烏骨雞禽霍亂的病原分離鑒定和藥敏試驗

1、烏骨雞禽霍亂的病原分離鑒定和藥敏試驗第28卷第1期.2010年2月青海大學學報(自然科學版)journalofqinghaiuniversity(naturescience)vo1.28no.1feb.2010烏骨雞禽霍亂的病原分離鑒定和藥敏試驗張紅見,趙靜,汪生林2,張永武(1.青海大學農(nóng)牧學院,青海西寧810016;2.湟中縣畜牧獸醫(yī)工作站,青海湟中811600)摘要:應用常規(guī)分離鑒定技術,對西寧市某特種珍禽養(yǎng)殖場92日齡瀕死和病死烏骨雞進行禽霍亂病原分離,并與多殺性巴氏桿菌質(zhì)控菌株進行生化特性比較.結果顯示:分離株與質(zhì)控茵株間有一定的生化差異,但符合禽型巴氏桿茵的生化特性;同時對分離茵株

2、進行了藥物篩選,選取中介和敏感藥物進行交替治療,取得了一定的治療效果.關鍵訶:烏骨雞;霍亂;分離鑒定;藥敏試驗,中圖分類號:$858.3文獻標志碼:a文章編號:10068996(2010)ol一004004isolationandidentificationofpathogen:ofcholerafromsilkyfowlanddrugsensitivetestzhanghongjian,zhaojing,wangshenglin2,zhangyongwu(1.agricultureandanimalhusbandrycollege,qinghaiuniversity,xining810016

3、,china;2.animalhusbandryandveterinarystationofhuangzhong,huangzhong811600,china)abstract:pathogeniebacteriawereisolatedfrom92daysoldsilkyfowls,whichwereagonalordied,withconventionalmethodfromapouhryfarminxining.thebiocemicalcharacterofthepathogenicbacteriawascomparedwiththatofstrainc478.theresultssh

4、owedtheisolatedpathogenicbacteriahadbiochemicaldifferenceswithcheck,butitmatchedwiththebiochemicalcharacterofavianpasteurellamultocida.drugscreeningandcurehadasatisfactoryresultwithalternativemediumandsensitivedrug.keywords:silkyfowl;cholera;isolationandidentification;drugsensitivetest烏骨雞禽霍亂(cholera

5、ofslikyfow1)是由多殺性巴氏桿菌禽型菌引起的.該病主要引發(fā)成年雞的敗血癥或傳染性肺炎,不僅導致病禽生產(chǎn)性能低下,而且具有較高的死亡率,給養(yǎng)禽業(yè)造成頗大的損失【i.隨著我國加入wto和改革開放的進一步深入,我國的珍禽養(yǎng)殖業(yè)也得到了飛速地發(fā)展.但是,在珍禽中諸如禽霍亂這樣的人畜共患常見病出現(xiàn)抬頭的趨勢,必然會對消費者的身體健康構成了潛在的威脅.2006年9月8日在西寧市某特種珍禽養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的l100余只92日齡的烏骨雞,突然出現(xiàn)散發(fā)病例,幾日后病例數(shù)增多并形成流行,前后累計發(fā)病550只,發(fā)病率為50.00%(55o/1loo),死亡72只,致死率為13.09%(72/550).為此,我們

6、對其進行了病原的分離與鑒定并結合流行病學資料調(diào)查,臨床癥狀和剖檢病變,確診為烏骨雞禽霍亂,同時對分離菌株進行藥物篩選,選取中介,敏感藥物交替治療,取得了較好的效果.現(xiàn)將診斷過程及結果報告如下.1材料與方法1.1材料1.1.1病料采集無菌采取7只瀕死和病死烏骨雞的肝,脾,腎,肺等病料18份,置4冰箱,待檢.收稿日期:200911一o4基金項目:國家自然科學基金資助項目(30960287)作者簡介:張紅見(197o一),男,河南長垣人,副教授,青海大學在讀碩士研究生.主要從事高原畜禽傳染病的診斷與防治研究.第1期張紅見等:烏骨雞禽霍亂的病原分離鑒定和藥敏試驗4l1.1.2培養(yǎng)基鮮血瓊脂平板,普通瓊

7、脂平板,mh瓊脂平板,鮮血瓊脂斜面和5%犢牛血清肉湯及葡萄糖,乳糖,麥芽糖,甘露醇,蔗糖,阿拉伯糖,鼠李糖,海藻糖,棉籽糖,木糖,果糖,肌醇,山梨醇,衛(wèi)矛醇,半固體,mr,vp,靛基質(zhì),hs,尿素,枸櫞酸鹽,硝酸鹽和三糖鐵(tsi)等各種生化培養(yǎng)基,均由青海大學農(nóng)牧學院動物醫(yī)學系傳染病實驗室自制.1.1.3質(zhì)控菌株c478(多殺性巴氏桿菌),購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所.1.1.4試驗動物健康昆明系小白鼠2只,1618g/只(購于青海省地方病研究所).1.1.5藥敏紙片購自上海伊華醫(yī)學科技有限公司,抗生素種類為:氨芐青霉素(amp),羧芐青霉素(car),復合磺胺(sxt),頭孢呋新(cfx),頭孢

8、噻肟(ctx),苯唑青霉素(oxa),鏈霉素(str),氯霉素(cmp),四環(huán)素(tet),紅霉素(ery),氟哌酸(nor),妥布霉素(tob),萬古霉素(van),卡那霉素(kan),頭孢三嗪(cro),呋喃妥因(ni),頭孢唑啉(cfz),丁胺卡那霉素(akn),氧哌嗪青霉素(pip),慶大霉素(gen),頭孢哌酮(cfp),頭孢他啶(ctd)和利福平(rif)23種藥敏紙片(批號:20020606).1.2方法1.2.1病料觸片,染色及鏡檢依次將肝,肺,脾,腎等臟器觸片,進行革蘭氏和美藍染色,鏡檢.1.2.2細菌分離純化將肝,肺,脾等病料無菌接種于鮮血瓊脂平板,普通瓊脂平板,37培養(yǎng)1

9、824h,并進行細菌的純化培養(yǎng);爾后再將上述病料無菌接種于5%犢牛血清肉湯,37cc連續(xù)培養(yǎng)7d.1.2.3細菌的移植將純化好的疑似巴氏桿菌菌株無菌接種到血斜面上.37培養(yǎng)1824h后置4cc冰箱備用.1.2.4細菌生化試驗將純化好的疑似巴氏桿菌菌株分別接種到上述生化培養(yǎng)基中,37培養(yǎng)2448h,觀察結果.1.2.5動物試驗勾取疑似巴氏桿菌菌株的菌落分別接種于鮮血瓊脂平板上,37培養(yǎng)1824h后,再用滅菌的生理鹽水無菌洗下與麥氏比濁管進行比濁,均選取310.個活菌/ml濃度分別腹腔注射1只小白鼠,0.2ml/只,同時用生理鹽水注射1只小白鼠作對照,觀察結果.1.2.6藥敏試驗將分離到的細菌培養(yǎng)

10、物用滅菌的生理鹽水無菌洗下,稀釋并與麥氏比濁管進行比濁,各選取610個活菌/ml濃度,用滅菌棉拭子分別蘸取稀釋菌液均勻涂布于mh瓊脂平板上,每塊血清平板涂布3次,室溫干燥35min后,分別貼上上述各種藥敏紙片,3片/塊,37培養(yǎng)l824h后觀察結果.判定標準參照美國實驗標準委員會(nccls)藥敏紙片擴散法規(guī)進行.2結果2.1病理剖檢剖檢病死烏骨雞常見腹膜,皮下組織及腹部脂肪有小點出血;肝臟暗紅色后成褐色,肝稍腫大,表面有少到大量針尖大小的灰白或黃白色壞死灶;肺臟糜爛,表面有大理石斑紋;腎臟,脾臟稍腫,質(zhì)脆;肌胃,腸道出血明顯;心脂肪和心內(nèi)外膜有出血點或出血斑,尤其是十二指腸呈現(xiàn)出血性紅染.2

11、.2觸片,染色及鏡檢將病死烏骨雞的肝,肺,脾,腎等病料觸片并進行革蘭氏染色鏡檢,可見到革蘭氏陰性兩端鈍圓,以單個或成雙排列形態(tài)均勻一致小桿菌;美藍染色鏡檢,觀察到大量兩極濃染的小桿菌.:2.3菌落形態(tài)及培養(yǎng)特性在鮮血瓊脂平板上形成灰白色圓形微隆起,半透明,濕潤,表面光滑,邊緣整齊的豐盛的露珠樣菌落,不溶血;在5%犢牛血清肉湯中培養(yǎng)24h后均勻混濁,連續(xù)培養(yǎng)47d后液體變得澄清并產(chǎn)生菌膜,在管底生成黏稠沉淀物,震蕩后不分散;在普通瓊脂平板上形成邊緣整齊,圓形,稍隆起,閃光,灰白色,半透明,直徑0.40.6mm的小菌落,連續(xù)培養(yǎng)48h后菌落直徑約1.0mm,但生長貧瘠,這與陳翠珍等報道的菌落形態(tài)基

12、本一致.2.4生化試驗詳細結果見表1.42青海大學學報第28卷注:”一”陰性反應,不發(fā)酵糖類;”+”陽性反應,發(fā)酵糖類(產(chǎn)酸不產(chǎn)氣);”+”陽性反應,發(fā)酵糖類(產(chǎn)酸);tsi反應模式=(斜ii)/(底層)h2s;gt(a表示產(chǎn)酸,培養(yǎng)基變黃;k表示不產(chǎn)酸,培養(yǎng)基仍為紅色;+表示產(chǎn)h2s或氣體;一表示不產(chǎn)h2s.)2.5動物試驗試驗鼠在24h內(nèi)死亡,對照鼠飼喂7d后仍健活.對死亡鼠剖檢可見皮下組織略水腫,心包和胸腔有漿液性纖維素性滲出物;有明顯的全身出血性變化,腸道出血尤為明顯;肝臟表面可見針尖大的灰白色壞死灶.采取肝,脾等病料進行細菌分離培養(yǎng),分離到了與上述性狀一致的革蘭氏陰性小桿菌.2.6藥

13、敏試驗抑菌圈的測量結果見表2.表2巴氏桿菌抑菌圈的測量結果tab.2theinhibitionzoneofpasteurellamultocida3診斷根據(jù)流行病學,臨床癥狀,病理變化和實驗室診斷,確診為烏骨雞禽霍亂.4討論4.1流行病學多殺性巴氏桿菌是一種條件性致病菌,當病菌毒力較弱或宿主抵抗力較強時雞只不易發(fā)病,也不向外排菌,細菌與機體保持一種平衡狀態(tài).一旦病菌的毒力增強或雞只因各種誘因導致機體抵抗力降低時,禽霍亂就會發(fā)生流行.由于該場從未對烏骨雞接種過禽霍亂疫苗,加之雞場禽舍潮濕,飼養(yǎng)管理條件較差,發(fā)生疫情前的幾天中氣溫驟變,從而導致了本病的發(fā)生.這與連玉意j,汪力寬等報道的基本一致.在

14、本次發(fā)病的550只烏骨雞中共有72只烏骨雞死亡,致死率達到13.09%(72/550).這與王卓明等報道禽霍亂可使患病禽群的死亡率達到2%20%基本上一致.4.2預防(1)平時應該進行禽霍亂疫苗的預防注射,加強飼養(yǎng)管理,在飼料中適當添加維生素和微量礦物元素,烏骨雞舍由專職飼養(yǎng)員管理,非工作人員嚴禁進入以避免烏骨雞只產(chǎn)生應激,增強其抗病力.(2)養(yǎng)殖場自身應加強疾病預防意識,完善防疫設施,烏骨雞舍f-i口消毒池的消毒液要定期更換,保證消毒效果,搞好烏骨雞舍內(nèi)外環(huán)境的清潔衛(wèi)生,并定期消毒,殺蟲,滅鼠.(3)堅持自繁自養(yǎng)的原則,必須引進種烏骨雞時應加強烏骨雞只檢疫工作,嚴防疫病傳人.一旦發(fā)病,要做好

15、隔離措施并及時用敏感藥物預防和治療.第1期張紅見等:烏骨雞禽霍亂的病原分離鑒定和藥敏試驗43(4)為了防止疫情擴大,將患病烏骨雞隔離,對死亡烏骨雞進行焚燒后深埋.每日定時清掃雞舍,用l:l500百毒殺和1:1000二氧化氯消毒劑對烏骨雞舍,烏骨雞群及用具進行交替噴霧消毒,2次/天,雞舍周圍的環(huán)境撒以10%石灰乳.對病情較輕的烏骨雞用0.1%氯霉素或(1/1000)氟哌酸可溶性粉劑投藥飲水,連用3d,對病情較重的烏骨雞用氟哌酸注射液注射,4ml/只,2次/d,連用3d后,再用鏈霉素按100mg/kg體重肌注,2次/d,連用2d.4.3藥敏結果分離菌株對鏈霉素,氯霉素,紅霉素,氟哌酸,氧哌嗪青霉素

16、,妥布霉素,卡那霉素等7種藥物敏感,對頭孢三嗪,呋喃妥因,頭孢唑啉等3種藥物中介,其余13種藥物均為耐藥.該烏骨雞場暴發(fā)此病后,曾用青霉素類和磺胺類藥物進行治療,但療效甚微.此次選用氯霉素,氟哌酸和鏈霉素交替治療,一周后患病烏骨雞全部康復,疫情流行終止.試驗結果也表明,分離菌對磺胺類藥物和大多數(shù)青霉素類藥物等均表現(xiàn)出高度耐藥性.通過藥敏試驗篩選經(jīng)濟,療效好的高敏藥物進行治療,既可取得良好的治療效果,又可為以后該病的治療提供參考依據(jù).參考文獻:1吳憶春,魏建忠.禽巴氏桿菌病的研究進展j.動物科學與動物醫(yī)學,2003,20(1o):4041.2陳翠珍,房海,張曉君,等.禽霍亂病原菌的鑒定與主要特征

17、分析j.中國預防獸醫(yī)學報,2006,28(4):3883913連玉意.牛巴氏桿菌病的診治j.中國獸醫(yī)科技,2001,31(3):3536.4汪力寬,李立雙,唐義紅,等.一起水牛巴氏桿菌病的暴發(fā)j.畜牧與獸醫(yī),2000,32(2):31.5王卓明,吳佩嬋,李幼博,等.42株禽巴氏桿菌特性的研究j.中國預防獸醫(yī)學報,1999,21(3):223227.(責任編輯楊君麗)(上接第29頁)圖4為兩種不同工況作用時平面剛架的變形曲線.從中可以看出,考慮溫度變化時,結構的變形與未考慮溫度影響時的變形具有很大差異,因而在施工過程中,由混凝土的凝固而引起的溫度變化是不容忽視的問題.綜上所述,在結構位移計算中,經(jīng)典的力法與位移法一般都能解決結構位移和求多余力問題,顯示其很強的實用性.但采用能量法同樣能很好地解決這些問題,且更加簡單,尤其對于大型復雜的結構分析問題,將能量法應用到有限元法中,其優(yōu)勢更加明顯,往往起到事半功倍的效果.本文所采用的”虛功”分析方法,格式統(tǒng)一,具有較強的通用性,對于大型桿系結構,可極大地節(jié)約計算工作量.