿卜素脫飽和酶參與-胡蘿卜素的合成”可知,重組質(zhì)粒中的目的基因含有psy基因和crtl基因,A正確;構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶

22、、DNA連接酶,不需要核酸酶,B錯誤;可通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胨臼荏w細(xì)胞,C錯誤;PCR可擴(kuò)增特定基因,但要檢測目的基因是否表達(dá)應(yīng)該用抗原-抗體雜交法,D錯誤。4.如圖為基因表達(dá)載體的模式圖,下列有關(guān)說法錯誤的是() A.構(gòu)建基因表達(dá)載體需要用到限制酶和DNA連接酶B.任何基因表達(dá)載體的構(gòu)建都是一樣的,沒有差別C.圖中啟動子位于基因的首端,是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位D.抗生素抗性基因的作用是作為標(biāo)記基因,用于檢測受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入了目的基因【解析】選B。構(gòu)建基因表達(dá)載體需要用到限制酶和DNA連接酶,A正確;用不同種類的載體構(gòu)建基因表達(dá)載體時處理方法是有差別的,B錯誤;啟動子位于基

23、因的首端,是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,C正確;抗生素抗性基因的作用就是作為標(biāo)記基因,用于檢測受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入了目的基因,D正確?！舅季S躍遷】5.目前廣泛應(yīng)用的新型冠狀病毒檢測方法是實時熒光RT-PCR技術(shù)。RTPCR是將RNA逆轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增反應(yīng)相結(jié)合的技術(shù),具體過程如圖所示,下列說法不正確的是() A.引物A與引物B應(yīng)該具有不同的堿基序列B.過程通過控制溫度的變化實現(xiàn)目標(biāo)序列的循環(huán)擴(kuò)增C.該反應(yīng)體系中應(yīng)加入緩沖液、引物、4種核糖核苷酸、逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶等物質(zhì)D.該檢測方法的應(yīng)用依賴于新型冠狀病毒特異性序列的確定【解析】選C。引物A與引物B分別結(jié)合在目的片段序列的兩端,其堿基序列不同,A正確;過程為PCR的反應(yīng)階段,通過控制溫度的變化實現(xiàn)變性、退火、延伸,實現(xiàn)目標(biāo)序列的循環(huán)擴(kuò)增,B正確;RT-PCR反應(yīng)體系中應(yīng)加入緩沖液、引物、4種脫氧核苷酸、逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶等物質(zhì),而不是4種核糖核苷酸,C錯誤;RT-PCR的前提條件是目的片段的特異性序列的確定,D正確。6.(2019全國卷改編)基因工程中可以通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因?；卮鹣铝袉栴}。(1)生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時,解開DNA雙鏈的酶是_。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時,使反應(yīng)體系中的模板D