皮質(zhì)醇(cortisol)作業(yè)指導書

1、皮質(zhì)醇(cortisol)1. 分析原理 采用競爭法原理，整個過程18分鐘完成。 第1步：20l標本與生物素化的抗皮質(zhì)醇抗體和釕（ru）標記的皮質(zhì)醇衍生物混勻，分別形成復合物，數(shù)量取決于標本中待測物的濃度。生物素化的抗皮質(zhì)醇抗體一部分與標本中待測物結(jié)合，另一部分與ru標記的皮質(zhì)醇衍生物結(jié)合。 第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒。形成的復合物通過生物素、鏈酶親和素之間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。 第3步：反應(yīng)混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學發(fā)光，通過光電倍增管進行測定。檢測結(jié)果由機器自動從標準曲線上查出。此曲線由儀器通過2點定標校正，由從試劑條形

2、碼掃描入儀器的原版標準曲線而得。2. 標本要求血清：按標準常規(guī)方法采集。血漿：肝素、edta或枸櫞酸鈉抗凝均可。其中用枸櫞酸鈉抗凝的血漿，測定結(jié)果需+10%。標本在28度可穩(wěn)定5天，20度可穩(wěn)定3個月。只能凍融一次。含沉淀的標本使用前需離心。不要加熱滅活標本。標本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。注意：由于皮質(zhì)醇在血中的含量呈現(xiàn)晝夜的周期性變化，應(yīng)注明采血時間。3. 試劑、校準品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：m：鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5ml。粒子濃度0.72mg/ml，生物素結(jié)合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐劑。r1：生物素化的羊抗皮質(zhì)醇抗體（灰蓋）

3、，1瓶，9ml。濃度90ng/ml，mes緩沖液0.1mol/l，ph6.0。含防腐劑。r2：ru(bpy) 3 2標記的皮質(zhì)醇-多肽（黑蓋），1瓶，9ml。濃度25ng/ml，達那唑（danazol）20mg/ml，mes緩沖液0.1mol/l，ph6.0。含防腐劑。校準品：elecsys 皮質(zhì)醇定標液（cortisol calset）貨號11875124質(zhì)控品：elecsys 通用質(zhì)控品（precicontrol universal）1和2貨號11731416其他所需材料： elecsys2010、cobas e411分析儀需要 elecsys系統(tǒng)緩沖液（procell）貨號1166298

4、8 elecsys 測量池清洗液（cleancell）貨號11662970 elecsys 添加劑液（syswash）貨號11930346 elecsys 系統(tǒng)清洗液支架（adapter for sysclean) ）貨號11933159 elecsys 2010反應(yīng)杯（assay cup) 貨號11706802 elecsys 2010吸樣頭（assay tip) 貨號11706799 modular analytics e170分析儀需要 elecsys系統(tǒng)緩沖液（procell m）貨號04880340 elecsys測量池清洗液（cleancell m）貨號04880293 elecs

5、ys系統(tǒng)緩沖液/測量池清洗液預(yù)熱杯（pc/cc-cup）貨號03023141 elecsys反應(yīng)杯/吸樣頭盒(assaycups/assaytips combimagazine m)貨號12102137 elecsys廢物盒(wasteliner)貨號03023150 elecsys系統(tǒng)清洗液支架(sysclean adapter m) )貨號03027651 各種分析儀均適用的材料 elecsys標本通用稀釋液 貨號11732277 elecsys 系統(tǒng)清洗液（sysclean） 貨號112985004. 儀器和校準使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)elecsys 2010/e 170/e 41

6、1全自動電化學發(fā)光免疫自動分析儀儀器校準：每批皮質(zhì)醇試劑有一條形碼標簽，含有該批試劑定標所需的特殊信息。應(yīng)用elecsys cortisol calset定標液定標。 定標頻率：每批試劑必須用新鮮試劑（試劑經(jīng)儀器注冊24小時以內(nèi)）標定一次，如再次標定即根據(jù)下列要求： elecsys2010、e170和cobas e 分析儀： 一個月（同一批號試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒） 各種分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進行標定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時。5. 操作步驟（以e 170為例）5.1 校準操作步驟：在編緝各項目的參數(shù)時，已經(jīng)在applicationcalib菜單中定義好了定標類型和幾點定標。因

7、此在對各項目進行定標時，只需在定標菜單calibration中進行即可。3.2進入calibrationstatus菜單，用鼠標選擇需定標的項目，再根據(jù)需要點單點定標（blank鍵）或兩點定標（two point鍵）、跨距定標（span鍵）、多點定標（full鍵），再選擇其它項目進行相應(yīng)選擇，最后點save，將定標物放入在calibrationcalibrator中定義好的位置，點start，再點start，儀器開始定標。 在calibrationstatus菜單中看定標結(jié)果，點calibration result鍵看定標結(jié)果，點reaction monitor鍵看每個定標物的反應(yīng)曲線。5.2

8、 樣本檢測程序： 單個樣本輸入，在主菜單下選擇workplace- testslection，在sequence no欄輸入標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目，點save鍵，樣本號自動累加。批量常規(guī)標本的輸入，在主菜單下選擇workplace- testslection，在sequence no欄輸入起始標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目，點repeat，輸入該批標本的最后一個標本號，點ok即可。進樣分析，將標本按在workplace菜單中輸入的標本號順序在樣本架上排好，放入進樣盤內(nèi),按start鍵，輸入該批上機標本的起始標本號，再點start鍵，儀器自動開始推架檢

9、測標本。6. 質(zhì)量控制elecsys 通用質(zhì)控品（precicontrol universal）1和2以及其它合適的質(zhì)控品。各濃度區(qū)域的質(zhì)控至少每24小時或每一次定標后測定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實驗室的具體要求。檢測值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計算方法對每一個標本，儀器會自動計算皮質(zhì)醇含量，單位是nmol/l，g/dl或g/l。換算方法nmol/l x 0.03625 = g/dl (x 0.3625 = g/l) g/dl x 27.586 = nmol/l (g/l x 2.7586)8. 參考范圍 血清和血漿： 上午時間 7-10 a.m.

10、: 171-536 nmol/l (6.2-19.4g/dl) (n=144) 下午時間 4-8 p.m. : 64-340 nmol/l (2.3-12.3g/dl) (n=137) 尿中游離皮質(zhì)醇：100-379 nmol/24 h (36-137 g/24 h) 唾液： 上午 8-10 a.m.: 19.1 nmol/l ( 0.69 g/dl) 下午 2:30-3:30 p.m.: 11.9 nmol/l ( 0.43 g/dl) 如有必要，各實驗室應(yīng)自己測定一個正常值范圍9. 分析性能 1.001750 nmol/l或0.03663g/dl 高于檢測范圍的標本可用通用稀釋液稀釋。建議

11、1:10稀釋。稀釋后的標本皮質(zhì)醇含量必須高于50nmol/l或1.8g/dl。如用手工稀釋，結(jié)果應(yīng)乘上稀釋倍數(shù)。如果是機器自動稀釋，機器會自動計算結(jié)果。10. 干擾因素 該方法不受黃疸（膽紅素60mg/dl）、溶血（血紅蛋白1.9g/dl）、脂血（脂質(zhì)2700mg/dl）和生物素5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時后才能采血。 不受類風濕因子干擾（1100u/ml）。 17種常用藥物經(jīng)試驗對本測定無干擾。偶爾會遇到抗鏈酶親和素抗體以及其它免疫反應(yīng)的干擾。 懷孕、使用避孕藥和雌激素治療會導致皮質(zhì)醇測定結(jié)果不準確。在使用潑尼松龍、甲基潑尼松龍或潑尼松治療的患者會出現(xiàn)假性皮質(zhì)醇升

12、高。美替拉酮試驗可導致11脫氧皮質(zhì)醇升高，由于交叉反應(yīng)也可出現(xiàn)假性皮質(zhì)醇升高。患21羥基酶缺損的病人,體內(nèi)21脫氧皮質(zhì)醇升高,因而可出現(xiàn)皮質(zhì)醇升高。在分析結(jié)果時，應(yīng)考慮采血時間,另外嚴重的應(yīng)激反應(yīng)也導致皮質(zhì)醇升高。 elecsys皮質(zhì)醇測定結(jié)果應(yīng)結(jié)合病人病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來進行診斷。11. 臨床意義 皮質(zhì)醇（氫可的松）是最主要的糖皮質(zhì)類固醇，對維持人體的多項機能有重要作用。與其它糖皮質(zhì)類固醇激素一樣，皮質(zhì)醇由共同前體膽固醇在腎上腺皮質(zhì)區(qū)合成而來。在外周血中，90%的皮質(zhì)醇與皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白（cbg）以及白蛋白結(jié)合后進行運輸。 皮質(zhì)醇最重要的的生理機能是升高血糖，抗炎和免疫抑制作用。 皮質(zhì)醇的合成和分泌受下丘腦垂體腎上腺皮質(zhì)軸的負反饋機制的調(diào)節(jié)。當皮質(zhì)醇水平下降時，下丘腦分泌促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（crh），使垂體分泌促腎上腺皮質(zhì)激素（acth），并由acth刺激腎上腺合成并分泌皮質(zhì)醇。皮質(zhì)醇本身對垂體和下丘腦起負反饋作用。另外，機體在應(yīng)急狀態(tài)下，皮質(zhì)醇分泌增加。皮質(zhì)醇在血中的含量呈現(xiàn)晝夜的周期性變化。在清晨含量達到最高峰（700nm