膠體金試紙條檢測(cè)技術(shù)

1、 膠體金試紙條診斷技術(shù)膠體金試紙條診斷技術(shù) 一、簡(jiǎn)一、簡(jiǎn) 介介 膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層 析技術(shù)研制而成，該技術(shù)是析技術(shù)研制而成，該技術(shù)是9090年代初在免疫年代初在免疫 滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡(jiǎn)易快速的免滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡(jiǎn)易快速的免 疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，最先用于人絨毛膜促性腺激疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，最先用于人絨毛膜促性腺激 素（素（hcghcg）的測(cè)定和乙型肝炎病毒表面抗原的測(cè)定和乙型肝炎病毒表面抗原 （hbsaghbsag）等檢測(cè)。等檢測(cè)。 p膠體金膠體金（colloidal goldcolloidal gold）是氯金酸是氯金酸 （hauclh

2、aucl4 4）的水溶膠，氯金酸在還原劑的作的水溶膠，氯金酸在還原劑的作 用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜 電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。 zeta電位可以使膠體金顆粒之間相互排斥，以維持 膠體金的穩(wěn)定狀態(tài)。 基礎(chǔ)金核基礎(chǔ)金核 雙離子雙離子 內(nèi)層負(fù)離子（auc12） zeta電位 外層離子層 h+分散在膠體間的溶液中 膠體金顆粒對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功 能，而不被壞其生物活性，可以與蛋白質(zhì) 等（葡萄球菌a蛋白、免疫球蛋白）等非 共價(jià)結(jié)合，形成膠體金標(biāo)記物。 質(zhì)量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球質(zhì)量好的膠體金：溶液呈紅

3、色，膠體金顆粒為球 形，大小均一，無(wú)棱角。形，大小均一，無(wú)棱角。 質(zhì)量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀質(zhì)量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀 各異。各異。 膠體金的質(zhì)量判定標(biāo)準(zhǔn)膠體金的質(zhì)量判定標(biāo)準(zhǔn) p膠體金標(biāo)記的原理：膠體金標(biāo)記的原理：膠體金在堿性條件下帶膠體金在堿性條件下帶 負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)藉靜電負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)藉靜電 吸引而形成牢固結(jié)合。吸引而形成牢固結(jié)合。 p膠體金標(biāo)記技術(shù)膠體金標(biāo)記技術(shù)（immunogold labeling immunogold labeling techniquetechnique）是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物應(yīng)是以膠體金作為示

4、蹤標(biāo)記物應(yīng) 用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。 二、膠體金試紙條診斷技術(shù)的原理二、膠體金試紙條診斷技術(shù)的原理 以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛 細(xì)血管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一細(xì)血管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一 端滲移，通過(guò)抗原抗體結(jié)合，并利用膠體金呈現(xiàn)端滲移，通過(guò)抗原抗體結(jié)合，并利用膠體金呈現(xiàn) 顏色（紅色）反應(yīng)，檢測(cè)抗原顏色（紅色）反應(yīng)，檢測(cè)抗原/ /抗體抗體。有三種反應(yīng)。有三種反應(yīng) 模式：夾心法，間接法，競(jìng)爭(zhēng)抑制法。模式：夾心法，間接法，競(jìng)爭(zhēng)抑制法。 最最常用的是雙抗夾心法檢測(cè)抗原常

5、用的是雙抗夾心法檢測(cè)抗原 膠體金試紙條示意圖膠體金試紙條示意圖 檢測(cè)線檢測(cè)線 質(zhì)檢線質(zhì)檢線 吸收墊吸收墊 樣品墊樣品墊 硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜 連接墊連接墊 （膠體金墊）（膠體金墊） 背襯背襯 （底板）（底板） p測(cè)定時(shí)將試紙條下端浸入液體測(cè)定時(shí)將試紙條下端浸入液體 標(biāo)本中，下端吸水材料即吸取標(biāo)本中，下端吸水材料即吸取 液體向上端移動(dòng)，流經(jīng)液體向上端移動(dòng)，流經(jīng)c c處時(shí)使處時(shí)使 干片上的干片上的免疫金復(fù)合物免疫金復(fù)合物復(fù)溶，復(fù)溶， 并帶動(dòng)其向膜條滲移。并帶動(dòng)其向膜條滲移。 測(cè)測(cè) 定定 p若標(biāo)本中有待測(cè)特異抗原，即若標(biāo)本中有待測(cè)特異抗原，即 可與免疫金復(fù)合物中的抗體結(jié)可與免疫金復(fù)合物中的抗體結(jié)

6、 合，此抗原抗體復(fù)合物流至測(cè)合，此抗原抗體復(fù)合物流至測(cè) 試區(qū)即被固相抗體捕獲，在膜試區(qū)即被固相抗體捕獲，在膜 上顯出紅色上顯出紅色反應(yīng)線條反應(yīng)線條（t t）。）。 測(cè)測(cè) 定定 測(cè)測(cè) 定定 p過(guò)剩的免疫金復(fù)合物繼續(xù)前行，過(guò)剩的免疫金復(fù)合物繼續(xù)前行， 至參照區(qū)與固相抗小鼠至參照區(qū)與固相抗小鼠iggigg結(jié)合結(jié)合 （免疫金復(fù)合物中的單克隆抗（免疫金復(fù)合物中的單克隆抗 體為小鼠體為小鼠iggigg），），而顯出紅色而顯出紅色質(zhì)質(zhì) 控線條控線條（r r）。）。 測(cè)測(cè) 定定 p陰性標(biāo)本則無(wú)反應(yīng)線條，而僅顯示質(zhì)控線條陰性標(biāo)本則無(wú)反應(yīng)線條，而僅顯示質(zhì)控線條。 膠體金快速診斷技術(shù)的特點(diǎn)膠體金快速診斷技術(shù)的特點(diǎn)

7、p簡(jiǎn)捷快速：簡(jiǎn)捷快速：操作簡(jiǎn)單，一般只要操作簡(jiǎn)單，一般只要5 5-10min -10min 就會(huì)出結(jié)就會(huì)出結(jié) 果，而其它方法如果，而其它方法如elisaelisa需要需要1 1-2h-2h，pcr pcr 需要時(shí)間需要時(shí)間 更長(zhǎng)。更長(zhǎng)。 p結(jié)果易于判定：結(jié)果易于判定：陰、陽(yáng)性呈色很明顯，肉眼很容易陰、陽(yáng)性呈色很明顯，肉眼很容易 判斷。判斷。 p特異性好：特異性好：因?yàn)樵摷夹g(shù)大多用單克隆抗體標(biāo)記，這因?yàn)樵摷夹g(shù)大多用單克隆抗體標(biāo)記，這 決定了它具有很好的特異性。決定了它具有很好的特異性。 p病毒性疾病：病毒性疾?。簜魅拘苑ㄊ夏也　⑶萘鞲?、新城疫、傳染性法氏囊病、禽流感、新城疫、 犬細(xì)小病毒、豬瘟等。犬細(xì)小病毒、豬瘟等。 p寄生蟲(chóng)疾?。杭纳x(chóng)疾病：血吸蟲(chóng)病、旋毛蟲(chóng)病、囊蟲(chóng)病、恙血吸蟲(chóng)病、旋毛蟲(chóng)病、囊蟲(chóng)病、恙 蟲(chóng)病。蟲(chóng)病。 p細(xì)菌性疾