生物技術(shù)在園林植物遺傳改良上的應(yīng)用

1、1.基因工程（基因工程（Gene Engineering） 2.細(xì)胞工程（細(xì)胞工程（Cell Engineering ） 3.酶工程（酶工程（Enzyme Engineering ） 4.發(fā)酵工程（發(fā)酵工程（Fermentation Engineering ） 5.蛋白質(zhì)工程（蛋白質(zhì)工程（Protein Engineering ） 細(xì)胞工程就是在細(xì)細(xì)胞工程就是在細(xì) 胞水平研究開發(fā)、胞水平研究開發(fā)、 利用各類細(xì)胞的工利用各類細(xì)胞的工 程。亦即人們根據(jù)程。亦即人們根據(jù) 科學(xué)設(shè)計(jì)改變細(xì)胞科學(xué)設(shè)計(jì)改變細(xì)胞 的遺傳基礎(chǔ)，通過(guò)的遺傳基礎(chǔ)，通過(guò) 無(wú)菌操作，大量培無(wú)菌操作，大量培 養(yǎng)細(xì)胞、組織乃至養(yǎng)細(xì)胞、組織

2、乃至 完整個(gè)體的技術(shù)。完整個(gè)體的技術(shù)。 1.分離基因的技術(shù)；分離基因的技術(shù)； 2.擴(kuò)增基因的技術(shù)；擴(kuò)增基因的技術(shù)； 3.將單一細(xì)胞擴(kuò)增成細(xì)胞群體的技術(shù)；將單一細(xì)胞擴(kuò)增成細(xì)胞群體的技術(shù)； 4.將一個(gè)生命體復(fù)制成一個(gè)與之完全相同將一個(gè)生命體復(fù)制成一個(gè)與之完全相同 的新個(gè)體的過(guò)程；的新個(gè)體的過(guò)程； 5.將單一個(gè)體擴(kuò)增成一個(gè)遺傳上完全相同將單一個(gè)體擴(kuò)增成一個(gè)遺傳上完全相同 的群體。的群體。 6.一個(gè)遺傳上來(lái)源完全相同的生物群體一個(gè)遺傳上來(lái)源完全相同的生物群體。 l植物組織培養(yǎng)技術(shù)是現(xiàn)代植物生植物組織培養(yǎng)技術(shù)是現(xiàn)代植物生 物技術(shù)的基本技術(shù)。物技術(shù)的基本技術(shù)。 l植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) (plant t

3、issue (plant tissue culture)culture)：是指在無(wú)菌條件下，將離：是指在無(wú)菌條件下，將離 體的植物材料（器官、組織、細(xì)胞以體的植物材料（器官、組織、細(xì)胞以 及原生質(zhì)體等）培養(yǎng)在人工配制的培及原生質(zhì)體等）培養(yǎng)在人工配制的培 養(yǎng)基上，在適宜的光照和溫度條件下，養(yǎng)基上，在適宜的光照和溫度條件下， 使其再生，形成完整植株或生產(chǎn)具有使其再生，形成完整植株或生產(chǎn)具有 經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他生物產(chǎn)品的一種技術(shù)。經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他生物產(chǎn)品的一種技術(shù)。 l廣義的植物組織培養(yǎng)即植物離體培廣義的植物組織培養(yǎng)即植物離體培 養(yǎng)養(yǎng)(plant in vitro culture)(plant in vi

4、tro culture)，不，不 僅包括分生組織、輸導(dǎo)組織、薄壁僅包括分生組織、輸導(dǎo)組織、薄壁 組織等離體組織的培養(yǎng)，而且包括組織等離體組織的培養(yǎng)，而且包括 原生質(zhì)體，懸浮細(xì)胞，根、莖、葉、原生質(zhì)體，懸浮細(xì)胞，根、莖、葉、 花、果實(shí)，以及成熟和未成熟的胚花、果實(shí)，以及成熟和未成熟的胚 胎及至完整植株等的離體培養(yǎng)。胎及至完整植株等的離體培養(yǎng)。 l外植體外植體(explant)(explant)：由植物體：由植物體 上切下來(lái)用于離體培養(yǎng)的離體上切下來(lái)用于離體培養(yǎng)的離體 材料，包括任何植物的任何一材料，包括任何植物的任何一 部分活的組織，包括細(xì)胞、組部分活的組織，包括細(xì)胞、組 織和器官?？椇推鞴?。

5、l繼代培養(yǎng)（繼代培養(yǎng)（subculturesubculture）：由）：由 最初的外植體上新增殖的組織，最初的外植體上新增殖的組織， 繼續(xù)轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基上進(jìn)行培繼續(xù)轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基上進(jìn)行培 養(yǎng)的過(guò)程。養(yǎng)的過(guò)程。 l單細(xì)胞無(wú)性系：指在細(xì)胞培養(yǎng)單細(xì)胞無(wú)性系：指在細(xì)胞培養(yǎng) 中，由單細(xì)胞形成的無(wú)性系。中，由單細(xì)胞形成的無(wú)性系。 l愈傷組織（愈傷組織（calluscallus）：在組）：在組 織培養(yǎng)過(guò)程中，由外植體形織培養(yǎng)過(guò)程中，由外植體形 成的一團(tuán)無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能成的一團(tuán)無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能 的細(xì)胞團(tuán)。的細(xì)胞團(tuán)。 l胚狀體（胚狀體（embryoembryo）：在組織）：在組織 培養(yǎng)過(guò)程中，由外植體或愈培養(yǎng)過(guò)

6、程中，由外植體或愈 傷組織產(chǎn)生的，與正常受精傷組織產(chǎn)生的，與正常受精 卵發(fā)育方式類似的胚胎結(jié)構(gòu)卵發(fā)育方式類似的胚胎結(jié)構(gòu) 體。體。 根據(jù)培養(yǎng)材料的來(lái)源、特性及其應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)材料的來(lái)源、特性及其應(yīng) 用，植物組織培養(yǎng)主要包括以下幾用，植物組織培養(yǎng)主要包括以下幾 個(gè)方面：個(gè)方面： l植株培養(yǎng)植株培養(yǎng) 離體器官培養(yǎng)離體器官培養(yǎng) l莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng) 胚乳培養(yǎng)胚乳培養(yǎng) l胚培養(yǎng)胚培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng) l胚珠和子房培養(yǎng)胚珠和子房培養(yǎng) 原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng) l花藥與花粉培養(yǎng)花藥與花粉培養(yǎng) 離體授粉受精離體授粉受精 l指對(duì)指對(duì)幼苗幼苗和和較大的完整植株較大的完整植株的培的培 養(yǎng)，主要用于提供適合接種的外養(yǎng)，主

7、要用于提供適合接種的外 植體或是研究植株在某些培養(yǎng)基植體或是研究植株在某些培養(yǎng)基 上的反應(yīng)等。上的反應(yīng)等。 l通?？煞譃椋和ǔ？煞譃椋呵げ迕缗囵B(yǎng)扦插苗培養(yǎng)和和種子種子 苗培養(yǎng)苗培養(yǎng)等類型。等類型。 l指對(duì)植物莖尖分生組織或更大的指對(duì)植物莖尖分生組織或更大的 芽在離體條件下進(jìn)行培養(yǎng)，進(jìn)而芽在離體條件下進(jìn)行培養(yǎng)，進(jìn)而 獲得完整植株的過(guò)程。獲得完整植株的過(guò)程。 l根據(jù)培養(yǎng)目的和外植體的取材大根據(jù)培養(yǎng)目的和外植體的取材大 小，分為小，分為普通莖尖培養(yǎng)普通莖尖培養(yǎng)（shoot shoot cultureculture）和）和莖尖分生組織培養(yǎng)莖尖分生組織培養(yǎng) （apical meristem cultur

8、eapical meristem culture）。）。 l指將受精后形成的指將受精后形成的胚胚從胚珠或種從胚珠或種 子中剝離出來(lái)，置于一定的培養(yǎng)子中剝離出來(lái)，置于一定的培養(yǎng) 基上生長(zhǎng)發(fā)育成完整植株的過(guò)程?；仙L(zhǎng)發(fā)育成完整植株的過(guò)程。 l它包括它包括未成熟胚未成熟胚、成熟胚成熟胚以及以及雜雜 種胚種胚的離體培養(yǎng)。的離體培養(yǎng)。 l將植物的將植物的離體胚珠離體胚珠或或子房子房接種到接種到 一定的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，最終一定的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，最終 獲得成熟種子或完整植株的過(guò)程。獲得成熟種子或完整植株的過(guò)程。 l根據(jù)授粉情況，可分為根據(jù)授粉情況，可分為已授粉胚已授粉胚 珠與子房的培養(yǎng)珠與子房的培養(yǎng)和

9、和未授粉胚珠與未授粉胚珠與 子房的培養(yǎng)子房的培養(yǎng)。 l在離體條件下，對(duì)處于一定發(fā)育在離體條件下，對(duì)處于一定發(fā)育 時(shí)期的時(shí)期的花藥花藥或或花粉花粉進(jìn)行培養(yǎng)，使進(jìn)行培養(yǎng)，使 其改變正常的發(fā)育方向而形成其改變正常的發(fā)育方向而形成單單 倍體植株倍體植株的過(guò)程。的過(guò)程。 l指以植物的指以植物的某一器官的全部或部某一器官的全部或部 分或器官原基分或器官原基作為外植體的離體作為外植體的離體 培養(yǎng)技術(shù)。培養(yǎng)技術(shù)。 l其材料包括：其材料包括：根尖、莖尖、莖段、根尖、莖尖、莖段、 莖的切塊、葉片、花瓣、花蕾、莖的切塊、葉片、花瓣、花蕾、 花托、子房、子葉、以及未成熟花托、子房、子葉、以及未成熟 的果實(shí)的果實(shí)等。等

10、。 l可培育出三倍體?？膳嘤鋈扼w。 l指以能保持較好分散性的單細(xì)胞 或很小的細(xì)胞團(tuán)作為外植體的離 體培養(yǎng)技術(shù)。 l根據(jù)培養(yǎng)方式可分為懸浮培養(yǎng)、 平板培養(yǎng)、看護(hù)培養(yǎng)、微室培養(yǎng)、 微滴培養(yǎng)等類型。 l指對(duì)利用酶或物理方法去掉指對(duì)利用酶或物理方法去掉 細(xì)胞壁而獲得的細(xì)胞壁而獲得的原生質(zhì)體原生質(zhì)體作作 為外植體的離體培養(yǎng)技術(shù)。為外植體的離體培養(yǎng)技術(shù)。 l指在無(wú)菌條件下培養(yǎng)離體的未受指在無(wú)菌條件下培養(yǎng)離體的未受 精雌性器官并授以無(wú)菌花粉，花精雌性器官并授以無(wú)菌花粉，花 粉萌發(fā)后花粉管進(jìn)入胚珠完成受粉萌發(fā)后花粉管進(jìn)入胚珠完成受 精過(guò)程，進(jìn)而獲得有生活力種子精過(guò)程，進(jìn)而獲得有生活力種子 的技術(shù)。的技術(shù)。

11、 根據(jù)培養(yǎng)器官母本組織的保留情根據(jù)培養(yǎng)器官母本組織的保留情 況，分為：況，分為： l離體胚珠授粉離體胚珠授粉 l離體胎座授粉離體胎座授粉 l離體柱頭授粉離體柱頭授粉 l1 1、利用莖尖等培養(yǎng)進(jìn)行園林植物的、利用莖尖等培養(yǎng)進(jìn)行園林植物的 快速繁殖和工廠化育苗快速繁殖和工廠化育苗 通過(guò)莖尖、莖段培養(yǎng)，對(duì)于一些通過(guò)莖尖、莖段培養(yǎng)，對(duì)于一些 名優(yōu)特新品種（種類）、優(yōu)良自交名優(yōu)特新品種（種類）、優(yōu)良自交 不親和系、雄性不育系以及常規(guī)無(wú)不親和系、雄性不育系以及常規(guī)無(wú) 性繁殖困難的種類，均可快速形成性繁殖困難的種類，均可快速形成 無(wú)性繁殖系。無(wú)性繁殖系。 l2 2、利用微莖尖培養(yǎng)獲得無(wú)病毒植株、利用微莖尖培

12、養(yǎng)獲得無(wú)病毒植株 很多植物都帶有病毒，如果利用微很多植物都帶有病毒，如果利用微 莖尖培養(yǎng)，有可能獲得脫毒的試管莖尖培養(yǎng)，有可能獲得脫毒的試管 苗。苗。 l3 3、結(jié)合細(xì)胞和組織培養(yǎng)進(jìn)行突變體、結(jié)合細(xì)胞和組織培養(yǎng)進(jìn)行突變體 的誘導(dǎo)和篩選的誘導(dǎo)和篩選 培養(yǎng)組織或細(xì)胞處在不斷地分裂分培養(yǎng)組織或細(xì)胞處在不斷地分裂分 化狀態(tài)，易受培養(yǎng)條件和外加壓力化狀態(tài)，易受培養(yǎng)條件和外加壓力 （如射線、化學(xué)物質(zhì)）的影響而產(chǎn)（如射線、化學(xué)物質(zhì)）的影響而產(chǎn) 生突變。生突變。 如今，通過(guò)這一途徑已篩選到抗病、如今，通過(guò)這一途徑已篩選到抗病、 抗除草劑、抗鹽堿、高蛋白、高賴抗除草劑、抗鹽堿、高蛋白、高賴 氨酸等突變體，有些已

13、用于生產(chǎn)。氨酸等突變體，有些已用于生產(chǎn)。 l4 4、利用花藥與花粉培養(yǎng)等進(jìn)行單倍、利用花藥與花粉培養(yǎng)等進(jìn)行單倍 體育種體育種 將處于一定發(fā)育時(shí)期的花藥與花粉將處于一定發(fā)育時(shí)期的花藥與花粉 或未授粉的胚珠和子房進(jìn)行離體培養(yǎng)，或未授粉的胚珠和子房進(jìn)行離體培養(yǎng)， 可誘導(dǎo)雌、雄配子細(xì)胞發(fā)育成完整的可誘導(dǎo)雌、雄配子細(xì)胞發(fā)育成完整的 單倍體植株，再使優(yōu)良的單倍體植株單倍體植株，再使優(yōu)良的單倍體植株 染色體加倍，便可獲得純合穩(wěn)定的二染色體加倍，便可獲得純合穩(wěn)定的二 倍體植株。倍體植株。 l5 5、利用胚乳培養(yǎng)等獲得三倍體、利用胚乳培養(yǎng)等獲得三倍體 植株。植株。 l6 6、利用胚胎培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交等克服、利用

14、胚胎培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交等克服 遠(yuǎn)緣雜交障礙遠(yuǎn)緣雜交障礙 利用胚珠和子房培養(yǎng)進(jìn)行試管授粉利用胚珠和子房培養(yǎng)進(jìn)行試管授粉 和受精，可以克服由于柱頭或花柱等和受精，可以克服由于柱頭或花柱等 障礙所造成的雜交或自交不親和性。障礙所造成的雜交或自交不親和性。 通過(guò)原生質(zhì)體融合途徑或以部分克服通過(guò)原生質(zhì)體融合途徑或以部分克服 有性雜交種間的障礙，獲得體細(xì)胞雜有性雜交種間的障礙，獲得體細(xì)胞雜 種，給實(shí)現(xiàn)種間或?qū)匍g甚至科間廣泛種，給實(shí)現(xiàn)種間或?qū)匍g甚至科間廣泛 雜交以極大的促進(jìn)作用。雜交以極大的促進(jìn)作用。 l7 7、利用離體培養(yǎng)進(jìn)行種質(zhì)資源的、利用離體培養(yǎng)進(jìn)行種質(zhì)資源的 長(zhǎng)期保存和遠(yuǎn)距離運(yùn)輸長(zhǎng)期保存和遠(yuǎn)距離運(yùn)輸

15、利用莖尖及細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)合低溫或利用莖尖及細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)合低溫或 超低溫冷凍貯藏，不僅節(jié)約空間，超低溫冷凍貯藏，不僅節(jié)約空間， 又可以減少病蟲危害，也便于運(yùn)又可以減少病蟲危害，也便于運(yùn) 輸和交換種質(zhì)資源。輸和交換種質(zhì)資源。 l8 8、通過(guò)組織培養(yǎng)提供生物技術(shù)、通過(guò)組織培養(yǎng)提供生物技術(shù) 育種的中間材料。育種的中間材料。 l另外，利用植物組織、細(xì)胞及原另外，利用植物組織、細(xì)胞及原 生質(zhì)體作為受體，通過(guò)某種途徑生質(zhì)體作為受體，通過(guò)某種途徑 和技術(shù)將外源目的基因?qū)胫参锖图夹g(shù)將外源目的基因?qū)胫参?細(xì)胞，使其再生成完整植株，可細(xì)胞，使其再生成完整植株，可 獲得能使外源目的基因穩(wěn)定表達(dá)獲得能使外源目的基因穩(wěn)定表

16、達(dá) 的轉(zhuǎn)基因植株。的轉(zhuǎn)基因植株。 l一、植物細(xì)胞具有全能性一、植物細(xì)胞具有全能性 l二、植物細(xì)胞可以進(jìn)行脫分化二、植物細(xì)胞可以進(jìn)行脫分化 l三、植物細(xì)胞可以進(jìn)行再分化三、植物細(xì)胞可以進(jìn)行再分化 l四、植物分化的激素調(diào)節(jié)四、植物分化的激素調(diào)節(jié) l植物細(xì)胞全能性（植物細(xì)胞全能性（totipotencytotipotency）：指）：指 植物的每個(gè)細(xì)胞都包含著該物種的全部植物的每個(gè)細(xì)胞都包含著該物種的全部 遺傳信息遺傳信息，從而具備發(fā)育成完整植株的，從而具備發(fā)育成完整植株的 遺傳能力。在適宜條件下，任何一個(gè)細(xì)遺傳能力。在適宜條件下，任何一個(gè)細(xì) 胞都可以發(fā)育成一個(gè)新個(gè)體。植物細(xì)胞胞都可以發(fā)育成一個(gè)新個(gè)

17、體。植物細(xì)胞 全能性是植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。全能性是植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。 l已分化的細(xì)胞在一定因素作用下已分化的細(xì)胞在一定因素作用下 重新恢復(fù)分裂能力，并改變?cè)瓉?lái)重新恢復(fù)分裂能力，并改變?cè)瓉?lái) 的發(fā)展方向而沿著一條新的途徑的發(fā)展方向而沿著一條新的途徑 發(fā)育的過(guò)程。發(fā)育的過(guò)程。 l脫分化的細(xì)胞團(tuán)或組織經(jīng)重新分脫分化的細(xì)胞團(tuán)或組織經(jīng)重新分 化而產(chǎn)生出新的具有特定結(jié)構(gòu)和化而產(chǎn)生出新的具有特定結(jié)構(gòu)和 功能的組織或器官的一種現(xiàn)象功能的組織或器官的一種現(xiàn)象 （如由愈傷組織形成根、芽或胚（如由愈傷組織形成根、芽或胚 狀體等）。狀體等）。 l激素是培養(yǎng)基中不可缺少的組成激素是培養(yǎng)基中不可缺少的組成 部分，

18、它對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)和器部分，它對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)和器 官分化都有直接的影響。包括：官分化都有直接的影響。包括： 細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素 生長(zhǎng)素生長(zhǎng)素 lKT（激動(dòng)素）（激動(dòng)素） lZT（zeatin，玉米素），玉米素） l6BA（6芐基腺嘌呤）芐基腺嘌呤） l2ip（異戊烯基腺嘌呤）（異戊烯基腺嘌呤） l 促進(jìn)細(xì)胞的分裂和器官分化、誘導(dǎo)胚促進(jìn)細(xì)胞的分裂和器官分化、誘導(dǎo)胚 狀體狀體(embryoid)(embryoid)和不定芽的形成、延和不定芽的形成、延 遲組織的衰老并增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成。遲組織的衰老并增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成。 l2，4D（2，4二氯苯氧乙酸）二氯苯氧乙酸） lNAA（萘乙酸）（萘乙酸）

19、lIAA（吲哚乙酸）（吲哚乙酸） lIBA（吲哚丁酸）（吲哚丁酸） l2，4，5T l 促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)生長(zhǎng)和細(xì)胞分裂、誘導(dǎo)產(chǎn)促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)生長(zhǎng)和細(xì)胞分裂、誘導(dǎo)產(chǎn) 生愈傷組織、促進(jìn)根的分化生愈傷組織、促進(jìn)根的分化 l離體培養(yǎng)的關(guān)鍵之一是要保證無(wú)離體培養(yǎng)的關(guān)鍵之一是要保證無(wú) 菌，以免污染。菌，以免污染。 l因此，必須對(duì)實(shí)驗(yàn)材料、各種用因此，必須對(duì)實(shí)驗(yàn)材料、各種用 具進(jìn)行嚴(yán)格的消毒。具進(jìn)行嚴(yán)格的消毒。 l清洗玻璃器皿的設(shè)備：水槽、水清洗玻璃器皿的設(shè)備：水槽、水 桶、各種大小的試管刷、洗滌架、桶、各種大小的試管刷、洗滌架、 適用的工作臺(tái)等。還要有干燥箱。適用的工作臺(tái)等。還要有干燥箱。 l常用的洗滌劑：肥皂

20、、洗衣粉、常用的洗滌劑：肥皂、洗衣粉、 洗液（即鉻酸洗液（即鉻酸硫酸混合液）。硫酸混合液）。 l1、引起污染的因素：器皿與用具，、引起污染的因素：器皿與用具， 培養(yǎng)基，培養(yǎng)材料，操作時(shí)的空氣，培養(yǎng)基，培養(yǎng)材料，操作時(shí)的空氣， 工作人員的衣物等。工作人員的衣物等。 l2、對(duì)于器皿、衣物和培養(yǎng)基等可用、對(duì)于器皿、衣物和培養(yǎng)基等可用 熱壓滅菌鍋進(jìn)行消毒，即高溫高壓熱壓滅菌鍋進(jìn)行消毒，即高溫高壓 消毒。消毒。 l3、刀、剪、鑷子等用具，在使用前、刀、剪、鑷子等用具，在使用前 可插于可插于70的乙醇中，用時(shí)再在酒的乙醇中，用時(shí)再在酒 精燈的火焰上消毒，待冷卻后應(yīng)用。精燈的火焰上消毒，待冷卻后應(yīng)用。 也可

21、將它們裝在金屬盒內(nèi)，放在也可將它們裝在金屬盒內(nèi)，放在 150下的電熱烘箱內(nèi)下的電熱烘箱內(nèi)40分鐘或分鐘或 120下兩小時(shí)進(jìn)行消毒。下兩小時(shí)進(jìn)行消毒。 l4、接種室（箱）內(nèi)的空間及地面和 墻壁，可用甲醛薰蒸滅菌或用紫外 燈照射。接種前也可用70的酒精 噴霧，使空間的灰塵降落及擦拭操 作臺(tái)表面。 5、接種材料的消毒 l消毒的原則：既要?dú)⑺啦牧仙细街?的微生物，又不能傷及材料。 l常用的表面消毒的消毒劑：次氯酸 鈉，過(guò)氧化氫，低濃度的氯化汞等。 l包括接種室、接種箱、超凈工作包括接種室、接種箱、超凈工作 臺(tái)以及各種接種時(shí)的刀、鑷、剪臺(tái)以及各種接種時(shí)的刀、鑷、剪 之類的用具。之類的用具。 l接種室外最

22、好設(shè)有準(zhǔn)備室，使工接種室外最好設(shè)有準(zhǔn)備室，使工 作人員進(jìn)入接種室前有一個(gè)過(guò)渡作人員進(jìn)入接種室前有一個(gè)過(guò)渡 以減少將室外雜菌帶入室內(nèi)。準(zhǔn)以減少將室外雜菌帶入室內(nèi)。準(zhǔn) 備室可放置工作服、拖鞋中、帽備室可放置工作服、拖鞋中、帽 子等，并用紫外燈隨時(shí)進(jìn)行滅菌。子等，并用紫外燈隨時(shí)進(jìn)行滅菌。 l用于無(wú)菌操作的工具有：酒精燈、用于無(wú)菌操作的工具有：酒精燈、 貯存酒精（貯存酒精（70）棉球的廣口瓶）棉球的廣口瓶 及各種鑷子、接種針、接種鉤及各種鑷子、接種針、接種鉤 （或鏟）、剪子等。（或鏟）、剪子等。 l1、試管、試管 l2、L形管和形管和T形管形管 l3、長(zhǎng)方形扁瓶及圓形扁瓶、長(zhǎng)方形扁瓶及圓形扁瓶 l4、

23、三角瓶、三角瓶 l5、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)皿 l6、平型有角試管和無(wú)角試管、平型有角試管和無(wú)角試管 l7、細(xì)胞微室培養(yǎng)的器皿、細(xì)胞微室培養(yǎng)的器皿 l一、培養(yǎng)基的成分一、培養(yǎng)基的成分 l培養(yǎng)基的組成有大量元素、微量元素、培養(yǎng)基的組成有大量元素、微量元素、 碳水化合物、及各種有機(jī)附加物，如碳水化合物、及各種有機(jī)附加物，如 維生素、氨基酸、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)維生素、氨基酸、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì) 及其他天然產(chǎn)物，如椰乳、酵母提取及其他天然產(chǎn)物，如椰乳、酵母提取 液、肌醇。用固體培養(yǎng)基時(shí)，還要加液、肌醇。用固體培養(yǎng)基時(shí)，還要加 入瓊脂。入瓊脂。 大量元素：大量元素： 一般是指濃度大于一般是指濃度大于 0.5mmol/

24、L.氮氮(N) 、磷、磷(P) 、鉀、鉀(K) 、鈣、鈣 (Ca) 、鎂、鎂(Mg) 、硫、硫(S) 。 微量元素：微量元素： 包括鐵包括鐵(Fe) 、銅、銅(Cu) 、鉬、鉬 (Mo) 、鋅、鋅(Zn) 、鈉、鈉(Na) 、錳、錳(Mn) 、 鈷鈷(Co) 、硼、硼(B) 、碘、碘(I)。 l蔗糖和葡萄糖等蔗糖和葡萄糖等 維生素、肌醇、氨基酸、有機(jī)添維生素、肌醇、氨基酸、有機(jī)添 加物。加物。 生長(zhǎng)素生長(zhǎng)素：2，4 - D、奈乙酸、奈乙酸(NAA)、吲、吲 哚丁酸（哚丁酸（IBA）、吲哚乙酸）、吲哚乙酸(IAA) 。 細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素：激動(dòng)素（：激動(dòng)素（KT）、）、6-芐基芐基 氨基嘌呤（

25、氨基嘌呤（6BA） 、玉米素（、玉米素（ZT）。）。 赤霉素赤霉素（GA） 、脫落酸（、脫落酸（ABA） 、 乙烯利（乙烯利（CEDP）。）。 l固體培養(yǎng)基用固體培養(yǎng)基用 l如麥芽提取液、椰乳、鮮果汁、酵如麥芽提取液、椰乳、鮮果汁、酵 母提取液、番茄汁等。它們對(duì)愈傷母提取液、番茄汁等。它們對(duì)愈傷 組織的誘導(dǎo)和維持均是有益的。組織的誘導(dǎo)和維持均是有益的。 l1、重蒸鎦水的制備、重蒸鎦水的制備 l2、配制母液、配制母液 l配制培養(yǎng)基最方便的方法是先制配制培養(yǎng)基最方便的方法是先制 備一系列的母液。備一系列的母液。 3、培養(yǎng)基的配制和滅菌、培養(yǎng)基的配制和滅菌 l配制培養(yǎng)基時(shí)，可將大量元素和微量元素，配

26、制培養(yǎng)基時(shí)，可將大量元素和微量元素， 根據(jù)母液濃度稀釋至配方所需的濃度，再加根據(jù)母液濃度稀釋至配方所需的濃度，再加 上附加物質(zhì)和蔗糖，待全部溶解后定容。隨上附加物質(zhì)和蔗糖，待全部溶解后定容。隨 后用后用KOH或或NaOH及及HCl調(diào)正到需要的調(diào)正到需要的PH 值。再加入瓊脂，一般用量為值。再加入瓊脂，一般用量為0.50.9， 加熱全溶后再裝于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。加熱全溶后再裝于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。 l培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓滅菌。培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓滅菌。 l制備的培養(yǎng)基應(yīng)在消毒后二星期內(nèi)應(yīng)用。制備的培養(yǎng)基應(yīng)在消毒后二星期內(nèi)應(yīng)用。 l1、MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基(Murashige和和Skoog,1962) l2、米勒培養(yǎng)基（、米勒

27、培養(yǎng)基（Miller,1963） l3、H培養(yǎng)基培養(yǎng)基(Bourgin和和Nitsch,1967) l4、改良懷特培養(yǎng)基、改良懷特培養(yǎng)基(White,1963) l5、B5培養(yǎng)基培養(yǎng)基(Gamborg等等,1968) l6、尼奇培養(yǎng)基、尼奇培養(yǎng)基(Nitsch,1951) l7、N6培養(yǎng)基（北京植物研究所，黑龍江農(nóng)培養(yǎng)基（北京植物研究所，黑龍江農(nóng) 業(yè)科學(xué)院，業(yè)科學(xué)院，1974） 植物組織培養(yǎng)經(jīng)歷的五個(gè)階段：植物組織培養(yǎng)經(jīng)歷的五個(gè)階段： （1）預(yù)備階段預(yù)備階段 外植體的獲得；外植體的獲得； 接種材料的消毒處理；接種材料的消毒處理； 配制適宜的培養(yǎng)基；配制適宜的培養(yǎng)基； （2）誘導(dǎo)去分化階段誘導(dǎo)去

28、分化階段 （3）繼代增殖階段）繼代增殖階段 （4）生根成芽階段）生根成芽階段 （5）移栽成活階段）移栽成活階段 l根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，確定植物種類、根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，確定植物種類、 品種并選擇合適的部位作為外植品種并選擇合適的部位作為外植 體，對(duì)外植體進(jìn)行消毒處理。體，對(duì)外植體進(jìn)行消毒處理。 l根據(jù)試驗(yàn)材料，選擇適宜的培養(yǎng)根據(jù)試驗(yàn)材料，選擇適宜的培養(yǎng) 基，配制后高壓滅菌備用?；?，配制后高壓滅菌備用。 l將消毒好的外植體在無(wú)菌條件下將消毒好的外植體在無(wú)菌條件下 切成小塊（約切成小塊（約0.51.0cm），植），植 入培養(yǎng)基。入培養(yǎng)基。 l進(jìn)行溫控和光控。進(jìn)行溫控和光控。 l多數(shù)情況下，長(zhǎng)出愈傷組織后，多數(shù)

29、情況下，長(zhǎng)出愈傷組織后， 還要往分化培養(yǎng)基里轉(zhuǎn)移一次。還要往分化培養(yǎng)基里轉(zhuǎn)移一次。 l本階段的主要目的是提高移栽成本階段的主要目的是提高移栽成 活率?；盥省?l經(jīng)試驗(yàn)表明：選擇壯苗。適當(dāng)煉經(jīng)試驗(yàn)表明：選擇壯苗。適當(dāng)煉 苗、控制水分供應(yīng)、選擇適合的苗、控制水分供應(yīng)、選擇適合的 移苗季節(jié)和選用合適的移栽土壤移苗季節(jié)和選用合適的移栽土壤 是提高移苗成活率的重要環(huán)節(jié)。是提高移苗成活率的重要環(huán)節(jié)。 1.單倍體的概念及其特點(diǎn)單倍體的概念及其特點(diǎn) 只含有一套染色體組的生物體；只含有一套染色體組的生物體； 被子植物的配子體世代。被子植物的配子體世代。 矮小性；矮小性； 不育性；不育性； 全顯性。全顯性。 1.

30、單倍體植物的直接利用；單倍體植物的直接利用； 2.克服雜種分離，縮短育種年限；克服雜種分離，縮短育種年限； 3.快速獲得異花授粉植物的自交系；快速獲得異花授粉植物的自交系； 4.單倍體植物的誘變育種；單倍體植物的誘變育種； 5.克服遠(yuǎn)緣雜種不孕性與不穩(wěn)定的現(xiàn)象；克服遠(yuǎn)緣雜種不孕性與不穩(wěn)定的現(xiàn)象； （1）單倍體材料的采集）單倍體材料的采集 單倍體育種的首要問(wèn)題是如何獲得大最的單單倍體育種的首要問(wèn)題是如何獲得大最的單 倍體植株。據(jù)現(xiàn)有的研究材料，用花藥培養(yǎng)產(chǎn)生倍體植株。據(jù)現(xiàn)有的研究材料，用花藥培養(yǎng)產(chǎn)生 單倍體植株有兩個(gè)途徑單倍體植株有兩個(gè)途徑: 第一是在離體培養(yǎng)的花藥中，花粉經(jīng)過(guò)類似第一是在離體培

31、養(yǎng)的花藥中，花粉經(jīng)過(guò)類似 胚胎發(fā)育的過(guò)程直接形成單倍體植物，如煙草、胚胎發(fā)育的過(guò)程直接形成單倍體植物，如煙草、 曼陀羅等。曼陀羅等。 第二是在離體培養(yǎng)的花藥中，花粉形成愈第二是在離體培養(yǎng)的花藥中，花粉形成愈 傷組織，再?gòu)挠鷤M織分化出單倍體植株。傷組織，再?gòu)挠鷤M織分化出單倍體植株。 （2）花藥的接種）花藥的接種 v接種前的準(zhǔn)備工作接種前的準(zhǔn)備工作 接種和培養(yǎng)花藥是在無(wú)菌條件下進(jìn)行的，所接種和培養(yǎng)花藥是在無(wú)菌條件下進(jìn)行的，所 用的一切用具必須徹底滅菌。用的一切用具必須徹底滅菌。 v花粉發(fā)育時(shí)期的鑒定花粉發(fā)育時(shí)期的鑒定 適宜的花粉發(fā)育時(shí)期對(duì)于提高花粉誘導(dǎo)愈傷適宜的花粉發(fā)育時(shí)期對(duì)于提高花粉誘導(dǎo)愈傷

32、 組織分化的頻率是很重要的，為此，進(jìn)行花藥組織分化的頻率是很重要的，為此，進(jìn)行花藥 培養(yǎng)前，要用顯微鏡進(jìn)行花粉發(fā)育時(shí)期的鑒定。培養(yǎng)前，要用顯微鏡進(jìn)行花粉發(fā)育時(shí)期的鑒定。 經(jīng)顯微鏡檢查后，把花粉細(xì)胞的發(fā)育進(jìn)期與經(jīng)顯微鏡檢查后，把花粉細(xì)胞的發(fā)育進(jìn)期與 花藥或花序的外部形態(tài)聯(lián)系起來(lái)，找出花粉單花藥或花序的外部形態(tài)聯(lián)系起來(lái)，找出花粉單 核期或單核期的花蕾或花序的外部形態(tài)標(biāo)志選核期或單核期的花蕾或花序的外部形態(tài)標(biāo)志選 取花藥進(jìn)行接種培養(yǎng)。取花藥進(jìn)行接種培養(yǎng)。 誘導(dǎo)愈傷組織分化出根、莖、葉的方法是在誘導(dǎo)愈傷組織分化出根、莖、葉的方法是在 愈傷組織長(zhǎng)到愈傷組織長(zhǎng)到1-3毫米大?。ㄈ缧∶状螅r(shí)，即毫米大?。ㄈ?/p>

33、小米大）時(shí)，即 可轉(zhuǎn)移到誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，促使分化長(zhǎng)出植株?？赊D(zhuǎn)移到誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，促使分化長(zhǎng)出植株。 一般說(shuō)來(lái)，愈傷組織如果先形成芽，隨后根自然一般說(shuō)來(lái)，愈傷組織如果先形成芽，隨后根自然 會(huì)發(fā)生，如果先有根，以后不一定會(huì)出芽。因此，會(huì)發(fā)生，如果先有根，以后不一定會(huì)出芽。因此， 掌握芽分化的條件是十分重要的。掌握芽分化的條件是十分重要的。 愈傷組織轉(zhuǎn)移培養(yǎng)工作是在無(wú)菌室或接種愈傷組織轉(zhuǎn)移培養(yǎng)工作是在無(wú)菌室或接種 箱內(nèi)進(jìn)行的，轉(zhuǎn)移后愈傷組織培養(yǎng)在箱內(nèi)進(jìn)行的，轉(zhuǎn)移后愈傷組織培養(yǎng)在23-28恒恒 溫室內(nèi)，每日光照溫室內(nèi)，每日光照9-11小時(shí)，可用日光燈作輔助小時(shí)，可用日光燈作輔助 光，光強(qiáng)度在光，

34、光強(qiáng)度在2000勒克斯以上。勒克斯以上。 在轉(zhuǎn)移愈傷組織時(shí)，應(yīng)注意其極性，原來(lái)在轉(zhuǎn)移愈傷組織時(shí)，應(yīng)注意其極性，原來(lái) 向上的一但轉(zhuǎn)移后的一但轉(zhuǎn)移后仍應(yīng)向上，否則向上的一但轉(zhuǎn)移后的一但轉(zhuǎn)移后仍應(yīng)向上，否則 會(huì)影響生長(zhǎng)，同時(shí)在轉(zhuǎn)移時(shí)，就避免沾帶過(guò)多的會(huì)影響生長(zhǎng)，同時(shí)在轉(zhuǎn)移時(shí)，就避免沾帶過(guò)多的 培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。 處理方式：處理方式： l試管內(nèi)進(jìn)行；試管內(nèi)進(jìn)行； l花粉植株定植后進(jìn)行；花粉植株定植后進(jìn)行； 藥劑處理；藥劑處理； 植株鑒定。植株鑒定。 l常規(guī)雜交育種由于物種間難以逾越常規(guī)雜交育種由于物種間難以逾越 的天然屏障而舉步維艱。的天然屏障而舉步維艱。 科學(xué)家們科學(xué)家們 受細(xì)胞全能性理論及組織培養(yǎng)成

35、功受細(xì)胞全能性理論及組織培養(yǎng)成功 的啟示，逐漸將眼光轉(zhuǎn)向細(xì)胞融合，的啟示，逐漸將眼光轉(zhuǎn)向細(xì)胞融合， 試圖通過(guò)這種嶄新的手段沖破自然試圖通過(guò)這種嶄新的手段沖破自然 界的禁錮。界的禁錮。 1.原生質(zhì)體的概念原生質(zhì)體的概念 植物細(xì)胞原生質(zhì)體是指那些以去除植物細(xì)胞原生質(zhì)體是指那些以去除 全部細(xì)胞壁的細(xì)胞。全部細(xì)胞壁的細(xì)胞。 此時(shí)，細(xì)胞外僅由此時(shí)，細(xì)胞外僅由 細(xì)胞膜包裹，細(xì)胞膜包裹， 呈圓形只有在高滲溶液中呈圓形只有在高滲溶液中 才能相對(duì)穩(wěn)定。才能相對(duì)穩(wěn)定。 原生質(zhì)體經(jīng)適當(dāng)處理，可與其他細(xì)原生質(zhì)體經(jīng)適當(dāng)處理，可與其他細(xì) 胞融合成新的體細(xì)胞。胞融合成新的體細(xì)胞。 比完整的細(xì)胞更容易獲得外來(lái)遺傳物質(zhì)，比完整

36、的細(xì)胞更容易獲得外來(lái)遺傳物質(zhì)， 為實(shí)現(xiàn)異源遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)化提供了較好的為實(shí)現(xiàn)異源遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)化提供了較好的 實(shí)驗(yàn)材料。實(shí)驗(yàn)材料。 原生質(zhì)體在一定條件下可以融合成雜種原生質(zhì)體在一定條件下可以融合成雜種 細(xì)胞，開辟了一條新的育種途徑。細(xì)胞，開辟了一條新的育種途徑。 1892， J. A. Klerker 用機(jī)械法獲得原生質(zhì)體；用機(jī)械法獲得原生質(zhì)體； 1960，E.C. Cocking 用酶法首先從番茄根尖中分離出用酶法首先從番茄根尖中分離出 大量有活性的原生質(zhì)體并通過(guò)培養(yǎng)再生出細(xì)胞壁大量有活性的原生質(zhì)體并通過(guò)培養(yǎng)再生出細(xì)胞壁 形成再生植株形成再生植株; 1960，G. Barski發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn), 題細(xì)胞原生

37、質(zhì)體能融合在一起題細(xì)胞原生質(zhì)體能融合在一起 形成單核的、并能進(jìn)行分裂的雜種細(xì)胞；形成單核的、并能進(jìn)行分裂的雜種細(xì)胞； 1972，P.S.Carlon首次獲得煙草體細(xì)胞種間雜種。首次獲得煙草體細(xì)胞種間雜種。 80s 此項(xiàng)技術(shù)在我國(guó)得到發(fā)展。此項(xiàng)技術(shù)在我國(guó)得到發(fā)展。 4. 原生質(zhì)體的制備原生質(zhì)體的制備 （1）取材與滅菌）取材與滅菌 （2）酶解）酶解 (纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶) （3）分離）分離 （沉淀法、漂洗法、滴洗法）（沉淀法、漂洗法、滴洗法） （4）洗滌）洗滌 （5）鑒定（形態(tài)觀測(cè)、活性鑒定）鑒定（形態(tài)觀測(cè)、活性鑒定） 原生質(zhì)體的培養(yǎng)：原生質(zhì)體的培養(yǎng)： 細(xì)胞壁

38、再生；細(xì)胞壁再生； 細(xì)胞分裂；細(xì)胞分裂； 植株再生。植株再生。 5. 原生質(zhì)體的融合原生質(zhì)體的融合 v化學(xué)法誘導(dǎo)融合化學(xué)法誘導(dǎo)融合 1)按比例混合雙親原生質(zhì)體按比例混合雙親原生質(zhì)體- 2)滴加滴加PEG- 3)滴加高鈣高滴加高鈣高PH值溶液值溶液- 4)洗滌原生質(zhì)體溶液洗滌原生質(zhì)體溶液- 5)離心獲得原生質(zhì)體溶液離心獲得原生質(zhì)體溶液- 6)篩選雜種細(xì)胞篩選雜種細(xì)胞- 7)再生雜種細(xì)胞。再生雜種細(xì)胞。 v物理法誘導(dǎo)融合物理法誘導(dǎo)融合 基本程序：基本程序： l原生質(zhì)體的獲得；原生質(zhì)體的獲得； l電擊融合；電擊融合； l篩選雜種細(xì)胞；篩選雜種細(xì)胞； l雜種細(xì)胞再生和完雜種細(xì)胞再生和完 整植株的形成。

39、整植株的形成。 6. 融合細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定與篩選融合細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定與篩選 雜和細(xì)胞的顯微鏡鑒別；雜和細(xì)胞的顯微鏡鑒別； 互補(bǔ)法鑒定雜和細(xì)胞；互補(bǔ)法鑒定雜和細(xì)胞； 細(xì)胞與分子生物學(xué)法；細(xì)胞與分子生物學(xué)法； 植株形態(tài)的鑒別。植株形態(tài)的鑒別。 人工種子即人為制造的種子，它人工種子即人為制造的種子，它 是一種含有植物胚狀體或芽、營(yíng)是一種含有植物胚狀體或芽、營(yíng) 養(yǎng)成分、激素、及其他成分的人養(yǎng)成分、激素、及其他成分的人 工膠囊。其具有種子的功能，可工膠囊。其具有種子的功能，可 直接用于田間播種。直接用于田間播種。 1、人工種子的構(gòu)成人工種子的構(gòu)成 人工種皮人工種皮 胚胚 狀狀 體體 人工胚乳人工胚乳 2、人

40、工種子的特點(diǎn)人工種子的特點(diǎn)： （1）可以不受環(huán)境條件的限制，周年進(jìn)行生產(chǎn)；）可以不受環(huán)境條件的限制，周年進(jìn)行生產(chǎn)； （2）經(jīng)人工無(wú)性繁殖產(chǎn)生，有利于保存該種系）經(jīng)人工無(wú)性繁殖產(chǎn)生，有利于保存該種系 的優(yōu)良性狀；的優(yōu)良性狀； （3）成本低，適于田間機(jī)械化生產(chǎn)；）成本低，適于田間機(jī)械化生產(chǎn)； （4）可根據(jù)需要調(diào)節(jié)胚乳成分。）可根據(jù)需要調(diào)節(jié)胚乳成分。 3、人工種子的制備人工種子的制備 （1）胚狀體的制備及其同步生長(zhǎng)；）胚狀體的制備及其同步生長(zhǎng)； （2）人工胚乳的制備；）人工胚乳的制備； （3）配制包埋劑及人工包埋。）配制包埋劑及人工包埋。 人工種子包埋示意圖人工種子包埋示意圖 4%海藻酸鈉 體細(xì)胞胚

41、 包埋丸 2% CaCl 人工種子 水 4、人工種子的貯存與萌發(fā)、人工種子的貯存與萌發(fā) 低溫、干燥、潔凈。低溫、干燥、潔凈。 （一）基因工程的含義 按照人們的愿望， 進(jìn)行嚴(yán)密的設(shè) 計(jì)， 通過(guò)體外 DNA重組技術(shù) 和DNA 轉(zhuǎn)移技術(shù)，有目的地改造生物種性， 使現(xiàn)有物種在短時(shí)間內(nèi)趣于完善， 創(chuàng) 造出新的生物類型。 致癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的致癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Ti質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化法質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化法 重組重組DNA的直接轉(zhuǎn)化法的直接轉(zhuǎn)化法 微粒散射技術(shù)微粒散射技術(shù) (Particle bombardment) （二）基因工程的基本步驟 1、目的基因的克隆與鑒定； 2、植物表達(dá)載體的構(gòu)建； 3、植物的遺傳轉(zhuǎn)化； 4、轉(zhuǎn)化

42、細(xì)胞的篩選； 5、轉(zhuǎn)基因植株的鑒定。 基因基因 基因克隆基因克隆基因轉(zhuǎn)化基因轉(zhuǎn)化 DNA重組技術(shù)重組技術(shù) 植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù) 植物組織培養(yǎng)技術(shù)植物組織培養(yǎng)技術(shù) 1. DNA1. DNA遺傳標(biāo)記的特點(diǎn)：遺傳標(biāo)記的特點(diǎn)： v 數(shù)量極多；數(shù)量極多； v 遺傳上穩(wěn)定；遺傳上穩(wěn)定； v 排除了環(huán)境差異排除了環(huán)境差異. . 2. DNA2. DNA遺傳標(biāo)記的應(yīng)用遺傳標(biāo)記的應(yīng)用 v構(gòu)建遺傳圖譜；構(gòu)建遺傳圖譜； v分析親緣關(guān)系；分析親緣關(guān)系； v定位農(nóng)藝性狀；定位農(nóng)藝性狀； v分子標(biāo)記輔助選擇；分子標(biāo)記輔助選擇； v種質(zhì)資源及雜種后代的鑒定。種質(zhì)資源及雜種后代的鑒定。 1.RFLP Restri

43、ction fragment length polymorphisms 2.RAPD 3.AFLP 4.SSR 5.SSLP l植物組織培養(yǎng)的概念 l植物組織培養(yǎng)的類型 l植物組織培養(yǎng)在園林植物育種中的應(yīng)用 l植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ) l植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備 l培養(yǎng)基 的種類、成分和配制 l植物組織培養(yǎng)的基本程序 l重點(diǎn)內(nèi)容：重點(diǎn)內(nèi)容：植物組織培養(yǎng)的概念植物組織培養(yǎng)的概念 ， 在園林植物育種中的應(yīng)用，理論基在園林植物育種中的應(yīng)用，理論基 礎(chǔ)，培養(yǎng)基礎(chǔ)，培養(yǎng)基 的配制，基本程序。的配制，基本程序。 l難點(diǎn)內(nèi)容：難點(diǎn)內(nèi)容：植物組織培養(yǎng)的理論基植物組織培養(yǎng)的理論基 礎(chǔ)礎(chǔ) ，培養(yǎng)基，培養(yǎng)基 的種類、成分和配制，的種類、成分和配制， 植物組織培養(yǎng)的基本程序植物組織培養(yǎng)的基本程序 。 l概概 念：念：植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) ，外植體，外植體， 繼代培養(yǎng)，單細(xì)胞無(wú)性系，愈傷繼代培養(yǎng)，單細(xì)胞無(wú)性系，愈傷 組織，胚狀體。組織，胚狀體。 l1.植物離體培養(yǎng)的基本原理是什么？離植物離體培養(yǎng)的基本原理是什么？離 體培養(yǎng)技術(shù)在園林植物育種中有何應(yīng)體培養(yǎng)技術(shù)在園林植物育種中有何應(yīng) 用價(jià)值？用價(jià)值？ l2.植物離體培養(yǎng)一般要有哪些主要步驟，植物離體培養(yǎng)一般要有哪些主要步驟， 各包含哪些主要工作？各包含哪些主要