體驗制備細(xì)胞膜的方法教學(xué)設(shè)計,DOC

1、體驗制備細(xì)胞膜的方法教學(xué)設(shè)計背景資料生物膜的研究發(fā)展迅速。要研究生物膜的組成、結(jié)構(gòu)及功能，首先必須分離出純凈的細(xì)胞膜。 分離得到的哺乳動物的紅細(xì)胞膜，一般稱為“血影”。哺乳動物成熟的紅細(xì)胞中沒有一般真核細(xì)胞 所具有的細(xì)胞核和細(xì)胞器，容易用它制備純凈的細(xì)胞膜。此外，哺乳動物的血液也比較容易獲得， 因而是研究細(xì)胞膜的理想材料。從哺乳動物的紅細(xì)胞中分離細(xì)胞膜，第一步是將血液收集在加有抗凝劑的容器內(nèi)，用低速離心 的方法從血液中分離出紅細(xì)胞，然后用等滲緩沖液反復(fù)洗滌，經(jīng)多次離心，去除血漿。第二步是在紅細(xì)胞中加入低滲緩沖液，由于低滲溶液的作用，大量水分進入細(xì)胞，使紅細(xì)胞脹破而溶血。第三步是將溶血的紅細(xì)胞反

2、復(fù)而充分地高速離心、洗滌，去除血紅蛋白和其他的細(xì)胞內(nèi)含物， 最終獲得比較純凈的紅細(xì)胞膜。I I / /1 材料新鮮的哺乳動物血液J J /2用具離心機，離心管，滴管，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，吸水紙，小燒杯。3試劑檸檬酸鈉或肝素(抗凝劑)，生理鹽水(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 9%的NaCI溶液)，蒸餾水或清水。4.操作要點教師在實驗前做以下準(zhǔn)備工作。準(zhǔn)備一定量的新鮮的哺乳動物血液，如羊血或豬血，在冰箱中靜置一晝夜。用滴管將上清液吸 去。再吸取1mL的沉淀物，放入離心管中，加入生理鹽水 2mL在2000r/min條件下離心5min。去 除上清液，在沉淀中再加入生理鹽水 2mL再離心一次，去除上清液，留沉淀備

3、用。以上操作的目 的是洗去血漿成分，避免血漿對血細(xì)胞的緩沖作用，從而使紅細(xì)胞的溶血現(xiàn)象更加明顯。學(xué)生的實驗操作如下。(1) 取一個5mL的小燒杯，加入生理鹽水 23mL(2) 用滴管在沉淀的下層吸取一小滴血細(xì)胞，滴入小燒杯的生理鹽水中，以達到稀釋紅細(xì)胞 的目的，以免觀察時，由于細(xì)胞密度太大，影響觀察效果。(3) 取另一個滴管，在小燒杯中輕輕攪拌，然后吸取少量的血細(xì)胞稀釋液，在載玻片的中央 滴很小的一滴，加蓋玻片。(4) 先在低倍鏡下觀察紅細(xì)胞的正常形態(tài)，可見其邊緣完整發(fā)亮。(5) 在蓋玻片的一側(cè)加一滴蒸餾水或清水，在另一側(cè)非常小心地用吸水紙慢慢地吸引，防止 把紅細(xì)胞全部吸入吸水紙中而影響觀察。

4、 邊加水邊觀察，注意紅細(xì)胞的形態(tài)變化。紅細(xì)胞會隨著水 流向一側(cè)漂移，觀察時注意移動玻片。 紅細(xì)胞體積逐漸變大，變得非常鼓脹，在視野中可以找到少 數(shù)脹破的紅細(xì)胞，它們已失去完整發(fā)亮的邊緣，變成彌散狀。5 需要注意的幾個問題(1) 制作臨時裝片時，紅細(xì)胞必須稀釋，而且取紅細(xì)胞的量要少。(2) 在高倍鏡下觀察，待觀察清晰時，在蓋玻片的一側(cè)滴加蒸餾水，同時在另一側(cè)用吸水紙 吸引。上述操作均在載物臺上進行， 并隨時調(diào)整鏡筒高度，持續(xù)觀察細(xì)胞的變化。在蓋玻片一側(cè)滴 加蒸餾水的量要少，不能讓蓋玻片處于漂浮狀態(tài)；同時在另一側(cè)用吸水紙吸引時要小心， 不要將血 細(xì)胞吸走。(3) 要想取得好的觀察效果，所用顯微鏡的

5、放大倍數(shù)應(yīng)在 400倍以上。(4) 操作中要認(rèn)真觀察才能看到連續(xù)的變化過程。|_ -r |；f -具體教學(xué)步驟1 分析實驗原理 II I .【提問引入】科學(xué)家要研究細(xì)胞膜，首先要解決的問題，是獲得相應(yīng)的實驗材料，即細(xì)胞膜。用哪種細(xì)胞來 制備細(xì)胞膜比較合適呢？為什么？【請學(xué)生討論】。根據(jù)學(xué)生回答的情況，加以歸納總結(jié)?？茖W(xué)家發(fā)現(xiàn)，哺乳動物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，而 且細(xì)胞質(zhì)的結(jié)構(gòu)也比其他真核細(xì)胞簡單得多，是制備細(xì)胞膜的理想材料?！具M一步提問】怎樣才能獲得純凈的細(xì)胞膜呢？直接剝離可以嗎？有沒有間接的方法？根據(jù)學(xué)生的回答，肯定溶血的方法。再進一步提問，如何將細(xì)胞膜與細(xì)胞其他成分分離開？引 導(dǎo)學(xué)生了解

6、離心技術(shù)的應(yīng)用。由于細(xì)胞膜非常薄，通常要在5000r/min及9000r/min條件下反復(fù)離 心多次，才能得到純凈的細(xì)胞膜。由于時間和條件的限制，我們在課上只用顯微鏡來觀察紅細(xì)胞溶 血前后細(xì)胞邊界的變化，以此來體驗細(xì)胞膜的存在，并對細(xì)胞膜的制備方法有一個初步的體驗。2 明晰實驗步驟讓學(xué)生討論，設(shè)計具體的實施步驟。教師對學(xué)生設(shè)計的步驟進行補充完善。具體實施步驟參見“操作指南”關(guān)于操作要點和難點，可以提出以下問題引發(fā)學(xué)生思考。例如，在載玻片上滴加的血細(xì)胞多些 好還是少些好？在蓋玻片另一側(cè)用吸水紙吸引時， 要注意什么？如何把握觀察溶血后的紅細(xì)胞的最 好時機？教師針對問題，指出操作要點并講明原因。3.

7、 分組實驗學(xué)生進行分組實驗，教師給予具體的指導(dǎo)和評價。4. 展示和討論實驗結(jié)果可以把教材中紅細(xì)胞溶血前后的照片在投影上展示。I /，-y根據(jù)學(xué)生分組實驗的情況，教師作講解。實驗反思1-jJ. I1I V I1. 本實驗中可以考查學(xué)生的基本實驗技能有：臨時裝片的制作，顯微鏡的使用等。2. 關(guān)于實驗結(jié)果的評價。如果實驗成功，可以看到近水部分的部分紅細(xì)胞體積增大，很快會 看到紅細(xì)胞的邊緣變得不清晰，呈彌散狀。 II I .3. 影響實驗結(jié)果的因素可能有以下幾個方面。(1) 紅細(xì)胞發(fā)生溶血的比例與操作是否得當(dāng)有關(guān)。(2) 顯微鏡使用是否熟練。(3) 是否認(rèn)真、連續(xù)地觀察。x I: |教學(xué)反思(1) 教師在進行實驗原理