唾液淀粉酶活性測定論文

1、唾液淀粉酶最適ph值的測定論文丁珂201140181 廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院2011級17班3組摘要：了解唾液淀粉酶的最適ph，把酶學(xué)知識應(yīng)用于臨床診斷與應(yīng)用治療。本實驗?zāi)康恼莆站珳y唾液淀粉酶最適ph值的方法，熟悉緩沖溶液的配置，722分光光度計的使用。首先配置緩沖溶液，然后獲取唾液，稀釋唾液，唾液稀釋倍數(shù)的選取，淀粉的分解，吸光度的測量，最后記錄數(shù)據(jù)，作圖。結(jié)果測得ph值在6.08.0范圍內(nèi)并且隨著ph的增大先減小后增大，ph6.8左右，吸光度值最低。分析ph6.8左右，酶的活性最大，淀粉被分解的最多，剩余底物的量最少，a值最小，過酸或過堿均會抑制酶的活性，使之分解的底物減少，a值增大。關(guān)鍵詞：

2、淀粉酶 ph 吸光度 前言：酶無論在生活中還是在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域都有很大的研究意義，研究酶可以很好應(yīng)用酶的各種特性，在各種領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。影響酶反應(yīng)活力的因素很多，影響胞外酶的因素主要包括ph值、溫度和金屬離子、抑制劑及其他小分子，以及酶濃度等因素。ph值對酶反應(yīng)活力的影響： 1、 酸或堿可以使酶的空間結(jié)構(gòu)破壞，引起酶的活力喪失，這種喪失活力可以是可逆的或者是不可逆的，對可逆的來說，改變ph值后可使活力恢復(fù)。2、 酸或堿影響酶的活性部位催化基團(tuán)的離解狀態(tài)，使得底物不能分解成產(chǎn)物。3、 酸或堿影響酶的活性部位結(jié)合基團(tuán)的離解狀態(tài)，使得底物不能和它結(jié)合。4、 酸或堿影響底物的離解狀態(tài)，或使底物不能和酶結(jié)合。由

3、于上述種種原因，各種酶的作用都有一個最適合的ph值范圍。實驗原理：ph的改變對酶的催化影響很大，酶催化活性最高時，反應(yīng)體系的ph值稱為最適ph值。本實驗用唾液淀粉酶為材料來觀察酶活性受ph影響的情況。淀粉被分解越多，剩余底物越少，a值最小，過酸或過堿會抑制酶的活性，使底物分解減少，a值增大。碘液與淀粉的不同程度水解的產(chǎn)物反應(yīng)呈不同顏色，即：淀粉（藍(lán)色）、紫色糊精（紫色）、紅色糊精（紅色）、麥芽糖及葡萄糖（黃色）。利用朗伯比爾定律，用分光光度計測量出各溶液在600nm處地吸光度a，從而間接測出唾液淀粉酶的最適ph值。a在ph值6.08.0內(nèi)范圍變化，并且隨著ph的增大而先減少后增大，ph=6.8

4、左右，吸光值最低，所以唾液淀粉酶最適ph值約為6.8。37恒溫水箱、分光光度計、吸量管（1ml 5ml）試劑藥品： 2.5%淀粉溶液、碘液、0.2mol/l磷酸二氫鈉溶液、0.2mol/l磷酸氫二鈉溶液、蒸餾水儀器材料和試劑藥品：儀器材料：1. 試管、試管架、洗耳球、小燒杯、坐標(biāo)紙；2. 37恒溫水浴箱、分光光度計；3. 0.1ml、0.5 ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管、膠頭滴管；試劑藥品：1. 0.02淀粉溶液 ；2. 0.2mol/l磷酸二氫鈉溶液、0.2mol/l磷酸氫二鈉溶液、碘液、蒸餾水；實驗步驟：（1）配置緩沖液：配置各個ph的緩沖液10ml， 選

5、擇ph值從6.0到8.0，間隔0.2. 用量（10ml）試劑ph值 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0磷酸氫二鈉 1.23 1.85 2.65 3.75 4.90 6.10 7.20 8.10 8.70 9.15 9.47 磷酸二氫鈉 8.77 8.15 7.35 6.25 5.10 3.90 2.80 1.90 1.30 0.85 0.53（2）唾液的獲?。赫麴s水漱口,然后用舌尖抵住上額或下額齒根后,微低頭.輕啟雙唇，將下嘴唇擱在燒杯邊緣，讓唾液自然流入試管中.（3）唾液的稀釋：取10支試管，分別編上號0009試管編號 00 01 02 0

6、3 04 05 06 07 08 09唾液(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 蒸餾水(ml) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16 .0 18.0 20.0（4）唾液稀釋倍數(shù)的選?。毫砣?0支試管，分別編上0009號，各取上述稀釋的唾液各1ml，分別加入相應(yīng)編號的試管里，然后向10支試管內(nèi)同時加入0.2ml的2.5的淀粉溶液，振蕩混勻后放入37 恒溫水浴箱中， 5分鐘后取出，滴加23滴碘液，振蕩混勻，觀察顏色，選取顏色變化適中的一支，記錄稀釋倍數(shù)。結(jié)果選取03號管的唾液濃度 （5)測量ph： 取11支試管，分別

7、標(biāo)上號111，按下表操作 用量（10ml）試管編號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 0.0 2.5淀粉溶液(ml) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 2ml緩沖溶液ph 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 (保溫10min) 37 稀釋唾液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 混勻后繼續(xù)保溫a 0.087 0.036 0.030 0.029 0.027 0.115 0.259 0.289 0.395 0.427 0.590以蒸餾水調(diào)零，用分光光度計測出各試管

8、中溶液的吸光度a值，做好記錄。以ph值為橫坐標(biāo)，吸光度a為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作出平滑曲線，取曲線最低點對應(yīng)的ph值，即為唾液淀粉酶的最適ph值。實驗結(jié)果:a在ph值6.08.0內(nèi)范圍變化，并且隨著ph的增大而先減少后增大，ph=6.8左右，吸光值最低，所以唾液淀粉酶最適ph值約為6.8。分析討論：在本實驗中，最佳保溫時間是關(guān)鍵。此外，碘液的濃度也直接關(guān)系著實驗結(jié)果的準(zhǔn)確觀察，若本實驗中配制的碘液濃度相對而言比較高，碘液的顏色將實際反應(yīng)的顏色遮蔽，導(dǎo)致實驗結(jié)果不能準(zhǔn)確觀察，為解決該問題，可將碘液稀釋后使用，從而得到清晰的顏色梯度。本實驗中可能導(dǎo)致結(jié)果誤差的原因有：1. 在確定保溫時間時未將滴管一起保溫，導(dǎo)致實驗誤差；2. 在配制不同ph緩沖液和測定唾液淀粉酶最適ph中加入試劑時若未混勻，將對實驗結(jié)果造成一定影響；3. 碘液過早的滴加會導(dǎo)致碘液的揮發(fā)，可能會影響實驗結(jié)果。 參考文獻(xiàn)：1 2 3 4 5查錫良,周春燕 . 生物化學(xué) . 第7版北京：人民衛(wèi)生出版社2008.1:756許冰,原媛,趙文獻(xiàn).ph值對酶活性影響的實驗觀察j.臨床合理用藥雜志,2010,3(10):35-35.7張杰、李淑艷 . 醫(yī)學(xué)化學(xué)實驗技術(shù) . 第1版北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社2006.12：276、2