(項目管理)項目名稱基于肝藏血主疏泄的臟象理論研究首席科學(xué)家

1、項目名稱：基于“肝藏血主疏泄”的臟象理論研究首席科學(xué)家：王慶國 北京中醫(yī)藥大學(xué)起止年限：2011.1 至 2015.8依托部門：國家中醫(yī)藥管理局二、預(yù)期目標(biāo)本項目的總體目標(biāo)：1 、系統(tǒng)梳理肝藏血主疏泄的臟象理論， 澄清其歷史源流， 明確理論的含義、 內(nèi)容及相互關(guān)系， 發(fā)展與創(chuàng)新肝臟象理論， 探索臟象學(xué)說及中醫(yī)理論發(fā)展與創(chuàng)新 的新模式。2、確立肝藏血主疏泄功能異常的主要宏觀表現(xiàn)及微觀指標(biāo)，建立肝藏血主 疏泄功能異常狀態(tài)的判別模式。3、闡釋肝藏血主疏泄功能的生理調(diào)控機(jī)制，分析肝藏血與主疏泄間的關(guān)聯(lián) 網(wǎng)絡(luò)。4、揭示從肝論治臨床療效產(chǎn)生的機(jī)制和規(guī)律。5、闡釋肝藏血主疏泄在神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)中特異的功能

2、區(qū)域、傳導(dǎo) 通路以及特異的反應(yīng)狀態(tài)，揭示肝藏血主疏泄的基本科學(xué)內(nèi)涵。五年預(yù)期目標(biāo) :1. 闡明肝藏血主疏泄的基本含義、 學(xué)說內(nèi)容及兩者間的關(guān)系。 闡明肝藏血主 疏泄的應(yīng)用范圍與原則。2. 澄清肝藏血主疏泄理論的演變史， 探索適合臟象學(xué)說及中醫(yī)理論發(fā)展與創(chuàng) 新的新模式。3、編制健康人群調(diào)查量表，完成 300 例正常健康人四時八節(jié)的動態(tài)追蹤調(diào) 查研究； 120 例健康志愿者兩種應(yīng)激狀態(tài)前后的比較研究。建立肝藏血主疏泄調(diào) 控機(jī)體的狀態(tài)判別模式，探討肝藏血與主疏泄的內(nèi)在調(diào)控機(jī)制及內(nèi)在相關(guān)性。4、完成 100只大鼠、 20只樹鼩四時八節(jié)的動態(tài)研究。5、完成 100 例月經(jīng)規(guī)律的健康志愿者月經(jīng)周期觀測及應(yīng)

3、激反應(yīng)測試。6、完成 120 例健康志愿者兩種應(yīng)激狀態(tài)前后的比較研究。建立肝藏血主疏 泄調(diào)控機(jī)體的狀態(tài)判別模式，探討肝藏血與主疏泄的內(nèi)在調(diào)控機(jī)制及內(nèi)在相關(guān) 性。7、編制四種疾病的臨床調(diào)查量表，完成每種疾病各 800 例以上的臨床橫斷 面調(diào)查；建立肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模式。8、完成臨床觀測與干預(yù)，五種疾病各 300 例；揭示五種疾病從肝論證的機(jī) 制和證治規(guī)律。9、建立 4-8 種可反映肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的抑郁癥等 5 種疾病的病 證結(jié)合動物模型及其判別方法。10、完成動物模型功能區(qū)神經(jīng)元活性、血管反應(yīng)性、腸敏感性、內(nèi)分泌腺體 反應(yīng)性等功能測定、 化學(xué)物質(zhì)的含量變化、 化學(xué)物質(zhì)的反

4、饋作用等相關(guān)指標(biāo)的檢 測，完成關(guān)鍵組織部位的基于測序技術(shù)的轉(zhuǎn)錄組（數(shù)字基因表達(dá)譜） 、小RNA分 析；完成不少于20個關(guān)鍵分子的mRN及蛋白質(zhì)水平的驗證；完成關(guān)鍵分子相關(guān) 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的分析，揭示出與肝藏血主疏泄功能密切相關(guān)的共性分子網(wǎng)絡(luò)。11、完成養(yǎng)血調(diào)肝方對抑郁癥等 5 種疾病的反證及該方對肝藏血主疏泄功能 密切相關(guān)的共性分子網(wǎng)絡(luò)的作用機(jī)制研究； 完成實質(zhì)性肝損傷對肝藏血主疏泄功 能密切相關(guān)的共性分子網(wǎng)絡(luò)影響的研究。12、完成相關(guān)各項數(shù)據(jù)分析及挖掘； 完成信息管理系統(tǒng)的平臺建設(shè)； 建立基 于熵理論分析方法與隱結(jié)構(gòu)分析方法的應(yīng)用規(guī)范。13、發(fā)表相關(guān)學(xué)術(shù)論文 300 篇左右，其中 SCI 20 篇

5、左右，出版相關(guān)學(xué)術(shù)著 作 2 部。14、培養(yǎng)博士研究生 50 名，碩士研究生 80 名，博士后 6 名；形成多學(xué)科交 叉、中青年為主的創(chuàng)新性研究梯隊。三、研究方案1、以肝藏血主疏泄為核心的肝臟象理論研究 本項目應(yīng)用歷史分析的方法進(jìn)行中醫(yī)理論研究。 即采用知識考古學(xué)等思想史 研究思路與中醫(yī)傳統(tǒng)文獻(xiàn)方法結(jié)合， 系統(tǒng)梳理從先秦時期到新中國成立前歷代中 醫(yī)及相關(guān)文獻(xiàn)， 以肝主疏泄為切入點， 分析肝主疏泄及相關(guān)專題的對象形成、 陳 述方式、 概念的擴(kuò)散、 主題策略的選擇等內(nèi)容， 對文獻(xiàn)中肝藏血主疏泄應(yīng)含義及 其診治體系生成變化進(jìn)行具體分析， 以發(fā)現(xiàn)構(gòu)成某一時期醫(yī)學(xué)思想整體的深層結(jié) 構(gòu)“知識型”或“基本信

6、碼” ，也就是話語，根據(jù)話語的轉(zhuǎn)變來分析肝藏血 主疏泄應(yīng)含義及其診治體系的演變及背后的原因，以分析其形成和轉(zhuǎn)變的歷史； 在肝藏血主疏泄及其相關(guān)理論學(xué)術(shù)發(fā)展史的基礎(chǔ)上， 確立其理論內(nèi)涵、 應(yīng)用范圍 與原則，論證其在臟象學(xué)說、臟腑辨證以及臨床各科疾病診治中的地位與作用， 解決學(xué)術(shù)分歧與爭議。1.1 肝藏血主疏泄及其相關(guān)理論的知識考古學(xué)研究話語構(gòu)成分析： 應(yīng)用知識考古學(xué)， 對文獻(xiàn)中肝藏血主疏泄及其相關(guān)研究單 元進(jìn)行話語構(gòu)成分析， 分別對肝藏血主疏泄及其相關(guān)研究單元在辨證論治體系中 進(jìn)行對象形成、陳述方式、概念擴(kuò)散、主題從屬等話語構(gòu)成的四要素分析。即： 歷代醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)中肝藏血主疏泄對象的形成， 也就是在

7、診治過程中應(yīng)用肝藏血主疏 泄疾病范圍的確定、 肝藏血主疏泄病癥之間的劃分方法； 肝藏血主疏泄在診治體 系中陳述方式， 即肝藏血主疏泄以什么方式、 與哪些概念、 以什么次序關(guān)系出現(xiàn) 在診治體系中； 肝藏血主疏泄的界定， 即在診治體系中， 在肝藏血主疏泄與肝藏 血主疏泄等其它概念、 學(xué)說的相互關(guān)系中， 肝藏血主疏泄是怎樣被界定的； 肝藏 血主疏泄的從屬的主題，即肝藏血主疏泄是在論述什么問題時才出現(xiàn)。話語轉(zhuǎn)型分析：分析肝藏血主疏泄及其相關(guān)研究單元知識型的斷裂點， 確定其話語形成系統(tǒng)的成分轉(zhuǎn)換、 話語形成體系特征性的關(guān)系轉(zhuǎn)換、 各種不同話 語形成規(guī)則之間的轉(zhuǎn)換、各種實證性之間的關(guān)系的轉(zhuǎn)換。1.2 肝藏

8、血主疏泄及其相關(guān)理論學(xué)術(shù)發(fā)展史的確立 在肝藏血主疏泄及其相關(guān)理論等的關(guān)系中確定肝藏血主疏泄的含義與應(yīng)用 范圍、應(yīng)用原則，并在肝藏血主疏泄臨床適用范圍改變的基礎(chǔ)上確立其學(xué)術(shù)的演 變史；闡明其所在診治體系的構(gòu)成要素、 診斷和治療原則、 處方原則及其從一個 時期到另一個是其轉(zhuǎn)換的歷史。1.3 肝藏血主疏泄理論內(nèi)涵的確定 在肝藏血主疏泄及其相關(guān)理論學(xué)術(shù)發(fā)展史的基礎(chǔ)上， 確立其理論內(nèi)涵、 應(yīng)用 范圍與原則，論證其在臟象學(xué)說、 臟腑辨證以及臨床各科疾病診治中的地位與作 用，解決學(xué)術(shù)分歧與爭議。2、生理狀態(tài)下肝藏血主疏泄功能的調(diào)控機(jī)制研究2.1 依據(jù)現(xiàn)代文獻(xiàn)提取的信息，編制半開放式健康人群調(diào)查他評量表。遵

9、循臨床流行病學(xué)抽樣調(diào)查的相關(guān)各項要求， 依據(jù) 2005 年全國 1%人口抽樣調(diào)查資 料數(shù)據(jù)， 在全國多家醫(yī)院的體檢中心、 學(xué)校及社區(qū)， 開展體檢無器質(zhì)性病變中青 年人群 300 例（男：女 =1：1）動態(tài)追蹤調(diào)查，分別在一年四時八節(jié)（立冬、冬 至、立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分） ，分時間段從軀體癥狀、情緒、生 活質(zhì)量、生活事件、 相關(guān)指標(biāo)（生命特征、體質(zhì)體能、 血常規(guī)、一滴血、虹膜儀、 脈象儀、舌象儀、面色分析儀、神經(jīng)遞質(zhì)、退黑素等）及一般情況等信息，建立 數(shù)據(jù)庫。2.2 采用方差分析、秩和檢驗等統(tǒng)計方法，分析宏觀表現(xiàn)及微觀指標(biāo)的關(guān) 聯(lián)性；在不同季節(jié)的差異性；以及隨季節(jié)變化的動態(tài)規(guī)律。2

10、.3 應(yīng)用隱結(jié)構(gòu)模型對調(diào)查數(shù)據(jù)庫進(jìn)行多維樣本聚類分析，由計算機(jī)自動 搜索對調(diào)查人群進(jìn)行分類， 分析其中與肝藏血主疏泄?fàn)顟B(tài)相關(guān)的人群， 而后提取 該人群的特征性癥狀與指標(biāo)，建立肝藏血主疏泄功能狀態(tài)的判別模型。2.4 動物四時八節(jié)的動態(tài)觀測選取W大鼠100只，樹鼩20只，根據(jù)北京市氣象局氣象科學(xué)研究所提供。 2011 年 1 月-2016 年 1 月 5 年的四時八節(jié)的氣候參數(shù)：包括日照百分?jǐn)?shù)、平均溫 度、日溫差、平均氣壓、日降水量、平均風(fēng)力、平均相對濕度、平均濕度/ 平均溫度共 8 項。分別選取四時八節(jié)（立冬、冬至、立春、春分、立夏、夏至、立秋、 秋分）八個時間點，動態(tài)觀察動物的表征，進(jìn)行褪黑素

11、、神經(jīng)遞質(zhì)等多項指標(biāo)的 檢測，建立數(shù)據(jù)庫，描述動物四時八節(jié)各項指標(biāo)的動態(tài)變化曲線，提取動物狀態(tài) 的核心指標(biāo)，建立動態(tài)變化判別模式，分析肝藏血主疏泄功能與時間節(jié)律的相關(guān) 性。3、健康志愿者應(yīng)激狀態(tài)下肝藏血主疏泄功能的調(diào)控機(jī)制研究3.1 婦女月經(jīng)周期應(yīng)激研究：選取月經(jīng)規(guī)律的健康志愿者 100 人，連續(xù)觀測 其三個月經(jīng)周期的情緒、 軀體癥狀以及一般性指標(biāo)的變化， 并與月經(jīng)期、黃體期、 月經(jīng)后期分別進(jìn)行應(yīng)激狀態(tài)測試， 主要進(jìn)行心理認(rèn)知測試， 檢測多導(dǎo)腦電等指標(biāo)， 建立數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析， 探索月經(jīng)周期中肝藏血狀態(tài)變化與疏泄功能的相關(guān)性， 并 總結(jié)肝藏血主疏泄異常狀態(tài)下應(yīng)激變化規(guī)律，探討肝藏血主疏泄的內(nèi)在機(jī)

12、制。3.2 健康志愿者應(yīng)激刺激前后不同狀態(tài)與肝藏血主疏泄關(guān)系的研究：選取 120例（男：女 =1：1）健康志愿者，采用情緒圖片、面孔、音樂、聲音、文字 和影片等刺激材料， 根據(jù)研究需要控制其情緒類型以及愉悅度和喚醒度水平。 通 過自我回憶、 材料刺激、社會交互作用等誘發(fā)手段使被試處于一定情緒狀態(tài)。 在 情緒表達(dá)抑制、認(rèn)知重評、向上和向下情緒調(diào)節(jié)、情緒分類、內(nèi)隱情緒任務(wù)、快 速呈現(xiàn)、視覺掩蔽、線索靶范式、情感啟動范式、延遲反應(yīng)任務(wù)、 n-back 等 經(jīng)典的實驗范式中，綜合運用行為學(xué)測試、生理多導(dǎo)儀記錄、事件相關(guān)電位（ERP 和功能磁共振成像（fMRI）等技術(shù)手段，從反應(yīng)時、正確率、ERP成分的

13、波幅和 潛伏期、腦區(qū)激活以及腦功能聯(lián)結(jié)等多個方面分析肝臟在情緒產(chǎn)生、 調(diào)節(jié)和情緒 與認(rèn)知相互作用中的地位及相應(yīng)心理、生理機(jī)制。 給予志愿者進(jìn)行較大強度的 運動任務(wù)負(fù)荷， 通過主觀報告、 問卷調(diào)查和客觀評分確定和劃分研究對象的情緒 狀態(tài)。進(jìn)行運動前后心理量表評測、視力系統(tǒng)測定、腦電圖、腦血流圖、肝血流 圖的檢測，以及微循環(huán)系統(tǒng)指標(biāo)的檢測，探討運動前后肝藏血功能的調(diào)節(jié)機(jī)制。 并分析藏血與疏泄之間的相關(guān)性。4、信息學(xué)管理系統(tǒng)及分析方法研究4.1 編寫數(shù)據(jù)庫程序，應(yīng)用現(xiàn)代信息管理學(xué)方法，根據(jù)研究中文獻(xiàn)、臨床、 實驗各項研究數(shù)據(jù)的特點， 編制關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)庫， 對相關(guān)信息進(jìn)行統(tǒng)一規(guī)范、 標(biāo)示及 編碼，從而形成

14、統(tǒng)一的數(shù)據(jù)庫錄入平臺。4.2 針對研究目標(biāo)及相關(guān)研究數(shù)據(jù)的特點，進(jìn)行算法研究，完善基于熵理論 的數(shù)據(jù)分析方法及隱結(jié)構(gòu)模型的分析方法， 并編寫為軟件開展網(wǎng)絡(luò)化運行， 為整 體項目搭建數(shù)據(jù)分析平臺。4.3 應(yīng)用兩種數(shù)據(jù)分析方法， 對四種疾病的臨床宏觀表現(xiàn)及微觀指標(biāo)進(jìn)行綜 合分析，提取與肝藏血主疏泄相關(guān)的病證結(jié)合下宏觀表現(xiàn)與微觀表現(xiàn)的共性特點 和個性特征。4.4 應(yīng)用兩種數(shù)據(jù)分析方法， 對四種疾病提取肝藏血主疏泄相關(guān)的病證結(jié)合 下動物模型的宏觀表征與微觀指標(biāo)進(jìn)行分析， 提取其共性特點和個性特征， 建立 動物模型的判別模式。4.5 對項目組臟象研究的各項數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合分析， 提煉肝藏血主疏泄的共性 生物

15、學(xué)基礎(chǔ)。4.6 應(yīng)用信息平臺對各項研究進(jìn)行實時錄入、盲法核對及質(zhì)量監(jiān)控。5、抑郁癥、經(jīng)前期綜合征從肝論治的研究5.1 流行病學(xué)調(diào)查5.1.1 編制調(diào)查表。由專家組根據(jù)研究目的，通過參考大量文獻(xiàn)，充分考慮 可行性及有效性，設(shè)計抑郁癥（輕中度） 、經(jīng)前期綜合征（重度， PMD）D 流行病 學(xué)調(diào)查內(nèi)容，并進(jìn)行預(yù)調(diào)查，在此基礎(chǔ)上，修改制定研究用調(diào)查表。5.1.2 開展流行病學(xué)調(diào)查。應(yīng)用編制的調(diào)查表，對符合上述疾病診斷和納入 標(biāo)準(zhǔn)的患者開展流行病學(xué)橫斷面調(diào)查， 采集患者的一般個人信息、 軀體癥狀、 情 緒精神癥狀、舌象、脈象，并對部分患者進(jìn)行相關(guān)微觀指標(biāo)檢測。5.1.3 資料整理與分析。建立流行病學(xué)研究

16、數(shù)據(jù)庫，對資料進(jìn)行邏輯檢查和 處理；運用方差分析、 Logist 回歸分析等方法，確立肝主疏泄調(diào)暢情志功能異 常的主要宏觀表現(xiàn)及微觀指標(biāo)， 建立宏觀與微觀相結(jié)合的肝主疏泄調(diào)暢情志功能 異常狀態(tài)的判別模式。5.2 臨床療效研究5.2.1從肝論治抑郁癥（輕中度）臨床療效。病例選擇符合中國精神疾病分類方案與診斷標(biāo)準(zhǔn)第3版（CCMD-）的抑郁癥發(fā)作診斷標(biāo)準(zhǔn)且中醫(yī)辨證為 肝氣郁證、 符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者。 分組方法 采用隨機(jī)數(shù)字表將受試者隨機(jī)分 配至方藥對證組（自擬方舒郁） 、方藥次對證組（自擬方舒郁加減） 。療程及隨 訪 療程 8 周，對治療后臨床痊愈、顯效及有效的患者，治療后長期隨訪，觀察 是否復(fù)發(fā)。

17、臨床療效評定方法于治療前、治療1w 2w 4w 6w、8w末，采用漢密爾頓抑郁量表、 臨床療效總評量表、 疾病嚴(yán)重程度量表、 中醫(yī)證候積分表、 副反應(yīng)量表進(jìn)行療效及副反應(yīng)評定。522從肝論治經(jīng)前期綜合征（重度，PMD）臨床療效。病例選擇 符合 西醫(yī)經(jīng)前期綜合征（重度，PMDP診斷標(biāo)準(zhǔn)且中醫(yī)辨證為肝氣逆證、符合納入標(biāo) 準(zhǔn)的患者。 分組方法 采用隨機(jī)數(shù)字表將受試者隨機(jī)分配至方藥對證組 （自擬 方白香丹）、方藥次對證組 （自擬方白香丹加減） 。療程及隨訪 療程 2 個月經(jīng) 周期，對治療后臨床痊愈、顯效及有效的患者，治療后進(jìn)行遠(yuǎn)期隨訪，觀察是否 復(fù)發(fā)。臨床療效評定方法 采用癥狀嚴(yán)重程度每日報告、經(jīng)前期

18、綜合征（重 度， PMD）D 肝氣逆證癥狀嚴(yán)重程度醫(yī)生記錄表 、副反應(yīng)量表進(jìn)行療效和副反應(yīng) 評定。5.3 臨床療效的作用機(jī)制5.3.1 臨床研究腦功能區(qū)定位研究 小樣本選取健康志愿者，抑郁癥（輕中 度）肝氣郁證患、經(jīng)前期綜合征（重度， PMD）D 肝氣逆證患者，采用 BLOD-fMRI 技術(shù)，觀察上述研究對象治療前后相關(guān)腦區(qū)（激活、抑制）的位點及其數(shù)目、強 度，并與對照組比較， 探討其腦功能活動區(qū)的異同點。 定位下的腦功能區(qū)血流 灌注及相關(guān)指標(biāo)信號檢測 利用利用單光子 / 正電子發(fā)射計算機(jī)斷層顯像（SPECT/PE）及磁共振波譜成像（MR$技術(shù)，在研究內(nèi)容基礎(chǔ)上，探查其局 部腦血流狀態(tài)及葡萄糖

19、物質(zhì)代謝變化，評估其腦功能，揭示抑郁癥（輕中度）肝 氣郁證患、經(jīng)前期綜合征（重度，PMDP肝氣逆證相關(guān)腦區(qū)功能改變。外周聯(lián) 系途徑相關(guān)指標(biāo)變化 檢測各組受試對象血漿中相關(guān)微觀指標(biāo)， 并通過組間及治 療前后對照，比較各組療效差異，探討抑郁癥（輕中度） 、經(jīng)前期綜合征（重度， PMD）D 不同病證的神經(jīng)體液機(jī)制。532模型動物及離體細(xì)胞實驗。動物模型造模及評價經(jīng)前期綜合征（重度，PMDD肝氣逆證大鼠模型：應(yīng)用情志刺激為主多因素造模法制備經(jīng)前期 綜合征（重度， PMD）D 肝氣逆證大鼠模型。動物模型評價：采集模型動物證候表 征進(jìn)行證候歸屬評價，檢測模型動物生物指標(biāo)進(jìn)行疾病歸屬評價。動物模型相關(guān)腦區(qū)定

20、位及定位下的神經(jīng)機(jī)制 進(jìn)行相應(yīng)腦區(qū)定位并應(yīng)用腦微透析灌流技 術(shù)，實時檢測去甲腎上腺素（N日、5-羥色胺（5-HT）等關(guān)鍵指標(biāo)水平變化。 動物模型外周血及不同腦區(qū)關(guān)鍵指標(biāo)變化特點與關(guān)鍵基因功能驗證檢測模型動物相關(guān)腦區(qū)、外周血中關(guān)鍵生物指標(biāo)含量， 篩選出與經(jīng)前期綜合征（重度， PMD、D 肝氣逆證密切相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)和激素。 進(jìn)行模型動物的基因表達(dá)譜分析及關(guān)鍵基 因的分布、 定位及功能驗證， 篩選其發(fā)病及藥物干預(yù)密切相關(guān)靶基因。 相關(guān)指 標(biāo)的分子機(jī)制及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 取正常大鼠相應(yīng)部位神經(jīng)元進(jìn)行體外培養(yǎng)， 用上述 病證的人或動物血清、腦脊液處理細(xì)胞，免疫熒光和 Western Blot 尋找病證相 關(guān)神

21、經(jīng)遞質(zhì)或激素的受體及其介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。6、腸易激、高血壓、肝硬化三種疾病病證臨床流行病學(xué)橫斷面調(diào)查6.1 通過對三種疾病現(xiàn)代文獻(xiàn)分析， 提取與肝藏血主疏泄相關(guān)的癥狀、 證候 要素、證候； 依據(jù)此信息建立臨床信息采集量表， 通過預(yù)調(diào)查進(jìn)行量表的聯(lián)合信 度檢測。6.2 應(yīng)用臨床信息采集表，在全國多中心同步開展大樣本約 800 例/ 病的臨 床流行病學(xué)橫斷面普查。 分別對符合現(xiàn)代疾病診斷和各項納入標(biāo)準(zhǔn)的患者進(jìn)行臨 床軀體癥狀、 情緒精神癥狀的調(diào)查， 并采用統(tǒng)一的檢測標(biāo)準(zhǔn)， 檢測相關(guān)實驗室指 標(biāo)。其中主要指標(biāo)包括：三種疾病同性指標(biāo)血液流變學(xué)指標(biāo)、血脂、血糖、 血清促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH

22、；血清皮質(zhì)醇，血漿去甲腎上腺素（NE、 5-羥色胺（5-HT）等；各種疾病特有指標(biāo)。6.3 建立臨床信息數(shù)據(jù)庫， 進(jìn)行多種統(tǒng)計分析， 主要包括： 頻數(shù)分析描述調(diào) 查人群特征； 方差分析方法統(tǒng)計不同疾病不同分期的差異性； 相關(guān)分析方法統(tǒng)計 宏觀癥狀與微觀指標(biāo)的相關(guān)性； Logist 回歸分析、判別分析提取特征癥狀、指 標(biāo)；并結(jié)合無監(jiān)督數(shù)據(jù)分析方法（如基于熵的分析、隱結(jié)構(gòu)模型；確立肝藏血主 疏泄功能異常的主要宏觀表現(xiàn)及微觀指標(biāo)， 及其在三種疾病中的共性表現(xiàn)特點和 個性特征；建立宏觀與微觀相結(jié)合的肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模式。7、應(yīng)用養(yǎng)血調(diào)肝系列方劑對三種疾病患者進(jìn)行藥物干預(yù)7.1 按照三種疾

23、病現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)， 及較為公認(rèn)的中醫(yī)證候診斷標(biāo) 準(zhǔn)，選擇腸易激綜合征肝郁脾虛證 300例、脾胃虛寒證 100 例；高血壓病肝陽上 亢證 300 例、肝火熾盛證 100例；肝硬化脾腎陽虛、肝氣滯血瘀證 100例、肝腎 陰虛、氣滯血瘀證 200 例。按照臨床為理論創(chuàng)新服務(wù)， 為實驗研究奠定基礎(chǔ)的原 則，按照 1：1：1：1 的比例，分別設(shè)立安慰劑對照組、方證對應(yīng)組、方證次對 應(yīng)組、非干預(yù)證候?qū)φ战M， 參照新藥創(chuàng)制的研究方法， 應(yīng)用養(yǎng)血調(diào)肝方劑的免煎 顆粒，進(jìn)行臨床干預(yù)研究。7.2 依據(jù)建立的肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別模型編制臨床觀測量表， 對納入研究的患者分別在治療前、 治療后及隨訪期

24、， 采集其宏觀臨床癥狀、 體征 及微觀指標(biāo)，建立數(shù)據(jù)庫。7.3 應(yīng)用方差分析、秩和檢驗、判別分析、因子分析、多維尺度分析等多種 統(tǒng)計方法，分析各項癥狀、 指標(biāo)在治療前后的差異性； 不同證候類型間的差異性； 不同疾病間的異同性等。并綜合分析結(jié)果分析從肝論證的干預(yù)機(jī)制及證治規(guī)律。8、肝藏血主疏泄現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵的實驗研究8.1 肝藏血主疏泄功能異常的病證結(jié)合動物模型的構(gòu)建8.1.1 建立公認(rèn)的疾病動物模型。 分別采用慢性應(yīng)激和嗅球切除法制備抑郁 癥大鼠模型，采用孤養(yǎng)加慢性不可預(yù)見性應(yīng)激和新生鼠母子分離復(fù)合避水應(yīng)激法 建立腸易激綜合征大鼠模型， 采用雙腎一夾法和自發(fā)高血壓大鼠構(gòu)建高血壓大鼠 模型，采用腹

25、腔注射二甲基亞硝胺法和皮下注射四氯化碳法誘導(dǎo)肝纖維化大鼠模 型。以上的疾病模型分別按照現(xiàn)行的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行嚴(yán)格的評價， 合格動物納 入研究。8.1.2 進(jìn)行動態(tài)、 全面的信息采集。 對上述符合疾病診斷的動物模型， 從模 型成立的時間點起， 擬定動物信息觀察表， 進(jìn)行規(guī)范化的動態(tài)信息采集， 以評價 其證候?qū)傩?。信息采集表的條目主要來自于：1) 動物實驗研究文獻(xiàn)提示的反映疾病的動物宏觀表征 和反映證候?qū)傩缘膭?物宏觀表征 ；2) 臨床證候研究文獻(xiàn)提示的與證候密切相關(guān)的理化指標(biāo)；3) 本項目組的臨床研究提示的與具有診斷和鑒別診斷意義的臨床癥狀和可 用于證候判別的理化指標(biāo)特征模式。8.1.3 動物證

26、候?qū)傩缘谋孀R。 動物證候?qū)傩缘谋孀R以臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)， 采用課題組前期建立的以宏觀特征組合、 微觀指標(biāo)特征組合、 方劑反證相結(jié)合的 三維動物證候判別方法進(jìn)行辨識。 首先通過宏觀特征組合和微觀指標(biāo)特征組合確 定各疾病模型的證候演變規(guī)律。 通過不同疾病造模方法的比較， 篩選出較優(yōu)的抑 郁癥肝氣郁結(jié)證、 腸易激綜合征肝郁脾虛證、 高血壓肝陽上亢證、 肝硬化肝腎陰 虛氣滯血瘀等病證結(jié)合動物模型。8.1.4 方劑反證。在上述病證結(jié)合動物模型證候?qū)傩苑€(wěn)定的時間窗內(nèi)，分別 采用對證的養(yǎng)血調(diào)肝方藥和次對證的方藥進(jìn)行干預(yù)治療， 并以模型組和正常組作 為對照，進(jìn)一步佐證模型動物的證候?qū)傩浴?各模型的干預(yù)藥物和臨

27、床組統(tǒng)一， 以 相互應(yīng)證。8.2 肝藏血主疏泄的調(diào)控機(jī)制研究8.2.1 分組。通過上述篩選得到的穩(wěn)定的反映肝藏血主疏泄異常狀態(tài)的病證 結(jié)合動物模型作為實驗組，以不符合相應(yīng)證候診斷的疾病模型和正常組作為對 照，從整體、器官、分子三個層面分析肝藏血主疏泄的調(diào)控機(jī)制，觀測指標(biāo)分為 共性的核心指標(biāo)和反映疾病個性的二級指標(biāo)以及探索性的基因分析指標(biāo)等三大 類。822核心指標(biāo)和疾病相關(guān)的二級指標(biāo)的檢測。采用HPLG電化學(xué)檢測、ELISA、免疫組化、RT-PCF等，研究：（1）核心指標(biāo)圍繞慢性應(yīng)激相關(guān)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，包括：1）整體指標(biāo)：行為學(xué)實驗、腦血流圖、肝血流圖、功能核磁共振。2）血液指標(biāo)：神經(jīng)遞質(zhì)（包括 D

28、A、NA、 NE、5-HT、Ach 等）；內(nèi)分泌激素 （包括CRH ACTH皮質(zhì)醇、褪黑素等）;血管舒縮因子（包括ET、CGRP Angll 等）、肝臟合成（代謝）的生物活性分子（如 HSP70、 Hcy 等）。3）組織檢測指標(biāo)：神經(jīng)遞質(zhì)、激素及其受體在特定腦區(qū)、疾病相關(guān)的效應(yīng) 器官的表達(dá)水平 （包括 DA、 NA、 5-HT 、皮質(zhì)醇等及其受體） 和病理形態(tài)學(xué)檢測。（ 2）疾病相關(guān)的二級指標(biāo)1）抑郁癥：氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)含量/受體表達(dá)（Glu NMD受體、GABAr GABA 受體），離子通道和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子分析、對信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子調(diào)節(jié)物質(zhì)（包括 PDE4 等）,適應(yīng)性調(diào)控分子（包括 GRKB -ar

29、restin 等）2）腸易激綜合征：在體結(jié)腸運動、離體結(jié)腸平滑肌張力、離體腸粘膜短路電流、外周血P物質(zhì)含量、GABA肥大細(xì)胞活化程度觀察、胸腺、脾臟臟體指數(shù) 計算、 T 淋巴細(xì)胞亞群水平分析、外周血環(huán)核苷酸水平、外周血前列腺素E2 水3）高血壓：24h 動態(tài)血壓、AT1、NO、ANR AVP、Ca2+ PGI2、TXA2 精氨酸加壓素等。4）肝硬化：外周血HA PCIII、LN IV C TGF- B 1,血清肝功能（包括 ALT,AST,ALB等）、肝組織血管緊張素受體、TGF? 1、Smad4 Smad7等。8.2.3 數(shù)字化基因表達(dá)譜分析和 small RNA 分析。在上述的研究結(jié)果進(jìn)行

30、分 析和整合, 初步確定肝藏血主疏泄的共性的特定反應(yīng)腦區(qū)。 對特定反應(yīng)區(qū)域的組 織樣本，采用測序技術(shù)數(shù)字化基因表達(dá)譜分析和 small RNA分析，結(jié)合生物信息 學(xué)分析,進(jìn)一步探索其可能的分子調(diào)控機(jī)制。8.2.4 共性調(diào)控機(jī)制的提取。綜合研究結(jié)果，采用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)、圖模型等多種 數(shù)據(jù)挖掘方法， 對上述各調(diào)控分子進(jìn)行關(guān)聯(lián)和分析， 初步建立起調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。 并實 現(xiàn)分子、組織器官和整體水平的功能狀態(tài)的逐級整合， 刻畫出肝藏血主疏泄的多 級的特定調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。8.3 養(yǎng)血調(diào)肝方干預(yù)的效應(yīng)機(jī)制研究8.3.1 分組。采用本研究構(gòu)建的反映肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的病證結(jié)合動物模型，隨機(jī)分為模型組、對證治療組、次對證治

31、療組，同時設(shè)正常對照組832肝藏血主疏泄的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的檢測。在證候穩(wěn)定的時間窗內(nèi)分組給 藥，觀察養(yǎng)血調(diào)肝藥物對于2.2.4獲得的特定指標(biāo)群的影響，從而驗證肝藏血主 疏泄的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)并闡明養(yǎng)血調(diào)肝藥物的作用機(jī)制。技術(shù)路線圖生理研究寶初冀動物實整監(jiān)輸f究Hi詩謂吏韋#述銷動笛曲1干預(yù)試MT完込的櫛零藥-J童現(xiàn)葩Z .-i岳 半 a豐 歳t研 主 兗四、年度計劃年度研究內(nèi)容預(yù)期目標(biāo)第1研究實施方案的論證與討論1、擬定課題實施方案，分割研究任務(wù)，簽訂:2、文獻(xiàn)整理研究。研究任務(wù)書3、生理狀態(tài)研究的文獻(xiàn)分析2、完成知識考古學(xué)分析肝藏血主疏泄有關(guān)的4、應(yīng)激研究的文獻(xiàn)分析研究單元的對象形成分析5、信息平臺建

32、設(shè)的籌建3、完成肝臟象功能生理狀態(tài)研究的文獻(xiàn)分6、五種疾病的現(xiàn)代文獻(xiàn)研究析，編制生理狀態(tài)研究調(diào)查表，分析北京地7、五種疾病臨床調(diào)查的前期準(zhǔn)備區(qū)四時八節(jié)氣象變化特點8五種疾病動物模型的構(gòu)建5、完成中醫(yī)理論與應(yīng)激研究相關(guān)的文獻(xiàn)分年9、動物模型證候評價指標(biāo)體系的析，編制月經(jīng)周期研究調(diào)查表，初步篩選志文獻(xiàn)研究愿者6、擬定信息平臺建設(shè)方案，編制相關(guān)程序， 進(jìn)行平臺試運行7、建立五種疾病現(xiàn)代文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫，完成數(shù)據(jù) 分析&擬疋五種疾病臨床流仃病學(xué)調(diào)查實施方 案，編制調(diào)查表，進(jìn)行人員培訓(xùn)，并完成預(yù) 調(diào)查9、建立五種疾病動物病證結(jié)合的證候模型10、發(fā)表文章10篇左右第1肝藏血主疏泄知識考古學(xué)研究1、完成知識考古學(xué)

33、對肝臧血主疏泄有關(guān)的研2、開展健康人群及動物的四時八究單元進(jìn)行話語構(gòu)成分析之陳述方式分析、節(jié)動態(tài)觀察概念擴(kuò)散分析、主題從屬分析。3、進(jìn)行月經(jīng)周期動態(tài)觀測2、完成300例健康人群8個時間點的動態(tài)觀二4、正式運行信息平臺察，完成宏觀指標(biāo)與微觀指標(biāo)的觀測；5、五種疾病的臨床流行病學(xué)調(diào)查3、完成100只大鼠，20只樹鼩8個時間點的6、五種疾病動物模型的動態(tài)觀察動態(tài)觀測和證候?qū)傩员孀R4、完成100例健康志愿者月經(jīng)周期觀察與應(yīng)年7、模型動物證候?qū)傩缘姆絼┓醋C激測試研究5、進(jìn)行信息平臺使用培訓(xùn)，正式進(jìn)行平臺運8進(jìn)行課題中期總結(jié)與檢查行6、完成五種疾病各800例全國多中心臨床流 行病學(xué)調(diào)查7、基于臨床流調(diào)數(shù)據(jù)

34、進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，建立宏 觀與微觀相結(jié)合的“肝藏血主疏泄”異常狀 態(tài)的判別模式。& 4種以上的反映肝藏血主疏泄功能異常狀 態(tài)的病證結(jié)合動物模型及其判別方法。9、撰寫課題中期總結(jié)報告，完成中期檢查年度研究內(nèi)容預(yù)期目標(biāo)10、發(fā)表論文10篇左右第1完善后三年研究方案1、擬定后三年研究實施方案，編制后三年課2、肝藏血主疏泄有關(guān)的研究單元題任務(wù)書的知識考古學(xué)話語轉(zhuǎn)換分析2、完成肝臧血主疏泄有關(guān)的研究單兀的系統(tǒng)3、完成健康人及動物生理四時八成分轉(zhuǎn)換分析、話語關(guān)系轉(zhuǎn)換分析。三節(jié)研究3、建立健康人生理研究數(shù)據(jù)庫，提取核心指4、開展志愿者應(yīng)激狀態(tài)測試研究標(biāo)，描繪動態(tài)變化曲線，建立肝藏血主疏泄生5、信息平臺多中心質(zhì)量

35、監(jiān)控及數(shù)理狀態(tài)判別模式據(jù)庫建設(shè)4、建立動物四時八節(jié)研究數(shù)據(jù)庫，提取相關(guān)年6、開展五種疾病臨床干預(yù)研究核心指標(biāo)，描繪動態(tài)變化曲線7、動物模型的實驗室指標(biāo)檢測5、建立月經(jīng)周期變化及應(yīng)激測試的數(shù)據(jù)庫， 探討肝藏血主疏泄與情緒變化的相關(guān)性， 揭示 其內(nèi)在機(jī)制6、擬定應(yīng)激研究實施方案，篩選研究志愿者7、通過信息平臺對各課題組全國多中心的研 究進(jìn)行動態(tài)實時質(zhì)量監(jiān)控，建立大型關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù) 庫。&完成五種疾病各100例的臨床干預(yù)試驗， 檢測各項指標(biāo)9、完成肝藏血主疏泄可能相關(guān)的核心指標(biāo)及 二級指標(biāo)的檢測，分析其在慢性應(yīng)激相關(guān)的 神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)的表現(xiàn)特征10、發(fā)表文章10篇左右年度研究內(nèi)容預(yù)期目標(biāo)第1肝臧血主疏泄的

36、文獻(xiàn)研究1、完成肝藏血主疏泄的文獻(xiàn)研究2、志愿者應(yīng)激狀態(tài)前后變化的研2、進(jìn)行60例健康志愿者應(yīng)激測試，分析其究應(yīng)激前后宏觀與微觀指標(biāo)變化規(guī)律3、信息平臺的數(shù)據(jù)匯交與分析3、完成關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)庫的建設(shè)，進(jìn)行數(shù)據(jù)匯總四4、五種疾病的臨床干預(yù)研究4、完成五種疾病各200例的臨床干預(yù)試驗，5、動物模型的基因組學(xué)和蛋白組檢測各項指標(biāo)，建立數(shù)據(jù)庫年學(xué)研究5、完成肝藏血主疏泄相關(guān)特定腦區(qū)的數(shù)字化 基因表達(dá)譜和small RNA分析6、完成肝藏血主疏泄共性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的提取7、揭示肝藏血主疏泄相關(guān)特定腦區(qū)的基因表 達(dá)特征和small RNA表達(dá)特征&發(fā)表文章10扁左右第1完成應(yīng)激狀態(tài)前后變化的研究1、完成120例健康志

37、愿者應(yīng)激測試，建立數(shù):2、進(jìn)行數(shù)據(jù)匯交與分析據(jù)庫，分析其內(nèi)在機(jī)制3、完成養(yǎng)血調(diào)肝方藥對肝藏血主2、通過信息平臺，進(jìn)行多種數(shù)據(jù)分析，進(jìn)行疏泄共性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的作用及其機(jī)數(shù)據(jù)匯交，綜合進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘五年制研究3、揭示養(yǎng)血調(diào)肝方藥的對肝藏血主疏泄調(diào)控4、總結(jié)研究成果，進(jìn)行結(jié)題的內(nèi)在機(jī)制4、闡明養(yǎng)血調(diào)肝方藥的對肝藏血主疏泄調(diào)控 網(wǎng)絡(luò)的效應(yīng)及其機(jī)制5、發(fā)表文章10扁左右6、撰寫結(jié)題報告，完成結(jié)題驗收一、研究內(nèi)容1、肝臟象理論的內(nèi)涵、外延及發(fā)展源流研究 以傳統(tǒng)中醫(yī)文獻(xiàn)學(xué)的研究方法為基礎(chǔ)， 借鑒法國現(xiàn)代思想體系史家米歇爾 福柯創(chuàng)立知識考古學(xué)的研究方法， 結(jié)合現(xiàn)代數(shù)理挖掘技術(shù)， 以歷代中醫(yī)文獻(xiàn)與史 書、志書、筆記等

38、其它相關(guān)古代文獻(xiàn)為研究對象，系統(tǒng)總結(jié)、深入闡明肝藏血主 疏泄及相關(guān)理論內(nèi)在涵義及學(xué)術(shù)發(fā)展源流。 其具體研究內(nèi)容包括： 系統(tǒng)梳理從先 秦時期到新中國成立前歷代中醫(yī)及相關(guān)文獻(xiàn)， 以肝主疏泄為切入點， 分析肝主疏 泄及相關(guān)專題的對象形成、陳述方式、概念的擴(kuò)散、主題策略的選擇等內(nèi)容，對 文獻(xiàn)中肝藏血主疏泄的含義及其診治體系生成變化進(jìn)行具體分析， 以發(fā)現(xiàn)構(gòu)成某 一時期醫(yī)學(xué)思想整體的深層結(jié)構(gòu)“知識型”或“基本信碼” ，也就是話語， 根據(jù)話語的轉(zhuǎn)變來分析肝藏血主疏泄的含義及其診治體系的演變及其原因， 以分 析其形成和轉(zhuǎn)變的歷史； 在肝藏血主疏泄及其相關(guān)理論學(xué)術(shù)發(fā)展史的基礎(chǔ)上， 確 立其理論內(nèi)涵、 應(yīng)用范圍與

39、原則， 論證其在臟象學(xué)說、 臟腑辨證以及臨床各科疾 病診治中的地位與作用，解決學(xué)術(shù)諸如“體陰用陽” “肝陽虛”等學(xué)術(shù)分歧與爭 議；揭示相關(guān)疾病從肝論治臨床療效產(chǎn)生的機(jī)制和規(guī)律， 進(jìn)一步豐富和發(fā)展臟象 理論；同時探討中醫(yī)理論發(fā)展與創(chuàng)新的規(guī)律， 嘗試建立一個以歷史分析為基礎(chǔ)進(jìn) 行中醫(yī)理論研究方法。2、生理狀態(tài)下肝藏血主疏泄功能的調(diào)控機(jī)制研究 （1）正常健康人肝藏血主疏泄與四時節(jié)律的相關(guān)性研究：遵循臨床流行病 學(xué)抽樣調(diào)查的原則，依據(jù)中醫(yī)時間醫(yī)學(xué)五臟節(jié)律的原理，在全國多中心對 300 例（男女各 150 例）健康人進(jìn)行四時八節(jié)的動態(tài)追蹤調(diào)查； 全面采集調(diào)查者的一 般信息、癥狀、情緒、生活質(zhì)量、實驗室指

40、標(biāo)等多種信息，建立數(shù)據(jù)庫。（2）正常動物肝藏血主疏泄與四時節(jié)律的相關(guān)性研究：選擇嚙齒類動物大 鼠與靈長類動物樹鼩， 依據(jù)中醫(yī)時間醫(yī)學(xué)五臟節(jié)律的原理， 選取一年中的四時八 節(jié)，采集 8 個時間點動物的表征， 進(jìn)行動物行為學(xué)檢測， 以及神經(jīng)遞質(zhì)、 退黑素、 血管緊張素、腎上腺皮質(zhì)等神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)的檢測，建立數(shù)據(jù)庫。 在統(tǒng)一的信 息管理系統(tǒng)下， 應(yīng)用現(xiàn)代信息學(xué)手段， 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析， 提煉肝藏血與疏泄功能的 節(jié)律性變化特點；揭示其調(diào)節(jié)機(jī)制。3、健康志愿者應(yīng)激狀態(tài)下肝藏血主疏泄功能的調(diào)控機(jī)制研究（1）婦女月經(jīng)周期應(yīng)激研究：選取月經(jīng)規(guī)律的健康志愿者 100 人，連續(xù)觀 測其三個月經(jīng)周期的情緒、 軀體癥狀以

41、及一般性指標(biāo)的變化， 并與月經(jīng)期、 黃體 期、月經(jīng)后期分別進(jìn)行應(yīng)激狀態(tài)測試， 主要進(jìn)行心理認(rèn)知測試， 檢測多導(dǎo)腦電等 指標(biāo)，建立數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析， 探索月經(jīng)周期中肝藏血狀態(tài)變化與疏泄功能的相關(guān) 性，并總結(jié)肝藏血主疏泄異常狀態(tài)下應(yīng)激變化規(guī)律， 探討肝藏血主疏泄的內(nèi)在機(jī) 制。（2）健康志愿者應(yīng)激刺激前后不同狀態(tài)與肝藏血主疏泄關(guān)系的研究：選取 健康志愿者 120 例（男女各 60 例）進(jìn)行情緒刺激和運動負(fù)荷兩種應(yīng)激狀態(tài)前后 的比較研究，采集志愿者應(yīng)激前后的宏觀表現(xiàn)、 心理與認(rèn)知功能， 以及神經(jīng)遞質(zhì)、 退黑素、血管緊張素、腎上腺皮質(zhì)等神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)的變化并建立數(shù)據(jù)庫。4、五種疾病肝藏血主疏泄功能異常狀態(tài)的判別