醫(yī)學(xué)綜述論文 研究胎兒性別早期鑒定方法及現(xiàn)狀

1、醫(yī)學(xué)綜述論文 研究胎兒性別早期鑒定方法及現(xiàn)狀摘要： 優(yōu)生優(yōu)育是當(dāng)今社會(huì)提高人口質(zhì)量的方針政策。如何實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育是人類(lèi)將長(zhǎng)期研究的課題。隨著遺傳學(xué)與分子生物學(xué)研究進(jìn)展，已發(fā)現(xiàn)許多遺傳性疾病與性別有關(guān)。所以，對(duì)有遺傳病傾向的胎兒實(shí)行性別鑒定，以便早期實(shí)行選擇性地終止妊娠，是降低此類(lèi)遺傳病患病率，提高整個(gè)社會(huì)人口質(zhì)量的途徑之一。目前，關(guān)于胎兒性別鑒定的方法有多種，本文主要介紹胎兒性別鑒定方法的基本原理、優(yōu)缺點(diǎn)，為進(jìn)一步探討胎兒性別控制提供參考。關(guān)鍵詞： 胎兒 性別鑒定 x-連鎖遺傳 聚合酶鏈反應(yīng)(pcr)前言 迄今,已發(fā)現(xiàn)的x連鎖遺傳病有200多種。包括x連鎖隱性遺傳病和x連鎖顯性遺傳病。常見(jiàn)的x連

2、鎖隱性遺傳病有血友病、紅綠色盲、假肥大型肌營(yíng)養(yǎng)不良（dmd），先天性丙種球蛋白缺乏癥等。此類(lèi)病的致病基因由攜帶者母親傳給兒子。攜帶者女性與正常男性所生的男孩一半發(fā)病，一半正常，而女孩表型一般正常，為預(yù)防患兒出生，可保留女胎，流產(chǎn)男胎。而x連鎖顯性遺傳病遺傳性腎病、抗維素d佝僂病，男性患者與正常女性結(jié)婚，兒子正常，女兒都患病，通過(guò)性別鑒定，可保留男胎，流產(chǎn)女胎1。產(chǎn)前胎兒性別早期鑒定具有重要的社會(huì)意義。 二、胎兒性別鑒定的標(biāo)本種類(lèi) 目前用于細(xì)胞遺傳學(xué)性別鑒定的標(biāo)本有多種。（1）羊水：可以在妊娠16-20周，經(jīng)羊膜腔穿刺抽取10ml左右，收集羊水細(xì)胞。（2）絨毛膜細(xì)胞：可以在妊娠6-12周，經(jīng)陰道

3、取絨毛膜細(xì)胞。（3）臍帶血：可以通過(guò)在b超引導(dǎo)下抽取臍帶血2。（4）孕婦母親外周血：近來(lái)有人發(fā)現(xiàn)采集6-41周孕婦母親外周血5ml-10ml，進(jìn)行連續(xù)密度梯度離心富集胎兒紅細(xì)胞3。 三、胎兒性別鑒定的方法：目前關(guān)于胎兒性別鑒定的方法主要有五種。（一）傳統(tǒng)的顯微鏡細(xì)胞染色質(zhì)分析法1,4此種方法將胎兒細(xì)胞通過(guò)特殊甲苯胺蘭染色液或硫堇染色液和阿的平染色液染色，觀察細(xì)胞內(nèi)有無(wú)x、y染色體。核膜的內(nèi)緣有無(wú)一塊染色較深、大小為1 um左右呈半月形的小塊，緊靠核膜，即為x小體。如果細(xì)胞核中有一發(fā)熒光的圓形或橢圓形的亮點(diǎn)，有如初秋夜空的北斗星，直徑約0.3um，即為y小體，y小體陽(yáng)性診斷為男胎。此種方法不需要

4、特殊的儀器，但結(jié)果受取材中細(xì)胞數(shù)、培養(yǎng)與染色效果及觀察細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)，不易標(biāo)準(zhǔn)化，靈敏度不高。（二）b超技術(shù) 這種技術(shù)較為安全，通過(guò)b超儀直接觀察胎兒的生殖器，此方法有較高的準(zhǔn)確性，但要求胎兒發(fā)育程度較高，生殖器基本形成，妊娠達(dá)4個(gè)月以上。（三）核型分析技術(shù) 通過(guò)收集羊水細(xì)胞并對(duì)其人工培養(yǎng)，進(jìn)行染色體顯帶，性染色體xx型為女性；xy型為男性。此方法取材不方便，有較大的風(fēng)險(xiǎn)，且費(fèi)時(shí)，必須由訓(xùn)練有素的人員完成。(四)熒光原位雜交技術(shù) (fish) 有人根據(jù)母胎之間存在有微量血液交換，母親體內(nèi)存在有胎兒來(lái)源的有核紅細(xì)胞，而且胎兒紅細(xì)胞的形態(tài)、核形、胞漿著色與母親紅細(xì)胞不同，并有特異的血紅蛋白和鏈，通

5、過(guò)x、y染色體特異熒光標(biāo)記探針可鑒定胎兒紅細(xì)胞是來(lái)源于男性胎兒還是女性胎兒。此方法的特異性可達(dá)100%，靈敏度隨孕齡增加而增加5。但此方法需要較昂貴的流式細(xì)胞分析儀，操作也不易掌握，只有特定的科研人員能完成。但也有人6認(rèn)為從母親外周血中抽取胎兒細(xì)胞進(jìn)行產(chǎn)前診斷的可能性很小,因?yàn)樘?母轉(zhuǎn)移細(xì)胞數(shù)少，僅占母親細(xì)胞的0.0035%-0.008%胎兒有核紅細(xì)胞到達(dá)母體需要的妊娠的時(shí)間也在10周以上。（五）pcr（聚合酶鏈反應(yīng)）技術(shù) 從醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的角度，性別是由個(gè)體性染體組成決定的，其中y染色體起決定性的作用。這是因?yàn)閥染色體帶有睪丸決定因子。 90年代在y染色體短臂上成功地定位和克隆了性別決定區(qū)（se

6、x determine region of the y hromosome,sry）基因7，近年來(lái)的研究表明，性別的決定與分化是一個(gè)以sry基因?yàn)橹鲗?dǎo)的多個(gè)基因參與的有序而復(fù)雜的調(diào)控過(guò)程，已發(fā)現(xiàn)參與這一過(guò)程的基因至少有7種，即sry，sox9,某種原因amh,wt-1,sf-1,dax-1,mis基因，這些都為胎兒性別鑒定奠定了分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)。隨著pcr技術(shù)的成熟，許多科研人員試圖應(yīng)用pcr技術(shù)進(jìn)行胎兒性別的鑒定。主要有如下幾種方法：（1）利用羊水或絨毛細(xì)胞，擴(kuò)增y染色體特異基因片斷如sry、dyz-1、dys14、daz進(jìn)行定性分析8,9；（2）根據(jù)母親外周中含有少量胎兒細(xì)胞，提取母親外周血

7、有核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞），利用特異引物擴(kuò)增y染色體上特異系列，如果有y染色體特異系列產(chǎn)物，胎兒即為男性，否則為女性10。（3）利用母親外周血血細(xì)胞或血漿，擴(kuò)增x、y染色體同源性基因如amelogenin，利用擴(kuò)增片斷電泳條帶數(shù)量進(jìn)行定性分析，兩條帶為男性，一條帶為女性11。(4)最近有報(bào)道利用母親外周血漿12,13，采用熒光實(shí)時(shí)定量pcr（rq-pcr）技術(shù)擴(kuò)增y染色體特異基因片斷如sry進(jìn)行胎兒性別鑒定的報(bào)道。vecchione g3根據(jù)胎兒外周血血漿基因片段較母親短這一特點(diǎn)，通過(guò)一定密度梯度液進(jìn)行分離后，用x染色體短串連重復(fù)序列對(duì)26例進(jìn)行實(shí)時(shí)定量pcr分析，結(jié)果與傳統(tǒng)的染色體核型分析一致。展

8、望 建立一種胎兒性別鑒定常規(guī)方法具有重要的社會(huì)意義。作為常規(guī)方法，必須簡(jiǎn)單、可靠、實(shí)用，價(jià)廉、安全。在上述諸方法中,無(wú)論是b超還是染色體核型分析，需妊娠時(shí)間較長(zhǎng)（一般在16周以上），實(shí)施終止妊娠時(shí)，給孕婦身體影響較大4。經(jīng)穿刺術(shù)采集標(biāo)本，風(fēng)險(xiǎn)大、操作煩鎖，方法不易掌握，而利用胎兒紅細(xì)胞的方法又因?yàn)槟赣H體內(nèi)胎兒紅細(xì)胞僅占0.0035%-0.008%，存在靈敏度低的缺點(diǎn)。pcr技術(shù)由其技術(shù)原理和特點(diǎn)，在眾多方法中最具有優(yōu)勢(shì)，它有較高靈敏度和特異性。但由于pcr敏感性高，會(huì)出現(xiàn)非特異擴(kuò)增，或pcr體系的不合理會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增失敗，都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度，但可以通過(guò)使用內(nèi)參照或巢式pcr技術(shù)，很好地解決了非特

9、異性擴(kuò)增和假陰性問(wèn)題12。目前報(bào)道中，由于標(biāo)本來(lái)源、靶系列位點(diǎn)、引物系列、pcr類(lèi)型的差異，診斷的特異性和靈敏度、準(zhǔn)確度有所不同。有的研究樣本較少, 關(guān)于性別早期診斷的可靠性還沒(méi)見(jiàn)報(bào)道，pcr應(yīng)用于胎兒性別鑒定是一種有前景但技術(shù)尚未成熟，有待進(jìn)步探索。我們課題小組正朝此方向試圖探索進(jìn)行胎兒早期性別鑒定的條件研究。相信，隨著研究的深入，一種安全、無(wú)創(chuàng)傷性、較高，且易于標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化的成熟pcr方法，將取代傳統(tǒng)方法，真正實(shí)現(xiàn)胎兒早期性別鑒定。參 考 文 獻(xiàn) 1盧惠霖主編.中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書(shū)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué).上海;上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1984:22,148,153. 2olga b.vainer, alek

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