病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件

1、病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)1 病原生物學(xué)教研室病原生物學(xué)教研室 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（二）病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（二） 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)2 細(xì)菌接種技術(shù)細(xì)菌接種技術(shù) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?1 1 掌握常用的細(xì)菌接種方法掌握常用的細(xì)菌接種方法 2 2 熟悉細(xì)菌生長(zhǎng)現(xiàn)象的觀察方法熟悉細(xì)菌生長(zhǎng)現(xiàn)象的觀察方法 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)3 （一）細(xì)菌的分離培養(yǎng)和接種技術(shù) 接種工具接種工具 接種針和接種環(huán)接種針和接種環(huán) L型涂布棒型涂布棒 接種環(huán)境接種環(huán)境 接種罩、超凈工作臺(tái)或無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行。接種罩、超凈工作臺(tái)或無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)4 接種方法接種方法 1. 平板劃線接種法平板劃線接種法： 目的：目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分使混合的細(xì)菌呈單

2、個(gè)分 散生長(zhǎng)，形成單個(gè)菌落，以便散生長(zhǎng)，形成單個(gè)菌落，以便 獲得純菌。獲得純菌。 方法：方法： 分區(qū)劃線法：適用于含菌量分區(qū)劃線法：適用于含菌量 較多的標(biāo)本。較多的標(biāo)本。 連續(xù)劃線法：適用于含菌量連續(xù)劃線法：適用于含菌量 較少的標(biāo)本。較少的標(biāo)本。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)5 分區(qū)劃線分區(qū)劃線 劃線時(shí)接種環(huán)與平皿約成劃線時(shí)接種環(huán)與平皿約成30-40度角度角,輕輕接觸輕輕接觸,以腕力以腕力 在瓊脂表面在瓊脂表面輕快滑動(dòng)輕快滑動(dòng),不能劃破瓊脂不能劃破瓊脂. 第一次劃線應(yīng)占平皿面積的第一次劃線應(yīng)占平皿面積的1/10,以后每次劃線約占面以后每次劃線約占面 積的積的1/41/5. 劃線為連續(xù)劃線劃線為連續(xù)劃線,不能

3、間斷不能間斷.應(yīng)占滿平皿應(yīng)占滿平皿.劃線不能交叉重劃線不能交叉重 復(fù)復(fù). 每次劃完后應(yīng)滅菌每次劃完后應(yīng)滅菌. 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)6 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)7 2.斜面接種法：斜面接種法： 用于菌種移種，以進(jìn)一步鑒定用于菌種移種，以進(jìn)一步鑒定 和保存菌種。和保存菌種。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)8 3.3.半固體穿刺接種法：半固體穿刺接種法：保存菌種或觀察細(xì)菌的動(dòng)力和生保存菌種或觀察細(xì)菌的動(dòng)力和生 化反應(yīng)?；磻?yīng)。 4.4.液體接種法：液體接種法：用于肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等液體用于肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等液體 培養(yǎng)基的接種。培養(yǎng)基的接種。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)9 四四 種種 接接 種種 方方 法法 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)10

4、將上述已接種細(xì)菌的培養(yǎng)基置將上述已接種細(xì)菌的培養(yǎng)基置37恒溫恒溫 培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)箱中孵育1824h，觀察細(xì)菌的生，觀察細(xì)菌的生 長(zhǎng)現(xiàn)象。長(zhǎng)現(xiàn)象。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)11 （二）細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象（二）細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)12 1. 細(xì)菌在細(xì)菌在固體固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 菌落菌落 定義：指定義：指單個(gè)細(xì)菌單個(gè)細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，在平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖， 形成單一肉眼可見(jiàn)的形成單一肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌集團(tuán)細(xì)菌集團(tuán)。 菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、 透明度、濕潤(rùn)度、黏度、溶血性透明度、濕潤(rùn)度、黏度、溶血性

5、。 菌苔菌苔：指指多個(gè)菌落多個(gè)菌落融合在一起形成的融合在一起形成的細(xì)菌堆積細(xì)菌堆積 物物。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)13 菌落與菌苔菌落與菌苔 菌落菌落 菌苔菌苔 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)14 2. 細(xì)菌在細(xì)菌在液體液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 渾濁渾濁：大多數(shù)細(xì)菌，如E.c. 沉淀沉淀：多見(jiàn)于鏈狀排列的細(xì)菌。 菌膜菌膜：專性需氧菌（如結(jié)核分枝桿菌、枯草桿 菌） 。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)15 細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 菌膜菌膜 菌沉淀菌沉淀均勻渾濁均勻渾濁 對(duì)照對(duì)照 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)16 3. 細(xì)菌在細(xì)菌在半固體半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 有鞭毛細(xì)菌：有鞭毛細(xì)菌

6、： 在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴(kuò)散生長(zhǎng)，穿刺在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴(kuò)散生長(zhǎng)，穿刺 線線邊緣模糊邊緣模糊。 無(wú)鞭毛細(xì)菌：無(wú)鞭毛細(xì)菌： 只沿穿刺線生長(zhǎng)，穿刺線邊緣清晰只沿穿刺線生長(zhǎng)，穿刺線邊緣清晰。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)17 細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 有動(dòng)力有動(dòng)力 現(xiàn)象現(xiàn)象 無(wú)動(dòng)力無(wú)動(dòng)力 現(xiàn)象現(xiàn)象 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)18 腸道致病菌的分離培養(yǎng)(1) 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)19 一.腸道桿菌的生物學(xué)性狀 二.S-S培養(yǎng)基的特性及用途 三.分離培養(yǎng)方法 主要內(nèi)容 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)20 （一）腸道桿菌的生物學(xué)性狀 埃希菌屬：大腸埃希菌 沙門菌屬：傷寒沙門菌 甲型、乙型、丙型副傷寒 志賀菌

7、屬：痢疾志賀菌 腸桿菌科的重要菌屬及代表菌種 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)21 1.相似的形態(tài)染色 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)22 乳糖發(fā)酵試驗(yàn) 腸道致病菌 腸道非致病菌 多數(shù)不發(fā)酵乳糖 多數(shù)發(fā)酵乳糖 2.活潑的生化反應(yīng) 初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)23 +/- - +傷寒桿菌 - - +痢疾桿菌 - 大腸桿菌 硫化氫 乳糖 葡萄糖 菌名 三種細(xì)菌的生化反應(yīng) 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)24 成成 分分含量（含量（g/Lg/L）作作 用用 牛肉膏牛肉膏5 5營(yíng)養(yǎng)成分營(yíng)養(yǎng)成分 乳糖乳糖1010營(yíng)養(yǎng)成分，發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)成分，發(fā)酵 蛋白胨蛋白胨5 5營(yíng)養(yǎng)成分營(yíng)養(yǎng)成分 膽酸鈉、膽酸膽酸鈉、膽酸- -脫氧膽脫氧膽 酸鈉鹽混合物（

8、三號(hào)酸鈉鹽混合物（三號(hào)） 3.53.5抑制抑制G+G+、大部分大腸菌群和變形、大部分大腸菌群和變形 桿菌桿菌 檸檬酸鈉檸檬酸鈉8.58.5抑制抑制G+G+、大部分大腸菌群和變形、大部分大腸菌群和變形 0.1%0.1%煌綠溶液煌綠溶液0.33ml0.33ml抑制抑制G G+ +、大部分大腸菌群和變形、大部分大腸菌群和變形 硫代硫酸鈉硫代硫酸鈉8.58.5檢測(cè)硫化氫的產(chǎn)生檢測(cè)硫化氫的產(chǎn)生 10%10%檸檬酸鐵溶液檸檬酸鐵溶液10ml10ml檢測(cè)硫化氫的產(chǎn)生檢測(cè)硫化氫的產(chǎn)生 1%1%中性紅溶液中性紅溶液2.5ml2.5ml指示劑指示劑 瓊脂瓊脂1717凝固劑凝固劑 （二）SS培養(yǎng)基 （Salmone

9、lla Shigella Agar ） 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)25 膽鹽抑制膽鹽抑制G G+ +, ,枸櫞酸鈉和煌枸櫞酸鈉和煌 綠能部分抑制大腸桿菌綠能部分抑制大腸桿菌, ,致致 病的沙門菌和志賀菌能大病的沙門菌和志賀菌能大 量生長(zhǎng)。量生長(zhǎng)。 中性紅指示劑和乳糖中性紅指示劑和乳糖, ,性性 紅遇酸變粉紅。紅遇酸變粉紅。 常用于腸道致病菌的分離常用于腸道致病菌的分離 培養(yǎng)。培養(yǎng)。 （二）SS培養(yǎng)基 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)26 細(xì)細(xì) 菌菌SS平板平板 大腸桿菌大腸桿菌粉紅色粉紅色大菌落大菌落 痢疾桿菌痢疾桿菌 無(wú)色細(xì)小，半透明菌落無(wú)色細(xì)小，半透明菌落 傷寒桿菌傷寒桿菌 無(wú)色細(xì)小無(wú)色細(xì)小 半透明菌落半透明菌落 (

10、(中間有黑色沉淀）中間有黑色沉淀） SS培養(yǎng)基中菌落特點(diǎn) 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)27 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)28 將糞便標(biāo)本以平板分區(qū)劃線法接種到將糞便標(biāo)本以平板分區(qū)劃線法接種到SSSS培培 養(yǎng)基。養(yǎng)基。 ( (每個(gè)實(shí)驗(yàn)室每個(gè)實(shí)驗(yàn)室8 8個(gè)個(gè)SSSS平板，每組做好標(biāo)記，班長(zhǎng)用膠布平板，每組做好標(biāo)記，班長(zhǎng)用膠布 按班級(jí)綁好按班級(jí)綁好) ) 放入放入3737溫箱中培養(yǎng)溫箱中培養(yǎng)24h24h；取出放；取出放44冰箱中保存?zhèn)溆?。冰箱中保存?zhèn)溆谩?（三）糞便標(biāo)本的分離培養(yǎng) 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)29 1.1.空氣中細(xì)菌的檢查（空氣中細(xì)菌的檢查（每個(gè)班每個(gè)班2 2個(gè)平皿個(gè)平皿） 原理：原理：根據(jù)空氣中攜帶有微生物氣溶膠（以固體或

11、液根據(jù)空氣中攜帶有微生物氣溶膠（以固體或液 體微小顆粒分散于空氣中的分散體系稱為氣溶膠，其中的氣體微小顆粒分散于空氣中的分散體系稱為氣溶膠，其中的氣 體是分散介質(zhì)）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方體是分散介質(zhì)）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方 式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上。式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上。 方法：方法：在室內(nèi)選擇一處放一個(gè)平皿。揭開(kāi)皿蓋，皿蓋在室內(nèi)選擇一處放一個(gè)平皿。揭開(kāi)皿蓋，皿蓋 扣置于皿底下，暴露扣置于皿底下，暴露放置放置15min，即蓋上皿蓋，放入，即蓋上皿蓋，放入37 培培 養(yǎng)養(yǎng)24小時(shí)，觀察結(jié)果。小時(shí)，觀察結(jié)果。 細(xì)菌在自然界的分布細(xì)菌在自然界的分布 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)30 2

12、.2.紫外線對(duì)細(xì)菌的影響紫外線對(duì)細(xì)菌的影響 （每個(gè)實(shí)驗(yàn)室（每個(gè)實(shí)驗(yàn)室2 2個(gè)培養(yǎng)皿）個(gè)培養(yǎng)皿） 取一個(gè)平皿，用密涂法將細(xì)菌涂布于培養(yǎng)皿中，取一個(gè)平皿，用密涂法將細(xì)菌涂布于培養(yǎng)皿中， 打開(kāi)一半平皿蓋，置于紫外燈下照射打開(kāi)一半平皿蓋，置于紫外燈下照射3030分鐘，分鐘， 然后蓋好平皿，置然后蓋好平皿，置37培養(yǎng)培養(yǎng)24h后取出觀察結(jié)果。后取出觀察結(jié)果。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)31 分三次接種，分三次接種， 每次取一環(huán)。第每次取一環(huán)。第 一次密涂接種后一次密涂接種后 旋轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)60度二次密度二次密 涂接種，然后同涂接種，然后同 方向旋轉(zhuǎn)方向旋轉(zhuǎn)60度后度后 再次密涂接種。再次密涂接種。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)32 3

13、. 咽喉部細(xì)菌的檢查（咽喉部細(xì)菌的檢查（每班每班4 4個(gè)平皿個(gè)平皿） n取血瓊脂平板取血瓊脂平板1塊，打開(kāi)平皿蓋，將培養(yǎng)基面置于塊，打開(kāi)平皿蓋，將培養(yǎng)基面置于 口腔前口腔前10cm處，受試者用力咳嗽幾次；處，受試者用力咳嗽幾次； n蓋上平皿蓋，置蓋上平皿蓋，置37溫箱中倒置培養(yǎng)溫箱中倒置培養(yǎng)24h后取出后取出 觀察結(jié)果觀察結(jié)果。 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)33 4.化學(xué)消毒劑對(duì)細(xì)菌的影響化學(xué)消毒劑對(duì)細(xì)菌的影響 方法方法：取一普通平皿培養(yǎng)基，取一普通平皿培養(yǎng)基， 一部分寫上一部分寫上“前前”，另一部分，另一部分 寫上寫上“后后”，然后將手指在寫，然后將手指在寫 有有“前前”的部分沾一下，再將的部分沾一下，再將 手指用酒精進(jìn)行消毒，在寫手指用酒精進(jìn)行消毒，在寫 有有“后后”的部分沾一下。放入的部分沾一下。放入 3737溫箱培養(yǎng)溫箱培養(yǎng)2424小時(shí)小時(shí)后觀察。后觀察。 （每個(gè)實(shí)驗(yàn)室（每