HIV抗體免疫印跡試驗(yàn)不確定結(jié)果

1、 HIV抗體免疫印跡試驗(yàn)不確定結(jié)果的血清學(xué)特征及病毒載量輔助診斷的意義研究繆禮鋒，沈月蘭，吳建軍，程曉莉，蘇斌（安徽省疾病預(yù)防控制中心，合肥230601）【摘要】 目的 研究HIV抗體蛋白印跡試驗(yàn)不確定標(biāo)本的血清學(xué)特征，比較血清學(xué)和核酸定量方法對不確定結(jié)果的鑒別效果，為HIV抗體不確定結(jié)果的隨訪處置和診斷提供依據(jù)。方法 以安徽省艾滋病確證中心實(shí)驗(yàn)室2003-2014年確證為“HIV抗體不確定”并有隨訪結(jié)果的298例標(biāo)本為研究對象，對首次和隨訪標(biāo)本同時進(jìn)行蛋白印跡試驗(yàn)和必要的核酸檢測，綜合兩次檢測結(jié)果和流行病學(xué)史資料，來判定標(biāo)本HIV感染的真實(shí)狀況；檢測并記錄膠體金快速試驗(yàn)結(jié)果、ELISA的S/

2、CO比值、WB帶型特征（強(qiáng)度）和病毒載量值，結(jié)合流行病學(xué)資料將不同方法結(jié)果進(jìn)行比較和驗(yàn)證。結(jié)果 （1）298例HIV抗體不確定病例中共有19種帶型，其中最常見三種：p24（48.0%）、gp160（24.2%）、gp160 p24（12.4%）。 (2)298例不確定標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)28例病毒感染者，其中血清陽轉(zhuǎn)24例，帶型不進(jìn)展但核酸持續(xù)陽性者4例。（3）不確定標(biāo)本中270例真陰性標(biāo)本和28例真陽性標(biāo)本S/CO值均值有顯著性差異；蛋白印跡試驗(yàn)條帶強(qiáng)度越強(qiáng)陽性比例越高，所有g(shù)p160 gp120帶型后續(xù)隨訪全部為HIV病毒感染者；膠體金檢測不確定標(biāo)本的敏感性和特異性分別為96.4%和88.5%。（4

3、）病毒載量檢測不確定標(biāo)本的敏感性和特異性分別為96.4%和99.6%，假陽性和假陰性結(jié)果各1例，隨訪病毒載量檢測敏感性和特異性均達(dá)100%。 結(jié)論 （1）根據(jù)抗體篩查檢測結(jié)果和確證帶型特征與強(qiáng)度，可以對不確定結(jié)果進(jìn)行初步評估；（2）不確定病例中關(guān)鍵帶型反應(yīng)強(qiáng)度越大，感染的風(fēng)險(xiǎn)越高；針對env帶的不確定標(biāo)本預(yù)示有較大的感染風(fēng)險(xiǎn)，尤其是gp160 gp120和gp160 p24兩種帶型，須做進(jìn)一步的隨訪和鑒別診斷；（3）不確定結(jié)果隨訪8周以上帶型不進(jìn)展也不能完全排除為陰性，應(yīng)當(dāng)視情況使用其他方法進(jìn)行鑒別診斷。（4）病毒載量檢測是鑒別不確定標(biāo)本的有效方法，當(dāng)缺少流行病學(xué)資料支持時，也要警惕假陽性和假

4、陰性結(jié)果的可能。【關(guān)鍵詞】艾滋病病毒；不確定結(jié)果；蛋白印跡；確證；病毒載量 Study on the indeterminate results of serological characteristics of HIV antibody from Western blot test and The significance of diagnosis by HIV-1 plasma viral loads. MIAO Lifeng，SHEN Yuelan,，WU Jianjun，et al.(Anhui Provincial Center for Disease Control and Pre

5、vention，Hefei 230601，Anhui,China)Abstract: Objective To study the serological characteristics of HIV antibody from Western blot test and to compare the results of serological and nucleic acid quantitative methods for the identification of the results of the indeterminate results, providing the basis

6、 for the follow-up treatment and diagnosis of HIV antibody. Methods both of the first time and follow up samples of the 298 subjects who were confirmed as indeterminate HIV antibody in Anhui provincial Center of HIV Confirmation Laboratory from 2003 to 2014, were collectedthe results of Western blot

7、 test and nucleic acid detection were performed to determine the true state of HIV infection, and to detect and record the fast test results, S/CO value of ELISA, WB bands patterns (intensity) and viral load value, and the results were compared and verified by epidemiological data Results (1) there

8、were 19 types of in 298 cases of HIV, three of which were the most common: p24 (48%), gp160 (24.2%), p24 gp160 (12.4%). (2) 28 cases of viral infection were found in 298 cases, including 24 cases with positive serum and 4 cases with positive nucleic acid. (3) there were significant differences in th

9、e mean value of S/CO in 270 cases of true negative and 28 cases of true positive. With the increase of the intensity of the WB reaction, the positive rate was also increased. All the subjects of gp120 gp160 bands followed up for HIV virus infection; the sensitivity and specificity of fast test were

10、96.4% and 88.5%,.(4) the sensitivity and specificity of viral load test were 96.4% and 99.6%, and the sensitivity and specificity of the The second viral load test were 100%. Conclusions (1) according to the results of antibody screening test and the characteristics and intensity of Western blot ban

11、ds, we can make a preliminary assessment of the results. (2) The greater the intensity of the critical bands in the case, the higher the risk of infectionEnv indeterminant were with the greater predictive value of HIV infectionespecially the gpl60p24 and gpl60 gp120Need to do follow-up and different

12、ial diagnosis.(3)the patients with no progress bands in the follow-up for more than 8 weeks could not be directly diagnosed as negative. Other methods should be considered for differential diagnosis.(4) Viral load assay can be applied to discriminate HIV antibody indeterminant, and when the lack of

13、epidemiological data supports, it should be alert to the possibility of false positive and false negative results.Keywords HIV; indeterminate result; Western blot; confirmation; viral loadHIV血清學(xué)抗體檢測是艾滋病實(shí)驗(yàn)室診斷的最常用方法，它分為篩查試驗(yàn)和確證試驗(yàn)兩個步驟，篩查檢測目前常用的方法包括酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）、快速檢測法（RT）和化學(xué)發(fā)光或免疫熒光法，確證試驗(yàn)一般常用免疫印跡法（WB）。根

14、據(jù)衛(wèi)生部發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)1規(guī)定：成人和大于18月齡的兒童或青少年HIV抗體確證試驗(yàn)陽性即可診斷，確證試驗(yàn)可做出HIV抗體陽性、陰性和不確定三種結(jié)果, 行標(biāo)建議不確定結(jié)果三個月后再次進(jìn)行檢測。而全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009版）將隨訪時間進(jìn)一步縮短為4周，規(guī)定：HIV抗體不確定結(jié)果可以結(jié)合流行病學(xué)資料，在4周后隨訪檢測，如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽性反應(yīng)，則報(bào)告陽性；如隨訪期間帶型有進(jìn)展，但不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)繼續(xù)隨訪到8周。如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)則報(bào)告陰性；滿足HIV抗體陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)則報(bào)告陽性，不滿足陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)可視情況決定是否繼續(xù)隨訪。為此本研究就安徽省十年來不

15、確定標(biāo)本的血清學(xué)特征和核酸鑒別診斷結(jié)果做了相應(yīng)的比較分析和探討。1 材料與方法1.1 研究對象 收集2003年1月到2014年9月送往安徽省HIV確證中心實(shí)驗(yàn)室初次確證試驗(yàn)為HIV抗體不確定的298份標(biāo)本，且所有病例均有隨訪采樣。1.2 檢測試劑 人類免疫缺陷病毒抗體檢測試劑盒（膠體金法，韓國SD 批號：023468B）；人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒（雙抗原夾心ELISA法，珠海麗珠，批號：2014051212），使用儀器為Authos 2010酶標(biāo)儀和Authos fluido 洗板機(jī),由奧地利AuthosLabtec Instruments公司生產(chǎn)；人類免疫缺陷病毒(HIV 1+2型)抗

16、體檢測試劑盒(免疫印跡法，新加坡MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司，批號：AE4008)，使用儀器為ProfiBlot 48自動蛋白免疫印跡儀，由奧地利TECAN公司生產(chǎn)；HIV病毒載量檢測為NucliSens EasyQ試劑（HIV RNA定量，法國生物梅里埃,批號：285033），使用核酸定量檢測儀NucliSens EasyQ Analyzer，最低檢測限為50IU/ml,以上試劑均按照試劑盒說明書要求操作并判讀結(jié)果。1.3 實(shí)驗(yàn)方法 檢測并記錄快速試驗(yàn)結(jié)果、ELISA反應(yīng)的S/CO比值、蛋白印跡試驗(yàn)的帶型，同時對蛋白印跡試驗(yàn)的帶型強(qiáng)度進(jìn)行評分，根據(jù)艾滋病和艾滋病病毒診斷標(biāo)準(zhǔn)（WS293-20

17、08）和全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009版）的規(guī)定，WB確證試驗(yàn)結(jié)果陽性判斷中最為關(guān)鍵的四條帶型分別是gp160、gp120、gp41和p24，因此本研究以陽性對照為標(biāo)準(zhǔn)，對四條關(guān)鍵帶型進(jìn)行評分，評分規(guī)則：以試劑盒中自帶的強(qiáng)陽性和弱陽性對照作為WB條帶反應(yīng)強(qiáng)度的判定標(biāo)準(zhǔn)分別代表4分(強(qiáng)陽性)和2分(弱陽性)，據(jù)此將樣本的WB條帶反應(yīng)強(qiáng)度得分由低到高依次分為0分(陰性)、1分(強(qiáng)于陰性，但弱于弱陽性)、2分(弱陽性相當(dāng))、3分(強(qiáng)于弱陽性，但弱于強(qiáng)陽性)、4分(強(qiáng)陽性相當(dāng))，由2名以上檢測人員肉眼觀察每個樣本各條帶的反應(yīng)強(qiáng)度，觀察結(jié)果的平均值計(jì)算得分；組合條帶得分是所屬區(qū)內(nèi)各條帶反應(yīng)強(qiáng)度得分之和

18、。對隨訪期間帶型或強(qiáng)度有進(jìn)展（或變化）的病例標(biāo)本進(jìn)行病毒載量檢測，隨訪期間帶型不進(jìn)展的標(biāo)本進(jìn)行集合核酸檢測，樣品采用三級集合策略，25份血漿標(biāo)本混合形成一份一級集合樣品：每份樣品取210l，移入標(biāo)記二級集合的去RNA酶的離心管中；再從5個二級集合管中分別吸取210l樣品，移入標(biāo)記一集集合的去RNA酶的離心管中。對每份一級集合樣品分別進(jìn)行核酸檢測，若為陰性則終止篩查；若為陽性則進(jìn)行拆分檢測，直至確定陽性樣品。2 結(jié)果2.1. 不確定結(jié)果的人口社會學(xué)基本特征主要人群有學(xué)生、干部、軍人、普通職員等無償獻(xiàn)血員和其他受檢人員；297例中男性159人，女性137人，不詳2人，男女性別比為1.16:1，年齡

19、分布中最小的5歲，最大的82歲，年齡組分布以15-44歲之間最多，其中15-24歲、25-34歲、35-44歲和大于45歲年齡段分別有92例（30.9%）、65例（21.8%）、53例（17.8%）和54例（18.1%）；職業(yè)以農(nóng)民或農(nóng)民工（21.8%）和學(xué)生（19.8%）居多；樣本來源以無償獻(xiàn)血員最多，有126例，占42.3%。具體見表1。表1 不確定標(biāo)本人口社會學(xué)特征Table 1 Demographic and sociological characteristics of the indeterminate specimens人群特征 characteristics例數(shù)case構(gòu)成比（

20、%）proportion性別 Sex男 Male15953.36女 Female13745.97不詳U(kuò)nknown20.67年齡 Age1441.3415-249230.8725-346521.8135-445317.79455418.12不詳 Unknown3010.07職業(yè) Occupation學(xué)生 student5919.80工人 worker299.73農(nóng)民或農(nóng)民工 Farmers or migrant workers6521.81個體戶 Self-employed person62.01司機(jī) Driver20.67公務(wù)人員或職員 Official or employee3010.07

21、醫(yī)務(wù)人員Medical personnel51.68娛樂場所服務(wù)人員Entertainment service personnel31.01無業(yè)Unemployed persons206.71不詳U(kuò)nknown7926.51樣本來源 Sample source無償獻(xiàn)血員Voluntary blood donors12642.28有償供血（漿）者Paid blood donors3110.40羈押人員Prisoner134.36咨詢檢測Counseling and testing134.36術(shù)前檢測或體檢者Preoperative examination or physical examinat

22、ion155.03其他就診者Other clinic4113.76孕產(chǎn)婦Pregnant women62.01吸毒者drugger20.67男男同性戀者 Man sexy with man113.69感染者配偶或子女Spouse or child of infected persons62.01不詳U(kuò)nknown3411.412.2不確定結(jié)果的帶型特征和強(qiáng)度：在298例不確定標(biāo)本中有19種不同的反應(yīng)帶型，最多的是p24,有143例，占48.0%，其次是gp160,有72例，占24.2%，gp160 p24也有37例，占12.4%這三種帶型占總不確定標(biāo)本比例達(dá)到84.6%，是本研究中常見的不確定

23、帶型。從不確定標(biāo)本的帶型反應(yīng)強(qiáng)度來看，1分有199例，占66.8%，2分有46例，占15.4%，兩者合計(jì)占82.2%。不確定標(biāo)本的帶型構(gòu)成和不同帶型反應(yīng)強(qiáng)度百分比見表2。其中“”表示帶型反應(yīng)強(qiáng)度非常弱，兩人判讀結(jié)果不一致。 表2 HIV抗體不確定標(biāo)本的帶型構(gòu)成及不同帶型反應(yīng)強(qiáng)度百分比Table 2 the proportion of indeterminate results and the percentage of the reactive intensity帶型pattern of Bands例數(shù)case構(gòu)成比（%）prop-ortion反應(yīng)強(qiáng)度(gp160/gp120/gp41/p24

24、)1分2分3分4分5分及以上例數(shù)case百分比（%）prop-ortion例數(shù)case百分比（%）prop-ortion例數(shù)case百分比（%）prop-ortion例數(shù)case百分比（%）prop-ortion例數(shù)case百分比（%）prop-ortiongp1607224.2 7198.6 11.4 00.0 00.0 00.0 gp160() gp120 p2410.3 00.0 00.0 1100.0 00.0 00.0 gp160 gp120 p6610.3 00.0 00.0 00.0 00.0 1100.0 gp160 p243712.4 00.0 2773.0 513.5 41

25、0.8 12.7 gp160 p24 p1710.3 00.0 00.0 00.0 1100.0 00.0 gp160 p31 p2410.3 00.0 1100.0 00.0 00.0 00.0 gp160 gp120() p2410.3 00.0 00.0 00.0 00.0 1100.0 gp160() gp41() p2410.3 00.0 00.0 1100.0 0.0 00.0 gp160 p66 p51 p2410.3 00.0 00.0 00.0 1100.0 00.0 gp160 gp12062.0 00.0 233.3 233.3 116.7 116.7 gp160 p17

26、31.0 3100.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p31 p1710.3 00.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p17175.7 00.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p2414348.0 12688.1 139.1 42.8 00.0 00.0 p24 p1782.7 675.0 225.0 00.0 00.0 00.0 p66 p51 p2410.3 1100.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p55 p51 p2410.3 1100.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p3110.3 00.0 00.0 00.0 00.0 00.0

27、 p55 p2410.3 1100.0 00.0 00.0 00.0 00.0 合計(jì) Total29810019966.84615.4134.472.3541.42.3 不確定標(biāo)本的隨訪進(jìn)展結(jié)果 對298例不確定樣本進(jìn)行隨訪，隨訪時間一到三個月不等，隨訪檢測陰性即判定為真陰性，隨訪期間帶型陽轉(zhuǎn)判定為陽性，將隨訪帶型仍然不確定的首次和隨訪標(biāo)本分別進(jìn)行核酸定量檢測，共發(fā)現(xiàn)真陽性標(biāo)本共計(jì)28例，占比9.4%?？傮w來看，不確定標(biāo)本隨著反應(yīng)強(qiáng)度的增加其陽性率不斷提高。不確定標(biāo)本在不同反應(yīng)強(qiáng)度下的陽性率比較見表3。 表3:不確定標(biāo)本在不同反應(yīng)強(qiáng)度下的陽性率比較Table 3: positive rate

28、of indeterminate results with different reaction intensity帶型pattern of Bands例數(shù)Case反應(yīng)強(qiáng)度(以gp160/gp120/gp41/p24四條帶計(jì)算)1分2分3分4分5分及以上例數(shù)（陽性數(shù)）Case(po-sitive)陽性率（%）rate例數(shù)（陽性數(shù)）Case(positi-ve)陽性率（%）rate例數(shù)（陽性數(shù)）Case(posit-ive)陽性率（%）rate例數(shù)（陽性數(shù)）Case(posit-ive)陽性率（%）rate例數(shù)（陽性數(shù)）Case(posi-tive)陽性率（%）rategp1607271(2)2

29、.8 1（0）0.0 00.0 00.0 00.0 gp160() gp120 p24100.0 00.0 1（1）100.0 00.0 00.0 gp160 gp120 p66100.0 00.0 00.0 00.0 1(1)100.0 gp160 p243700.0 27(6)22.2 5(3)60.0 4(3)75.0 1(1)100.0 gp160 p24 p17100.0 00.0 00.0 1(1)100.0 00.0 gp160 p31 p24100.0 1（0）0.0 00.0 00.0 00.0 gp160 gp120() p24100.0 00.0 00.0 1(1)100

30、.0 gp160() gp41() p24100.0 00.0 1（0）0.0 00.0 00.0 gp160 p66 p51 p24100.0 00.0 00.0 1（0）00.0 gp160 gp120600.0 2（2）100.0 2（2）100.0 1（1）100.0 1（1）100.0 gp160 p1733（0）0.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p31 p17100.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p171700.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p24143126(2)2.4 13(1)7.7 4（0）0.0 00.0 00.0 p24 p17

31、86（0）0.0 2（0）0.0 00.0 00.0 00.0 p66 p51 p2411（0）0.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p55 p51 p2411（0）0.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p31100.0 00.0 00.0 00.0 00.0 p55 p2411（0）0.0 00.0 00.0 00.0 00.0 合計(jì) Total298199（4）2.0 46（9）19.6 13（6）46.2 7（5）71.4 4（4）100.0 備注：“（）”內(nèi)為“陽性例數(shù)”，此處“陽性”指不確定標(biāo)本隨訪后帶型進(jìn)展可以判定為陽性或兩次病毒載量檢測均為陽性。從298例標(biāo)本

32、中帶型出現(xiàn)頻次來看，p24和gp160出現(xiàn)頻次最高。p24條帶出現(xiàn)197次，其中19次隨訪陽性，占9.6%，gp160出現(xiàn)125次，其中25例隨訪陽性，占20%，gp120僅出現(xiàn)9次，且隨訪100%皆為陽性；從組合帶型來分析，gp160 p24和gp160 gp120兩種帶型是隨訪陽性率最高的帶型。不同帶型出現(xiàn)頻次和陽性率比較見表4。表4 不同帶型出現(xiàn)頻次和陽性率一覽Table 4 the frequency and positive rate of the bands 基因組Genome帶型bands頻次frequency陽性例（%）Positive（rate）占總陽性例數(shù)百分（%）prop

33、ortionenvgp16012525(20.0)/gp12099(100.0)/gp4110(0.0)/gagp17301(3.3)/p2419719（9.6）/p5520（0.0）/polp6631（33.3）/p5130（0.0）/p3130（0.0）/組合帶型 Combinations of bandsgp160722（2.8）6.9gp160() gp120 p2411（100.0）3.4gp160 gp120 p6611（100.0）3.4gp160 p243713（35.1）44.8gp160 p24 p1711（100.0）3.4gp160 gp120() p2411（100.

34、0）3.4gp160 gp12066（100.0）20.7p241433（2.1）10.3其他帶型360（0.0）0合計(jì)29828（9.4）100.02.4 不同實(shí)驗(yàn)方法檢測不確定標(biāo)本的結(jié)果比較 298份不確定標(biāo)本ELISA試驗(yàn)，其中假陽性（270份）標(biāo)本僅有一例S/CO比值為9.1，其他均小于6，均值為2.54；膠體金快速檢測不確定標(biāo)本的敏感度可以達(dá)到96.4%，但特異性僅88.5%；而病毒載量檢測敏感性和特異性分別達(dá)到96.4%和99.6%。298份不確定標(biāo)本膠體金快速法檢出28份陽性。結(jié)果具體見表5表5 ELISA、膠體金快速方法和病毒載量檢測不確定標(biāo)本的結(jié)果比較Table 5 Comp

35、arison of the results of ELISA, RT and viral load testing of the indeterminate specimens不確定標(biāo)本indeterminate specimensEILSA S/CO比值 Value快速(fast testing,RT)病毒載量(首次) viral load(the first)最大值Maximum最小值Minimum均值Mean陽性（份）Positive陰性（份）Negetive陽性（份）Positive陰性（份）Positive270份真陰性true negetive9.11.042.5431239126

36、928份真陽性true positive14.45.18.12271271298例不確定標(biāo)本病毒載量檢出29份核酸陽性，其中24例在隨訪中血清自然陽轉(zhuǎn)；4例追蹤隨訪6個月以上帶型不進(jìn)展，但兩次病毒載量檢測均為陽性，流行病學(xué)史調(diào)查（3例為男男同性戀者，1例為老年嫖客，且均有高危行為史）支持核酸診斷陽性結(jié)果；還有1例無償獻(xiàn)血員首次核酸定量為140cps/ml，隨訪檢測帶型消失，且流行病學(xué)史調(diào)查證實(shí)無高危行為史，證實(shí)為一例假陽性標(biāo)本。我們還發(fā)現(xiàn)1例特殊的血清陽轉(zhuǎn)標(biāo)本：一位孕婦（239號標(biāo)本）初始EIA檢測為抗體高滴度（S/CO=7.4），快速試劑檢測陽性，HIV-1蛋白印記(WB)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為不確定（

37、帶型：gp160/p24，強(qiáng)度：4分），病毒載量檢測結(jié)果TND（未檢出），四周后隨訪檢測WB結(jié)果顯示帶型進(jìn)展為陽性（gp160 gp120 p24），病毒載量檢測結(jié)果仍顯示為罕見的低拷貝（371 cps/ml），六個月后再次隨訪帶型進(jìn)展為全帶型，流行病學(xué)史調(diào)查該孕婦此前與男男同性戀感染者有性接觸史，可以證實(shí)首次核酸檢測為假陰性結(jié)果。不確定標(biāo)本中28例真陽性樣本的病毒載量結(jié)果和隨訪帶型變化見表6。表6 不確定標(biāo)本中28例真陽性樣本的病毒載量結(jié)果和隨訪帶型變化Table 6 The results of viral load in 28 cases of truepositive specimen

38、s and the change of the banding pattern after a followup test.編號No.首次帶型banding pattern after the first test病毒載量（cps/ml)Viral load隨訪帶型(間隔時間1-3個月) Banding pattern after a followup test(Interval 1-3 months)病毒載量（cps/ml)viral load6個月后隨訪帶型Banding pattern after a 6 months of follow-up 26p2411000000gp160 gp

39、120 p66 p51 gp41 p31 p24/162gp160 gp120770000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24/189gp160 ()gp120 p2416000000gp160 gp1 20 p66 p51 gp41 p31 p24 p17/236gp160 gp120 p66110000gp160 gp120 p66160000gp160 gp120 p66237gp160 gp12024000gp160 gp1201800gp160 gp120239gp160 p24TNDgp160 gp120 p24371全帶240p241900gp160

40、gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17110000/241gp160 gp12030000gp160 gp1208900gp160 gp120242gp160 p24190000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17/243gp160 p24230000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24/245gp160 p2435000gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p24 p17/246gp160 p24 p1731000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24/250g

41、p160 gp120（）p24110000gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p31 p24/253gp160 p24120000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24/259gp160 p2490000gp160 p24370000gp160 p24260gp16058000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24/263gp160 p245300000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24/266p248600000gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p31 p24 p1

42、7/267gp160 p24400000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17/268gp160 gp120910000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17/270gp160 p2430000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24/271gp160 p2494000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17/273gp160 gp12019000gp160 gp120 p66 gp41 p31 p24/275gp160 p243500000gp160 gp120 p66

43、 p51 gp41 p31 p24/276gp160 gp120570gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17/277gp160 p243200gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24/279gp1601500000gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p31 p24 p17/294gp160 p2427000gp160 gp120 p66 p51 gp41 p31 p24 p17/備注：“/”代表未隨訪或未檢測3 討論根據(jù)艾滋病病毒感染診斷行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)1，大于18個月齡的兒童或成人兩項(xiàng)符合一項(xiàng)即可診斷為HIV感染：HIV

44、抗體確證試驗(yàn)陽性或血液中分離出HIV毒株。有急性HIV感染綜合癥或流行病學(xué)史，且不同時間兩次HIV核酸檢測結(jié)果均為陽性。由于血液分離毒株對實(shí)驗(yàn)室條件要求較高，耗時較長一般不被采用，HIV抗體確證試驗(yàn)作為常用的方法被廣泛用于個體診斷，目前國內(nèi)檢測HIV抗體最常用的確證方法仍然是蛋白印跡試驗(yàn)（WB）。根據(jù)規(guī)范2對HIV抗體確證檢測判斷標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，同時符合以下2條標(biāo)準(zhǔn)可判為HIV-1抗體陽性：至少有2條env帶（gp41和gp160/gp120）出現(xiàn)，或至少1條env帶和p24帶同時出現(xiàn)；符合試劑盒提供的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。HIV-1抗體特異帶包括：env帶：gp160/gp120、gp41；gag帶：p

45、55、p24、p17；pol帶：p66、p51、p31。HIV抗體不確定是指出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但不足以判定陽性。HIV抗體陰性是指無HIV抗體特異帶出現(xiàn)。我們的研究顯示，從社會人口學(xué)來看，男女性別比并沒有明顯的差異，年齡組分布15歲及以上各年齡組分布比較均勻，從檢測人群來看無償獻(xiàn)血員最多，這可能與血液系統(tǒng)篩查檢測普遍采取較低的灰區(qū)設(shè)置有關(guān)，國外對獻(xiàn)血員和孕婦等一般人群的研究也顯示不確定的比例較高，但多數(shù)與HIV感染無關(guān)3,4。從不確定結(jié)果的條帶出現(xiàn)頻率來看，p24和gp160是出現(xiàn)頻率最高的常見帶，從帶型來分析，p24單帶也最為常見，其次是gp160單帶，gp160/p24組合帶也占一定比

46、例。,我們的研究結(jié)果顯示單條p24或gp160大部分為非特異性反應(yīng)的假陽性標(biāo)本，這和國內(nèi)外相關(guān)報(bào)道3,5,6相似。從國外Schpbach等人7,8和國家參比室王繼寶等9的研究來看，確證檢測的免疫印跡法(WB)帶型中蘊(yùn)含新發(fā)感染信息，WB帶型的帶型和強(qiáng)度與感染時間有高度相關(guān)性，據(jù)此本研究對不確定按帶型強(qiáng)弱進(jìn)行評分，結(jié)果顯示隨著關(guān)鍵帶型（gp160/gp120和p24）強(qiáng)度的增加，不確定結(jié)果的陽性預(yù)期值顯著增加，但與p66、p55、p51、p31和p17帶相關(guān)度不高。根據(jù)MP試劑說明書所述，gp160為gp41的聚合體，且濃度高于gp41,因此可以認(rèn)為env帶（gp160/gp120/gp41）和

47、p24帶型的出現(xiàn)可能暗示有更大的感染風(fēng)險(xiǎn)。特別是gp160 gp120和gp160 p24帶提示有很大感染風(fēng)險(xiǎn)，必須隨訪檢測，這與鮑作義等人研究6結(jié)果相似。Tomaras GD等人的研究10顯示感染后最早測出得抗體為gp41和p24，gp120抗體比gp41出現(xiàn)平均晚14天；我們的不確定標(biāo)本最終隨訪為感染者的28份標(biāo)本中最早出現(xiàn)的單一帶型同樣為gp160條帶 （gp41的聚合體，且濃度高于gp41）和p24帶。我們同時還發(fā)現(xiàn)，在gp160/gp120組合帶出現(xiàn)的情況下，即使gp120強(qiáng)度非常弱，后續(xù)隨訪均為HIV感染者，此處gp160/gp120似乎可以各自分別作為兩條ENV帶，直接判為陽性，

48、而并不需要另外的gp41或p24組合判定；但是當(dāng)一條env帶和p24組合判定陽性時，gp160/gp120必須作為一個組合帶和p24同時出現(xiàn)方可判為陽性， gp160/p24帶型存在較大比例的假陽性，不能直接判為陽性，必須進(jìn)一步追蹤隨訪或采用其他方法鑒別診斷。這一現(xiàn)象似乎提示W(wǎng)B試劑中g(shù)p120是具有更高特異性的抗原組分，在此可能具有更高的實(shí)驗(yàn)室診斷價(jià)值，而MP試劑的蛋白印跡實(shí)驗(yàn)中g(shù)p160帶和p24帶易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)可以部分解釋這種現(xiàn)象。目前美國、法國、澳大利亞、德國和世界衛(wèi)生組織對于免疫蛋白印跡檢測HIV陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)各不相同，即使美國國內(nèi)，美國CDC與美國泛美逆轉(zhuǎn)錄病毒血清標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CR

49、SS）、美國紅十字會（ARC）采用的判定標(biāo)準(zhǔn)也不完全相同。中國CDC組織建立的確證陽性判定標(biāo)準(zhǔn)與美國CDC相同，根據(jù)目前的國內(nèi)的行業(yè)判定標(biāo)準(zhǔn)gp160/gp120帶型尚不足以判定陽性。本次研究中9例標(biāo)本的檢測結(jié)果卻提示此種帶型均為陽性，因此這種帶型值得進(jìn)一步追蹤研究。Fiebig等人的研究11發(fā)現(xiàn)對于前早期感染者病毒載量檢測比p24抗原檢測靈敏度大約提早7天，比抗體檢測靈敏度提早12天。而且從免疫印跡的“不確定結(jié)果”到帶型陽轉(zhuǎn)的進(jìn)展非常迅速，不超過8天。我們的研究結(jié)果也顯示28例首次檢測為不確定的真陽性樣本中24例在隨后隨訪中帶型完全進(jìn)展為陽性，但仍有4例隨訪時間延長到6個月，帶型仍無進(jìn)展但兩

50、次核酸檢測陽性。表明全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009版）中規(guī)定的通過追蹤隨訪蛋白印跡帶型的進(jìn)展來判斷是否為HIV感染者的方法存在缺陷應(yīng)當(dāng)予以修訂，四周隨訪一次，連續(xù)隨訪兩次帶型不進(jìn)展也不足以判定為陰性，應(yīng)當(dāng)采用核酸檢測做進(jìn)一步的鑒別診斷。核酸檢測作為更為靈敏的早期感染的診斷方法11,12,13，被廣泛用于獻(xiàn)血員的篩查以減低血液殘余危險(xiǎn)度。HIV RNA定量檢測缺點(diǎn)在于：檢測值的波動性較大、不同方法針對不同亞型和進(jìn)化分支檢測結(jié)果不一致、特殊樣本中的抑制物質(zhì)影響檢測敏感性可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果的出現(xiàn)、由于缺乏一個公認(rèn)的定量標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)致不同試驗(yàn)方法之間難以進(jìn)行等價(jià)的比較等14,15,此外病毒載量檢測出現(xiàn)假陽

51、性結(jié)果也時有報(bào)道16,17，我們本次研究中也發(fā)現(xiàn)了核酸定量假陽性和假陰性的結(jié)果，假陰性結(jié)果后續(xù)隨訪核酸檢測也為低拷貝，國外同樣有核酸假陰性發(fā)現(xiàn)18,19和酶聯(lián)免疫陽性、WB結(jié)果不確定但核酸檢測持續(xù)出現(xiàn)罕見低拷貝的病例報(bào)道20，因此不確定標(biāo)本即使病毒載量單次檢測陰性也不能完全排除感染的可能性，應(yīng)當(dāng)視情況決定是否做進(jìn)一步的追蹤隨訪。由于這種核酸定量方法的局限性，HIV核酸定量檢測長久以來并不作為首選的確診方法單獨(dú)使用。但是作為確診的首選方法，蛋白印跡試驗(yàn)不確定結(jié)果由來已久并一直困擾著實(shí)驗(yàn)室的診斷，大量不確定的假陽性結(jié)果給受檢者帶來嚴(yán)重的心理負(fù)擔(dān)和精神壓力，安徽省確證中心實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)多例征兵體檢和公務(wù)

52、員體檢的不確定結(jié)果，給受檢者入伍和就業(yè)帶來困擾，血液系統(tǒng)送檢的不確定標(biāo)本也多為假陽性，這些無償獻(xiàn)血員因此而無法獻(xiàn)血也造成了血源的損失。由于HIV WB方法的缺點(diǎn)和客觀存在的現(xiàn)實(shí)需求，因此引入核酸定量檢測鑒定不確定標(biāo)本成為一種迫切需要，美國FDA在2006年10月也批準(zhǔn)了一種HIV RNA定量檢測試劑盒21，用于HIV-1急性期或新近感染的輔助診斷。盡管核酸定量檢測偶爾可能會出現(xiàn)假陰性或假陽性結(jié)果，但相對于p24抗原和抗體檢測，仍是鑒定WB抗體不確定標(biāo)本的有效方法，綜合患者流行病學(xué)資料，可以對HIV抗體不確定受檢個體做出及時診斷。參考文獻(xiàn)：1 WS293-2008，艾滋病和艾滋病病毒診斷標(biāo)準(zhǔn),2

53、008.2 中國疾病預(yù)防控制中心.HIV抗體檢測.全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）.2009年9月.3 Georgoulias VA, Malliaraki NE, Theodoropoulou M,et al. Indeterminate human immunodeficiency virus type 1 western blot may indicate an abortive infection in some low-risk blood donors.Transfusion,1997，37(1)：65-72.4 Cremonezi D, Mesquita PE, Romo MM,et a1Prevalence of indetermin