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文檔簡介

1、1偶極離子排斥:被吸附的氨基酸的羧基所帶的負(fù)電荷與樹脂之負(fù)電荷產(chǎn)生排斥力。親和層析:在生物分子中有些分子的特定結(jié)構(gòu)部位能夠同其他分子相互識別并結(jié)合,這種結(jié)合既是特異的,又是可逆的, 改變條件可以使這種結(jié)合解除。生物分子間的這種結(jié)合能力稱為親和力。親和層析就是根據(jù)這樣的原理設(shè)計的蛋白質(zhì)分離純化方法。生物制品:用微生物及其代謝產(chǎn)物、原蟲、動物病毒素、人、或動物血液或組織等直接加工制成,或用現(xiàn)代生物技術(shù)方法制備的,用于預(yù)防、治療、診斷特定傳染病或其他有關(guān)疾病的藥品。疫苗、抗血清、抗毒素、類毒素、免疫制劑、診斷制劑等。2不對稱膜:又稱各相異性膜,該類膜正反兩方面不一樣,膜質(zhì)分為兩層,其功能層是具有一定

2、孔徑?jīng)Q定膜的選擇性透過,另一層是孔徑大得多的支持層 , 它增大了膜的機(jī)械強(qiáng)度,又使膜不易堵塞.對稱膜易于堵塞. 3速度區(qū)帶離心的特點(diǎn)及其用途: 又叫速率區(qū)帶離心法或分級區(qū)帶離心法。離心操作時將樣品液置于連接或不連接線性或非線性密度梯度液上(如蔗糖、甘油、KBr、CsCl 等),控制離心時間,使具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi)分成一系列區(qū)帶,達(dá)到彼此分離的目的。本法適用于分離顆粒大小不同而密度相近或相同的組分,如 DNA與 RNA 混合物,核蛋白體亞單位及線粒體、溶酶體及過氧化酶體等。 特點(diǎn):(1)樣品加于梯度介質(zhì)的頂步、離心時間需嚴(yán)格控制。(2)介質(zhì)的密度需嚴(yán)格掌握:梯度最大值組分

3、最小密度(3)樣品的密度1 時表示樹脂對 A1離子的吸附力大于A2 離子,反之亦然。(1分)K值的大小取決于樹脂和交換離子的性質(zhì),以及交換條件。8由下圖,利用給出的兩種離子交換劑(E1,E2)分離3種蛋白質(zhì)(P1、P2、P3),用箭頭流程圖表示(并指出E1,E2的類型)。E1為陰離子交換劑E2為陽離子交換劑9、下圖為離子交換法應(yīng)用實例,請?zhí)顚懮a(chǎn)工藝流程中的空格(可選因素:陰離子交換樹脂,陽離子交換樹脂, 0.05mol/L氨水,0.1mol/L氨水,2mol/L氨水)。簡述從“濾液”開始,以后步驟的分離原理?答:陽離子交換樹脂, 0.05mol/L氨水,0.1mol/L氨水,2mol/L氨水

4、濾液調(diào)節(jié)到pH2.5時,氨基酸帶正電荷,因此選用陽離子交換樹脂,之后根據(jù)氨基酸等電點(diǎn)的不同,依次用0.05mol/L氨水,0.1mol/L氨水,2mol/L氨水洗脫。酸性氨基酸等電點(diǎn)低,因此用0.05mol/L氨水就可洗脫下來,而堿性氨基酸等電點(diǎn)高,因此需用2mol/L氨水才能將之洗脫下來。10、影響沉降速度的因素有哪些? 沉降速度的計算公式為 式中為角速度,x為離心半徑,d為粒子的直徑,為離心介質(zhì)的粘度,0介質(zhì)密度粒子密度,為沉降速度。從公式可知:粒子的沉降速度與2 ,x (-0) d2 成正比,而與成反比11填寫胰島素生產(chǎn)工藝流程中的空格(字母AN表示)。:乙醇、草酸:2.53.0 :堿化

5、 :8.08.4 :堿化液 : 酸化 :3.63.8 :去脂 :2.02.5 :鹽析 :除酸性蛋白:6.0 :除堿性蛋白結(jié)晶 :6.012填寫肝素生產(chǎn)工藝流程中的空格():攝氏度:吸附:洗滌:樹脂吸附物:洗脫:18、鹽解離子交換法生產(chǎn)肝素的工藝13膜孔徑檢測技術(shù): (1)氣泡壓力法 D=4Kcos/P 修正為:D=4 /P(2)水流量法:將濾膜以蒸餾水完全潤濕,裝于濾器中,下接抽氣瓶。開動真空泵,使壓力穩(wěn)定于700mmHg柱,然后加入潔凈蒸餾水100ml,記錄下抽濾100ml水所需要的時間。 計算孔徑:r= (其中 r濾膜孔隙半徑,cm; K0.265; S膜的厚度,mm; V蒸餾水體積,ml; G干濕膜重量差,g; P壓力差,dyn/cm; t時間,s。)14理論塔板數(shù)及分離度的計算公式:理論塔板數(shù)N :

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