第七組液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用

1、藥物分析課程論文綜述液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用藥學(xué)2011級(jí)（2）班劉星明（） 張 婷（）林敏燕（） 劉培能（） 指導(dǎo)教師：周漩2014 年 6 月 摘 要液相色譜（LC）是分離各種未知混合物的高效能的物理分離技術(shù)，核磁共（NMR）是結(jié)構(gòu)分析的強(qiáng)有力手段。液相色譜核磁共振（LC-NMR ）聯(lián)用技術(shù)能達(dá)到快速分離、結(jié)構(gòu)鑒定并且定量分析的目的，該技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用非常廣泛，具有廣闊的應(yīng)用前景。本文主要對(duì)LC-NMR 聯(lián)用技術(shù)在化學(xué)藥物分析（包括未知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析、混合物中已知成分的定量分析）、中藥 物分析（包括異構(gòu)體分析、新化合物的結(jié)構(gòu)鑒定），天然產(chǎn)物，代謝產(chǎn)物分析中的應(yīng)用進(jìn)

2、行詳細(xì)的綜述。關(guān)鍵詞 ：生物堿；中藥材；含量測(cè)定 前言液相色譜- 核磁共振譜聯(lián)用技術(shù)(LC - NMR)的嘗試始于20 世紀(jì)70 年代末, 但直到90 年代中后期才發(fā)展得較為成熟并且得到推廣使用。而隨后從確定菊科植物Zaluzaniagrayana 的粗提物中倍半萜內(nèi)酯成分的結(jié)構(gòu)開(kāi)始 , LC - NMR 在天然產(chǎn)物分析中逐漸顯示出高效、快速、微量的優(yōu)勢(shì)。現(xiàn)由于LC-NMR一體化聯(lián)用技術(shù)能一次性完成從樣品的分離純化到峰的檢測(cè)、結(jié)構(gòu)測(cè)定和定量分析,提供大量分子結(jié)構(gòu)和混合物組成的信息,提高了研究效率和靈活性,因此引起人們的廣泛關(guān)注,現(xiàn)已成為目前用于天然產(chǎn)物研究的一種新型分析手段,。隨著對(duì)藥品分析要

3、求的提高，LC-NMR 又與質(zhì)譜（MS）等技術(shù)聯(lián)合，發(fā)展成了LC-SPE-NMR 聯(lián)用、LC-MS-NMR聯(lián)用， 實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)互補(bǔ), 在混合物成分的結(jié)構(gòu)鑒定中具有不可替代的作用。LC-NMR 聯(lián)用技術(shù)包括連續(xù)流動(dòng)（on-line）和停止流動(dòng)（off-line）兩種模式。LC-NMR 在混合物尤其是未知物的結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用已經(jīng)越來(lái)越廣泛。在藥物分析的領(lǐng)域：有機(jī)小分子藥物的鑒別、定量，生物大分子類(lèi)生化藥物的結(jié)構(gòu)研究；對(duì)藥物的體外評(píng)價(jià)與研究、對(duì)體內(nèi)藥物的監(jiān)控與研究等也有廣泛使用。本文主要闡述本文綜述LC-NMR聯(lián)用技術(shù)在分析化學(xué)藥、中藥藥物分析，天然產(chǎn)物分析，代謝產(chǎn)物分析的應(yīng)用。1 化學(xué)藥物分析1.1

4、未知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析 LC-NMR 聯(lián)用技術(shù)在分析未知雜質(zhì)時(shí)，無(wú)需純品做對(duì)照，不產(chǎn)生破壞性，具有專(zhuān)屬性強(qiáng)、快速、準(zhǔn)確、精密度好等優(yōu)點(diǎn)。為混合物的即時(shí)分離、鑒定提供了一種簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的方法。檢測(cè)藥物中的雜質(zhì)是這一技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域之一。楊春1等用高效液相色譜-核磁共振(HPLC-CNM)聯(lián)用技術(shù)中的連續(xù)流動(dòng)和停止流動(dòng)兩種模式對(duì)萘哌地爾中雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。所有的高效液相色譜采用Varian公司的Prostar-230高效液相色譜儀, 分析柱為Inertsil ODS-3柱(4.6I.D.250mm, 5m)，萘哌地爾樣品用乙腈溶解, 濃度為5g/ L。連續(xù)流動(dòng)的進(jìn)樣量為20L, 停止流動(dòng)的進(jìn)樣量為50L。

5、檢測(cè)器為VarianProstar-330二極管陣列檢測(cè)器, 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。HPLC分離條件為乙腈磷酸緩沖溶液=6535( pH7.88.0)。所有的圖譜均在INOVA-500核磁共振儀上完成。HPLC-NMR采用反相60L流動(dòng)探頭。WET脈沖序列抑制乙腈和重水的溶劑峰, 同時(shí)抑制乙腈的衛(wèi)星峰。在沒(méi)有純品的對(duì)照下，根據(jù)1HNMR,1H-1HCOSY譜完成了主要雜質(zhì)1-萘環(huán)-丙三醇結(jié)構(gòu)鑒定。聯(lián)用技術(shù)同時(shí)能得到化合物的UV、NMR、MS信息，為化合物分析提供了全面的信息。孫煌2等應(yīng)用HPLC-MS/MS/核磁共振(1H-NMR/13C-NMR/HMBC) 技術(shù)，對(duì)多索茶堿及其未知雜質(zhì)進(jìn)

6、行結(jié)構(gòu)分析,首次發(fā)現(xiàn)并確定多索茶堿未知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。采用Inertsil ODS-3（4.6m,2.1mm150mm,迪馬公司），流動(dòng)相為乙腈-水( 82:18) ，進(jìn)樣量為10l，通過(guò)ESI 與LC相聯(lián)采用全掃描一級(jí)質(zhì)譜及全掃描二級(jí)質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定。通過(guò)多索茶堿對(duì)照品及茶堿對(duì)照品確定未知雜質(zhì)，通過(guò)其產(chǎn)物離子推測(cè)，該未知雜質(zhì)為多索茶堿的同分異構(gòu)體1,3-二甲基-9-（1,3-二氧環(huán)戊基-2-基）甲基-3,9-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮。采用聯(lián)用技術(shù)已經(jīng)證明是一種有效的研究工具，特別是在藥物研發(fā)、生產(chǎn)過(guò)程中。1.2 混合物的定量分析 核磁共振波譜用于定量分析的基礎(chǔ)是不同化學(xué)環(huán)境上的原子核共振吸收峰

7、面積只與它的原子數(shù)有關(guān)，因此，不需要引進(jìn)任何校正因子，不需要為每一種被測(cè)物選擇相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品。LC-NMR 廣泛應(yīng)用于有機(jī)化合物的定性分析，它在化合物純度定值含量測(cè)定中也具有很多優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于藥物合成及生產(chǎn)中。美國(guó)藥典規(guī)定使用定量 NMR法，以苯甲酸芐酯為內(nèi)標(biāo)物，進(jìn)行亞硝酸戊酯的定量分析。此外，LC-NMR 法還應(yīng)用于多種藥物的副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物含量測(cè)定，具有快速、簡(jiǎn)便、專(zhuān)屬性高的特點(diǎn)；與其他方法相比，有不破壞樣品，信號(hào)峰不會(huì)發(fā)生重疊等優(yōu)勢(shì)3。柳娜4等采用HPLC-PDA和核磁共振(NMR)法定性定量分析。流動(dòng)相為氘代甲醇水-乙酸（40|：60：0.5），以1.0 mL/min的體積流量在

8、Pure 2811C18 色譜柱（250 mm8mm，2040m）中分離樣品，柱溫室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。Bruker DRX-500 NMR 儀。杜仲中環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物京尼平甙酸(GPA)和京尼平甙(GPS)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為w( GPA) = 94.69%和w( GPS) =93.27%，該方法能夠滿足一般的混合物的定量分析，且成本低。Lienau 5等用LC-NMR 聯(lián)用技術(shù)同時(shí)分離并定量分析了生育酚這一大類(lèi)物質(zhì)。HP1100型HPLC系統(tǒng)，流動(dòng)相為氘代甲醇甲醇（5 95），以0.4 mL/min的體積流量在Bischoff C30 色譜柱（250 mm4.6 mm，3 m）中分離樣品

9、，柱溫22 ，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。Bruker AMX 600 NMR 儀。Bruker Esquire-LC 離子阱LC/MS(n )系統(tǒng)，裝有大氣壓化學(xué)電離（APCI）源和離子阱。生育酚中各單一成分的量為： -生育酚醋酸酯96.7% 、 -生育酚 1.8%、 -生育酚0.7%、-生育酚0.1%、-生育酚0.1%，檢測(cè)對(duì)樣品需求量少，對(duì)微量樣品也適用。2 中藥藥物分析 中藥和天然藥物成分十分復(fù)雜，而有效物質(zhì)通常多為數(shù)種，因此單純采用一種色譜分離模式通常不能夠全面地解決問(wèn)題，往往需要將多種分離模式相結(jié)合。采用LC-NMR可以很好的表征化學(xué)成分特征和相對(duì)含量的差異。LC-NMR技術(shù)在色譜峰分離

10、不完全情況下仍可提供詳盡信息，使得同分異構(gòu)體無(wú)需分離提取，便可進(jìn)行檢測(cè)分析，大大提高了分析速度。2.1 藥用成分異構(gòu)體分析 Bobzin等用Hewlett-Packard 1100 HPLC系統(tǒng)，Alltech Alltima C18 色譜柱，流動(dòng)相為A 0.01%TFA的D2O，B 0.01% TFA的10%100%乙腈，梯度洗脫，體積流量1 mL/min，Va r ia n Unity-Inova 500 MHz NMR儀，有效體積60 L的1H/13C PFG探頭，WET 脈沖來(lái)抑制溶劑峰，連續(xù)模式下，聯(lián)合使用Perkin-Elmer Sciex AP100型MS儀對(duì)天然產(chǎn)物氨基轉(zhuǎn)移酶中

11、存在的幾何異構(gòu)體進(jìn)行了鑒定，分別是阿普他明、反式阿普他明、阿普他昔及其類(lèi)似物。根據(jù)質(zhì)子的偶合常數(shù)確定其雙鍵的構(gòu)型，作者提出雖然LC-NMR聯(lián)用缺乏靈敏性，但該方法仍然廣泛用于已知化合物的分析和未知化合物的結(jié)構(gòu)鑒定，將為藥物的研究提供可靠地手段和提高效率。劉寧等用LC-10AT HPLC儀，HPCHEM型LC/MS儀，色譜柱為Kromasil C18（250 mm4.6 mm，5 m），流動(dòng)相水（8020），體積流量為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)216 nm。INOV500 MHz NMR儀，在500 MHz的工作頻率下，以氘代甲醇為溶劑并作化學(xué)位移內(nèi)標(biāo)，試驗(yàn)在室溫下進(jìn)行，對(duì)HPLC分離得到的

12、兩種異構(gòu)體進(jìn)行NMR分析，得到了雙氫青篙素型差向異構(gòu)體向轉(zhuǎn)化過(guò)程。實(shí)驗(yàn)中得到異構(gòu)體和異構(gòu)體的值分別為5.425.55。從NMR圖中可看到共振峰化學(xué)位移變化的過(guò)程，也說(shuō)明雙氫青篙素的異構(gòu)體轉(zhuǎn)化現(xiàn)象的存在。王映紅等在HPLC-MS分析的基礎(chǔ)上用HPLC-NMR技術(shù)進(jìn)一步分析了土茯苓中的二氫黃酮醇苷4個(gè)異構(gòu)體。YMC-Pack ODS-A（250 mm4.6 mm，5 m）色譜柱，柱溫25 ，流動(dòng)相為乙腈（A）、0.05%甲酸的D2O溶液（B），梯度洗脫010 min 5%20% A、1045 min 20%55% A、4555 min 55%90% A，體積流量0.8 mL/min。Va r ia

13、n NOVA -500 HPLC-NMR聯(lián)用系統(tǒng)，停流模式，WET抑制溶劑峰。Agilent 1100 LC-MSD-TRAP XCT PLUS系統(tǒng)，ESI接口。土茯苓中二氫黃酮醇苷的4個(gè)異構(gòu)體分別為落新婦苷、新落新婦苷、異落新婦苷和新異落新婦苷。該方法避免了傳統(tǒng)的分離單體成分再鑒定結(jié)構(gòu)的繁瑣過(guò)程，從而可以簡(jiǎn)便快速的得各化合物的分子結(jié)構(gòu)信息。Strohschein等研究了-胡蘿卜素的順/反異構(gòu)體，分離出5種順/反異構(gòu)體，并通過(guò)2D NMR確定了3種順/反異構(gòu)體結(jié)構(gòu)。用Merck L6200 A LC儀，（250 mm4.6 mm，5 m和3 m）硅 膠C30色譜柱，分別采用丙酮氘水（928，9

14、37）作為流動(dòng)相，體積流量為1 mL/min。Bruker AMX 600 NMR儀，BPSU接口，停流模式。其中在3 m硅膠柱分離異構(gòu)體最大峰比在5 m硅膠柱大。這是由于3 m硅膠柱能分離到異構(gòu)體更小的洗脫體積，在實(shí)驗(yàn)中NMR流通池為120 L，這比洗脫體積小。因此認(rèn)為NMR檢測(cè)量取決于樣品最大峰的濃度而不是樣品的總量。Dachtler等用HPLC-MS和HPLC-NMR在線聯(lián)合技術(shù)進(jìn)行菠菜和視網(wǎng)膜中的葉黃素和玉米黃質(zhì)立體異構(gòu)體的分離和測(cè)定，濃度在納克水平。HP 1100 HPLC系統(tǒng)，ProntoSIL C30（250 mm4.6 mm，3 m）色譜柱，柱溫為22。用氘水作為流動(dòng)相以減少溶

15、劑峰，流動(dòng)相為丙酮（A）和水（B），梯度洗脫021 min 86% A、2125 min 86%97% A、2540 min 97% A，體積流量為1 mL/min。Esquire-LC離子阱MS系統(tǒng)，APCI接口。NMR采用Bruker AMX 600NMR儀，BPSU接口，停流模式和連續(xù)流動(dòng)模式結(jié)合。結(jié)果提示LC-NMR聯(lián)用技術(shù)是結(jié)構(gòu)明確的異構(gòu)體分析的首選方法，可以用于痕量樣品的分析和鑒定。2.2 新化合物的結(jié)構(gòu)鑒定 Hendrawati等對(duì)峨?yún)nthriscussy lvestris (L.) Hoffm.中木脂素類(lèi)成分的分離鑒定。采用Agilent 1200 色譜儀，Agilent

16、Zorbax Eclipse XDB-C18（150 mm4.6 mm，5 m）色譜柱，柱溫為30 ，流動(dòng)相組分為0.1%甲酸水溶液（A）和0.1%甲酸的乙腈溶液（B），05 min 32% B、515 min 32%86% B、1515.1 min 95% B、15.120 min 95% B梯度洗脫，體積流量1 mL/min。API 3000型MS儀，APCI接口。Bruker Avance III 500 MHz儀和5-mm CPTCI 低溫探頭。獲得了1D 1H、1H-1H- DQF-COSY、1H-1H-TOCSY、1H-13C-HSQC、1H-13C-HMQC和1H-1H-NOES

17、Y譜，最終鑒定了提取物中14種化合物，其中有6種含甲基的木脂素是以前沒(méi)有報(bào)道過(guò)的，分別為-盾葉鬼臼素、-盾葉鬼臼素、異鬼臼苦酮、去氧鬼臼毒素、換臼毒酮、-盾葉鬼臼素甲基醚。結(jié)果證明聯(lián)合使用LC-ESI-MS，LC-SPE-NMR技術(shù)是一種有效的分離鑒定化合物的分析手段，樣品可以通過(guò)SPE在線富集，使得NMR靈敏度提高。Zehl等采用Varian 9012 HPLC系統(tǒng)，色譜柱為Hypersil BDS-C18（250 mm4.6 mm，5 m），柱溫25，流動(dòng)相為0.05%TFA的氘水溶液（A）、乙腈（B），梯度洗脫01 min 12% B、120 min 12%20% B、2050 min

18、20%50% B，體積流量為1.0 mL/min，停流模式，Varian INOVA 500 MHz儀，有效體積為65 L的ID PFG探頭，WET抑制溶劑峰，聯(lián)合運(yùn)用三重四級(jí)桿型MS儀，分析1D（1H，13C）和雜核2DNMR（COSY、TOCSY、ROESY）譜，對(duì)茅膏菜屬植物中黃酮類(lèi)和鞣花酸衍生物進(jìn)行了定量定性分析，其中2-O-沒(méi)食子?；鸾z桃苷、楊梅素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-(2-O-沒(méi)食子酸)-吡喃半乳糖苷這3種化合物首次在此種屬中被鑒別。HPLC-SPE-NMR聯(lián)用技術(shù)是分離，分析化學(xué)或生物制品生物活性有效的手段，Goulas等21分析了狹葉香科Teucrium pol

19、ium L.提取物。采用HPLC-SPE-NMR和HPLC-DPPH聯(lián)用，Agilent G13311A HPLC系統(tǒng)，色譜柱為Discovery C18（250 mm4.6 mm，5 m），柱溫為室溫，流動(dòng)相采用0.1%醋酸溶液（A）、乙腈（B），梯度洗脫，020 min 15% B、2030 min 15%40% B、3040 min 40%80% B、4045 min 80% B、4555 min 80%95% B。流動(dòng)相體積流量為0.6 mL/min。Bruker AV-500 MR儀，有效體積為60 L的3 mm LC SEI 13C-1H探頭。首次在狹葉香科中發(fā)現(xiàn)金石蠶苷，且是其中

20、含量最高、性最強(qiáng)的成分，毛蕊花苷以及二甲氧基槲皮素是抗氧化的主要成分。Xu等采用聯(lián)用技術(shù)分析了鏈莢木屬植物Ormocarpum kirkii S.Moore中黃酮類(lèi)化合物共有14個(gè)不同的成分，其中有8種是新發(fā)現(xiàn)的化合物，分別為氨基丙酰胺狼毒素、葡糖基化狼素、順式7-氧-葡糖基化狼毒素、反式7-氧-葡糖基化狼毒素、7,7-雙氧-葡糖基化狼毒素、4-羥基強(qiáng)的松龍、順式7,4-雙羥基強(qiáng)的松龍、反式7,4-雙羥基強(qiáng)的松龍。LC-NMR采用Agilent1200色譜儀，流動(dòng)相為0.05%的TFA溶液和乙腈，體積流量為2 mL/min。Zorbax Eclipse XDB-C18（150 mm4.6 mm

21、，5 m）色譜柱，柱溫為20 ，Bruker DRX 400 NMR儀。實(shí)驗(yàn)采用電子圓二色譜技術(shù)分析化合物的手性結(jié)構(gòu)，用HPLC技術(shù)分離得到不同的單體，然后聯(lián)用NMR技術(shù)對(duì)分離得到的單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，這些技術(shù)的聯(lián)用將有助于推進(jìn)天然產(chǎn)物中新的化合物的發(fā)現(xiàn)。3 天然產(chǎn)物分析應(yīng)用NMR 能檢測(cè)到化合物的結(jié)構(gòu)信息, 但其靈敏度由組分濃度決定, 因此目前該技術(shù)研究的主要對(duì)象是相對(duì)分子質(zhì)量較小的化合物。當(dāng)常規(guī)天然產(chǎn)物研究方法效率過(guò)低甚至無(wú)法有效發(fā)揮作用時(shí), HPLC- NMR 則顯示出快速高效的優(yōu)點(diǎn), 可用于粗提物微量組分的分離及結(jié)構(gòu)鑒定, 因此在天然產(chǎn)物研究的不同環(huán)節(jié)均能發(fā)揮重要作用。3.1 化學(xué)

22、篩選并指導(dǎo)粗提物定向分離由于靈敏度較低, 且缺乏適用的數(shù)據(jù)庫(kù), 對(duì)粗提物進(jìn)行化學(xué)篩選時(shí)HPLC- NMR 不能作為首選方法。高效靈敏的分析方法, 如HPLC- MS 及HPLC/ UV 等更有效。但HPLC- NMR 在鑒別新組分結(jié)構(gòu)類(lèi)型, 鑒定結(jié)構(gòu)具有規(guī)律性的同類(lèi)化合物, 尤其在化合物的快速鑒定篩除等方面, 能有效地補(bǔ)充HPLC/UV- MS 法檢測(cè)結(jié)構(gòu)信息的不足, 從而能提高效率, 避免資源浪費(fèi)。這些在天然產(chǎn)物的前期研究中具有重要意義。多數(shù)HPLCNMR實(shí)驗(yàn)是在停止流動(dòng)模式下檢測(cè)1H NMR 譜, 主要目的是判斷組分的結(jié)構(gòu), 指導(dǎo)隨后的定向分離新化合物等粗提物的處理步驟, 為天然產(chǎn)物的常規(guī)

23、研究奠定基礎(chǔ)3.2 結(jié)構(gòu)鑒定 HPLC- NMR 鑒定結(jié)構(gòu)通常從了解粗提物生源的植物學(xué)及化學(xué)分類(lèi)學(xué)的特點(diǎn)開(kāi)始, 結(jié)合HPLC/ UV- MS 和HPLC- MS n 等信息并參考可能存在的相關(guān)文獻(xiàn), 初步判別組分骨架類(lèi)型。同時(shí)主要以停止流動(dòng)模式檢測(cè)高濃度組分, 可得1H NMR 譜、COSY、TOCSY 等1H- 1H NMR 相關(guān)譜以及HSQC、HMBC 等1H-13C NMR 相關(guān)譜, 并從后者反推出13C 的信息。這些信息基本可解決結(jié)構(gòu)鑒定問(wèn)題。雖然現(xiàn)在HPLC- NMR 檢測(cè)涉及13C 信號(hào)的譜圖仍較困難。基于以1H作為發(fā)射道的各類(lèi)譜信息, 在鑒定粗提物中含量少、不穩(wěn)定而不易分離制備的

24、組分, 以及難分離或發(fā)生互變異構(gòu)的組分, 尤其在確定結(jié)構(gòu)、構(gòu)象及光學(xué)異構(gòu)體時(shí), HPLC- NMR 仍發(fā)揮著重要作用。Dachtler 等HPLC- MS 及HPLC- NMR 檢測(cè)了幾種生物樣品中對(duì)光或氧敏感易變的黃體素、黃質(zhì)素等胡蘿卜素類(lèi)成分, 區(qū)別并鑒定了它們的數(shù)種幾何異構(gòu)體, 為闡明這些組分在預(yù)防治療相關(guān)疾病時(shí)的不同作用奠定了基礎(chǔ)。Schaller 等 HPLC- MS 及HPLC- NMR 測(cè)定了兩個(gè)新的難分離的甲基醌類(lèi)二萜組分, 對(duì)它們的混合物進(jìn)行了常規(guī)NMR 實(shí)驗(yàn), 并用HPLC- NMR 研究了它們?cè)谌芤褐械幕プ儺悩?gòu)現(xiàn)象4 代謝產(chǎn)物方面的應(yīng)用 LC-MS 能分析更高極性和更高相

25、對(duì)分子質(zhì)量的化合物，已被越來(lái)越多地用于代謝組學(xué)研究，它非常適合于生物樣本中復(fù)雜代謝產(chǎn)物的檢測(cè)和潛在標(biāo)記物的鑒定。而藥品中的代謝物分析在新藥研究和臨床用藥監(jiān)控方面起著極為重要的作用。LC- MS一個(gè)很大優(yōu)勢(shì)是它大多數(shù)情況下不需要對(duì)非揮發(fā)性代謝物進(jìn)行化學(xué)衍生。過(guò)去幾年，LC- MS技術(shù)中的軟電離方式使得質(zhì)譜儀更加完善和穩(wěn)健，尤其是最近幾年，超高效液相色譜(UPLC)/高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOFMS)技術(shù)及聯(lián)機(jī)的MarkerLynx 自動(dòng)化數(shù)據(jù)處理軟件的應(yīng)用為復(fù)雜生物混合物提供了更好的分離分析能力；另一方面，現(xiàn)代離子阱多級(jí)譜儀的發(fā)展使LC- MS 可提供未知化合物的結(jié)構(gòu)解析信息。因此選擇LC-MS，

26、簡(jiǎn)便連續(xù)，靈敏度高，分辨率好。4.1 藥物研究中的應(yīng)用 藥物在體內(nèi)吸收、分布、代謝、排泄過(guò)程或某一治療措施,可使機(jī)體功能活動(dòng)發(fā)生變化, 進(jìn)而影響終端代謝產(chǎn)物的變化, 并在代謝物有所反應(yīng)。因此,代謝物水平變化是藥物研究的有效指標(biāo)。對(duì)LC-MS分析產(chǎn)生的數(shù)據(jù),采用適當(dāng)化學(xué)計(jì)量學(xué)方法進(jìn)行處理, 可提取豐富的藥物代謝信息, 使代謝組學(xué)研究在藥物研發(fā)階段發(fā)揮作用, 進(jìn)行早期活體毒理測(cè)試, 而且能為藥物分子篩選提供依據(jù), 幫助確定藥物的安全性生物標(biāo)記物和代謝表型, 評(píng)價(jià)將動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)應(yīng)用于人類(lèi)疾病的可行性。Wagner等采用LC-MS技術(shù)研究男性和女性患者口服阿司匹林的代謝差異。Sun等通過(guò)LC-MS進(jìn)行

27、兒茶酚氧位甲基移位酶抑制劑在大鼠體內(nèi)代謝輪廓分析, 為藥物的藥理、毒理研究提供依據(jù)。Zhao等通過(guò)LC-MS技術(shù), 成功檢測(cè)小鼠服用傳統(tǒng)中藥后代謝物改變?？梢?jiàn), LC-MS 應(yīng)用于代謝組學(xué)技術(shù),可分析傳統(tǒng)中藥的藥理、毒理。4.2 疾病標(biāo)志物的尋找及病因?qū)W研究中的應(yīng)用病理生理刺激或基因改變時(shí), 生物體系動(dòng)態(tài)代謝改變, 如尿液、血漿、血清、唾液和膽汁等生物體終端樣本動(dòng)態(tài)變化, 同樣為代謝組學(xué)研究范圍。Chen等通過(guò)LC/ MS 研究發(fā)現(xiàn)21 種代謝物可能成為肝癌標(biāo)志物。Haleem 等指出, LC-MS檢測(cè)技術(shù)可成為預(yù)測(cè)膀胱癌的檢測(cè)手段。同時(shí), LC-MS對(duì)疾病標(biāo)志物的探索, 將為疾病發(fā)病機(jī)制研究提供依據(jù)。由此可見(jiàn),LC-MS 作為一門(mén)很有潛力的新興技術(shù), 將在疾病診斷, 尤其是在疾病的早期診斷及進(jìn)一步闡明發(fā)病機(jī)制方面, 將發(fā)揮重要作用。 五 結(jié)束語(yǔ) LC-NMR的特點(diǎn)不僅是LC的高效分離能力和NMR精確的結(jié)構(gòu)分析能力，更在于將兩者巧妙結(jié)合技術(shù)。優(yōu)點(diǎn)主要表現(xiàn)在減少了從提取到譜學(xué)數(shù)據(jù)測(cè)定中間的樣品制備步驟，實(shí)驗(yàn)周期縮短，減少樣品分散，需要樣品量少，分析速度