雞白介素的進展

1、技術研發(fā)工作匯報技術研發(fā)工作匯報 第一部分：第一部分： 報告主要內容 第二部分第二部分: 第三部分：第三部分： 第四部分：第四部分： 第一部分第一部分 白細胞介素白細胞介素( interleukin , il) 簡稱白介素簡稱白介素,是由白細胞產生的、是由白細胞產生的、 介導細胞間相互作用的細胞因子介導細胞間相互作用的細胞因子,在細胞的活化、增殖和分化中起調節(jié)在細胞的活化、增殖和分化中起調節(jié) 作用作用,是是20 世紀世紀80 年代后才發(fā)現(xiàn)的一類細胞因子。年代后才發(fā)現(xiàn)的一類細胞因子。il 與其他免疫系統(tǒng)與其他免疫系統(tǒng), 通過作用于通過作用于t 細胞、細胞、b 細胞及自然殺傷細胞細胞及自然殺傷細胞

2、(n k) 等多種靶細胞來傳等多種靶細胞來傳 遞免疫信息遞免疫信息,激活、調控血細胞的生長發(fā)育與分化成熟激活、調控血細胞的生長發(fā)育與分化成熟,參與機體的免參與機體的免 疫應答疫應答,參與某些疾病的病理過程。參與某些疾病的病理過程。由于白介素具有廣泛的生物學功能，由于白介素具有廣泛的生物學功能， 且用量極小就可以起到重要的介導效應且用量極小就可以起到重要的介導效應，因此，目前有多種經基因工，因此，目前有多種經基因工 程生產的白介素已經或將要用于臨床。程生產的白介素已經或將要用于臨床。 1.1 白介素的種類與生物學功能白介素的種類與生物學功能 白介素是一類低相對分子質量的蛋白多肽，白介素家族的大多

3、白介素是一類低相對分子質量的蛋白多肽，白介素家族的大多 數(shù)成員在氨基酸序列、結構、理化特性和生物學功能等方面均不相數(shù)成員在氨基酸序列、結構、理化特性和生物學功能等方面均不相 同。同。 人的白介素研究在近十幾年來發(fā)展很快人的白介素研究在近十幾年來發(fā)展很快,現(xiàn)在已廣泛應用于疾病的治現(xiàn)在已廣泛應用于疾病的治 療和疫苗的免疫增強劑療和疫苗的免疫增強劑,但動物的白介素研究相對滯后但動物的白介素研究相對滯后,雞的白介素發(fā)展雞的白介素發(fā)展 更加緩慢更加緩慢,但隨著分子生物學等相關學科的發(fā)展但隨著分子生物學等相關學科的發(fā)展,有關雞白細胞基因與功有關雞白細胞基因與功 能的研究已逐漸成為熱點能的研究已逐漸成為熱點

4、,現(xiàn)在已經克隆出的白介素有現(xiàn)在已經克隆出的白介素有il-1 、il-2 、il- 6 、il-12 、il-15 、il-16 、il-17 及及il-18 等。等。 本文就目前雞白介素（本文就目前雞白介素（il-2）分子生物學與應用的研究進展做一綜）分子生物學與應用的研究進展做一綜 述。述。 il-2: 白細胞介素白細胞介素-2（interleukins-2，il-2）是一類由活化的）是一類由活化的t 細胞分泌產生的細胞分泌產生的 糖蛋白，具有抗感染、抗病毒等功效，能夠有效提高動物機體的免疫功能。糖蛋白，具有抗感染、抗病毒等功效，能夠有效提高動物機體的免疫功能。 1976年年morgan 等

5、以等以t 細胞生長因子命名，在細胞生長因子命名，在1979 年年5 月正式命名為白細胞介月正式命名為白細胞介 素素-2。醫(yī)學上已經用于預防和治療一些常規(guī)方法難以治療的疾病如癌癥、艾滋。醫(yī)學上已經用于預防和治療一些常規(guī)方法難以治療的疾病如癌癥、艾滋 病等。對于家禽類，病等。對于家禽類，il-2 主要作為免疫佐劑配合疫苗使用，以提高疫苗的免疫主要作為免疫佐劑配合疫苗使用，以提高疫苗的免疫 效果，降低副反應，同時還具有免疫增強、免疫治療等功能。由于效果，降低副反應，同時還具有免疫增強、免疫治療等功能。由于il-2 是天然是天然 的細胞因子，不會造成體內的殘留問題，對動物產品安全生產等方面具有廣闊的細

6、胞因子，不會造成體內的殘留問題，對動物產品安全生產等方面具有廣闊 的應用前景。的應用前景。 人類人類il-2 基因于基因于1983 年被成功克隆后年被成功克隆后,30 多個物種的多個物種的il-2 基因被相繼發(fā)基因被相繼發(fā) 現(xiàn)現(xiàn),雞雞il-2 直到直到1997 年才被年才被sundick r s 等克隆出來。雞等克隆出來。雞il-2 是雞的白介素中是雞的白介素中 研究最為深入的。研究最為深入的。lillehojj w 等發(fā)現(xiàn)雞等發(fā)現(xiàn)雞il-2 真核表達質?？稍鰪姲蓝蛳x真核表達質粒可增強艾美耳球蟲 基因免疫的效果基因免疫的效果,抑制球蟲的復制。姜永厚等將含雞抑制球蟲的復制。姜永厚等將含雞il

7、-2 基因的真核表達質?；虻恼婧吮磉_質粒 作為佐劑與作為佐劑與ndf基因疫苗混合免疫接種雛雞基因疫苗混合免疫接種雛雞,用標準強毒攻擊用標準強毒攻擊,結果發(fā)現(xiàn)結果發(fā)現(xiàn),添加添加 il-2 質粒試驗組免疫保護率明顯高于單獨接種質粒試驗組免疫保護率明顯高于單獨接種ndf 基因疫苗試驗組?；蛞呙缭囼灲M。 lowent hal j w 等研究發(fā)現(xiàn)雛雞注射雞等研究發(fā)現(xiàn)雛雞注射雞il-2 等細胞因子能增加等細胞因子能增加ig a 抗體抗體 的分泌水平和對疾病的抵抗力。于鏈等研究了的分泌水平和對疾病的抵抗力。于鏈等研究了il-2 質粒對傳染性法氏囊病病質粒對傳染性法氏囊病病 毒的免疫增強作用。毒的免疫增強

8、作用。 第二部分第二部分 sundick等（等（1997）用）用cona刺激雞脾淋巴細胞構建了一個刺激雞脾淋巴細胞構建了一個cdna 文庫，文庫， 轉染轉染cos-7細胞，通過瞬時表達，首次克隆出了雞的細胞，通過瞬時表達，首次克隆出了雞的il-2基因。所克隆的雞基因。所克隆的雞 il-2 mrna 全長全長747 bp，結構基因長，結構基因長343 bp，根據(jù)氨基酸序列所推測的蛋，根據(jù)氨基酸序列所推測的蛋 白質長白質長143個氨基酸。通過序列分析，該基因個氨基酸。通過序列分析，該基因mrna具有短的具有短的端非翻譯區(qū)端非翻譯區(qū) （），且該（），且該mrna 僅在激活的細胞中表達。根據(jù)核苷酸序列

9、所推導僅在激活的細胞中表達。根據(jù)核苷酸序列所推導 的蛋白質含有一個短的信號序列，長的蛋白質含有一個短的信號序列，長22個氨基酸，該基因所編碼的蛋白質含個氨基酸，該基因所編碼的蛋白質含 有個保守的半胱氨酸，可形成個鏈內二硫鍵，而哺乳動物只含有個半有個保守的半胱氨酸，可形成個鏈內二硫鍵，而哺乳動物只含有個半 胱氨酸，形成個鏈內二硫鍵。胱氨酸，形成個鏈內二硫鍵。 研究還發(fā)現(xiàn)，該基因靠近開放閱讀框架的研究還發(fā)現(xiàn)，該基因靠近開放閱讀框架的端有重復的端有重復的 序列。序列。 等（）采用技術獲得了雞等（）采用技術獲得了雞il-2基因全序列，基因全序列， 對其基因組結構進行分析，發(fā)現(xiàn)該基因外含子和內含子結構與

10、哺乳動物的極為對其基因組結構進行分析，發(fā)現(xiàn)該基因外含子和內含子結構與哺乳動物的極為 相似，但前者的外含子及內含子和更短一些。在該基因外含子的相似，但前者的外含子及內含子和更短一些。在該基因外含子的端端 未翻譯區(qū)有個重復的未翻譯區(qū)有個重復的“不穩(wěn)定不穩(wěn)定”的重復序列。該基因是一個既無的重復序列。該基因是一個既無 結構（氨基酸）又無啟動子序列多態(tài)性的單拷貝基因，在該基因的啟動子上發(fā)結構（氨基酸）又無啟動子序列多態(tài)性的單拷貝基因，在該基因的啟動子上發(fā) 現(xiàn)有許多潛在的調節(jié)序列，序列比較還表明該基因上存在其他潛在的轉錄因子現(xiàn)有許多潛在的調節(jié)序列，序列比較還表明該基因上存在其他潛在的轉錄因子 結合位點，這

11、在哺乳動物結合位點，這在哺乳動物il-2啟動子上至今未見報道，并在研究雞啟動子上至今未見報道，并在研究雞il-2基因結基因結 構的過程中，意外地發(fā)現(xiàn)了個多態(tài)現(xiàn)象，這可將該基因定位于雞第構的過程中，意外地發(fā)現(xiàn)了個多態(tài)現(xiàn)象，這可將該基因定位于雞第 號染色體上與相連，根據(jù)核苷酸序列所推導的氨基酸序列分析表明，號染色體上與相連，根據(jù)核苷酸序列所推導的氨基酸序列分析表明， 該蛋白質結構是保守的，但是其受體結合位點并不保守該蛋白質結構是保守的，但是其受體結合位點并不保守. 李祥瑞（李祥瑞（1995）利用雞脾臟細胞，體外誘生利用雞脾臟細胞，體外誘生il-2，提取誘導過的，提取誘導過的 脾單核細胞總，反轉錄合

12、成，將核酸片段與質粒載體連接，脾單核細胞總，反轉錄合成，將核酸片段與質粒載體連接， 質粒轉化宿主菌，建立質粒轉化宿主菌，建立 文庫。經過兩輪篩選，成功克隆文庫。經過兩輪篩選，成功克隆 了雞了雞il-2，經序列分析表明，雞，經序列分析表明，雞il-2與人和其他哺乳動物與人和其他哺乳動物il-2同源性同源性 在左右。在左右。 李建榮等（李建榮等（2001）則是采用刺激體外培養(yǎng)的雞淋巴細胞，應用則是采用刺激體外培養(yǎng)的雞淋巴細胞，應用 方法得到地方品種蕭山雞方法得到地方品種蕭山雞il-2，經研究發(fā)現(xiàn)，其全長為，經研究發(fā)現(xiàn)，其全長為 737，編碼，編碼143個氨基酸，其與火雞個氨基酸，其與火雞il-2有

13、有69.4的同源性，與哺乳動物的的同源性，與哺乳動物的 il-2有有21.229.4的同源性。所編碼的蛋白質預計包括的同源性。所編碼的蛋白質預計包括22個氨基酸的前導個氨基酸的前導 序列和形成兩個鏈內二硫鍵的個半胱氨酸。序列和形成兩個鏈內二硫鍵的個半胱氨酸。 陳吉剛等（陳吉剛等（2003）克隆了地方品種絲羽烏骨雞克隆了地方品種絲羽烏骨雞il-2，經研究發(fā)現(xiàn)，經研究發(fā)現(xiàn)， 絲羽烏骨雞絲羽烏骨雞il-2基因由基因由734堿基組成，編碼一由堿基組成，編碼一由143個氨基酸組成的前體蛋白。個氨基酸組成的前體蛋白。 基因基因端含有個核苷酸和端含有個核苷酸和端含有個核苷酸組成的非編碼區(qū)，端含有個核苷酸組成

14、的非編碼區(qū)， 中含有個重復的中含有個重復的“”序列。序列。 張春杰張春杰等利用雞新城疫等利用雞新城疫系疫苗接種雞胚，直接從雞胚脾淋巴細胞中分離系疫苗接種雞胚，直接從雞胚脾淋巴細胞中分離 進行擴增得到了洛陽土種雞進行擴增得到了洛陽土種雞il-2。序列分析表明，洛陽。序列分析表明，洛陽 土種雞與中公布的雞土種雞與中公布的雞il-2基因基因 序列有個氨基酸的序列有個氨基酸的 差異，尤其是、和個位點的氨基酸變異是其差異，尤其是、和個位點的氨基酸變異是其 他品系雞沒有出現(xiàn)過的。他品系雞沒有出現(xiàn)過的。 第三部分第三部分 1 免疫治療劑免疫治療劑 雞雞il-2 作為免疫治療劑應用于作為免疫治療劑應用于禽細菌

15、性傳染病禽細菌性傳染病和一些和一些寄生蟲病寄生蟲病的的 報道不斷出現(xiàn)。報道不斷出現(xiàn)。tellez 等使用由雞等使用由雞cona 活化活化t 細胞誘導產生的細胞因子，可以使雞細胞誘導產生的細胞因子，可以使雞 腸炎沙門氏菌器官侵入率降低腸炎沙門氏菌器官侵入率降低51%60%，此種細胞因子注入雞胚，同樣可以顯著，此種細胞因子注入雞胚，同樣可以顯著 降低孵化期雞胚降低孵化期雞胚沙門氏菌沙門氏菌器官侵入率。在寄生蟲方面，器官侵入率。在寄生蟲方面，lillehoj等，在等，在eimeria tenella（柔嫩艾美球蟲（柔嫩艾美球蟲)感染雞的前感染雞的前1 d 或感染后的第或感染后的第1 天，用天，用co

16、na 活化雞淋巴細胞活化雞淋巴細胞 產生的細胞因子處理雞，謝昆等對產生的細胞因子處理雞，謝昆等對chil-2 的的抗球蟲抗球蟲作用做了初步研究，分別在作用做了初步研究，分別在14 日齡和日齡和21 日齡給試可以明顯降低球蟲感染雞卵囊的排出量。驗雛雞胸部肌肉注射不日齡給試可以明顯降低球蟲感染雞卵囊的排出量。驗雛雞胸部肌肉注射不 同劑量的重組同劑量的重組chil-2 蛋白，蛋白，28 d 齡口服接種齡口服接種1105 個活球蟲卵囊，結果表明，重個活球蟲卵囊，結果表明，重 組組chil-2 蛋白能降低相對卵囊產量、減少盲腸病變、提高相對增重。蛋白能降低相對卵囊產量、減少盲腸病變、提高相對增重。low

17、enthal 等等 研究發(fā)現(xiàn)，剛孵化出的小雞的研究發(fā)現(xiàn)，剛孵化出的小雞的t 淋巴細胞未發(fā)育成熟，在抗原的刺激下不能分化增淋巴細胞未發(fā)育成熟，在抗原的刺激下不能分化增 殖和分泌殖和分泌il-2，因此在小雞，因此在小雞2 周齡注射周齡注射il-2 可以提供一定的保護力。作為免疫治療可以提供一定的保護力。作為免疫治療 劑，劑，il-2 還可以克服免疫抑制以及預防某些疾病感染，合理使用還可以克服免疫抑制以及預防某些疾病感染，合理使用il-2 還可以克服飼還可以克服飼 料中的霉菌毒素等原因引起的免疫抑制。料中的霉菌毒素等原因引起的免疫抑制。 2 免疫增強劑免疫增強劑 將將i l-2 與免疫源性弱的亞單位

18、疫苗聯(lián)合使用與免疫源性弱的亞單位疫苗聯(lián)合使用, 可提高機體保護性免疫反應的水可提高機體保護性免疫反應的水 平。持續(xù)低劑量注射平。持續(xù)低劑量注射i l-2 , 有介導有介導t 細胞的作用細胞的作用, 促進促進t 細胞分裂、增殖?？稍黾蛹毎至?、增殖。可增加 外周血液中外周血液中cd4 t 細胞數(shù)量細胞數(shù)量, 提高機體對抗原性的免疫應答能力。國內外學者進行提高機體對抗原性的免疫應答能力。國內外學者進行 了許多此方面的研究。了許多此方面的研究。neil 等等(2000)采用采用il-2 與培養(yǎng)物過濾蛋白聯(lián)合使用對牛的結與培養(yǎng)物過濾蛋白聯(lián)合使用對牛的結 核病進行免疫試驗核病進行免疫試驗, 結果顯示結果

19、顯示, il-2 能作為一種佐劑提高亞單位苗的細胞免疫。并能作為一種佐劑提高亞單位苗的細胞免疫。并 且且, cfp-il-2苗能減少肺部的損傷苗能減少肺部的損傷, 相比之下相比之下, bcg 疫苗就有較多的肺部壞死疫苗就有較多的肺部壞死 (weinberg 等等, 1988)。numberg 等等(1989)報道報道, 以以il-2 和狂犬病滅活苗一起使用和狂犬病滅活苗一起使用, 攻攻 毒后毒后, 疫苗對試驗鼠的保護作用最少提高疫苗對試驗鼠的保護作用最少提高25 倍倍, 表明表明il-2 具有明顯的佐劑效應具有明顯的佐劑效應 (adjuvantici ty)。 家禽類家禽類il-2 作為免疫增

20、強劑已被許多學者所證實。作為免疫增強劑已被許多學者所證實。杜明華杜明華利用畢赤酵母表達利用畢赤酵母表達 了重組了重組chil-2，將純化的，將純化的chil-2 與疫苗聯(lián)合免疫雞群，研究其作為免疫增強劑對與疫苗聯(lián)合免疫雞群，研究其作為免疫增強劑對 禽流感病毒疫苗和新城疫病毒疫苗的免疫增強效果。實驗表明，禽流感病毒疫苗和新城疫病毒疫苗的免疫增強效果。實驗表明，chil-2 與禽流感與禽流感 或新城疫疫苗聯(lián)合免疫均具有良好的免疫增強作用，能有效提高雞體抗體滴度，或新城疫疫苗聯(lián)合免疫均具有良好的免疫增強作用，能有效提高雞體抗體滴度， 提高存活率，其使用劑量約提高存活率，其使用劑量約8. 35 g 只

21、。只。王彥彬王彥彬等也研究了重組雞等也研究了重組雞il-2 對新城對新城 疫滅活疫苗的免疫增強效果，發(fā)現(xiàn)將重組疫滅活疫苗的免疫增強效果，發(fā)現(xiàn)將重組il-2和雞新城疫滅活苗聯(lián)合免疫和雞新城疫滅活苗聯(lián)合免疫8 日齡固日齡固 始雞，能增強新城疫疫苗的免疫效果，提高血清中抗體的水平。此外，始雞，能增強新城疫疫苗的免疫效果，提高血清中抗體的水平。此外，tarpey 等等 在雞胚胎接種低劑量傳染性法氏囊病和傳染性支氣管炎病毒疫苗時加入了重組火在雞胚胎接種低劑量傳染性法氏囊病和傳染性支氣管炎病毒疫苗時加入了重組火 雞皰疹病毒表達的雞雞皰疹病毒表達的雞il-2，結果顯示，抗體對病毒的抑制作用明顯增強，并且抵，

22、結果顯示，抗體對病毒的抑制作用明顯增強，并且抵 抗病毒的自我保護作用明顯增加。表明，抗病毒的自我保護作用明顯增加。表明，il-2 和低劑量疫苗聯(lián)合免疫是增強卵內和低劑量疫苗聯(lián)合免疫是增強卵內 接種疫苗效果的有效、安全的方法。以上試驗研究均表明了接種疫苗效果的有效、安全的方法。以上試驗研究均表明了il-2 可以作為一種安可以作為一種安 全高效的免疫增強劑應用于禽類養(yǎng)殖業(yè)中。全高效的免疫增強劑應用于禽類養(yǎng)殖業(yè)中。 3構建新型基因工程疫苗構建新型基因工程疫苗 早在早在dna 疫苗產生以前就有人把細胞因子作為佐劑與疫苗聯(lián)用疫苗產生以前就有人把細胞因子作為佐劑與疫苗聯(lián)用, 但由于細胞但由于細胞 因子在體

23、內半衰期太短且造價昂貴因子在體內半衰期太短且造價昂貴, 未能在傳統(tǒng)疫苗中廣泛應用。受未能在傳統(tǒng)疫苗中廣泛應用。受dna 疫苗以疫苗以 質粒作為抗原載體的啟發(fā)質粒作為抗原載體的啟發(fā), 以重組質粒表達的細胞因子克服了原有的弱點以重組質粒表達的細胞因子克服了原有的弱點, 而得以而得以 在在dna 疫苗這個領域中得到更多的重視和研究疫苗這個領域中得到更多的重視和研究, 其中其中, 以對以對i l-2 的研究最為活躍。的研究最為活躍。 姜永厚等首次克隆得到的雞姜永厚等首次克隆得到的雞il-2 與新城疫弱毒與新城疫弱毒d26 株株f 基因基因, 經載體構建經載體構建, 將兩者將兩者 以非融合蛋白形式共同克

24、隆于真核表達質粒以非融合蛋白形式共同克隆于真核表達質粒pcdna 上上, 成功構建了表達雞成功構建了表達雞i l-2 與與 新城疫新城疫f 蛋白的重組質粒蛋白的重組質粒(pcdna-f-il-2), 用此重組質粒免疫雞用此重組質粒免疫雞, 試驗結果表明其試驗結果表明其 表達表達il-2 可提高新城疫可提高新城疫dna 疫苗的效力。疫苗的效力。hazama 等將等將il-2 基因與牛單純性皰疹基因與牛單純性皰疹 病毒糖蛋白病毒糖蛋白d 基因融合基因融合, 真核細胞內表達融合蛋白真核細胞內表達融合蛋白, 免疫小鼠后攻毒。結果該融合免疫小鼠后攻毒。結果該融合 蛋白可完全保護小鼠免受病毒攻擊蛋白可完全

25、保護小鼠免受病毒攻擊, 而以氫氧化鋁為佐劑但不含而以氫氧化鋁為佐劑但不含il-2 的重組糖蛋白的重組糖蛋白 只產生部分保護只產生部分保護, i l-2 在體內的半衰期也因此延長大約在體內的半衰期也因此延長大約4 倍。表明采用此種方式獲倍。表明采用此種方式獲 得得i l-2 抗原重組蛋白抗原重組蛋白, 是研制新一代基因工程苗的另一途徑。是研制新一代基因工程苗的另一途徑。 基因工程疫苗常把細胞因子基因與保護性抗原基因連接在一起，構成融合蛋基因工程疫苗常把細胞因子基因與保護性抗原基因連接在一起，構成融合蛋 白來增強疫苗的體液和細胞免疫水平。而禽類白來增強疫苗的體液和細胞免疫水平。而禽類il-2 基因

26、可以作為一個良好的細胞基因可以作為一個良好的細胞 因子基因與保護抗原的基因連接在一起。前面提到了一些因子基因與保護抗原的基因連接在一起。前面提到了一些il-2 和和ibdv 的疫苗聯(lián)的疫苗聯(lián) 合使用能提高合使用能提高ibdv 疫苗的免疫原性的研究情況，而疫苗的免疫原性的研究情況，而wang 等通過基因工程技術將等通過基因工程技術將 ibdv 病毒的病毒的vp2 基因和雞基因和雞il-2 基因構建重組融合蛋白基因構建重組融合蛋白rvp2-il-2，實驗證實，實驗證實， rvp2-il-2 融合蛋白也能通過體液及細胞免疫來增強雞體抵抗融合蛋白也能通過體液及細胞免疫來增強雞體抵抗ibdv 病毒的能力

27、。病毒的能力。 liu 等也做了相關的研究，通過構建等也做了相關的研究，通過構建pbacpakvp2-il-2 質粒獲得了融合蛋白質粒獲得了融合蛋白vp2- il-2。 shah 等將堆形艾美球蟲的等將堆形艾美球蟲的csz-2 基因和基因和chil-2基因以及基因以及chifn- 基因分別導基因分別導 入真核表達載體入真核表達載體pvax1中，構建了中，構建了pvax1-csz2-chil-2、pvax1-csz2-chifn-、 pvax1-csz2、pvax1-chil-2 以及以及pvax1-chifn-重組基因工程疫苗，并發(fā)現(xiàn)重組基因工程疫苗，并發(fā)現(xiàn) pvax1-csz2-chil-2

28、 重組基因工程疫苗能使雞體有較其他重組基因工程疫苗能使雞體有較其他4 個基因工程疫苗更強個基因工程疫苗更強 的免疫球蟲病的能力，并能降低免疫應答過程中產生的對雞腸組織損傷的程度。的免疫球蟲病的能力，并能降低免疫應答過程中產生的對雞腸組織損傷的程度。 song 等優(yōu)化了等優(yōu)化了dna 疫苗疫苗pcdna-ta4-il-2 的劑量及給藥途徑，采用肌肉注射的劑量及給藥途徑，采用肌肉注射25 ug 只時具有最好的免疫效果。閆若潛等研究了雞基因工程重組復合抗病毒制只時具有最好的免疫效果。閆若潛等研究了雞基因工程重組復合抗病毒制 劑對雞病毒性疾病的作用，構建了劑對雞病毒性疾病的作用，構建了chifn-li

29、nker-chil-2 嵌合基因，其在大腸嵌合基因，其在大腸 桿菌中表達的蛋白相對分子質量大小約桿菌中表達的蛋白相對分子質量大小約35900，測定發(fā)現(xiàn)該重組蛋白在雞胚成纖，測定發(fā)現(xiàn)該重組蛋白在雞胚成纖 維細胞中具有明顯抗病毒活性。免疫增強劑維細胞中具有明顯抗病毒活性。免疫增強劑 第四部分第四部分 1 雞雞il-2基因的發(fā)現(xiàn)及克隆基因的發(fā)現(xiàn)及克隆 1975年年morgan等用等用pha刺激正常淋巴細胞刺激正常淋巴細胞,收集的細胞上清加入普通培養(yǎng)基用收集的細胞上清加入普通培養(yǎng)基用 以培養(yǎng)正常骨髓細胞以培養(yǎng)正常骨髓細胞,發(fā)現(xiàn)這種培養(yǎng)基中含有一種具有維持骨髓發(fā)現(xiàn)這種培養(yǎng)基中含有一種具有維持骨髓t淋巴細

30、胞在體外長淋巴細胞在體外長 期生長的物質期生長的物質,并把它命名為并把它命名為t細胞生長因子細胞生長因子(tcgf)。1979年年,瑞士國際淋巴因子會議瑞士國際淋巴因子會議 統(tǒng)一把它命名為白細胞介素統(tǒng)一把它命名為白細胞介素-2(il-2)。雖然眾多實驗結果顯示。雖然眾多實驗結果顯示il-2可以對多種細胞發(fā)可以對多種細胞發(fā) 揮顯著的免疫作用揮顯著的免疫作用,但是這種條件培養(yǎng)基中包含有其他的細胞因子但是這種條件培養(yǎng)基中包含有其他的細胞因子,這就需要從這種這就需要從這種 培養(yǎng)基中分離出到單一的培養(yǎng)基中分離出到單一的il-2蛋白。為此研究人員嘗試了多種純化方法獲得了純度蛋白。為此研究人員嘗試了多種純化

31、方法獲得了純度 不一的天然不一的天然il-2蛋白。但這些純化步驟只是相對的地提高了蛋白。但這些純化步驟只是相對的地提高了il-2的純度的純度,并沒有完全并沒有完全 解決實驗中其他因子污染的問題解決實驗中其他因子污染的問題,而且純化過程中外界因素也不可避免地對而且純化過程中外界因素也不可避免地對il-2產生產生 了影響。直到在了影響。直到在1983年年,日本人日本研究者口日本人日本研究者口taniguchi和比利時研究者和比利時研究者devos在體外在體外 克隆和表達了人克隆和表達了人il-2基因基因,這才使獲得單一這才使獲得單一il-2蛋白成為可能。蛋白成為可能。 隨后隨后,研究人員分別克隆了

32、鼠、牛和豬的研究人員分別克隆了鼠、牛和豬的il一一2基因。與人和哺乳動物相比基因。與人和哺乳動物相比, 禽禽il-2的研究相對滯后。直到的研究相對滯后。直到1997年年,sundick等用構建等用構建cdna文庫的方法文庫的方法,才將雞才將雞 il-2基因克隆成功。迄今基因克隆成功。迄今,己有多種禽己有多種禽il-2cdna被成功克隆。被成功克隆。 il-2根據(jù)來源不同可以分為根據(jù)來源不同可以分為內源性內源性il-2和和重組表達重組表達il-2。前者生要。前者生要 來自新鮮的組織細胞來自新鮮的組織細胞,包括外周血淋巴細胞脾淋巴細胞和扁桃體淋巴細包括外周血淋巴細胞脾淋巴細胞和扁桃體淋巴細 胞胞,這些細胞誘導后均可產生這些細胞誘導后均可產生il-2。迄今。迄今,人和鼠都建立了多個可以分泌人和鼠都建立了多個可以分泌 il-2的細胞系的細胞系,但一些