植物細(xì)胞染色體標(biāo)本的制作與觀察

1、普通生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課須知1. 新生進(jìn)實(shí)驗(yàn)室之前要認(rèn)真閱讀實(shí)驗(yàn)室基本知識。2. 每次進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的時(shí)間為以課表為準(zhǔn)，提前 10 分鐘進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。3. 應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)平臺上預(yù)約時(shí)間進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，不來者，視為曠課。如 因特殊情況請假， 需在實(shí)驗(yàn)開始前至少三天向指導(dǎo)教師說明， 在選課平臺系統(tǒng)中 取消原預(yù)約時(shí)間，重新預(yù)約，一次不做實(shí)驗(yàn)或一次不交報(bào)告，即按不及格論處。4. 預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和有關(guān)知識，寫好預(yù)習(xí)報(bào)告（手寫） ,前四部分內(nèi)容（一、實(shí)驗(yàn)?zāi)?的，二、實(shí)驗(yàn)原理，三、實(shí)驗(yàn)器材與試劑，四、實(shí)驗(yàn)步驟與操作方法） ，無預(yù) 習(xí)報(bào)告者扣 10 分。5. 實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)認(rèn)真操作，仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，做好原始記錄 （三個(gè)實(shí)

2、驗(yàn)需要用 相機(jī)或手機(jī)拍照， DNA 指紋圖譜實(shí)驗(yàn)需用 U 盤拷貝實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請自備拍照工 具和 U 盤）。6. 預(yù)習(xí)、課堂操作、課堂紀(jì)律、善后處理、實(shí)驗(yàn)報(bào)告是評分的依據(jù)。7. 實(shí)驗(yàn)完畢，要將自己使用的儀器刷洗干凈，藥品按序恢復(fù)原位，臺面擦凈，把自己做實(shí)驗(yàn)的一套東西找齊，經(jīng)指導(dǎo)老師檢查合格并簽字后方可離開。8. 值日生要認(rèn)真清掃地面、水槽、臺面，檢查水、電、門窗是否關(guān)好。9. 實(shí)驗(yàn)講義：實(shí)驗(yàn)預(yù)約系統(tǒng)中可以下載，也可到生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院網(wǎng)站下載。10. 實(shí)驗(yàn)報(bào)告模板見附件，需注明姓名、學(xué)號、組號、做實(shí)驗(yàn)具體時(shí)間植物細(xì)胞染色體標(biāo)本的制作與觀察上課地點(diǎn)：化學(xué)樓 120 上課時(shí)間：選課時(shí)任課教師：陳麗杰

3、辦公地點(diǎn)：生化樓 215 電話： 84706308 課程要求：預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，掌握實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?、儀器和試劑、實(shí)驗(yàn)步驟；手寫完成預(yù)習(xí)報(bào)告（實(shí)驗(yàn)名稱、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)器材與試劑、實(shí) 驗(yàn)方法與步驟），課堂檢查預(yù)習(xí)報(bào)告情況。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1、實(shí)驗(yàn)臺上物品按實(shí)驗(yàn)室管理老師要求擺放整齊；2、實(shí)驗(yàn)廢物按實(shí)驗(yàn)室管理老師要求收集；3、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，經(jīng)老師檢查后方可離開。實(shí)驗(yàn)紀(jì)律：1、按時(shí)上課2、穿實(shí)驗(yàn)服（白大衣）3、不許吃東西，課堂嚴(yán)禁大聲喧嘩4、手機(jī)靜音實(shí)驗(yàn)成績：預(yù)習(xí)報(bào)告：20分實(shí)驗(yàn)操作：40分報(bào)告內(nèi)容：結(jié)果和討論40分植物細(xì)胞染色體標(biāo)本的制作與觀察1. 實(shí)驗(yàn)背景與原理染色體的研究在生物進(jìn)化、 發(fā)育、遺

4、傳和變異中都有十分重要的作用。 因此， 染色體標(biāo)本的制備技術(shù)是遺傳學(xué)、 細(xì)胞生物學(xué)、染色體工程、 分類學(xué)等眾多學(xué)科 的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 物種細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)目、 形態(tài)、 長度等信息的總和根據(jù)實(shí)驗(yàn)的 觀察和測量繪制成的模式圖稱為核型（ karyotype）。核型分析在物種親緣鑒定， 染色體變異分析， 雜種分析， 細(xì)胞分裂過程分析， 孤雌生殖等研究中均有重要的 作用。染色體標(biāo)本的常規(guī)制片方法有切片法、涂片法、壓片法、滴片法（空氣干燥 法）等。壓片法操作簡單，是常用的植物染色體標(biāo)本制備的方法。不過，該法在 制備中要注意避免壓片所造成的染色體的扭曲、變形和丟失的現(xiàn)象。染色體制備的重要環(huán)節(jié)如下：（1）取材：

5、應(yīng)取分生旺盛的組織或細(xì)胞。在植物中通常取根尖，在分裂高峰時(shí) 取材，可得到大量分裂相細(xì)胞。 而在動(dòng)物細(xì)胞中通常選取骨髓等分裂活躍的細(xì)胞， 或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴細(xì)胞， 也可選取分裂旺盛的體外培養(yǎng)的癌細(xì) 胞或轉(zhuǎn)化細(xì)胞等。（2）預(yù)處理：使用秋水仙胺等藥品破壞紡錘體形成，不但可得到大量分裂相細(xì) 胞，而且可使染色體縮短變粗，有利于觀察。（3）固定：滲透力強(qiáng)的固定液將細(xì)胞迅速殺死，蛋白質(zhì)沉淀，并可盡量保持細(xì) 胞原有狀態(tài)。（4）解離或低滲：植物細(xì)胞要除去細(xì)胞間的果膠層，并使細(xì)胞壁軟化，從而使 細(xì)胞得以膨脹，為染色體的分散提供了空間。常用解離方法有酸解法和酶解法。 動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，通常不需解離，而

6、是用低滲液使細(xì)胞膨脹。（ 5）染色體分散：通過壓片、滴片等機(jī)械力量使染色體分散 , 有利于觀察。2. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）掌握常規(guī)壓片技術(shù)制作植物染色體標(biāo)本的一般方法。（ 2）了解顯微鏡下常規(guī)顯色的植物細(xì)胞染色體的形態(tài)特點(diǎn) , 熟練掌握顯微鏡的 使用。（3）理解染色體與生命遺傳的意義及染色體核型檢查的應(yīng)用。3. 實(shí)驗(yàn)材料與試劑 （1）材料：市售大蒜。（2）設(shè)備與用品：普通光學(xué)顯微鏡，水浴鍋，蓋玻片，載玻片，異物針，鑷子， 平皿，濾紙等。（3）藥品與試劑：秋水仙胺，甲醇，鹽酸等。改良石炭酸品紅染液： 是近年來觀察植物染色體時(shí)使用的比較理想的染色劑， 染色背景清晰， 反差 好，使用方便。配制方法如下：原

7、液 A：取 3 g堿性品紅溶于 100 mL 70%的酒精中，此液可以長期保存。原液 B：取 A 液 10 mL 加入 90 mL 體積分?jǐn)?shù)為 0.05的苯酚（即石炭酸）水 溶液中（ 2 周內(nèi)使用）。原液C：取B液55 mL加入 6 mL的冰醋酸和 6 mL 37%的甲醛（可長期保存）。 染色液：取 C 液 10 mL，加入 90 mL 體積分?jǐn)?shù)為 0.45的醋酸和 1.8 g山梨 醇。放置 2 周后使用，染色效果顯著，可普遍用于植物組織的壓片法和涂片法， 使用 23 年不變質(zhì)。山梨醇為助滲劑，兼有穩(wěn)定染色液的作用。如果沒有山梨 醇，也能染色，但效果稍差?？ㄖZ固定液：甲醇 -冰醋酸（體積比 3

8、：1），現(xiàn)用現(xiàn)配。4. 實(shí)驗(yàn)方法與步驟實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 壓片法制備大蒜根尖細(xì)胞的染色體標(biāo)本； 觀察男人和女人染色體、洋蔥細(xì)胞有絲分裂的永久標(biāo)本。 實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)： 3 學(xué)時(shí)。（1）取材：保持大蒜根部濕潤，使根發(fā)約 11.5 cm即可，不能過長。取大蒜 0.51 cm 的根尖。（2）預(yù)處理： 0.52 gL-1（用純水配制）秋水仙胺處理 34 h。（ 3）固定：卡諾固定液 4 下固定 30 min 后，用蒸餾水洗凈。（4）解離： 60 水浴下 1 mol/L HCl （濃鹽酸稀釋大約 10倍）解離 10 min。（5）洗滌：用蒸餾水清洗根尖組織。若洗不凈，會影響染色。（ 6）用改良的石炭酸品紅染色 5 mi

9、n，可直接在載玻片上進(jìn)行，染色前可用異 物針去掉分生區(qū)以后部分，保留根尖 0.20.3 cm即可。染色時(shí)用針把組織撥散。 （7）壓片，敲片：蓋上蓋玻片，上面墊上一張濾紙，先用手指輕輕均勻地按壓 蓋玻片，使組織初步壓散，并且可使蓋玻片壓牢，防止敲片時(shí)蓋玻片移動(dòng)。再用 異物針的針柄一端垂直輕輕落下（為防敲碎玻片，可再在蓋玻片上墊一張濾 紙），進(jìn)一步敲散組織，使染色體充分散開。敲至組織在玻片上呈現(xiàn)霧狀。 （8）觀察結(jié)果：細(xì)胞核著色，而細(xì)胞質(zhì)不著色。大蒜有 8 對 16 條染色 體（2n=16）。好的染色體標(biāo)本染色體應(yīng)該分散較好，不重疊，不缺失，染色體形 態(tài)清晰。大蒜根尖細(xì)胞的染色體制片（ 400，箭

10、頭示染色體）5. 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) （ 1）若材料不易生根，可把材料在 4 低溫處理促使其生根，不過注意低溫有 時(shí)也會誘導(dǎo)染色體數(shù)目加倍。 過長的根尖分裂相會大大減少， 所以不要取長度超 過 1.5 cm 的根尖。（2）秋水仙胺，又名脫甲酰秋水仙堿，毒性比秋水仙堿（秋水仙素）小，作用 卻比秋水仙堿強(qiáng)約 10 倍。（3）壓片、敲片時(shí)力量要均勻合適，避免弄碎玻片；載玻片和蓋玻片之間也不 要移動(dòng)。（4）可隨時(shí)鏡檢判斷敲片進(jìn)行的程度，但要注意整個(gè)過程要保持標(biāo)本的濕潤。6. 思考題 若染色體標(biāo)本結(jié)果不理想，請分析一下可能的原因有哪些？附件 2： 大連理工大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告封皮范本大連理工大學(xué)本科實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程名稱： 普通生物學(xué)實(shí)驗(yàn)學(xué)院（系）：專 業(yè)：班 級：