血庫標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程分析

1、鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院臨床輸血質(zhì)量管理體系技術(shù)性規(guī)程文件編號(hào)zjsdyrmyysxkCBT /SOP 004版本 /修改狀態(tài)B/0第 1 頁 共 1頁編制者陳偉 審核者 陳鵬批準(zhǔn)者蔡玲發(fā)布日期2012-12-20實(shí)施日期2013-01-01卡式 ABO、抗 D 血型鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作程序1. 目的：檢測(cè)受檢者紅細(xì)胞表面有無 A 或 B、D 抗原。2. 適用范圍：適用于本科日常工作中 ABO 正定型、抗 D 血型鑒定試驗(yàn)。3.職責(zé)：輸血科全體工作人員。4.溯源： 見操作說明書。5.操作程序：本實(shí)驗(yàn)用“長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司”提供的 coombs 卡。適用抗原抗 體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合檢測(cè)紅細(xì)胞

2、 A BD 抗原，適用于抗凝血。5.1 實(shí)驗(yàn)原理：這是抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。 通過調(diào)節(jié)葡聚糖凝膠的濃 度來控制分子篩孔徑大小， 使分子篩只允許游離分子通過， 從而達(dá)到分離凝集 紅細(xì)胞和游離紅細(xì)胞的目的。即將紅細(xì)胞和血清加在凝集的上部反應(yīng)離心以 后，凝集紅細(xì)胞將受到凝膠的阻礙而停止在凝集的上部或凝膠中， 則證明發(fā)生 凝集反應(yīng)為陽性，反之判斷凝集反應(yīng)為陰性。5.2 實(shí)驗(yàn)試劑：5.2.1 Coombs卡每份標(biāo)本用 4 孔。6. 測(cè)定步驟：6.1 在 ABD 孔分別加入已配制的 3%病人紅細(xì)胞懸液 25ul（或 1 滴）。6.2離心，定時(shí) 9 分鐘。6.3 結(jié)果判斷見原理。6.4

3、注意事項(xiàng)：6.4.1 結(jié)果不明顯時(shí)，或有拖尾現(xiàn)象，應(yīng)用試管法核查，并核查何種疾病的病人 標(biāo)本，找出原因6.4.2 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)將卡離心。鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院臨床輸血質(zhì)量管理體系技術(shù)性規(guī)程文件編號(hào)zjsdyrmyysxkCBT /SOP 005版本 /修改狀態(tài)B/0第1 頁 共 1頁編制者陳偉審核者陳鵬批準(zhǔn)者蔡玲發(fā)布日期2012-12-20實(shí)施日期2013-01-01Rh血型鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作程序1. 目的：檢測(cè)待檢紅細(xì)胞上有無 D 抗原。2. 適用范圍：適用于本科急診 Rh血型鑒定試驗(yàn)。3. 職責(zé)：輸血科全體工作人員。4. 溯源：全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第三版） 。5. 操作程序：本實(shí)驗(yàn)用“長春博迅生物技術(shù)

4、有限責(zé)任公司”提供的 RhD（ IgM）血型定型試 劑盒（單抗隆抗體）檢測(cè)紅細(xì)胞上有無 D 抗原。6. 實(shí)驗(yàn)原理：用已知的標(biāo)準(zhǔn)血清（抗 D）檢測(cè)待檢紅細(xì)胞上有或無 D抗原。臨床上凡帶有 D 抗原者，稱為 Rh 陽性。不帶 D 抗原者，稱為 Rh陰性。7. 試劑：抗 D 標(biāo)準(zhǔn)血清。8. 操作：8.1.1 取小試管 1 支，加 2d抗 D血清，再加 2d 35%紅細(xì)胞懸液。8.1.2 900G 離心 15 秒。9. 結(jié)果觀察： 若有凝集，則表明受檢者紅細(xì)胞上有 D抗原， Rh陽性。 若無凝集，則表明受檢者紅細(xì)胞上無 D抗原， Rh陰性。9.1 注意事項(xiàng)：抗 D 標(biāo)準(zhǔn)血清應(yīng)保存于 28冰箱內(nèi)。鎮(zhèn)江市

5、第一人民醫(yī)院臨床輸血質(zhì)量管理體系技術(shù)性規(guī)程文件編號(hào)zjsdyrmyysxkCBT /SOP 006版本 /修改狀態(tài)B/0第1 頁 共 1頁編制者陳偉審核者陳鵬批準(zhǔn)者蔡玲發(fā)布日期2012-12-20實(shí)施日期2013-01-01ABO血型反定型鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作程序1、目的：檢測(cè)受檢者血清中有無抗 A, 抗 B 抗體2、適用范圍：適用于本科日常工作中 ABO血型反定型3、職責(zé)：輸血科全體工作人員。4、溯源： 全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程 （第三版 ）.5、操作程序： （試管法 ） 本實(shí)驗(yàn)用長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供的人 ABO 反定型紅細(xì)胞試劑 盒。5.1 實(shí)驗(yàn)原理：用已知的紅細(xì)胞檢測(cè)受檢者血清中有無抗

6、A,抗 B 抗體 ,根據(jù)血清 中有無抗 A,抗B抗體將血型分為 A 型.B型. 長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司 AB 型及 O型 4種.5.2試劑組成： A.B.O 紅細(xì)胞5.3 測(cè)定步驟 :5.3.1 將抗凝血離心5.3.2 取小試管 3 支.分別標(biāo)上 A.B.O5.3.3 在上述小試管中分別加入 A.B.O 紅細(xì)胞懸液 2d.和已離心好的受檢者血清 2d.5.3.4 900G離心 15秒,觀察結(jié)果 .5.3.5 結(jié)果觀察受檢者血型受檢者血清 +試驗(yàn)紅細(xì)胞A 細(xì)胞B 細(xì)胞O 細(xì)胞A型+B型+O型+AB 型注： +：凝集；：不凝集5.3.6 注意事項(xiàng)： 如果凝集很微弱或結(jié)果不明顯 ,應(yīng)重復(fù)做鎮(zhèn)江

7、市第一人民醫(yī)院臨床輸血質(zhì)量管理體系技術(shù)性規(guī)程文件編號(hào)zjsdyrmyysxkCBT /SOP 007版本 /修改狀態(tài)B/0第1 頁共2 頁編制者陳偉 審核者 陳鵬批準(zhǔn)者蔡玲發(fā)布日期2012-12-20實(shí)施日期2013-01-01凝聚胺配血標(biāo)準(zhǔn)操作程序1. 目的：為規(guī)范凝聚胺試驗(yàn)的技術(shù)操作， 保證試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確， 依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程 序 4.1.8 (1)條款的要求制定本規(guī)程。2. 適用范圍：適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血科采用凝聚胺法進(jìn)行血型血清學(xué)試驗(yàn)。3. 職責(zé)：醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)凝聚胺法血型血清學(xué)試驗(yàn)。4. 溯源：見試劑操作說明書。5.操作程序 :本實(shí)驗(yàn)用“合肥天一生物技術(shù)研究所”提供的聚凝膠

8、胺試劑盒。6.1 原理: 凝聚胺法是利用低離子介質(zhì) (LIM) 來降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度 ,進(jìn)而減少 紅細(xì)胞之間距 , 以促進(jìn)紅細(xì)胞和血清 (血漿)中的抗體及生物特異性結(jié)合 , 接 著加入凝聚胺 (Polybrene), 使紅細(xì)胞間發(fā)生非特異性凝集 , 最后加入重懸液 (resupending) 使之中和凝聚胺 (Polybrene) 所引發(fā)的非特異性凝集 , 倘若沒 有凝集發(fā)生 ,則判定為陰性 ;若有凝集 ,則得知存在特異性之抗原抗體反應(yīng) , 則判為陽性。6.2. 試劑盒組成 :8.1 LIM (low lonic trength medium)低離子介質(zhì)溶液 8.2. POLYBRENCE凝聚

9、胺8.3 RESUSPENDING重 懸液8.4 POSITIVE CONTROL陽性對(duì)照6.3 交叉配血實(shí)驗(yàn) :6.3.1 取小試管 2 支, 標(biāo)主次側(cè) , 主側(cè)管加病人血清 ( 血漿)2d, 加供血者 35%紅 細(xì)胞懸液 ( 洗滌或不洗滌均可 )2d, 次側(cè)管反之6.3.2 各加 LIM0.7ml, 混合均勻后,再各加 polybrene 溶液 2d，并混合均勻。6.3.4 1000G離心 15 秒, 然后把上清液倒掉不要瀝干， 讓管底殘留約 0.1ml 液體。6.3.5 輕輕搖動(dòng)試管，目側(cè)紅細(xì)胞有無凝集。如無凝集，則必要重做。6.3.6 最后加入 resuspending2d ，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)

10、試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果。如果在10930 秒內(nèi)凝集散開，代表是由 polybrene 引起的非特異性凝集配血結(jié)果相對(duì) ; 如凝集不散開 , 則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng) , 配血結(jié)果不相對(duì)。如反 應(yīng)可疑, 可進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。7. 注意事項(xiàng) :7.1 若病人血清含肝素高則應(yīng)加入雙倍量的 POLYBREN液E中和肝素。7.2 試劑使用前 , 應(yīng)恢復(fù)室溫再做。7.3 由于某些病人血清中可能含有冷凝集素等因素 , 而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果出現(xiàn)。 若有懷疑,建議在最后滴入 RESVSPENDIN液G時(shí),將試管立即置入 37水浴中 , 輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合 ,并在 30秒內(nèi)觀察結(jié)果。鎮(zhèn)江市第一人

11、民醫(yī)院臨床輸血質(zhì)量管理體系技術(shù)性規(guī)程文件編號(hào)zjsdyrmyysxkCBT /SOP 008版本 /修改狀態(tài)B/0第1 頁共2 頁編制者陳偉 審核者 陳鵬批準(zhǔn)者蔡玲發(fā)布日期2012-12-20實(shí)施日期2013-01-01手工配血系統(tǒng)交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序1.目的：為規(guī)范微柱凝膠卡在血型血清學(xué)試驗(yàn)中的應(yīng)用， 保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和有 效性，依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序 4.1.8（ 1）條款的要求制定本規(guī)程。2.適用范圍：適用于輸血科采用微柱凝膠卡進(jìn)行血型血清學(xué)試驗(yàn)。3.職責(zé)：醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)微柱凝膠卡在血型血清學(xué)試驗(yàn)中的應(yīng)用。4. 溯源： 見操作說明書5. 操作程序：本實(shí)驗(yàn)用“長春博迅生

12、物技術(shù)有限責(zé)任公司”提供的 combs 卡6.1 原理：本實(shí)驗(yàn)是抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。 通過調(diào)節(jié)葡聚糖 凝膠的濃度來控制分子篩孔徑大小， 使分子篩只允許游離分子通過， 從而達(dá)到 分離凝集紅細(xì)胞和游離紅細(xì)胞的目的。 血清和紅細(xì)胞發(fā)生凝集的受到凝膠阻礙 的而停止在微管的上端， 反之則紅細(xì)胞沉在微管的底部， 通過有無凝集而判斷 交叉配血試驗(yàn)可否配合。6.2 試驗(yàn)準(zhǔn)備：凝膠卡處理 ：實(shí)驗(yàn)前，將新的 Combs 卡離心。使微柱內(nèi)壁上端 粘有的凝膠離心下來。6.3 實(shí)驗(yàn)步驟：6.3.1 平行向后撕拉 Diana Gel Combs卡上端的錫紙膜，直至所需孔完全露出為 止。6.3.2 在

13、主側(cè)孔懸空加入獻(xiàn)血員 1紅細(xì)胞懸液 50ul，病人血漿 25ul6.3.3 在次側(cè)孔懸空加入病人 1紅細(xì)胞懸液 50ul，獻(xiàn)血員血漿 25ul。6.3.4 在病人自身對(duì)照孔加入病人 1紅細(xì)胞懸液 50ul，病人血漿 25ul。6.3.5 在 Diana 孵育器內(nèi) 37下孵育 15分鐘。6.3.6 將卡放到 Dianafuge離心機(jī)中 1100轉(zhuǎn)/9 分鐘離心。6.3.7 離心結(jié)束后在白色背景前觀察結(jié)果。7.結(jié)果判定： 100的紅細(xì)胞沉在微管的底部。+/- 100的紅細(xì)胞沉在微管的下端 1/3 之內(nèi)。1+ 80 的紅細(xì)胞沉在微管的下端 2/3 之內(nèi)。2+ 80 的紅細(xì)胞沉在微管的上端 2/3 之

14、內(nèi)。3+ 80 的紅細(xì)胞沉在微管的上端 1/3 之內(nèi)。4+ 凝集的細(xì)胞全部處于微管的頂部8. 注意：避免吸入白細(xì)8.1 紅細(xì)胞懸液不能超過 1，避免假陽性。8.2 配制紅細(xì)胞懸液時(shí)加樣槍頭應(yīng)沿壁插到管底吸取壓積紅細(xì)胞， 胞和血小板，避免假陽性。8.3 受檢血樣要充分離心，避免纖維蛋白影響結(jié)果判斷。鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院臨床輸血質(zhì)量管理體系技術(shù)性規(guī)程文件編號(hào)zjsdyrmyysxkCBT /SOP 009版本 /修改狀態(tài)B/0第1 頁共2 頁編制者陳偉 審核者 陳鵬批準(zhǔn)者蔡玲發(fā)布日期2012-12-20實(shí)施日期2013-01-01血型抗體效價(jià)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序1.目的：為規(guī)范紅細(xì)胞血型抗體效價(jià)測(cè)定的技

15、術(shù)操作， 依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序 相關(guān) 條款的要求制定本規(guī)程。2.適用范圍：適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血科測(cè)定 IgG抗-A抗-B及IgG或IgM 類紅細(xì)胞 不規(guī)則抗體效價(jià)，用以評(píng)估胎 -母血型不合適妊娠時(shí)發(fā)生胎兒及新生兒免疫溶血 性疾病（ HDN）的風(fēng)險(xiǎn)程度及其他臨床需要。3.職責(zé)： 醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)紅細(xì)胞血型抗體效價(jià)的測(cè)定。5.溯源：見全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第三版）6.操作程序： 本實(shí)驗(yàn)用“長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司”提供的譜細(xì)胞 .6.1 原理 ： 將血清經(jīng)倍比稀釋后與選定的紅細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)，觀察反應(yīng)結(jié)果，以肉眼觀察到“ 1+”的最后一個(gè)凝集管作為終點(diǎn)， 終點(diǎn)血清稀釋倍數(shù)的倒數(shù)為抗體效價(jià)

16、， 此過 程稱為效價(jià)滴定。這是一種半定量的方法。7 實(shí)驗(yàn)步驟7.1倍比稀釋：排列 10只小試管并編號(hào)，從第 2 管開始每管加生理鹽水 0.1ml， 第1、第 2管各加待檢血清 0.1ml，第 2管混勻后移出 0.1ml轉(zhuǎn)至第 3管，第 3 管混勻后移出 0.1ml 轉(zhuǎn)至第 4 管，以同樣操作稀釋至第 10 管，從第 10 管中 吸出 0.1 棄去，或暫時(shí)保留在另一試管中，以備必要時(shí)作進(jìn)一步稀釋。這樣 從第 1 管到第 10 管的血清稀釋度依次是 1:1，1:2,1:4, 1:512。7.2 向上述各試管中分別加入 2%紅細(xì)胞懸液 0.1ml，混勻。7.3 處理并觀察結(jié)果：一般情況下，鹽水凝集試

17、驗(yàn)可立即離心后觀察，或置室溫1 小時(shí)觀察結(jié)果。冷凝集素效價(jià)要置 41 小時(shí)后觀察結(jié)果。酶法、膠體介質(zhì) 法、抗球蛋白法等根據(jù)方法本身進(jìn)行孵育或離心后觀察結(jié)果。7.4 某些血清里存在同一特異性 IgG 和 IgM 抗體，常用巰基試劑處理法將兩者區(qū) 分。7 結(jié)果判定 ：0. 無凝集，無溶血，全是游離細(xì)胞，用顯微鏡觀察+/- 微小凝集塊，肉眼很難看清，背景渾濁，用顯微鏡觀察1+ 很小的凝集塊，肉眼可見，背景不透明，游離細(xì)胞較多。2+ 許多小凝塊，肉眼可見，大小均勻，背景基本透明，有游離細(xì)胞。3+ 數(shù)個(gè)大凝塊，背景透明，無游離細(xì)胞。4+ 一個(gè)大凝塊，背景透明，無游離細(xì)胞。8 注意 ：8.1 在稀釋過程中

18、，習(xí)慣上是不更換吸管的。這與更換吸管的結(jié)果將不一樣。8.2 若血清要分別和幾種紅細(xì)胞作用，要將血清做總稀釋，然后分別移同樣實(shí)驗(yàn) 量到幾個(gè)試管中，可以減小誤差。8.3 試驗(yàn)結(jié)果可能出現(xiàn)前帶現(xiàn)象。應(yīng)適當(dāng)增加稀釋倍數(shù)方可避免。8.4 同一份血清重復(fù)滴定， 結(jié)果可能不同，若只有稀釋度的差別且前后 1 管之差， 屬于正常誤差范圍。鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院臨床輸血質(zhì)量管理體系技術(shù)性規(guī)程文件編號(hào)zjsdyrmyysxkCBT /SOP 010版本修改狀態(tài)B/0第1 頁共2 頁編制者陳偉 審核者 陳鵬批準(zhǔn)者蔡玲發(fā)布日期2012-12-20實(shí)施日期2013-01-01不規(guī)則抗體篩選及鑒定 標(biāo)準(zhǔn)操作程序1. 目的 :

19、為規(guī)范紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選、鑒定的技術(shù)操作，保證檢測(cè)結(jié)果及臨床輸血 安全有效，依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序相關(guān)條款的要求制定本規(guī)定。2. 適用范圍 :適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血科篩選及鑒定紅細(xì)胞不規(guī)則抗體。3. 職責(zé)：輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的篩選及鑒定。4 . 溯源:全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程 （第三版 ）.5. 操作程序 : 本實(shí)驗(yàn)用“長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司”提供的 combs 卡和“長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司” 提供的譜細(xì)胞， 對(duì)不規(guī)則抗體篩選試驗(yàn) 陽性患者，作抗體鑒定試驗(yàn)，確定其特異性。5.1 實(shí)驗(yàn)原理 : 本實(shí)驗(yàn)是抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。 用已知 的標(biāo)準(zhǔn)譜細(xì)胞與患者血漿（清）反應(yīng)后，觀察在凝膠分子的位置，判斷有無相應(yīng) 抗體。5