白蠟多年菌液體培養(yǎng)產(chǎn)胞外多糖條件精品資料

1、B白蠟L# 液 菌rrrfA 產(chǎn) 養(yǎng)、 7nn東.農(nóng).業(yè).科.學(xué).雜.志.2-1年.第.十二期.白蠟.多年菌丄Jfnea是一種多孔-菌科多一年-菌.屬一的.珍.稀.食.藥一用-真菌.野.丄白-蠟.多一年.菌.在一北一X安一徽一湖.南一1東一等一地-均一有一發(fā)一現(xiàn)-，-多一長(zhǎng)于腐朽的樹(shù)一上一丄丄作為一野生一食藥用一菌，一它富含一糖類(lèi)活性-物一質(zhì)，-并-具一有較高的一營(yíng)養(yǎng)價(jià)-值n丄2 一目一前一，一國(guó)一內(nèi)外一對(duì)白一蠟一多一年一菌一進(jìn)一行的一研一究一主要在其菌絲一纖一溶蛋白-酶的-分離純化及表征方面一丄3 一但-關(guān)一于一白一蠟-多一年一菌一液一體_培一養(yǎng)一條一件一的一相一關(guān)一研一究一尚一不一多一見(jiàn)一

2、1為一此，一本一試一驗(yàn)一研一究一白一蠟一多一年一菌液體培養(yǎng)的碳一氮源及一培一養(yǎng)條件對(duì)一其胞一外一多糖含一量一的一影一響一，一以一期一為-白一蠟一多一年一菌一的一開(kāi)一發(fā)一利一用一及一其一多一糖-的一丄業(yè)一化一生一產(chǎn)一提一供一建一論一依一據(jù)一丄材一料與方法一試一驗(yàn)一材一料一供一試一菌一株一白一蠟一多-年菌一IIII(-UPenniinea)菌株一，-由一華南師范大一學(xué)一生命科-學(xué)一學(xué)一院一提-供一丄要-儀-器-與_設(shè)一備-56通-用一臺(tái)一式一離-心機(jī)-(-美-國(guó)-jm公-司一),3紫-外-可一見(jiàn)-分-光光度儀日本島津公司5|7計(jì)匕 寸京時(shí)代新Sicma司UV245C）紫外-可維測(cè)控設(shè)備有限公司）。

3、1.2試驗(yàn)方法1.2.1單因素及正交試驗(yàn)以胞外多糖含量為指標(biāo)考察碳源（葡萄糖、麥芽糖、D-果糖、蔗糖、可溶性淀粉濃度分別為25、30、35、40、45(L）、氮源NH4NO3(NHL)2S；04、尿素、KN103、L-谷氨酰胺氮原子含量為50mm(ol/L濃度分別為0.5、1、2、4、8g/L丨、培養(yǎng)液初始pH(5.5、6.0、6.5、7.0、7.5）、裝液量(50、75、100、125、150mL/25(mL）、溫度(18、21、24、27、30）、搖床轉(zhuǎn)速（120、150、180、210、240r/min)及培養(yǎng)時(shí)間（5、7、9、11、13d)對(duì)菌絲產(chǎn)胞外多糖的影響在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上以正

4、交試驗(yàn)考察溫度、初始pH、裝液量、培養(yǎng)時(shí)間對(duì)白蠟多年菌液體培養(yǎng)產(chǎn)胞外多糖的影響正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1上述各處理組試驗(yàn)步驟為:將菌株轉(zhuǎn)接于母種培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)制成平板菌種用同一一一打孔器在平板菌種的同一一一半徑上打孔將4個(gè)菌栓接入試驗(yàn)培養(yǎng)基置于搖床振蕩培養(yǎng)1.2.2指標(biāo)測(cè)疋將發(fā)酵液于80()0r/miin離心5miin棄、iT沉淀取上清液備用?？偺呛渴褂帽椒?硫酸法測(cè)疋4;還原糖含量用二二二硝基水楊酸(DNSI)法測(cè)疋5；胞外多糖含量是總糖含量與還原糖含量之差6。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SP3.0處理系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)采用LSD）法(最小顯者性差異法)進(jìn)行數(shù)據(jù)間的方差分析7。2結(jié)果與分析2.1碳源對(duì)菌絲產(chǎn)胞外多糖的影

5、響從圖1可以看出白蠟多年菌菌絲在5種不同碳源的液體培養(yǎng)基上都可產(chǎn)胞外多糖但是其/、胞外多糖含量存在差異。以蔗糖作為碳源時(shí)胞外多糖含量最高、達(dá)到4756g/L極顯著高于其/、他碳源。因此白蠟多年菌菌絲產(chǎn)胞外多糖適宜碳源是蔗糖這與刖人對(duì)樺褐孔菌、靈芝等最適碳源的研究結(jié)果一一一致。由圖2可知菌絲在蔗糖濃度2545gL范圍內(nèi)均可產(chǎn)生胞外多糖但其/、含量有一一一疋差異。隨著蔗糖濃度的增高胞外多糖含量逐漸升高當(dāng)蔗糖濃度為40(L時(shí)胞外多糖含量最高、為5728g/L極顯者高于其/、他濃度的胞外多糖含量當(dāng)蔗糖濃度為45g/L時(shí)菌絲胞外多糖含量反而減少可見(jiàn)蔗糖濃度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響白蠟多年菌對(duì)碳素營(yíng)養(yǎng)的吸收導(dǎo)致

6、胞外多糖含量降低因此最適宜白蠟多年菌產(chǎn)胞外多糖的蔗糖濃度為40(L2.2不同氮源對(duì)菌絲產(chǎn)胞外多糖的影響由圖3可知不同氮源培養(yǎng)基中胞外多糖含量由高至低順序?yàn)橄跛徜@、硫酸銨、L-谷氨酰胺、尿素、硝酸鉀菌絲體在以硝酸銨為氮源的培養(yǎng)基中胞外多糖含量最高、為65.48g/L極顯著高于其/、他氮源培養(yǎng)基中的胞外多糖含量當(dāng)以硝酸鉀為氮源時(shí)菌絲胞外多糖含量最少、僅有2248g/L因此白蠟多年菌液體發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖的適宜氮源為硝酸銨從圖4可看出當(dāng)硝酸銨濃度小于ig/L時(shí)菌絲胞外多糖的含量隨著濃度的增加而增加當(dāng)硝酸銨濃度為1g/L時(shí)胞外多糖含量最高、達(dá)87 15g/L高于其/、他濃度當(dāng)硝酸銨濃度大于1g/L時(shí)胞外多

7、糖含量隨著濃度的增加反而減少可見(jiàn)過(guò)量或過(guò)低的氮素營(yíng)養(yǎng)不僅妨礙了菌絲對(duì)氮源本身的吸收還影響了對(duì)其/、他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用影響了菌絲胞外多糖的產(chǎn)量因此為獲得更多的胞外多糖菌絲液體培養(yǎng)基中硝酸銨濃度以1c/L為宜。2.3不同初始pH值對(duì)菌絲產(chǎn)胞外多糖的影響由圖5可知菌絲在初始pH為5.57.5范圍的培養(yǎng)基內(nèi)均可產(chǎn)生胞外多糖在初始pH為5.5時(shí)菌絲產(chǎn)胞外多糖少隨著初始pH的增大菌絲胞外多糖含量也不斷增加當(dāng)初始pH為6.5時(shí)胞外多糖量達(dá)到最高值、為3661g/L隨著pH進(jìn)一一一步升高胞外多糖含量逐漸下降當(dāng)初始pH為7.5時(shí)胞外多糖含量最少僅有21.45g/L因此白蠟多年菌更適合在偏微酸性的環(huán)境中產(chǎn)生胞外多糖

8、最適初始pH為6.52.4不同裝液量對(duì)菌絲產(chǎn)胞外多糖的影響由圖6可知不同裝液量對(duì)于菌絲產(chǎn)胞外多糖有重要影響隨著裝液量的增加菌絲胞外多糖含量也逐漸增加當(dāng)裝液量為75m】L/2!50mL時(shí)菌絲產(chǎn)胞外多糖含量最多、為31.59g/L但隨著裝液量的進(jìn)一一一步增加菌絲的胞外多糖含量急劇下降當(dāng)裝一液一量為一21L m 525CL m時(shí)，一胞外-多糖含量達(dá)一最低一值.，-僅.有.這.可.能.是.過(guò)-多一裝.液.量.影一響.培.養(yǎng).液的氧量,導(dǎo)致菌絲生-長(zhǎng)不良而-胞外多糖含量不-高一因.此.，-適.于-白一蠟.多一年-菌一菌一絲.產(chǎn)-胞.外.多一糖.的一裝一液.量一為一7LJLIIUIIIII不一同轉(zhuǎn)速對(duì)一菌

9、絲產(chǎn)胞一外多糖的影響從一圖7可-以-看出-，-隨著轉(zhuǎn)一速的增大-胞外一多糖含量逐漸增一加一當(dāng)一轉(zhuǎn)一速一為一I-時(shí)一，一胞一外一多一糖一含一量一達(dá)一到一最大，-為17g兒但隨著轉(zhuǎn)速進(jìn)一步增加，-胞外-多一糖一含一量一急一劇一下_降一，一當(dāng)一轉(zhuǎn)一速一為一時(shí)一亠胞一外一多一糖一含一量一最一低一，一僅一有一可一見(jiàn)一，一強(qiáng)一力一機(jī)一械一振蕩會(huì)損傷細(xì)一胞一結(jié)構(gòu)，一也可能導(dǎo)一致胞質(zhì)一營(yíng)養(yǎng)交換一過(guò)一快一，一不一利一丄菌一絲一生一長(zhǎng)一及一胞一外-多一糖一的一分一泌一因一此一，-0r/mi為一白一蠟一多一年一菌一菌一絲一產(chǎn)一胞一外一多一糖-的一適一宜-轉(zhuǎn)一速-不同一培一養(yǎng)一溫一度-對(duì)菌一絲一產(chǎn)一胞一外一多-糖-的

10、影-響由一圖一8可一知一，-在-的溫度范圍內(nèi)，-隨著溫度的升高-，-胞一外-多-糖-含-量-逐-漸-升-高-亠在一丄培一養(yǎng)-時(shí)-胞一外一多一糖-含-量-最-高-，-達(dá)一到-5594g但一當(dāng)一溫一度-超一旦時(shí),胞外多糖含量急劇下降,在5時(shí)胞外多糖含量?jī)H有O1g 匚溫度對(duì)菌絲生一長(zhǎng)一和代一謝一作.用.的.影一響.較.大.，-菌.絲.產(chǎn)-胞.外多一糖.最.適.宜.的.培養(yǎng).溫度為27OUUUUnUnU不-同.培.養(yǎng).時(shí).間.對(duì)-菌一絲.產(chǎn).胞.外一多一糖.的-影一響.圖一2可一知，-培養(yǎng)時(shí)間.是影響菌絲產(chǎn).胞外多糖的重要因丄隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加一，一胞外多糖含量逐漸一丄升-，-培一養(yǎng)后達(dá).到最大一值，

11、-為此后一，一隨一著一培一養(yǎng)一時(shí)間一的一延一長(zhǎng)一，一菌一絲一老一化亠菌一絲一的產(chǎn)胞外多糖量也逐漸一丄降因此,為獲一得較多一的一胞一外-多一糖一，一培一養(yǎng)一時(shí)一間一旦適一宜一1-1正一交一試一驗(yàn)一溫一度一起一始一pp裝一液一量一培一養(yǎng)一時(shí)一間一對(duì)菌絲胞外多糖含量影響的正交一試驗(yàn)結(jié)一果一見(jiàn)表2-從-表一2-的一極一差-R_可-知-，一四一因一素一對(duì)一白一蠟一多一年一菌一產(chǎn)一胞一外一多一糖-的一影一響一由一大一到一小一順一序一為一初一始一溫一度-裝-液-量一二培一養(yǎng)-時(shí)一間一亠極一差-計(jì)一算一所一得一的一產(chǎn)一胞一外一多-糖-量-較一優(yōu)的組-合一為一A3.B1C丄即一溫一度-II、起始pp、裝液一量1

12、2H、培養(yǎng)對(duì)-本一試一驗(yàn)-確-定一的一最-佳-培-養(yǎng)-條-件一組-合一進(jìn)_行-試一驗(yàn)-驗(yàn)-證一，一結(jié)一果-表-明白一蠟-多一年一菌-胞一外一多一糖-產(chǎn)量-能-維一持一在,比任一組正交試驗(yàn)的胞外多糖含量都高nn匚nnnnn3 一結(jié).論.與.討論.I與菌絲固體培養(yǎng)相比-，-液體深層培養(yǎng)可-以-根據(jù)菌一絲.在.丄長(zhǎng).過(guò).程.中-對(duì)一碳源一氮一源一丄長(zhǎng).因.丄等.營(yíng)一養(yǎng)一物.質(zhì)一及一溫.度一1值.需一氧一量.等一條一件一的一不-同.需要，一合理配制補(bǔ)加-各種一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和一隨時(shí)一調(diào)節(jié)溫一度值和-通風(fēng)-量，-這就有一可-匕匕 厶冃把-微生物培一養(yǎng)一過(guò)一程一的一生一長(zhǎng)一代一謝一都控一制一在一最一佳一狀一態(tài)一

13、而一收一到最好的培養(yǎng)效果另外，-與寄主培養(yǎng)固體培-養(yǎng)一和一代一料一栽一培-相一比一，一白-蠟一多一年一菌一液一體一培一養(yǎng)一是一一種一獲一得一其一多一糖一產(chǎn)物一較一為一方一便一的途一徑一，一并一且一也一比較一容易對(duì)其培養(yǎng)條件一進(jìn)行優(yōu)化一及對(duì)其胞一外多糖一進(jìn)一行-分-離一純一化一目-前一大一多一數(shù)一的一菌一絲一發(fā)一酵-研一究一采一用一液一體一培一養(yǎng)一的一方一法一本一試一驗(yàn)一結(jié)一果一表一明一亠白一蠟一多一年一菌-的一最一適一碳一源一為一蔗-糖-亠最一適一蔗-糖-濃一度-為一一4幾，-最-適一硝一酸一鞍濃一度-為一19由此可一推知亠該-菌一種適一宜一的一碳一氮一比接一近一55，-這一與一前一人對(duì)食一用

14、-菌-CCN值-不_大_致-亠這-可-能-與一菌-種一自-身-生一理一特一性一和培一養(yǎng)-的一環(huán)-境-有一關(guān)一在一氮-源-試驗(yàn)-中亠當(dāng)一以一硝一酸鞍硫酸鞍以及口谷氨酰胺為氮源時(shí),白蠟多年一菌的胞外一多糖含量較高，一可見(jiàn)白蠟一多年一菌更.喜.好.在.導(dǎo).致.培.養(yǎng).基.酸.化.的-鹽.或.酰.胺.鹽.中.發(fā).酵產(chǎn)-糖從培養(yǎng)條件-來(lái)看通過(guò)-對(duì)-比.單因素試驗(yàn)一和.正.交.試.驗(yàn).結(jié).果.可一知.，-PH值一的.適.宜.范.圍.為.J5161這一符一合.前一對(duì)一擔(dān).丄菌一屬一的.菌一種-生一長(zhǎng)一探.究-中得出一的擔(dān)丄菌對(duì)一1P值的要求比一較廣泛的結(jié)U論，-但總體-來(lái)一說(shuō)白蠟多年菌適合一在偏微酸一性的環(huán)一境一下生一長(zhǎng)一白一靈一菇一在一培一養(yǎng)一的一第一4-天產(chǎn)一胞一外一多一糖量達(dá)到最大值，-而生物量在第8天達(dá)到最大值一1在一本一試一驗(yàn)一中一，一白一蠟一多一年_菌一生一物一量一在一第一7_天一達(dá)一到一最一大一值一，一產(chǎn)一胞一外一多一糖一量一在一第一9-天一達(dá)一到一最一大一值可見(jiàn)對(duì)丄白蠟多年菌來(lái)說(shuō)，一菌絲體一生一長(zhǎng)優(yōu)先