阿替洛爾錦鯽肝細胞

1、摘 要本研究采用阿替洛爾(Atenolol，簡稱ATL)進行試驗，通過實驗室模擬自然水生條件初步探究ATL對錦鯽抗氧化防御系統(tǒng)的毒性大小及機理，探究ATL對錦鯽肝臟的氧化應激系統(tǒng)損傷，本實驗通過測定抗氧化指標SOD和CAT，評估了用不同濃度ATL長時間暴露下（30天），ATL對錦鯽肝臟抗氧化防御系統(tǒng)的損傷情況，比較不同劑量ATL毒作用的差別。由實驗可得知將錦鯽暴露于ATL100mg/kg會使錦鯽CAT活性下降，酶活受到抑制，說明錦鯽的抗氧化系統(tǒng)受到損傷，阿替洛爾能對錦鯽產(chǎn)生致毒作用。關(guān)鍵詞：阿替洛爾；錦鯽；肝細胞；SOD；CAT；氧化損傷；生物毒性AbstractIn this study,

2、atenolol (ATL) was used to study the toxicity and mechanism of ATL on the antioxidant defense system of Carassius auratus, and the damage of ATL on the oxidative stress system of Carassius auratus liver. By measuring the antioxidant indexes SOD and CAT, we evaluated the effects of ATL on Carassius a

3、uratus under low concentration and long time exposure (30 days) To compare the toxic effects of different doses of compounds. The results showed that the CAT activity of Carassius auratus exposed to ATL 100mg / kg decreased and the enzyme activity was inhibited, which indicated that the antioxidant

4、system of Carassius auratus was damaged and atenolol could produce toxic effect on Carassius auratus.Key words: atenolol; Carassius auratus; Liver cells; SOD.CAT; Oxidative damage; The biological toxicity of目 錄1 引言11.1 阿替洛爾的物理化學性質(zhì)11.2 阿替洛爾進入自然環(huán)境的途徑11.3 阿替洛爾的毒性效應21.4 錦鯽的抗氧化防御系統(tǒng)31.4.1 生物標志物31.4.2 抗氧化防

5、御的機理31.5 本文的研究目的和意義42 實驗部分42.1 試劑和儀器42.1.1 藥品42.1.2 儀器42.1.3 錦鯽的馴養(yǎng)42.2 實驗步驟52.2.1 染毒處理52.2.2 取樣和制備樣品52.2.3 總蛋白的測定52.2.4 SOD活性測定52.2.5 CAT活性測定63 數(shù)據(jù)分析與處理63.1 統(tǒng)計分析方法63.2 數(shù)據(jù)記錄與處理63.3 結(jié)果分析與討論83.3.1 圖表分析83.3.2 討論94 結(jié)論與展望10致謝11參考文獻12阿替洛爾對錦鯽的環(huán)境健康風險評價1 引言阿替洛爾(Atenolol，ATL)，是一種選擇性1腎上腺素受體阻滯藥，被廣泛使用在多種情況所引起的中、輕度

6、高血壓病。ATL由英國帝國化學公司(ICI)于上世紀70年代初期率先研制的1。ATL的優(yōu)點有：起效快、無積蓄中毒性中毒的風險等，普及于高血壓、心絞痛、心肌梗死等疾病的治療。因為ATL有持久性超量使用、較高的穩(wěn)定性和水溶性的特點，所以現(xiàn)在ATL在各類水體中被檢測出含有殘留。據(jù)實驗研究人員表明，ATL存在阻抑人類胚胎細胞生長的情況，所以對自然生態(tài)環(huán)境和水生生物的健康存在很大的隱患2。天然條件下的水環(huán)境中ATL的理化性質(zhì)比較穩(wěn)定，因此采用傳統(tǒng)水處理技術(shù)與生態(tài)修復技術(shù)都很難去除各類水體環(huán)境中殘留的ATL?？偟膩碚f，ATL對環(huán)境健康影響的研究仍然是一個我們需要重復不斷地探討和研究的問題。1.1 阿替洛爾

7、的物理化學性質(zhì)阿替洛爾(Atenolol，ATL)，又稱：氨酰心安，分子量：266.33600，分子式：C14H22N2O3，溶解于乙醇，微溶于氯仿，幾乎不溶于乙醚。精確質(zhì)量：266.16300，熔點151155，密度：1.125 g/cm3，沸點：508C，白色粉末，無臭或微臭。圖1-1 阿替洛爾結(jié)構(gòu)式1.2 阿替洛爾進入自然環(huán)境的途徑目前獲得阿替洛爾片劑生產(chǎn)資質(zhì)的生產(chǎn)企業(yè)我國共70多個，觸及的相關(guān)部門批準文號105個。參照國外相關(guān)標準與國內(nèi)相關(guān)文件，歐洲藥典8.0版收錄了ATL的8個雜質(zhì)，但是我國很少有關(guān)于阿替洛爾片的相關(guān)物質(zhì)系統(tǒng)研究和雜質(zhì)溯源的有關(guān)報道。隨著近些年來我國人口老齡化越來越嚴

8、重，ATL也越來越廣泛地被適用于治療心血管疾病當中。在過去的10年間，其處方量增長了約1倍3。阿替洛爾主要服用方式以口服為主，ATL的口服雖然吸收很快，但是并不完全，口服大約攝取50%有效成分，在2-4小時將會達到峰濃度，口服攝取后作用會持續(xù)很久，可以達到一天，廣泛分布在各個組織中，少量可以通過血-腦脊液屏障。健康人群的分布量大約為50-75升，血液中的半衰期為6-7小時，主要通過排尿的方式排出人體。且我國現(xiàn)階段醫(yī)療廢品處置存在廢物生產(chǎn)機構(gòu)安全意識低、設施簡陋及知識匱乏、過期藥品回收形同虛設、診所廢品流失、廢物集中處置單位服務方式不足等問題，造成了每年近一半年生產(chǎn)量以上的醫(yī)療廢品沒有妥善處理流

9、入自然界4。由于阿替洛爾具有較好的水溶性和抗生物降解性，因此常規(guī)處理污水方法很難有效去除阿替洛爾，這些殘留于尿液中的藥品隨著地下下水道源源不斷的流入自然界水環(huán)境中。許多國家和地區(qū)的污水廠中已檢測到ng/Lg/L的阿替洛爾56。就目前來說，阿替洛爾已經(jīng)在水環(huán)境以及地表水中被檢測出大量存在，并檢出濃度偏高，阿替洛爾已經(jīng)成為了水環(huán)境的重要污染物。隨著近些年來我國人口老齡化越來越嚴重，ATL也越來越廣泛地被適用于治療心血管疾病當中，中、輕度高血壓病治療中以ATL為代表的選擇性1腎上腺素受體阻滯藥的需求也將不斷擴大。所以在自然生態(tài)環(huán)境中ATL的比例也逐漸增加。1.3 阿替洛爾的毒性效應因為化合物的化學結(jié)

10、構(gòu)和毒性效應緊密相連，不難看出阿替洛爾的親脂性顯然和阿替洛爾生物毒性相關(guān)，阿替洛爾的-受體阻滯劑的logKow（辛醇水分配系數(shù)）為：約為 -0.15到0.787。凡是人類生產(chǎn)的大多數(shù)藥品大多經(jīng)過特別調(diào)整而擁有其特定的效用方式。雖然阿替洛爾是針對人類的l腎上腺受體，可是與其相似的受體也在哺乳類、魚類等脊椎動物中存在。根據(jù)研究現(xiàn)象表明，有類似阿替洛爾的-受體阻滯劑，-受體阻滯劑裸露會致使魚類胚胎孵化成功率減少，而且也會導致魚類的胚胎發(fā)育情況不正常。例如普萘洛爾裸露可能會讓斑馬魚胚胎的體色變淺、心包腫、血液循環(huán)異常和尾部彎曲，明顯減少其孵化成功率和自由活動，最后導致胚胎直接死亡8。根據(jù)觀察-受體阻滯

11、劑的藥物在防治疾病中對機體的作用及其原理，ATL對魚類也能發(fā)生相似的生物機體的機能效應，比如引起心率降低。相關(guān)研究人員還在實驗中發(fā)現(xiàn)-受體阻滯劑可能導致EROD的升高。也發(fā)現(xiàn)魚鰓中的EROD含量更為顯著，這樣的情況也許說明了魚鰓在-受體阻滯劑代謝中的主要作用，而-受體阻滯劑的誘導效力可以與一些自然生態(tài)環(huán)境常見的EROD誘導劑的作用匹敵。在其他研究實驗中還能發(fā)現(xiàn)-受體阻滯劑可以誘導斑馬魚心臟中產(chǎn)VTG（卵黃蛋白原），這是第一次人類發(fā)現(xiàn)VTG可以經(jīng)過非雌激素方式刺激表現(xiàn)出來9。雖然ATL被認為是較為安全的一種-受體阻滯劑，但是自然生態(tài)環(huán)境中所存在的大量ATL，讓我們不得不重新看待ATL的毒性效應和

12、ATL對于自然生態(tài)環(huán)境及生物體的安全危害和影響。1.4 錦鯽的抗氧化防御系統(tǒng)1.4.1 生物標志物一種能在意識之外評價服藥后正常生理、病理過程或機體生理的指標被稱作生物標志物10。生物標志物作為一種特別的且有用的輔佐方法可以快速、靈敏、準確、在較早期地推斷病癥的產(chǎn)生、進展和預后。生物標志物還可以適合用在嚴重程度疾病的判斷和種類，檢測疾病醫(yī)療的效果，也可使用在篩查患病高危人群之中111213。指示水環(huán)境污染的主要生物標志物包括：細胞色素4P50lA1（抗氧化酶、解毒酶等）、金屬硫蛋白、DNA加合物、應激蛋白（HSP）?？寡趸副灰曌麇\鯽抗氧化系統(tǒng)的重要指標之一，所以在研究錦鯽抗氧化性時抗氧化酶便

13、能作為一種特殊生物標志物。1.4.2 抗氧化防御的機理鯽魚類的抗氧化系統(tǒng)中，起重要作用的是抗氧化酶：消除機體自由基的功能、對氧化脅迫的清除功能、增強機體防御能力、增強機體免疫等14。抗氧化防御系統(tǒng)中SOD、CAT是其重要防線之一，SOD的任務是將氧氣催化成過氧化氫，如果過氧化氫清除的不適時，過氧化氫就會和氧氣產(chǎn)生反應后，從而生成毒性羥基自由基。而CAT的任務是主要將SOD催化后產(chǎn)生的過氧化氫一一轉(zhuǎn)化為水和氧氣，便能夠減少過氧化氫的濃度，以此保護機體的組織，維持機體細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定15。清除活性氧自由基的反應式如下：自由基是有氧生物一定需要的，若自由基的生產(chǎn)量很大，抗氧化防御系統(tǒng)的抗氧化清理作用

14、清理不及時，遭到壓制，長時間就會導致抗氧化防御系統(tǒng)損傷，抗氧化酶活性下降。綜上，要讓自然生態(tài)環(huán)境有所改變，魚類的抗氧化酶活性的變化就可以作為衡量指標之一。1.5 本文的研究目的和意義隨著我國老齡化的加劇，心血管疾病患者不斷增多，阿替洛爾為代表的-受體阻滯劑藥品的使用量可能會持續(xù)增加。大量的阿替洛爾隨著患者排泄以及醫(yī)療廢物處理不當大量流入以水環(huán)境為代表的自然環(huán)境中，因此自然生態(tài)環(huán)境正在逐漸惡化。本論文在以下文獻的研究基礎(chǔ)上，以錦鯽作為實驗對象，主要進行的研究內(nèi)容是在室內(nèi)進行半靜態(tài)染毒實驗，進行更深入的研究關(guān)于阿替洛爾對錦鯽的肌肉和內(nèi)臟團中谷胱甘肽過氧化氫酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶、超氧化物歧

15、化酶活性的影響。經(jīng)過本實驗的探究，從而評價阿替洛爾對錦鯽的毒性效應以及產(chǎn)生的酶系的響應，為評價阿替洛爾對水生動物，尤其是對于魚類的毒性影響和潛在生態(tài)風險提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和參考價值。2 實驗部分2.1 試劑和儀器2.1.1 藥品阿替洛爾（摩貝實驗用品商城，純度為98%）；福爾馬林、二甲苯和酒精（國藥集團試劑有限公司，上海）；SOD、CAT和蛋白質(zhì)含量測定試劑盒南京建成生物工程研究所，南京）；錦鯽（Carassiusauratus，19.73.6g，9.01.0cm），所有錦鯽均購自寧德市金馬市場。（實驗中所用的試劑的純度均為100）2.1.2 儀器低溫高速冷凍離心機（Allegra64R來自于美國

16、Beckman公司）；紫外可見分光光度計（Unico UV2000 spectrometry，上海）；2.1.3 錦鯽的馴養(yǎng)實驗室中曝氣水的來源是活性炭去氯曝氣自來水、溶解氧大于5mgL-1、pH7.60.3、水溫222C。實驗室條件下錦鯽被馴養(yǎng)至少達到15天以上，每天的任務給錦鯽定時定量投餌一次（餌料為南京水產(chǎn)所提供的魚用食料），并且給魚缸持續(xù)充氧。實驗應選擇肉眼不可見畸形的無明顯疾病的錦鯽。2.2 實驗步驟2.2.1 染毒處理本實驗選擇以錦鯽作為對象，購置于寧德市金馬市場。將錦鯽置于30L曝氣水配備自動換水系統(tǒng)的魚缸中，實驗環(huán)境保持在溶解氧大于5mgL-1、pH7.60.3、水溫222。錦

17、鯽必須在實驗室的條件下馴養(yǎng)至少達到15天以上，需要給魚缸持續(xù)充氧且每天喂食量約0.035g/魚（餌料為寧德水產(chǎn)所提供的魚用食料）。實驗開始前，應挑選無明顯疾病、健康活潑和肉眼無可見畸形的錦鯽。為保證每個魚缸的暴露濃度盡量在同一水平，換水時先放到剩下一半的水，再加入一定體積事先配置好的KP母液和水，其中KP母液濃度為100mg/L（用二甲基亞砜溶液配置）。將錦鯽隨機分劃入處理組別，設置的濃度組為ATL（0），ATL（10mg/kg），ATL（100mg/kg）。2.2.2 取樣和制備樣品在暴露實驗第7、14、30天從每個缸中選擇三條差不多，無明顯病態(tài)錦鯽，撈出受試魚，將其擊昏后立刻放置在天平上迅

18、速稱重，而后在冰盤上為受試魚測量和解剖，將受試魚的肝臟取出，用0.9的生理鹽水為組織表面沖洗備用。然后取出低溫冷凍保存的樣品或者新鮮組織樣品，表面殘余的水分利用濾紙吸干，而后迅速稱量，加入質(zhì)量體積比為1：9的冷生理鹽水，操作電動勻漿器進行勻漿后，在-4的冷凍離心機（Beckman，購置于美國）12000g離心15分鐘，取其上清液分別測定肌肉和內(nèi)臟中蛋白質(zhì)含量及相關(guān)酶活性，4小時內(nèi)需測定完畢。2.2.3 總蛋白的測定運用Bradford方法對錦鯽的蛋白含量進行測定，采用BSA實驗中的標準蛋白。NH3+基團存在于蛋白質(zhì)分子中，游離狀態(tài)下的考馬斯亮藍G-250呈現(xiàn)棕紅色，當?shù)鞍讟藴室夯驑悠放c棕紅色的

19、顯色劑出現(xiàn)反應時，蛋白中的NH3+便會和G-250染料上的陰離子相結(jié)合，此時溶液將會呈現(xiàn)出藍色。如果色素-蛋白質(zhì)的結(jié)合物在595nm下時，在一定范圍內(nèi)含量的蛋白質(zhì)，蛋白的含量與光的密度值會呈現(xiàn)正比，測定出的蛋白含量被用在校正SOD，CAT酶活性。提取所需的酶提取液，用滴管加入3mL的G-250試劑，然后使用混勾器將酶提取液和試劑進行充分的混合，在10分鐘內(nèi)二者將會相互反應，而后用595nm的波長下做比色，樣品測定過程中，利用測定標準管（標準樣品試樣）和對照管（蒸餾水空白）的吸光度作為校正。在此期間一定要注意的是，如果當樣品的濃度太高則需要對其預先稀釋，以保證測定的樣品吸光度在準確的線性范圍內(nèi)。

20、2.2.4 SOD活性測定使用Flohe和Otting(1984)描述的方法測定相關(guān)生化參數(shù)的測定過程并且采用試劑盒測定SOD活性，SOD活性根據(jù)馮明寶16等提出的方法來測定：超氧離子的自由基會生成黃嘌呤氧化酶與黃嘌呤，二者相互反應中，亞硝酸鹽形成于超氧離子經(jīng)過氧化羥胺的作用。通過顯色劑的作用下，使用分光光度計測其在550nm處的吸光度，會出現(xiàn)肉眼可見的淡紫紅色。如果待測樣品中具有SOD超氧離子會出現(xiàn)相對應的專一性的抑制作用，會降低它生成的亞硝酸鹽的濃度，并且吸光度會減小。推算SOD酶活性可利用所測定樣品與標準對照之間吸光度的差異，單位為USOD/g蛋白質(zhì)。依照實驗中吸光度的變化情況，可以明確

21、待測樣品的SOD活性，并且通過公式推算，最后能夠計算出待測樣品中SOD酶活性，其中SOD的活性的表達式為U/mg protein。每毫克的組織蛋白在每一毫升反應液的抑制率達50%時，其實驗所對應的SOD量是一個活性單位（U）為SOD活性定義。測定過程需要同時測定標準管（標準樣品試樣）和對照管（蒸饋水空白），用作樣品管的校正。2.2.5 CAT活性測定CAT酶活性的測定利用試劑盒進行批量化的測定，其測定過程是依據(jù)Goth(1991)所描述的方法，CAT分解H2O2加入鉬酸銨的反應后將會迅速中止，因為鉬酸銨與實驗過量的H2O2反應能夠產(chǎn)生淡黃色的絡合物，而且能夠在405nm波長處測定出其的吸光度和

22、生成量，所以能夠推算出CAT的活性，其中CAT活力表達為U/mg protein。通過研究人員發(fā)現(xiàn)每一毫克組織蛋白1秒鐘能夠分解出1mol的H2O2的量作為一個活性單位該為組織勻漿中的CAT活性定義。測定過程中需要同時測定對照管(蒸餾水空白)用作樣品管的校正。3 數(shù)據(jù)分析與處理3.1 統(tǒng)計分析方法該實驗利用SPSS數(shù)據(jù)處理軟件Statistical Package for Social Sciences，ver.12.0，SPSS公司，芝加哥，美國）處理該實驗數(shù)據(jù)之間統(tǒng)計學的差異進行分析。實驗中實驗的數(shù)值均可使用平均值標準偏差的方法來表示。其中，當P小于0.05時，可認為對照組與實驗組之間具有

23、顯著性的差異。實驗時數(shù)據(jù)記錄的應用統(tǒng)計分析圖均用Origin 8.0（Origin Lab，美國）繪制。3.2 數(shù)據(jù)記錄與處理表2-1 不同濃度的ATL在不同時間暴露下蛋白質(zhì)濃度的變化暴露時間/天ATL暴露濃度Control10mg/kg100mg/kg71.011.371.15140.971.401.14301.011.060.96圖2-1 不同濃度的ATL在不同時間暴露下蛋白質(zhì)濃度的變化表2-2 不同濃度的ATL在不同時間暴露下SOD酶活性的變化暴露時間/天ATL暴露濃度Control10mg/kg100mg/kg770.8861.5969.321483.0757.9977.753078.

24、3082.1176.48圖2-2 不同濃度的ATL在不同時間暴露下SOD酶活性的變化表2-3不同濃度的ATL在不同時間暴露下CAT酶活性的變化暴露時間/天ATL暴露濃度Control10mg/kg100mg/kg717.7520.2319.941417.7921.8415.423017.2310.6115.12圖2-3 不同濃度的ATL在不同時間暴露下CAT酶活性的變化3.3 結(jié)果分析與討論3.3.1 圖表分析從圖1中我們分析不同濃度ATL和時間對蛋白質(zhì)活性的影響，可以看出第7天的在蛋白質(zhì)酶活性10mg/kg的濃度組酶活性與空白對照組其酶活性呈現(xiàn)出誘導上升的趨勢，呈現(xiàn)顯著性差異（p小于0.05

25、），其誘導率為34.97；在100mg/kg濃度組與空白對照組相比較呈現(xiàn)誘導上升趨勢，但是沒有明顯差異（P大于0.05）。14天的時候，10mg/kg的濃度組蛋白質(zhì)酶活性與空白組對比呈現(xiàn)出誘導上升的趨勢，且出現(xiàn)顯著性差異（p小于0.05），其誘導率為43.72；100mg/kg高濃度組蛋白質(zhì)酶活性與空白組相比沒有顯著性差異（P大于0.05）。30天的時候，10mg/kg濃度組蛋白質(zhì)酶活性與空白組對比出現(xiàn)了誘導上升的趨勢，但是沒有明顯差異（P大于0.05）；100mg/kg高濃度組蛋白質(zhì)酶活性與空白組相比呈現(xiàn)抑制下降的趨勢，但是沒有明顯差異（P大于0.05）。從圖2中我們分析不同濃度ATL和時間

26、對SOD酶活性的影響，可以看出第7天，10mg/kg低濃度組與空白對照組相比SOD酶活性呈現(xiàn)出顯著性差異（p小于0.05），SOD酶活性有明顯降低，酶活顯著被抑制，抑制率為13.10；在100 mg/kg濃度組與空白對照組比較呈現(xiàn)抑制下降的趨勢，但是沒有明顯差異（P大于0.05）。14天的時候，10mg/kg濃度組與空白組對比SOD酶活性呈現(xiàn)顯著性差異（p小于0.05），且呈抑制下降趨勢，其抑制率為30.20；100 mg/kg濃度組SOD酶活性與空白組對比呈現(xiàn)抑制下降的趨勢，但是沒有明顯差異（P大于0.05）。30天的時候，10mg/kg濃度組SOD酶活性與空白組對比呈現(xiàn)誘導上升的趨勢，可是

27、沒有明顯差異（P大于0.05）；100 mg/kg高濃度組與空白組相比SOD酶活性已經(jīng)相對一致。從圖3中，我們分析不同濃度ATL和時間對CAT酶活性的影響，第7天的在CAT酶活性10 mg/kg低濃度組CAT酶活性與空白對照組相比呈現(xiàn)誘導上升的趨勢，但是沒有明顯差異（P大于0.05）；在100mg/kg濃度組與空白對照組相比較，呈現(xiàn)誘導上升的趨勢，但是沒有明顯差異（P大于0.05）。14天的時候，10 mg/kg濃度組CAT酶活性呈現(xiàn)誘導上升趨勢，出現(xiàn)顯著性差異（P小于0.05），其誘導率22.80；100 mg/kg濃度組CAT酶活性與空白組對比呈現(xiàn)抑制下降的趨勢，但是沒有明顯差異（P大于0

28、.05）。30天的時候，10mg/kg濃度組CAT酶活性與空白組對比出現(xiàn)了顯著性差異（p小于0.05）呈現(xiàn)抑制下降的趨勢，其抑制率為38.43；100 mg/kg高濃度組CAT酶活性與空白組相比出現(xiàn)了顯著性差異（p小于0.05）呈現(xiàn)抑制下降的趨勢，其抑制率為12.26。3.3.2 討論本實驗所采用阿替洛爾（ATL）進行試驗，通過實驗室模擬自然水生條件初步探究ATL對錦鯽抗氧化防御系統(tǒng)的機理與毒性作用的大小，探究ATL對錦鯽肝臟的氧化應激系統(tǒng)損傷，為理解ATL對水生生態(tài)系統(tǒng)的影響提供實驗數(shù)據(jù)。本實驗通過測定抗氧化指標SOD和CAT，評估了低濃度長時間暴露下（30天）阿替洛爾對錦鯽肝臟抗氧化防御系

29、統(tǒng)的損傷，比較不同劑量化合物毒作用的差異。通過對阿替洛爾對錦鯽肝臟的氧化系統(tǒng)損傷的研究了解到，將錦鯽暴露于ATL0mg/kg、ATL10mg/kgSOD、CAT濃度變化呈現(xiàn)一致規(guī)律，說明ATL10mg/kg時，對錦鯽的氧化損傷并不明顯；將錦鯽暴露于ATL100mg/kg會導致錦鯽CAT酶活性受到抑制作用，這些體內(nèi)表征的變化可證明阿替洛爾能導致錦鯽肝臟的氧化損傷。因此阿替洛爾對魚能夠產(chǎn)生誘導發(fā)生氧化應激，CAT活性下降，這些表征可證明阿替洛爾的暴露造成了肝臟細胞的氧化應激并產(chǎn)生毒性效應。實驗研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)分泌系統(tǒng)易受阿替洛爾影響，對生物體具有潛在的威脅，對與動植物都具有較大的消極效應。當使用低濃度阿

30、替洛爾處理動物時，會造成動物對氧的消耗量的增加，可發(fā)現(xiàn)阿替洛爾對錦鯽的肝細胞既有誘導作用，也有抑制作用。從實驗數(shù)據(jù)可得知，實驗發(fā)現(xiàn)：0mg/kg、10mg/kg濃度暴露下，蛋白質(zhì)濃度變化呈現(xiàn)一致規(guī)律；10mg/kg濃度暴露下，7天、14天對SOD酶活性有顯著的抑制能力和CAT酶活性有誘導能力，30天后又與空白組持平，說明低濃度ATL暴露下，生物體內(nèi)自由基的增加，在SOD酶活性下降和CAT酶活性上升作用下使得生物體清除過多的自由基后機體自身抗氧化系統(tǒng)未被破壞，得出低濃度ATL對生物體的毒性影響不大；100mg/kg濃度暴露下，30天對CAT酶活性有顯著的抑制能力，說明生物體內(nèi)自由基的增加，從而造

31、成肝臟組織損傷，這種現(xiàn)象可能是阿替洛爾本身所具有的毒性所引起的，即ATL的濃度僅在一定濃度范圍內(nèi)與錦鯽的表達呈劑量-效應相關(guān)關(guān)系，并把這種現(xiàn)象歸結(jié)為ATL本身所具有的毒性。4 結(jié)論與展望本論文針對阿替洛爾進入環(huán)境后錦鯽肝臟的損傷以及對肝臟抗氧化應激系統(tǒng)的影響。論文主要研究結(jié)論如下：在濃度（ATL0mg/kg、ATL10mg/kg）暴露下SOD、CAT濃度變化沒有并呈現(xiàn)一致規(guī)律，蛋白質(zhì)濃度變化沒有并呈現(xiàn)一致規(guī)律，說明ATL10mg/kg時，對錦鯽的氧化損傷并不明顯；ATL100mg/kg會導致錦鯽SOD、CAT活性有下降趨勢，蛋白質(zhì)濃度均有所降低，說明高濃度對SOD、CAT活性蛋白質(zhì)有著顯著的抑

32、制能力，這些體內(nèi)表征的變化可證明阿替洛爾能導致錦鯽肝臟的氧化損傷。從實驗結(jié)果可看出一定濃度的阿替洛爾會導致錦鯽SOD、CAT活性有下降趨勢，蛋白質(zhì)濃度均有所降低對錦鯽的肝臟造成氧化損傷，所以可以說明阿替洛爾對生物的毒性十分強烈，因此在必要的使用當中若使用不當就會產(chǎn)生嚴重的環(huán)境影響。在未來的使用當中，應謹慎小心或發(fā)展出更加安全可靠、效果相同可替代的阿替洛爾其他藥品。1 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015年版(二部) S .北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2015: 572573.2 李蓮. 改性TiO_2對水體中阿替洛爾去除的應用研究D. 東南大學, 2018. 3 Santos L H

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