第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理

1、第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 第第22章章 免疫學(xué)檢測(cè)原理免疫學(xué)檢測(cè)原理 免疫學(xué)檢測(cè)是指借助免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、 分子生物學(xué)等理論或方法，對(duì)抗原、抗體、 免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子等進(jìn)行定性、定量檢測(cè)。 臨床醫(yī)學(xué)中，免疫學(xué)檢測(cè)可用于免疫相關(guān)疾 病的診斷、病情檢測(cè)和療效評(píng)價(jià)等。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 第一節(jié)第一節(jié) 基于抗原基于抗原- -抗體反應(yīng)的檢測(cè)方法抗體反應(yīng)的檢測(cè)方法 第二節(jié)第二節(jié) 免疫細(xì)胞檢測(cè)免疫細(xì)胞檢測(cè) 第三節(jié)第三節(jié) 分子生物學(xué)技術(shù)在免疫學(xué)上的應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)在免疫學(xué)上的應(yīng)用 本章內(nèi)容本章內(nèi)容 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 第一節(jié)第一節(jié) 基于抗原基于抗原- -抗體反應(yīng)的檢測(cè)方法抗

2、體反應(yīng)的檢測(cè)方法 一、抗原抗體反應(yīng)概念一、抗原抗體反應(yīng)概念 抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)生的高度特異性結(jié)合反應(yīng)。在抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)生的高度特異性結(jié)合反應(yīng)。在 合適條件下所進(jìn)行的體外反應(yīng)中，抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合適條件下所進(jìn)行的體外反應(yīng)中，抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié) 合可呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象（如凝集、沉淀）。由于實(shí)驗(yàn)所用抗合可呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象（如凝集、沉淀）。由于實(shí)驗(yàn)所用抗 體存在于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)。體存在于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn) 高度特異性高度特異性 可精確區(qū)分物質(zhì)間極微細(xì)的差異?？删_區(qū)分物質(zhì)間極微細(xì)

3、的差異。 表示為表示為 親和力親和力：一個(gè)抗原表位與相應(yīng)抗體單一抗原：一個(gè)抗原表位與相應(yīng)抗體單一抗原 結(jié)合位點(diǎn)間的結(jié)合能力。結(jié)合位點(diǎn)間的結(jié)合能力。 親合力親合力：指一個(gè)抗體分子與整個(gè)抗原大分子：指一個(gè)抗體分子與整個(gè)抗原大分子 間的結(jié)合強(qiáng)度，與抗原表位數(shù)目有關(guān)。間的結(jié)合強(qiáng)度，與抗原表位數(shù)目有關(guān)。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 2.抗原抗體結(jié)合的帶現(xiàn)象與可見性抗原抗體結(jié)合的帶現(xiàn)象與可見性 抗原抗體結(jié)合存在帶現(xiàn)象（前帶、等帶、后帶），適宜的抗原抗體濃度和比例抗原抗體結(jié)合存在帶現(xiàn)象（前帶、等帶、后帶），適宜的抗原抗體濃度和比例 （等帶）決定抗原抗體結(jié)合后能否出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)；（等帶）決定抗原抗體結(jié)

4、合后能否出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)； 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 3. 表面化學(xué)基團(tuán)之間的可逆結(jié)合表面化學(xué)基團(tuán)之間的可逆結(jié)合 抗原抗體結(jié)合除了空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)外，主要以氫鍵、范德華力抗原抗體結(jié)合除了空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)外，主要以氫鍵、范德華力 和疏水鍵等非共價(jià)結(jié)合。易受溫度、酸堿度和離子強(qiáng)度的影和疏水鍵等非共價(jià)結(jié)合。易受溫度、酸堿度和離子強(qiáng)度的影 響而解離，解離后抗原抗體仍具有原有特性，可借助親和層響而解離，解離后抗原抗體仍具有原有特性，可借助親和層 析法純化抗原或抗體。析法純化抗原或抗體。 抗原抗體反應(yīng)的抗原抗體反應(yīng)的2個(gè)階段個(gè)階段 第第1階段是抗原抗體特異性結(jié)合，可在數(shù)秒鐘至幾分鐘內(nèi)完階段是抗原抗體特異性

5、結(jié)合，可在數(shù)秒鐘至幾分鐘內(nèi)完 成；第成；第2階段是小的抗原抗體復(fù)合物靠正負(fù)電荷吸引形成較階段是小的抗原抗體復(fù)合物靠正負(fù)電荷吸引形成較 大復(fù)合物，所需時(shí)間從數(shù)分鐘至數(shù)日不等。大復(fù)合物，所需時(shí)間從數(shù)分鐘至數(shù)日不等。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 三、抗原抗體反應(yīng)的影響因素三、抗原抗體反應(yīng)的影響因素 電解質(zhì)電解質(zhì) 抗原抗體等電點(diǎn)分別為抗原抗體等電點(diǎn)分別為pH3-5和和pH5-6，在中性或，在中性或 弱堿性條件下表面帶有較多負(fù)電荷，適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會(huì)使弱堿性條件下表面帶有較多負(fù)電荷，適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會(huì)使 它們失去一部分負(fù)電荷而相互結(jié)合；它們失去一部分負(fù)電荷而相互結(jié)合； 溫度溫度 通常為通常為37，適

6、當(dāng)提高反應(yīng)溫度可增加抗原與抗體，適當(dāng)提高反應(yīng)溫度可增加抗原與抗體 分子的碰撞機(jī)會(huì)，但分子的碰撞機(jī)會(huì)，但56以上可使抗原或抗體變性失活；以上可使抗原或抗體變性失活； 1.酸堿度酸堿度 抗原抗體反應(yīng)的最適抗原抗體反應(yīng)的最適pH值在值在6-8之間，之間，pH值過高值過高 或過低均可直接影響抗原抗體的理化性質(zhì)。當(dāng)或過低均可直接影響抗原抗體的理化性質(zhì)。當(dāng)pH值接近等值接近等 電點(diǎn)時(shí)，抗原抗體多帶正負(fù)電荷相等，由于自身吸引而出現(xiàn)電點(diǎn)時(shí)，抗原抗體多帶正負(fù)電荷相等，由于自身吸引而出現(xiàn) 凝集，導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。凝集，導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 四、抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用四、抗原抗體反

7、應(yīng)檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用 抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)生的高度特異性結(jié)合反應(yīng)。在合抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)生的高度特異性結(jié)合反應(yīng)。在合 適條件下所進(jìn)行的體外反應(yīng)中，抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合可適條件下所進(jìn)行的體外反應(yīng)中，抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合可 呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象（如凝集、沉淀）。由于實(shí)驗(yàn)所用抗體存在呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象（如凝集、沉淀）。由于實(shí)驗(yàn)所用抗體存在 于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)。于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 五、抗原五、抗原-抗體反應(yīng)的基本檢測(cè)方法抗體反應(yīng)的基本檢測(cè)方法 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 Ab Ag 高親和力 Ab Ag 低親和力 特異性特異性 結(jié)合力的

8、表示方法結(jié)合力的表示方法親和力和親合力親和力和親合力 低親合力 高親合力 Ag-Ab反應(yīng)的原理反應(yīng)的原理 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 Ab 過剩Ag 過剩 比例適當(dāng)，交聯(lián)成網(wǎng)絡(luò) Ag-Ab反應(yīng)的可見性反應(yīng)的可見性 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 1.凝集反應(yīng)凝集反應(yīng) 直接凝 集反應(yīng) 1:2稀釋待測(cè)血清 1:4 1:8 1:16 細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性Ag或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)Ab在電解質(zhì)存在的情況 下直接反應(yīng)，二者比例合適時(shí)，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)現(xiàn)象。 玻片法 試管法 常用于菌種鑒定或ABO血型鑒定 選擇最佳稀釋濃度， 常用于檢測(cè)抗體的滴 度或效價(jià)，見于臨床 診斷傷寒或副傷寒所 用的

9、肥達(dá)氏反應(yīng)和診 斷布氏菌病所用的瑞 特試驗(yàn)。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 間接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng) 將可溶性Ag/Ab先吸附在某些顆粒載體上，形成致敏顆粒，然后再與相應(yīng)Ab/Ag進(jìn) 行反應(yīng)產(chǎn)生凝集，叫間接凝集反應(yīng)。如將溶血毒素O吸附于乳膠顆粒上的抗“O” 試驗(yàn)、人IgG作為Ag吸附于乳膠顆粒上的類風(fēng)濕因子檢測(cè)。 凝集反應(yīng)常用于溶血性疾病的診斷： + 病人的病人的RBC體內(nèi)體內(nèi)anti-Rh 由于抗體多屬于由于抗體多屬于IgG，分子，分子 量較小，抗體與紅細(xì)胞間的量較小，抗體與紅細(xì)胞間的 結(jié)合力不能克服細(xì)胞間的排結(jié)合力不能克服細(xì)胞間的排 斥力，不出現(xiàn)凝集斥力，不出現(xiàn)凝集 + 體外加入體外加入

10、 抗人抗人IgG 出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象， 叫直接庫姆試驗(yàn)叫直接庫姆試驗(yàn) 正常人正常人O型血型血 的的Rh+的的RBC + 患者血清內(nèi)的患者血清內(nèi)的 游離游離anti-Rh + 體外加入體外加入 抗人抗人IgG 出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象， 叫間接庫姆試驗(yàn)叫間接庫姆試驗(yàn) 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 2.沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) AgAgAgAg Ab in gel 單向免疫擴(kuò)散單向免疫擴(kuò)散 Ag1 Ab Ag2Ag3Ag4 雙向免疫擴(kuò)散雙向免疫擴(kuò)散 免疫比濁免疫比濁 過量Ab Ab Ab Ab 毒素、組織浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼可見的沉 淀物，稱為沉淀反應(yīng)。沉淀

11、反應(yīng)可在液體中進(jìn)行，也可在半固體瓊脂凝膠中進(jìn)行。 鑒定多種抗原是完全相同、鑒定多種抗原是完全相同、 部分相同或完全不同部分相同或完全不同 用于確定用于確定 抗原濃度抗原濃度 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)免疫電泳免疫電泳 存在于不同區(qū)域的抗原與抗存在于不同區(qū)域的抗原與抗 體結(jié)合，在比例適宜處形成體結(jié)合，在比例適宜處形成 沉淀弧。沉淀弧的數(shù)量、位沉淀弧。沉淀弧的數(shù)量、位 置和形狀與標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)比，置和形狀與標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)比， 可分析樣品的成分及其性質(zhì)。可分析樣品的成分及其性質(zhì)。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 3.免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù) 免疫酶測(cè)定法免疫酶測(cè)定法 免疫熒光技術(shù)免疫熒

12、光技術(shù) 放射免疫測(cè)定法放射免疫測(cè)定法 免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù) 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 免疫酶測(cè)定法免疫酶測(cè)定法 夾心法夾心法ELISA 間接間接ELISA BASELISA 利用生物利用生物 素和抗生物素蛋白為橋梁素和抗生物素蛋白為橋梁 微粒捕獲酶免疫分析技術(shù)微粒捕獲酶免疫分析技術(shù) 將已知特異性抗體致敏的將已知特異性抗體致敏的 免疫微粒與生物素、親和免疫微粒與生物素、親和 素、酶相結(jié)合，最后酶作素、酶相結(jié)合，最后酶作 用于熒光底物發(fā)光，通過用于熒光底物發(fā)光，通過 檢測(cè)熒光強(qiáng)度判斷未知抗檢測(cè)熒光強(qiáng)度判斷未知抗 原的含量。原的含量。 a） b） 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 免疫組

13、化技術(shù)免疫組化技術(shù) 定位、定性、定量檢測(cè) 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù) 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 放射免疫測(cè)定放射免疫測(cè)定 用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫測(cè)定。將 同位素的敏感性與抗原抗體結(jié)合的特異性結(jié)合起來， 具有重復(fù)性好、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于激素、 藥物等微量物質(zhì)的檢測(cè)。常用的有131I、125I。 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新 的免疫分析技術(shù)。最常用的發(fā)光物質(zhì)是魯米諾。 靈敏度高、簡(jiǎn)便、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù) 用膠體金顆粒標(biāo)記Ab/Ag

14、，以檢測(cè)未知Ag/Ab的方法。 氯金酸在還原劑作用下，可聚合成特定大小的金顆粒，形成帶負(fù)電的 疏水膠溶液，因靜電作用而呈穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。 該技術(shù)可應(yīng)用于免疫組化(光鏡下檢查)和免疫層析快速診斷。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 免疫印跡法免疫印跡法-Western blotting 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 4.4.蛋白質(zhì)芯片技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù) 又稱為蛋白質(zhì)微列陣，指固定于支持介質(zhì)上的大量蛋白質(zhì)構(gòu)成的微列陣。 根據(jù)蛋白質(zhì)分子間特異性結(jié)合的原理，可實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確、高通量的檢測(cè)。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 第二節(jié)第二節(jié) 免疫細(xì)胞檢測(cè)免疫細(xì)胞檢測(cè) 淋巴細(xì)胞及其淋巴細(xì)胞及其 亞群的分離亞群

15、的分離 免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞 功能測(cè)定功能測(cè)定 磁珠分磁珠分 離法離法 免疫吸附免疫吸附 分離法分離法 流式細(xì)流式細(xì) 胞術(shù)胞術(shù) 肽肽MHC四聚四聚 體技術(shù)體技術(shù) T細(xì)胞功細(xì)胞功 能測(cè)定能測(cè)定 B細(xì)胞功細(xì)胞功 能測(cè)定能測(cè)定 細(xì)胞因細(xì)胞因 子檢測(cè)子檢測(cè) T細(xì)胞增 殖試驗(yàn) 遲發(fā)型超 敏反應(yīng)的 檢測(cè) 抗體含 量測(cè)定 溶血空 斑試驗(yàn) 巨噬細(xì)胞 吞噬試驗(yàn) 細(xì)胞毒細(xì)胞毒 試驗(yàn)試驗(yàn) 吞噬功吞噬功 能測(cè)定能測(cè)定 51Cr釋放法 乳酸脫氫 酶釋放法 細(xì)胞染 色法 凋亡細(xì)胞 檢測(cè)法 硝基藍(lán)四 氮唑試驗(yàn) 生物活性 檢測(cè)法 免疫學(xué)檢 測(cè)法 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 一、免疫細(xì)胞及其亞類計(jì)數(shù)一、免疫細(xì)胞及其亞類計(jì)數(shù) 稀

16、釋 血液 淋巴細(xì)胞 分離液(葡 聚糖-泛影 葡胺 r=1.078) 離心 單 個(gè)核細(xì) 胞 (PBMC，包 括淋巴細(xì)胞、 DC和NK) 紅細(xì)胞和 粒細(xì)胞 血漿 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 稀釋 血液 淋巴細(xì)胞分 離液(葡聚糖 -泛影葡胺 r=1.078) 離心 單 個(gè)核細(xì)胞 (PBMC，包 括淋巴細(xì)胞、 DC和NK) 紅細(xì)胞和 粒細(xì)胞 血漿 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 磁珠分離法磁珠分離法 免疫吸附分離法免疫吸附分離法 流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù) 肽肽MHC四聚體技術(shù)四聚體技術(shù) 淋巴細(xì)胞及其亞群的分離淋

17、巴細(xì)胞及其亞群的分離 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 免疫吸附分離法免疫吸附分離法 加入淋巴 細(xì)胞懸液 anti-CD4 anti-CD4 anti-CD4 棄上清 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 磁珠分離法磁珠分離法 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù) 熒光抗體標(biāo) 記混合細(xì)胞 噴嘴 單細(xì)胞懸液 5000-10000個(gè)/秒 細(xì)胞分選器 熒光 檢測(cè)器 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 抗原肽抗原肽-MHC四聚體分離技術(shù)四聚體分離技術(shù) 親和素親和素 抗原肽抗原肽 MHC I 生物素生物素 anti-CD8 肽-四聚體 肽特異性CD8T CD4T及B 非肽特異性CD8T 熒光素?zé)晒馑?/p>

18、 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 二、免疫細(xì)胞功能的測(cè)定二、免疫細(xì)胞功能的測(cè)定 T細(xì)胞功細(xì)胞功 能測(cè)定能測(cè)定 B細(xì)胞功細(xì)胞功 能測(cè)定能測(cè)定 細(xì)胞因細(xì)胞因 子檢測(cè)子檢測(cè) T細(xì)胞增 殖試驗(yàn) 遲發(fā)型超 敏反應(yīng)的 檢測(cè) 抗體含 量測(cè)定 溶血空 斑試驗(yàn) 巨噬細(xì)胞 吞噬試驗(yàn) 細(xì)胞毒細(xì)胞毒 試驗(yàn)試驗(yàn) 吞噬功吞噬功 能測(cè)定能測(cè)定 51Cr釋放法 乳酸脫氫 酶釋放法 細(xì)胞染 色法 凋亡細(xì)胞 檢測(cè)法 硝基藍(lán)四 氮唑試驗(yàn) 生物活性 檢測(cè)法 免疫學(xué)檢 測(cè)法 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 T細(xì)胞功細(xì)胞功 能測(cè)定能測(cè)定 T細(xì)胞增 殖試驗(yàn) 遲發(fā)型超 敏反應(yīng)的 檢測(cè) T細(xì)胞受到特異性抗原或有絲分裂原刺激后發(fā)生增殖，可通過以

19、下三種 方法檢測(cè)： 形態(tài)計(jì)數(shù)法：活化細(xì)胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則、胞質(zhì)增多、細(xì)胞核 松散及出現(xiàn)較多核仁； 3H-TdR或125I-UdR摻入法：3H-TdR能摻入到合成的DNA中，用液 體閃爍儀檢測(cè)樣品的放射活性，特點(diǎn)是靈敏可靠，但須特殊儀器， 易有放射性污染。 1. MTT (四甲基偶氮唑鹽)比色法： 外來抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答后，再用相同的抗原作皮試， 可導(dǎo)致遲發(fā)型超敏反應(yīng)，T細(xì)胞活化并釋放多種細(xì)胞因子，產(chǎn)生 以單個(gè)核細(xì)胞浸潤為主的炎癥，局部發(fā)生充血滲出，24-48h發(fā) 生，72h到達(dá)高峰。陽性反應(yīng)表現(xiàn)為局部紅腫和硬結(jié)，反應(yīng)強(qiáng)烈 的發(fā)生水腫甚至壞死。細(xì)胞免疫正常者出現(xiàn)陽性反應(yīng)，細(xì)胞免 疫低下

20、者呈弱陽性或陰性反應(yīng)。常用于檢測(cè)某些微生物感染。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 B細(xì)胞功細(xì)胞功 能測(cè)定能測(cè)定 抗體含 量測(cè)定 溶血空 斑試驗(yàn) 可通過單項(xiàng)瓊脂擴(kuò)散法、ELISA、速率比濁法等測(cè)定標(biāo)本中各類Ig的含量。 綿羊紅細(xì)胞 (SRB C)免 疫動(dòng)物 4天后取出動(dòng)物 脾臟，在脾細(xì)胞 懸液中含有抗 SRBC的漿細(xì)胞 脾細(xì)胞與 SRBC在適量 瓊脂糖液中混 勻 在抗體形成細(xì)胞周圍出 現(xiàn)溶解的透明區(qū)，即溶 血空斑。1個(gè)空斑區(qū)代表 1個(gè)漿細(xì)胞 通過記錄溶血空斑的數(shù) 目可知抗原特異性B細(xì)胞 的數(shù)目 加入新鮮補(bǔ)體， 倒入平皿中培養(yǎng) 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 細(xì)胞毒細(xì)胞毒 試驗(yàn)試驗(yàn) 51Cr釋放法

21、 乳酸脫氫 酶釋放法 細(xì)胞染 色法 靶細(xì)胞被殺傷后，向體系中加入臺(tái)盼蘭，可進(jìn)入膜破損 的細(xì)胞內(nèi)，將細(xì)胞染成藍(lán)色。活細(xì)胞拒染而不著色。 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 凋亡細(xì)胞 檢測(cè)法 瓊脂糖電泳法 正常細(xì)胞基因組DNA 凋亡細(xì)胞 TUNEL法 在細(xì)胞中加入末端脫氧 核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)和生 物素標(biāo)記的核苷酸 TdT能在游離的DNA3端 缺口連接標(biāo)記的核苷酸 加入親和素-酶復(fù)合物， 在DNA斷裂處顯色 流式細(xì)胞術(shù) Annexin V PI 凋亡 早期 凋亡 晚期 壞死 期 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 巨噬細(xì)胞 吞噬試驗(yàn) 吞噬功吞噬功 能測(cè)定能測(cè)定 硝基藍(lán)四氮 唑(NBT)試驗(yàn) NBT在殺菌

22、過程中產(chǎn)生反應(yīng)性氧中間物，其中超氧陰離子能使被吞 噬進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的NBT還原成不溶性藍(lán)黑色甲臜顆粒，沉積于胞漿中。 光鏡下計(jì)數(shù)NBT陽性細(xì)胞可反映PMN的殺傷功能。 將待測(cè)mf與雞紅細(xì)胞混合溫育后，雞紅細(xì)胞被mf吞噬，根據(jù)吞噬 百分率確定mf吞噬能力。 吞噬百分率=吞有紅細(xì)胞的mf/mf總數(shù) 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 細(xì)胞因細(xì)胞因 子檢測(cè)子檢測(cè) 生物活性 檢測(cè)法 免疫學(xué)檢 測(cè)法 夾心ELISA或ELISPOT 熒光素標(biāo)記抗體染胞內(nèi)細(xì)胞因子，F(xiàn)ACS分析 細(xì)胞增殖或增殖抑制法，如細(xì)胞因子依賴性或 抑制性細(xì)胞株 細(xì)胞病變抑制法，如感干擾素抑制病毒感染性 細(xì)胞損傷 第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理 檢測(cè)B細(xì)胞 產(chǎn)生的抗體 檢測(cè)T細(xì)胞 產(chǎn)生的CK 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)- -ELISpot 第