大賽璐手性分析方法篩選與優(yōu)化PPT學習課件

1、第1頁/共63頁 液液- -液萃取法液萃取法 生物催化法生物催化法 不對稱合成法不對稱合成法 膜分離法膜分離法 傳感器法傳感器法 結晶法結晶法 毛細管電泳毛細管電泳色譜法色譜法 手性分離方法手性分離方法 第2頁/共63頁 超臨界超臨界 ( (SFCSFC) ) 氣相色譜氣相色譜 （GCGC） 薄層色譜薄層色譜 （TLCTLC） 逆流色譜逆流色譜 （CCCCCC） 模擬移動床模擬移動床 ( (SMBSMB) ) 高效液相色譜高效液相色譜 （HPLCHPLC） 色譜法色譜法 第3頁/共63頁 方法方法精度精度說明說明 旋光法旋光法 低 (5%) 非對映體異構體法非對映體異構體法 高 (0.1%)幾

2、十毫克 . 中等 (2%) 幾毫克需要位移試劑. 色譜法色譜法高高 (0.1%)(0.1%)微克微克- -毫克毫克HPLCHPLC、GCGC、SFCSFC 對映體純度測定方法及其比較對映體純度測定方法及其比較 幾十毫克 樣品用量樣品用量 需要其它的手性化合物來制 備非對映體 需要真實樣品 第4頁/共63頁 手性色譜固定相法基本原理手性色譜固定相法基本原理 操作簡單操作簡單 不需要預處理不需要預處理 準確度高準確度高 R R R R 對映體分離示意圖對映體分離示意圖 S S S S S S S S S S S S S S S S S S S SR,S R,S 消旋體消旋體 (racemate)(

3、racemate) 手性選擇劑手性選擇劑 R R S S R R R R R R R R R R R R R R R R 引入手性環(huán)境是實引入手性環(huán)境是實 現(xiàn)手性分離的前提現(xiàn)手性分離的前提 第5頁/共63頁 Daicel手性色譜柱一覽表手性色譜柱一覽表 正相正相 l直鏈淀粉衍生物直鏈淀粉衍生物 CHIRALPAK AD / AD-H/AD-3 CHIRALPAK AS / AS-H/AS-3 CHIRALPAK AY-H/AY-3 CHIRALPAK AZ-H/AZ-3 l纖維素纖維素衍生物衍生物 CHIRALCEL OD / OD-H/OD-3 CHIRALCEL OJ / OJ H/OJ-

4、3 CHIRALCEL OZ H /OZ-3 CHIRALCEL OA, OB, OC CHIRALCEL OF, OG, OK CHIRALCEL CA-1 反相反相 CHIRALPAK AD -RH/AD-3R CHIRALPAK AS RH/AS-3R CHIRALCEL OD-RH/OD-3R CHIRALCEL OJ RH/OJ-3R CHIRALPAK AY RH/AY-3R CHIRALCEL OZ RH/OZ-3R 其它其它 Chiral -AGP CROWNPAK CR (), () CHIRALPAK OT(), OP () CHIRALPAK WH, MA () CHIR

5、ALPAK QD-AX CHIRALPAK QN-AX 共價鍵合型共價鍵合型 CHIRALPAK IA/IA-3 CHIRALPAK IB/IB-3 CHIRALPAK IC/IC-3 第6頁/共63頁 第7頁/共63頁 第8頁/共63頁 分析條件優(yōu)化流程圖分析條件優(yōu)化流程圖 (1 (1) ) 酸性酸性 中性中性 堿性堿性 Hex/IPA/Hex/IPA/TFATFA = =7 70/0/3 30/0.10/0.1 Hex/IPA/Hex/IPA/DEADEA = =7 70/0/3 30/0.10/0.1 Hex/IPAHex/IPA = =7 70/0/3 30 0 第9頁/共63頁 堿性

6、樣堿性樣 品品 mV Minutes 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 024681012141618202224 10.74 13.96 Hex/IPA/DEA=90/10/0.1 流量：1.0mi/min. 溫度：25、檢測波長：（254） 流動相Hex/IPA=90/10Hex/IPA/AcOH=90/10/0.1 流動相Hex/IPA=90/10 -0.10 -0.05 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 mV 024681012141618202224262830 Minutes 10.94 0.40 流量：1

7、.0mi/min.溫度：40、檢測波長：（254） 0 5 10 15 20 25 30 35 mV 0123456789101112131415 Minutes 6.66 7.52 Minutes 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 mV 0510152025303540 酸性樣品酸性樣品 F COOH NH2 N O N （沒出峰（沒出峰 ) （無法分離（無法分離 ) 第10頁/共63頁 *1 主要用于1級胺 *2 主要用于1級氨基醇 第11頁/共63頁 Minutes 0.02.55.07.510.012.515.017.520.0 mv 0 200

8、400 600 800 1000 1200 mv 0 200 400 600 800 1000 1200 12.240 14.853 1: 220 nm, 4 nm Retention Time Minutes 051015 mv 0 1000 2000 3000 mv 0 1000 2000 3000 1: 220 nm, 4 nm Retention Time Column: AY-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow:2.0ML/MIN Mobile phase: CO2/IPA/DEA =85/15/0.1 Column: AY-H (4.6*150mm) Temp:

9、 35 Flow:1.2ML/MIN Mobile phase: CO2/IPA/1-propylamine =85/15/0.1 第12頁/共63頁 0.05.010.015.020.025.0min 0 100 200 300 400 mV Detector A Ch1:220nm 2.225 29.879 0.02.55.07.510.012.515.017.520.0min -25 0 25 50 75 100 125 mV Detector A Ch1:220nm 12.005 15.046 0.02.55.07.510.012.515.017.5min -50 -25 0 25 5

10、0 75 100 mV Detector A Ch1:220nm 12.164 14.754 Column: OZ-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/DEA(75/25/0.1) Column: OZ-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/TFA(85/15/0.1) Column: OZ-H (4.6(150mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase: hexane/I

11、PA/TFA/DEA(80/20/O.1/0.05) 第13頁/共63頁 保留時間保留時間? ? 適宜的分析時間 (10-30 min.) 增加增加 異異丙醇 增加增加 正已烷 第14頁/共63頁 OK!OK! 分離？分離？ 第15頁/共63頁 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 0123456789101112131415 Minutes 4.68 4.82 OB 15 mV 1234567891011121314 Minutes 6.71 6.87 OD 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 mV 0 -5 0

12、 5 10 15 20 25 30 35 mV 0123456789101112131415 Minutes 6.66 7.52 AD 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 mV 0123456789101112131415 OJ mV 0 10 20 30 40 50 60 70 80 mV 01234567891011121314 4.70 90 AS 15 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0123456789101112131415 Minutes 4.70 OC Minutes 10 20 30 40 50 6

13、0 70 80 mV 0123456789101112131415 Minutes 4.36 15 OG Minutes 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 mV 01234567891011121314 Minutes 4.36 OF 色譜條件色譜條件 流動相： Hex./IPA/ AcOH = 90/10/0.1 流量：1.0ml/min. 溫度 ：40 檢測波長 ：UV254nm 樣品： F COOH 選擇效果最好的手性柱, 然后繼續(xù)優(yōu)化分析條件 第16頁/共63頁 部分分離部分分離 A.A.降低異丙醇濃度降低異丙醇濃度 B. B. 調整溫度調整溫度 C. C. 更換

14、醇類更換醇類 第17頁/共63頁 0 5 10 15 20 25 30 35 mV 0123456789101112131415 Minutes 6.66 7.52 在多數(shù)情況下，降低醇的濃度可延長保持時間，改善分離度在多數(shù)情況下，降低醇的濃度可延長保持時間，改善分離度 Column：AD, Temp.：40, Flow rate：1.0ml/min. Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1Hex./IPA/ AcOH =100/1/0.1 -0.5 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 mV 051015202530354045505560 Minute

15、s 35.77 43.71 F COOH Sample：Flurbiprofen 第18頁/共63頁 部分分離部分分離 B. B. 調整溫度調整溫度 C. C. 更換醇類更換醇類 A.A.降低異丙醇濃度降低異丙醇濃度 第19頁/共63頁 Column：CHIRALPAK AD Mobile phase： Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1, Flow rate：1.0ml/min. 2540Temp.： 5 F COOH 降低柱溫降低柱溫可增大可增大值，但會使峰形變寬值，但會使峰形變寬 升高柱溫升高柱溫會減少會減少值，但會使峰形尖鋒值，但會使峰形尖鋒 -0.5 0.0 0.5

16、1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 0123456789101112131415 Minutes 8.72 12.13 :1.59 mV Minutes 0 5 10 15 20 25 30 35 0123456789101112131415 6.66 7.52 :1.23 mV 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0123456789101112131415 Minutes 7.66 9.12 :1.32 第20頁/共63頁 0.02.55.07.5min -10 -5 0 5 10 15 20 mV Detector A Ch1:20

17、0nm 3.217 3.732 Temp.： 25 Rs: 1.99 0.02.55.07.5min 0 25 50 75 mV Detector A Ch1:200nm 4.335 5.281 Temp.： 20 Rs: 2.78 Temp.： 15 Rs: 3.56 0.02.55.07.5min 0 10 20 30 40 50 60 70 mV Detector A Ch1:200nm 4.397 5.661 Column: CROWNPAK CR(+) (4.6*150 mm) Mobile phase: PH=1.0高氯酸高氯酸 Flow: 0.3 ml/min Sample: 蘇

18、氨酸蘇氨酸 第21頁/共63頁 部分分離部分分離 C C. .更換醇類更換醇類B. B. 調整溫度調整溫度 A.A.降低異丙醇濃度降低異丙醇濃度 第22頁/共63頁 由異丙醇換為乙醇由異丙醇換為乙醇-選擇性增大選擇性增大 Hex./IPA/AcOH=90/10/0.1 F COOH IPA和和EtOH有時會使峰形和有時會使峰形和值發(fā)生明顯變化值發(fā)生明顯變化 Column：CHIRALPAK AD Temp.：40, Flow rate：1.0ml/min. Sample：Flurbiprofen 0 5 10 15 20 25 30 35 mV 0123456789101112131415 M

19、inutes 6.66 7.52 =1.23 0 5 10 15 20 25 30 0123456789101112131415 7.58 9.64 =1.45 mV Minutes Hex./EtOH/AcOH=95/5/0.1 第23頁/共63頁 0.05.010.015.020.025.0min 0 25 50 75 100 mV Detector A Ch2:254nm 20.241 21.424 0.02.55.07.510.012.515.0min 0 50 100 150 200 250 300 mV Detector A Ch2:254nm 10.011 13.410 Colu

20、mn: AY-H (4.6X250mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/DEA(90/10/O.1) Column: AY-H (4.6X250mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase:hexane/EtOH/DEA(90/10/O.1) 第24頁/共63頁 01020min 0 250 500 mV Detector A Ch1:220nm 0.05.010.0min 0 250 500 750 mV Detector A Ch1:220nm 8.475 11.818 IA-H80I

21、20DEA0.1-1.0mlmin-35IA-M100DEA0.1-1.0mlmin-35 0.02.55.07.510.012.515.017.5min -50 -25 0 25 50 75 100 mV Detector A Ch1:220nm 12.164 14.754 0.02.55.07.510.012.5min 0 50 100 150 200 250 300 350 mV Detector A Ch1:214nm 5.011 7.462 OZ-H，Hexane/IPA /TFA/DEA= 80/20/0.1/0.05（v/v/v)，1.0 ml/min OZ-H，MeOH/DEA

22、=100/0.1（v/v)， 0.8 ml/min 第25頁/共63頁 第26頁/共63頁 第27頁/共63頁 CHIRALPAK IA/IB/IC CHIRALPAK IA/IB/IC研發(fā)背景研發(fā)背景 第28頁/共63頁 CHIRALPAK IA, IB, IC O N H CH3 CH3 OR O OR OR O n R OR O OR OR O n O N H CH3 CH3 R O N H Cl Cl R OR O OR OR O n CHIRALPAK IA CHIRALPAK IB CHIRALPAK IC New! 第29頁/共63頁 l 流動相組分沒有任何限制流動相組分沒有任何

23、限制 l 可以選用任何有機溶劑溶解樣品可以選用任何有機溶劑溶解樣品 l 新的手性選擇性新的手性選擇性 l 可以再生，壽命長可以再生，壽命長 l 正相與反相可以在同一支柱子上實現(xiàn)正相與反相可以在同一支柱子上實現(xiàn) 第30頁/共63頁 對于一些化合物，分離度可能 優(yōu)于涂布型 第31頁/共63頁 0.02.55.07.5min 0 250 500 750 mV Detector A Ch1:220nm 0.01.02.03.04.05.0min 0 250 500 750 mV Detector A Ch1:220nm 分離度優(yōu)于涂布型實例分離度優(yōu)于涂布型實例 Column: AD-H (4.6X25

24、0mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase: hexane/IPA/DEA (90/10/0.1) Column: IA (4.6X150mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase: hexane/IPA/DEA (90/10/0.1) 第32頁/共63頁 0.02.55.07.510.0min 0 250 500 750mV Detector A Ch1:220nm 0.02.55.07.5min 0 50 100 150 200 mV Detector A Ch1:220nm 3.944 5.528 由于在流

25、動相中改善了溶解度，由于在流動相中改善了溶解度， 柱效優(yōu)于涂布型柱效優(yōu)于涂布型 Column: AD-H (4.6X250mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Solubility: 0.5 mg/ml Mobile phase: hexane/IPA (70/30) Column: IA (4.6X250mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Solubility: 7.0 mg/ml Mobile phase: MtBE/MeOH (80/20) 第33頁/共63頁 更高的柱效，更好的峰形更高的柱效，更好的峰形 Chromatographic Co

26、ndition: Hexane/IPA, 90/10 (v/v) 第34頁/共63頁 通過溶劑多樣性優(yōu)化手性分離通過溶劑多樣性優(yōu)化手性分離 第35頁/共63頁 IBIB含水流動相含水流動相 非水與水相體系通用非水與水相體系通用 第36頁/共63頁 C H 3 N N O C H 3 024681012 50 100 150 200 250 300 a= 2.81 0 010102020 0.000.00 0.010.01 0.020.02 0.030.03 0.040.04 0.050.05 a= 2.36 a= 1.96 0 01 12 2 3 34 45 5 6 67 78 8 9 910

27、101111121213131414 0 0 0.10.1 0.20.2 0.30.3 0 02 24 46 68 8101012121414 0.00.0 0.20.2 0.40.4 0.60.6 0.80.8 1.01.0 a= 1.79 0 010102020 0.000.00 0.010.01 0.020.02 0.030.03 0.040.04 a= 1.70 02468101214 0 50 100 150 200 250 a= 1.65 0 010102020 0.00.0 0.10.1 0.20.2 a= 1.63 a= 1.33 0 02 24 46 68 810101212

28、1414 0.00.0 0.20.2 0.40.4 0.60.6 0.80.8 1.01.0 第37頁/共63頁 修復再生后修復再生后 （可使用各種強極性溶劑）（可使用各種強極性溶劑） 柱性能受損柱性能受損 （ 如受強吸附雜質的影響）如受強吸附雜質的影響） O O F O O H O H 樣品樣品新色譜柱新色譜柱 第38頁/共63頁 IA柱的修復再生方法： 第一：第一：EtOH 0.EtOH 0.4 4ml/min 30minml/min 30min 第二：第二：DMF 0.3ml/min 3hDMF 0.3ml/min 3h 第三：第三：EtOH 0.3ml/min 50minEtOH 0.

29、3ml/min 50min 第四：第四：H/E=90/10H/E=90/10 還不行，再用下面條件還不行，再用下面條件 第一：第一：EtOH 0.EtOH 0.4 4ml/min 30minml/min 30min 第二：第二：THF 0.5ml/min 2hTHF 0.5ml/min 2h 第三：第三：EtOH 0.EtOH 0.4 4ml/min 30minml/min 30min 第四：第四：DMF 0.3ml/min 3hDMF 0.3ml/min 3h 第五：第五：EtOH 0.3ml/min 50minEtOH 0.3ml/min 50min 第六：第六：H/E=90/10H/E=

30、90/10 第39頁/共63頁 IB IC柱的修復再生方法： 第一：第一：EtOAc 1ml/min 30minEtOAc 1ml/min 30min，有添加劑的，有添加劑的2h, 2h, 室溫保存室溫保存2 2天天 第二：第二：H/I=90/10 1ml/min 1hH/I=90/10 1ml/min 1h 第40頁/共63頁 鍵合型固定相篩選一般流程鍵合型固定相篩選一般流程 l 選用比較典型的溶劑組合作為起始篩選流動相選用比較典型的溶劑組合作為起始篩選流動相 Hexane/IPA（EtOH） Hexane/THF(DCM, EA) MtBE/ MeOH (IPA,EtOH） MtBE/ T

31、HF(DCM, EA) ACN/ MeOH (IPA,EtOH） l 如果分析物的溶解度不好，優(yōu)先選用溶解度好的有機溶劑作為流動相組分如果分析物的溶解度不好，優(yōu)先選用溶解度好的有機溶劑作為流動相組分 l 使用多元流動相優(yōu)化分離使用多元流動相優(yōu)化分離 第41頁/共63頁 第42頁/共63頁 (MPa)() OD-RH *1 =90/100/100 10 54027 OJ-RH AS-RH 540*229*2,3 AD-RH 新新產產品：品： AY-RH / OZ-RH 第43頁/共63頁 根據(jù)樣品性質選擇流動相根據(jù)樣品性質選擇流動相 樣品性質OD-RH、OJ-RHAD-RH、AS-RH 中性水/

32、乙腈 酸性 磷酸水溶液(pH2)/乙腈 0.1M 磷酸緩沖液(pH2)/乙腈 堿性 0.1M KPF6 水溶液/乙腈 0.1M NaPF6水溶液/乙腈 20mM 硼酸緩沖液(pH9)/乙腈 20mM 磷酸緩沖液(pH8)/乙腈 1） 酸性流動相： 甲酸、乙酸 2） 堿性流動相： 碳酸氫氨（醋酸銨，甲酸銨） 第44頁/共63頁 第45頁/共63頁 反相流動相的反相流動相的pH值對分離度的影響值對分離度的影響 (AS-RH ) O O H 中性化合物 Benzoin ON H O C O O H 酸性化合物 N-CBZ-Norvaline 堿性化合物 Ofloxacin ethyl ester O

33、 NN N F O C O O Et 水溶液 水溶液/CH3CN=60/40 流速：1.0ml/min. 水溶液/CH3CN=60/40 流速：1.0ml/min. 水溶液/CH3CN=80/20 流速：0.5ml/min. 0 5 10 15 mV 02468101214 Minutes 7.16 8.77 0 2 4 6 8 10 12 mV 012345678910 Minutes 2.25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 mV 05 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Minutes 27.79 水 磷酸水溶液 (pH2) 硼酸緩沖液 (pH9)

34、0 5 10 15 mV 02468101214 Minutes 7.11 8.70 0 5 10 15 20 mV 0.02.04.06.08.0 Minutes 4.17 4.69 0 20 40 60 80 mV 0510 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Minutes 4.00 4.484.77 0 5 10 15 mV 02468101214 Minutes 6.97 8.53 0 10 20 30 40 50 60 70 mV 012345678910 Minutes 1.85 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 05 10 15 20 25 30

35、35 40 45 50 55 60 Minutes 30.74 36.78 第46頁/共63頁 有機溶劑種類對分離的影響有機溶劑種類對分離的影響 12.18 13.54 8.20 8.84 11.52 12.35 8.21 14.12 15.78 7.45 7.97 水水/乙腈乙腈 =50/50 水水/乙醇乙醇 =35/65 水水/甲醇甲醇 =25/75 O O H 2-Methyl-1-tetralone2-Phenyl-2-butanol 手性柱手性柱： CHIRALPAK AD-RH 、流速流速：0.5ml/min、溫度、溫度：25 第47頁/共63頁 反相柱分析條件優(yōu)化的總結反相柱分析

36、條件優(yōu)化的總結 第48頁/共63頁 第49頁/共63頁 手性色譜柱組合篩選手性色譜柱組合篩選 CHIRALPAK AD-H CHIRALPAK AS-H CHIRALCEL OD-H CHIRALCEL OJ-H CHIRALPAK AY-H CHIRALCEL OZ-H CHIRALPAK IA CHIRALPAK IB CHIRALPAK IC ： 0.46cmI.D.15cmL 第50頁/共63頁 組合篩選設備組合篩選設備 IPA 第51頁/共63頁 泵泵 紫外檢測器紫外檢測器 色譜柱自動切換閥色譜柱自動切換閥 流動相流動相2 自動進樣器自動進樣器 組合篩選設備示意圖組合篩選設備示意圖

37、流動相流動相1 溶劑切換閥溶劑切換閥 旋光檢測器旋光檢測器 第52頁/共63頁 串聯(lián)旋光檢測器的好處串聯(lián)旋光檢測器的好處 1 1.1.用用UVUV檢測器只出現(xiàn)檢測器只出現(xiàn)“峰峰”的時候的時候 應用旋光檢測器可確認其分離狀況應用旋光檢測器可確認其分離狀況 第53頁/共63頁 2. 2. 可確認洗脫順序可確認洗脫順序 串聯(lián)旋光檢測器的好處串聯(lián)旋光檢測器的好處 2 第54頁/共63頁 若篩選沒得到理想的分析條件時若篩選沒得到理想的分析條件時 第55頁/共63頁 第56頁/共63頁 Daicel大部分手性柱是涂敷型產品，在市場上具有獨特性。大部分手性柱是涂敷型產品，在市場上具有獨特性。 若導入錯誤的溶

38、劑若導入錯誤的溶劑(CH2Cl2、乙酸乙酯、甲苯等、乙酸乙酯、甲苯等)，柱子會馬上被破壞，柱子會馬上被破壞。 當流動相或樣品溶液導入錯誤的溶劑時，柱壓劇增，分離突然變差當流動相或樣品溶液導入錯誤的溶劑時，柱壓劇增，分離突然變差。 一旦錯誤地使用了溶劑，重新恢復柱子性能的可能性很低。一旦錯誤地使用了溶劑，重新恢復柱子性能的可能性很低。 若您遇到此類分析故障，請對照出廠報告重新確認柱子的性能或與大賽璐聯(lián)系若您遇到此類分析故障，請對照出廠報告重新確認柱子的性能或與大賽璐聯(lián)系 常見使用故障常見使用故障-溶劑錯誤溶劑錯誤 1 第57頁/共63頁 DaicelDaicel正相手性柱的流動相和樣品溶液不能使

39、用水溶液正相手性柱的流動相和樣品溶液不能使用水溶液 若不小心導入水，柱子不會徹底受損若不小心導入水，柱子不會徹底受損。 只需要使用色譜級無水乙醇低流速將水置換出來只需要使用色譜級無水乙醇低流速將水置換出來。 常見使用故障常見使用故障- -溶劑錯誤溶劑錯誤 2 2 第58頁/共63頁 所有溶劑入口所有溶劑入口 泵 泵與進樣閥之間 定量環(huán) 進樣閥清洗液 進樣閥與柱子之間 柱子與檢測器之間 檢測器 使用前徹底清洗管路使用前徹底清洗管路 1.用水將HPLC所有管路徹底清洗（） 2.用異丙醇將HPLC所有管路徹底清洗 （） 3.用流動相將HPLC所有管路徹底清洗（）。 第59頁/共63頁 l流動相或樣品

40、溶液過濾不徹底，固體顆粒堵塞管路或柱頭，會引起柱壓過高。流動相或樣品溶液過濾不徹底，固體顆粒堵塞管路或柱頭，會引起柱壓過高。 l樣品中成分在柱頭析出或強烈吸附，會引起柱壓升高。樣品中成分在柱頭析出或強烈吸附，會引起柱壓升高。 l流速過快，會引起柱壓過高，特別是當使用粘度高的溶劑，流速過快，會引起柱壓過高，特別是當使用粘度高的溶劑， 如如IPA, EtOH，流速應控制在，流速應控制在0.1-0.3 ml/min l 每種柱子有特定的承壓范圍，請仔細參照相應的每種柱子有特定的承壓范圍，請仔細參照相應的色譜柱說明書色譜柱說明書。 l 徹底過濾流動相及樣品溶液。徹底過濾流動相及樣品溶液。 l 樣品預處

41、理樣品預處理 l 更換流動相時，或者剛把柱子剛接上儀器的時候，逐步增加流速更換流動相時，或者剛把柱子剛接上儀器的時候，逐步增加流速 l 儀器設定保護柱壓儀器設定保護柱壓 原因：原因： 后果：后果： l 長期超壓會引起柱頭塌陷，反壓上升，柱效下降。長期超壓會引起柱頭塌陷，反壓上升，柱效下降。 解決方法：解決方法： 壓力壓力 第60頁/共63頁 殘留物在普通流動相中可長時間地穩(wěn)定保留 用醇洗滌可除去大部分的堿性殘留物 用酸洗滌也可除去堿性殘留物 用堿洗滌可除去酸性殘留物 如何避免如何避免“殘留效應殘留效應” 第61頁/共63頁 歡迎您訪問！歡迎您訪問！ 第62頁/共63頁 大大賽賽璐璐藥藥物物手手性性技技術術（上上海海）有有限限公公司司 DAICEL CHIRAL TECHNOLOGIES (CHIN