濾光片的原理濾光片的原理種類和選型

1、濾光片的原理濾光片的原理種類和選型濾光片的原理、種類和選型本文所談的濾光片指的是各種熒光濾光片，濾光片一般用于 各種顯微鏡中，使人們能夠更方便的觀測(cè)各種熒光現(xiàn)象。濾光片 通常用到的顯微鏡有熒光顯微鏡、激光掃描共聚焦熒光顯微鏡、 共聚焦顯微鏡、和全內(nèi)反射熒光顯微鏡。濾光片的分類方法：根據(jù)使用目的的不同，濾光片可分為TIRF濾光片、干涉濾光 片、全內(nèi)反射濾光片、Raman濾光片、拉曼濾光片、FISII熒光濾 光片和應(yīng)原位雜交濾光片。根據(jù)濾光片本身功能的不同，其可分為激發(fā)濾光片、發(fā)射濾 光片、二向色鏡/二向色濾光片/二色鏡、陷波濾光片、燃料濾光 片、熒光素濾光片、ND濾光片、中性濾光片、中性灰度鏡、

2、截止 濾光片、高通濾光片、低通濾光片、帶通濾光片、紫外濾光片和 UV濾光片。根據(jù)主要應(yīng)用領(lǐng)域，濾光片又可分為生物濾光片、醫(yī)學(xué)濾光 片和天文學(xué)濾光片。維爾克斯光電可提供Chroma, Omega,Semrock, Anvover等公司的濾光片,詳情請(qǐng)聯(lián)系維 爾克斯光電的技術(shù)人員。熒光濾光片 FluorescenceFiIters用于生命科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，主要作用是在生物醫(yī)學(xué)熒光 檢驗(yàn)分析系統(tǒng)中分離和選擇物質(zhì)的激發(fā)光與發(fā)射熒光的特征波段 光譜。中性灰度鏡ND濾光片中性灰度鏡又叫中灰密度鏡，其作用是均勻地過(guò)濾光線。這 種濾光作用是非選擇性的，也就是說(shuō)，ND鏡對(duì)各種不同波長(zhǎng)的光 線的減少能力是同等的

3、、均勻的，而對(duì)原物體的顏色不會(huì)產(chǎn)生任 何影響，可以真實(shí)再現(xiàn)景物的反差。熒光原位雜交濾光片，F(xiàn)ISII濾光片熒光原位雜交技術(shù)是根據(jù)已知微生物不同分類級(jí)別上種群特 異的DNA序列，以利用熒光標(biāo)記的特異寡聚核昔酸片段作為探 針，與環(huán)境基因組中DNA分子雜交，檢測(cè)該特異微生物種群的存 在與豐度。陷波濾光片，Notch濾光片陷波濾光片通常用于拉曼光譜測(cè)試。通常也被稱作帶阻或者 帶抑制濾光片。它可以透過(guò)絕大多數(shù)波長(zhǎng)，但是將特定波長(zhǎng)范圍 內(nèi)的光衰減到非常低的水平。全內(nèi)反射濾光片，TIRF濾光片，全內(nèi)反射熒光法濾光片用于全內(nèi)反射熒光法顯微鏡，利用全內(nèi)反射產(chǎn)生的隱失波照 明樣品，使照明區(qū)域限定在樣品表面的一薄層

4、范圍內(nèi)，從而觀測(cè)到 非常不易察覺(jué)的現(xiàn)象。優(yōu)秀濾光片的特征：1、和燃料的激發(fā)峰、發(fā)射峰匹配，且交疊小2、截止深度深3、自發(fā)熒光小4、透鏡面形好，利于熒光成像的提取。如果透鏡表面的平整 度不好，則會(huì)產(chǎn)生波前扭矩或楔角，波前扭矩會(huì)改變聚焦或成像 位置，一般透射波前扭矩比反射波前扭矩對(duì)成像的影響更加直 接，也會(huì)有更嚴(yán)格的要求。濾光片的原理：熒光濾光片一般采用單片無(wú)色透明的玻璃作為基底，在玻璃 的兩個(gè)表面鍍膜。增反膜的厚度會(huì)選擇為半波長(zhǎng)的整數(shù)倍，此時(shí) 及射疊加增強(qiáng)；增透膜的厚度為1/4波長(zhǎng)的倍數(shù)，此時(shí)投射疊加 增強(qiáng)。濾光片的激發(fā)和成像方式熒光濾光片的激發(fā)和成像方式大體可分為如下三種：聚焦型：入射激發(fā)光聚

5、焦在待測(cè)樣品上；寬場(chǎng)型：入射激發(fā)光束以較大的面積打到樣品上全內(nèi)反射型：激發(fā)光透過(guò)樣品，觀測(cè)倏逝波成像濾光片組和濾光片盒子濾光片在實(shí)際中一般都是以濾光片組的形式來(lái)使用的。熒光 濾光片組一般由三個(gè)透鏡組成：激發(fā)濾光片、二向色鏡和發(fā)射濾 光片，他們都至于濾光片盒中，具體結(jié)構(gòu)如下圖所示，激光濾光片的作用是使激發(fā)光能夠有效的通過(guò)，而避免外界 熒光波段的光線進(jìn)入濾光片盒，二向色鏡的作用主要是分光，反 射激光使其照射樣品，同時(shí)又能夠讓樣品產(chǎn)生的熒光通過(guò)，達(dá)到 發(fā)射濾光片，發(fā)射濾光片的作用是進(jìn)一步濾掉激發(fā)光和其它雜散 光，使系統(tǒng)得到比較純粹的熒光信號(hào)。濾光片的選擇如何選擇合適的濾光片是廣大科研人員在項(xiàng)目過(guò)程中

6、需要考 慮的問(wèn)題。維爾克斯光電快速準(zhǔn)確地為您提供選型支持，請(qǐng)聯(lián)系 維爾克斯光電技術(shù)人員。熒光濾波片選取的原則是在成像端盡可能讓熒光/發(fā)射光透 過(guò)，同時(shí)完全阻擋激發(fā)光，獲得最高的信噪比。尤其是對(duì)于多光 子激發(fā)和全內(nèi)反射顯微鏡的應(yīng)用，微弱的噪聲也會(huì)對(duì)成像效果造 成很大的干擾，因此對(duì)信噪比的要求更高。通常我們看濾光片的參數(shù)一般會(huì)看透射率光譜，但往往熒光 相對(duì)于激發(fā)光的強(qiáng)度很弱，選擇濾光片更需要參考阻擋深度光譜 圖0D值。0D值更能直觀地反映濾光片對(duì)光的阻擋特性。在選擇激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片時(shí)，兩者的阻擋深度光譜交 點(diǎn)是重要的判斷標(biāo)準(zhǔn)，一般要求寬場(chǎng)光源激發(fā)是交點(diǎn)0D值大于 5,激光激發(fā)時(shí)大于0D6,以

7、實(shí)現(xiàn)較好的熒光信噪比。有時(shí)激發(fā)和發(fā)射濾光片的透射光譜組合看起來(lái)很完美，但轉(zhuǎn) 換成0D值之后卻發(fā)現(xiàn)光譜交點(diǎn)僅為0D1,不符合熒光成像的基本 要求。因此，一般會(huì)建議激發(fā)和發(fā)射濾光片的透射光譜有一定的距離，比如10nmO濾光片的命名規(guī)則了解濾光片的明敏規(guī)格能夠使用戶快速讀懂各個(gè)濾光片廠家的產(chǎn)品，例如 Olympus,Leica,Nikon,Zeiss,Sunny 和 Motic0激發(fā)濾光片T表示二向色鏡的系列，495表示50%cut-on對(duì)應(yīng) 的波長(zhǎng)。發(fā)射濾光片磁控濺射鍍膜二向色鏡，非激光應(yīng)用，通常45度 角入射。ET磁控濺射鍍膜二向色鏡，激光應(yīng)用，通常45度角入射。ZET長(zhǎng)通/短通/帶通。NFdi

8、chroic 縮寫。pcextendedreflection/extendedtransmission 縮寫。xru 表示 TIRFoRET拉曼專用二向色鏡。定制濾光片的注意事項(xiàng)：在標(biāo)準(zhǔn)濾光片不滿足使用要求時(shí)，需要定制濾光片/濾波片， 維爾克斯光電為您提供各種濾光片的定制服務(wù)。首先，需要考慮入射角A0I和圓錐角ConeAngle這兩個(gè)量，入射角是光線入射的角度，比如二向色鏡一般為45。，圓錐角是 由于聚焦或發(fā)散，邊緣光線和中心光線的夾角，有時(shí)也用半錐角 來(lái)表示。入射角和圓錐角的改變對(duì)濾光片的光譜曲線有非常大的影 響，入射角增大可能會(huì)使濾光片曲線藍(lán)移，而圓錐角可能會(huì)使二 向色鏡的透過(guò)區(qū)減小。其次，需要考慮光的偏振，根據(jù)菲涅爾偏振公式，光在兩種 物質(zhì)界面?zhèn)鞑r(shí)，反射率和透射率和光的偏振狀態(tài)有關(guān)，因此用 戶在定制時(shí)必須制定光的偏振，以保證最后濾光片達(dá)到要求。熒光濾光片光源LM-75金鹵燈仿汞燈光譜。使用壽命達(dá)到1500小時(shí)；具有標(biāo)準(zhǔn)的汞燈光譜峰值；提供340800nm波段的光譜；輸出穩(wěn)定；操作簡(jiǎn)單、性價(jià)比高；能夠和目前市場(chǎng)