HPLC法測定阿日申―18中梔子苷的含量

1、HPLC 法測定阿日申 18 中梔子苷的含量 摘 要 目的：測定阿日申 -18 中梔子苷的含量。 方法： 采用 HPLC 法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相 為乙腈-水（15 : 85）,檢測波長為238nm,流速為1.0ml/min 結(jié)果：梔子苷在 0.06500.8125卩g/ml范圍內(nèi)呈良好的線性 關(guān)系。梔子苷平均加樣回收率為1 0 1 .7% ， RSD 為 1.5%（n=9）結(jié)論：該方法簡便、靈敏，可用于制劑的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞 阿日申 -18；梔子苷； HPLC中圖分類號 R284.1 文獻標志碼 A 文章編號1007-8517（2015） 06-0013-02阿日申-18

2、是由楓香脂、冬葵果、決明子、黨參、草烏 （制）、麻黃、苦參、黃精、梔子、文冠木、木香、五靈脂 （制）、石菖蒲、訶子、川楝子、瞿麥、黑云香、人工麝香 十八味藥組成的水丸，該方具有清熱、瀉火、涼血的功效 1-2 ，可治療銀屑病、皮膚瘙癢、濕疹、癤腫、梅毒等各種 皮膚病及風濕病癥。該方主要成分之一梔子對本方臨床療效 有重要作用，本文采用高效液相色譜法測定梔子中主要有效 成分梔子苷的含量 3 。實驗表明，該方法簡單、準確、重現(xiàn) 性好，可有效的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，可作為質(zhì)量控制的方法。1 儀器與試藥1.1 儀器 Alltech 高效液相色譜儀 Series1500， UV201 紫外檢測器，自動進樣器； T

3、P-300 超聲儀。1.2 試藥 梔子苷對照品（批號： 110749-200613，中國 藥品生物制品檢定所提供） ；阿日申 -18 （批號： 080705、 090616、090617）由內(nèi)蒙古通遼市蒙醫(yī)研究所制劑室提供。2 方法和結(jié)果2.1色譜條件 色譜柱：Phenomenex C18柱（250mm x 4.6mm, 5 卩 m）;流動相：乙腈-水（15 : 85）;流速：1.0ml/min ; 進樣量：10卩l(xiāng);柱溫：30 C ;檢測波長：238nm。理論塔板 數(shù)按梔子苷峰計算應不低于 3000。2.2對照品溶液的制備 稱取梔子苷對照品16mg，精密 稱定，置 100ml 量瓶中，加甲醇

4、溶解并稀釋至刻度，搖勻， 精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（制成每1ml含梔子苷30卩g的溶液）。2.3 樣品溶液的制備 取裝量差異項下的本品適量，研 細，取約1.6g，精密稱定，置100ml碘量瓶中，加入甲醇 25.0ml，稱定重量，超聲處理（功率 160W, 50kHz） 30min , 放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。量取續(xù)濾液3.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻， 即得。2.4 陰性對照試驗 按上述方法制備樣品溶液和對照品 溶液。另取陰性樣品（按處方比例并以相同工藝制備的無梔 子的樣品），按阿日申 -18 溶液制備法制得陰性對照

5、溶液。分 別精密吸取陰性溶液、 阿日申-18溶液、對照品溶液各10卩I, 注入Alltech高效液相色譜儀Series1500,在同一色譜條件下 進行測定，結(jié)果：陰性色譜圖中，在與梔子苷對照品及樣品 阿日申 -18 色譜圖相同保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明配方 中的其他組分對阿日申 -1 8中梔子苷的測定無干擾。2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液 1、 2、 5、 8、10、15、20、25卩I分別進樣，按上述色譜條件進行測定， 以峰面積為縱坐標（丫）,以對照品進樣量為橫坐標（X），繪制標準曲線。結(jié)果梔子苷在 0.37623.7620卩g/ml范圍內(nèi)線 性關(guān)系良好，回歸方程為：丫=1.5E

6、+6X+3692.7 , r=0.99985。2.6精密度試驗 精密量取梔子苷對照品溶液10卩I，在上述色譜條件下連續(xù)進樣 6 次，測定梔子苷峰面積，結(jié)果梔 子苷峰面積的 RSD （n=6）為1.2%。2.7 重復性試驗 精密稱取同一批樣品（批號：090616）6 份，研細，按上述樣品制備方法制備樣品溶液，在上述色 譜條件下進行分析測定，測得每份樣品含量。結(jié)果梔子苷的 平均含量（n=6 ）為2.11mg/g, RSD為0.1%。見表1。2.8 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于 0、 2、 4、6、& 10、15、20h取樣10卩I，按上述色譜條件進樣測定。 RSD （n=6）為0.2%，表

7、明供試品溶液 20h內(nèi)穩(wěn)定。2.9 加樣回收試驗 取供試品（含量 1.864mg/g） 9份， 各約0.8g，精密稱定，分別置 9個具塞錐形瓶中，再分別在 其中 3 個具塞錐形瓶中各精密加入濃度為 0.1738mg/ml 的梔 子苷對照品甲醇溶液 5ml （約相當于供試品含有量的 75%） 及甲醇溶液20ml,另3個具塞錐形瓶中各精密加入上述對照 品溶液 12ml （約相當于供試品含有量的 100%）及甲醇溶液 13ml，其余3個具塞錐形瓶中各精密加入上述對照品溶液16ml （約相當于供試品含有量的125%）及甲醇溶液9ml，分別稱定重量，超聲處理 30min，取出，再稱重，用甲醇補足 減失的

8、重量，搖勻，濾過。各取續(xù)濾液10卩l(xiāng)進樣，測定每份含量，計算回收率，梔子苷平均回收率（n=6 ）為101.7%。RSD 為 1.5%。結(jié)果見表 2。2.10 樣品測定 按含量項下方法制備樣品溶液，在上述 色譜條件下進行測定，三批樣品的測定結(jié)果見表 3。3 討論3.1 提取條件的優(yōu)化 根據(jù)文獻 4-5，中藥梔子的梔子苷 含量測定方法中，選用甲醇作為提取溶劑，故本研究也采用 甲醇作為提取溶劑。分別對不同溶劑體積及不同超聲時間進 行了對比試驗，最后得到最優(yōu)化的提取方法為：溶劑甲醇， 加入量 25ml ，超聲處理 30min。3.2 檢測方法的優(yōu)點 本文中定量方法準確、 靈敏、專屬 性強，可作為控制阿日申 -18 制劑質(zhì)量的檢測方法。參考文獻1 那莎，郭國田， 王宗殿， 等.梔子及其有效成分藥理研 究進展 J. 中國中醫(yī)藥信息雜志， 2005，12（1）：90-92.2 方尚玲， 劉源才，張慶華，等.梔子苷鎮(zhèn)痛和抗炎作用 的研究 J. 時珍國醫(yī)國藥， 2008，19（8）：1374-1376.3 劉瑛，張浩梔子藥材中梔子苷的含量測定